ЭКСТРАКТ ИЗ Crataegus В КАЧЕСТВЕ ПРЕПАРАТА ДЛЯ ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ ВНЕЗАПНОЙ СМЕРТИ В РЕЗУЛЬТАТЕ ОСТАНОВКИ СЕРДЦА И ВЫЗВАННЫХ РЕПЕРФУЗИЕЙ СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТЫХ ПОРАЖЕНИЙ Российский патент 2001 года по МПК A61K35/78 A61P9/06 

Многочисленные клинические исследования показали, что экстракты из листьев и цветов и/или плодов Crataegus species могут быть с успехом применены для лечения пациентов с пониженной сердечной деятельностью. Накопленный в течение многих лет терапевтический опыт также демонстрирует терапевтическую эффективность таких экстрактов в случае нестабильных функционально-вегетативных стенокардий, так же как и в случае средних по тяжести форм брадикардиальной аритмии. Эти открытия привели к тому, что Комиссия E министерства здравоохранения Германии опубликовала монографию (см. Официальную Федеральную Газету от 03.01.1984) со следующими показаниями к применению экстрактов из Crataegus:
"Пониженная сердечная функция, соответствующая стадиям I и II в соответствии с NYHA; ощущение давления и сужения в области сердца; сенильное (старческое) сердце, еще не требующее дигитализной терапии (терапии наперстянкой); и средние по тяжести формы брадикардиальной аритмии".

До настоящего времени известный терапевтический эффект, так же как и фармакодинамический спектр действия этих экстрактов Crataegus в основном объясняли присутствием флавоноидов и олигомерных процианидинов в экстрактах Crataegus. Поэтому фармацевтические препараты были стандартизованы по этим компонентам. Один из известных экстрактов Crataegus (WS 1442) содержит ориентировочно от 18,5 до 19,5% олигомерных процианидинов.

Настоящее изобретение основано на неожиданном эффекте, полученном при испытаниях на животных с использованием крыс с экспериментально вызванной ишемией. Было установлено, что полученный экстракцией водой или растворимым в воде органическим растворителем, таким как ацетон, алканол C₁-C₄, или смесями воды и указанных растворителей, экстракт из листьев с цветами соответствующих видов Crataegus, таких как Crataegus monogyna JAQUIN emend. LINDMAN, Crataegus laevigata (POIRET) DE CANDOLLE syn. Crataegus oxyacantha L.p.p. et duct., Crataegus azarolus L., Crataegus nigra WALDSTEIN и KITAIBEL и Crataegus pentagyna WALDSTEIN, KITAIBEL и WILLDENOW может предотвращать внезапную смерть в результате остановки сердца, а также угрожающие жизни сердечно-сосудистые патологические изменения, вызванные реперфузией.

До настоящего времени активные вещества экстракта Crataegus не обнаруживали эти эффекты.

Испытания показали, что особенно активный компонент экстракта Crataegus имеет молекулярный вес более 3000 единиц Дальтона. Структура этого компонента пока еще не известна.

Указанные эффекты экстракта Crataegus позволяют найти терапевтическое применение экстрактам Crataegus в предупреждении и лечении ишемии сердца с нарушениями сердечного кровообращения, вызванными реперфузией патологических изменений сердца и предупреждении внезапной смерти, вызванной остановкой сердца, так же как и других угрожающих жизни вызванных реперфузией патологических условий.

Методика испытаний:
Использовался метод, описанный H. Seley [Сели и др., Ангиология 11 (1960), 398-407] , в применении к крысам-самцам Sprague-Dawley с весом тела от 250 до 350 г, анестезированным пентобарбиталом. Ишемия сердца провоцировалась перевязкой коронарной артерии и реперфузией, вызванной повторным открытием лигатуры после 7 минут ишемии. Кровяное давление и частота сердечных сокращений животных измерялись ранее и в ходе ишемии, так же как и после реперфузии; также определялись длительность и тип аритмии сердца во время фазы реперфузии. При таких условиях проведения испытаний ориентировочно 50% контрольных животных умирало в течение периода реперфузии 15 минут. Причинами такой смертности были приступ гипотензии и желудочковые фибрилляции, вызванные реперфузией и происходящие немедленно после нее. Эта фармакологическая модель была применена для определения эффективности фармацевтических веществ, которые могут предотвратить внезапную смерть, вызванную остановкой сердца, или оказать благоприятное действие на поражения сердечно-сосудистой системы, вызванные реперфузией.

Результаты испытаний
В этой модели был исследован полный экстракт из листьев с цветами Crataegus monogyna, laevigata, azarolus, nigra и pentagyna, полученный экстракцией с этанолом 45% (по весу) при 60^o, при содержании олигомерных процианидинов от 18,5 до 19,5%. В первой серии испытаний экстракт вводился перорально при помощи фарингоскопа при дозировке 100 мг/кг/день в течение 6 дней. На 7-й день животные получали пероральную дозу 50 мг/кг и подвергались исследованиям часом позже.

Результаты испытаний для животных, получивших лечение полным экстрактом, и для контрольной группы животных, которые получали только растворитель, сведены в таблицу 1 и показаны на чертеже. На чертеже показано среднее кровяное давление (в мм рт. столба со стандартной погрешностью) выживших животных контрольной группы (n = 8) и группы, получившей экстракт Crataegus (n = 16). Эти результаты испытаний показывают, что введение полного экстракта Crataegus защищает животных от аритмии, вызванной кратковременной ишемией и реперфузией, а также от угрожающего жизни приступа гипотензии и возможной смерти.

В дальнейшей серии испытаний был исследован экстракт Crataegus при различных дозах и в соответствии с различными планами лечения. Результаты испытаний сведены в таблицу 2.

Результаты испытаний показывают, что максимальный эффект применения экстракта Crataegus против ишемической болезни сердца и вызванных реперфузией поражений может быть получен только после продолжительного приема и что простой кратковременный, однако надежный защитный эффект можно ожидать после приема 2х100 мг/кг (1 днем ранее + за 1 час до ишемии).

Для профилактики и терапии вызванных реперфузией сердечно-сосудистых поражений и для предотвращения внезапной смерти в результате остановки сердца экстракт Crataegus может быть использован во всех фармацевтических формах для введения перорально, а именно в таких формах как таблетки с покрытием, таблетки, капсулы, растворы. Такие фармацевтические препараты должны быть приготовлены обычным образом с использованием носителей, таких как лактоза, крахмал, микрокристаллическая целлюлоза, стеарат магния, тальк или вода, спирты, полиэтиленгликоли, глицериновый эфир. В виде добавок могут использоваться консерванты, смазки, смачивающие вещества, эмульгаторы, красители, корректоры запаха и ароматизаторы.

Дневные принимаемые (вводимые) дозы составляют от 50 до 500 мг экстракта Crataegus.

Примеры показывают приготовление экстрактов Crataegus и препаратов из них для применения в соответствии с настоящим изобретением.

Пример 1
100 кг сухих листьев и цветов разновидностей Crataegus (коммерческая смесь около 77% Crataegus monogyna, около 2% C. laevigata, около 4% C. azarolus, около 16% C. nigra и около 1% C. pentagyna) дробились в мельнице и подвергались вихревой экстракции на генераторе Dispax^® с 1000 кг 45 весовых процентов водного раствора этанола в течение 1 часа при 60^oC. Экстракт отделялся непрерывным центрифугированием. Растительный материал подвергался аналогичному экстрагированию еще раз с 1000 кг 45 весовых процентов раствора этанола в воде в течение 1 часа при 60^oC. Растворы комбинированных (объединенных) экстрактов концентрировались при давлении около 400 мбар при 80^oC; концентрированный экстракт сушился в вакуумной стеллажной сушилке при 60^oC, под давлением 5-10 мбар.

Выход полного экстракта 20% в пересчете на сухие листья и цветы Crataegus. Экстракт содержит ориентировочно 18,75% олигомерных процианидинов.

Пример 2
200 г сухих листьев с цветами разновидностей Crataegus (смесь ориентировочно 63% Crataegus monogyna, ориентировочно 3% C. laevigata, ориентировочно 9% C. azarolus, ориентировочно 25% C. nigra/pentagyna) дробились в мельнице и подвергались экстрагированию с 2 литрами 40 весовых процентов ацетона в течение 1 часа при перемешивании, с использованием системы с обратным холодильником. После отделения раствора экстракта остаток подвергался дополнительному экстрагированию 2 литрами 40 весовых процентов водного раствора ацетона в течение 30 минут при перемешивании и с использованием системы с обратным холодильником. Растворы объединенных экстрактов концентрировались до сухости при температуре ванны 60^oC под давлением 520-20 мбар.

Выход: 65,6 г сухой фракции экстракта, что соответствует 32,8% в пересчете на сухие листья с цветами Crataegus.

Пример 3
20 г экстракта из листьев с цветами разновидностей Crataegus, приготовленного с помощью 40 весовых процентов ацетона в воде в соответствии с примером 2, добавлялись к 400 мл воды при 70^oC при перемешивании. После добавки 10 г активированного угля смесь перемешивалась в течение 1 часа. Активированный уголь и нерастворенные компоненты экстракта фильтровались через фильтрующий слой. Фильтрат концентрировался до сухости при температуре ванны 60^oC под давлением 80-20 мбар.

Выход: 44% в пересчете на экстракт Crataegus.

Пример 4
85 кг сухих листьев и цветов разновидностей Crataegus (смесь ориентировочно 76% Crataegus monogyna, ориентировочно 5% C. laevigata, ориентировочно 19% C. nigra) дробились в мельнице и нагревалась до 60^oC с 600 кг метанола в экстракторе с циркуляцией; после этого производилось отделение раствора экстракта. После этого раствор экстракта концентрировался при температуре 60^oC и под давлением 200-260 мбар и сушился в вакуумной стеллажной сушилке при 60^oC под давлением 20 мбар.

Выход: 12,75 кг сухой фракции экстракта, что соответствует 15% в пересчете на сухие листья с цветами Crataegus.

Пример 5
200 г сухих листьев с цветами разновидностей Crataegus (смесь ориентировочно 63% Crataegus monogyna, ориентировочно 3% C. laevigata, ориентировочно 9% C. azarolus, ориентировочно 25% C. nigra/pentagyna) дробились в мельнице и смешивались с 2 литрами кипящей деминерализованной (умягченной) воды, а затем экстрагировались в течение 15 минут в дозирующем устройстве с ножами. Раствор экстракта фильтровался через фильтрующий слой на основе целлюлозы. Растительный остаток подвергался еще раз вихревому экстрагированию с 2 литрами кипящей деминерализованной воды в течение 15 минут. Раствор экстракта от второго экстрагирования также фильтровался через фильтрующий слой на основе целлюлозы.

Растворы экстракта комбинировались (объединялись) и концентрировались до сухости в роторном испарителе при температуре ванны 60^oC и под давлением 50 мбар.

Выход: 52 г фракции экстракта, что соответствует 26% в пересчете на сухие листья с цветами Crataegus.

Пример 6
20 г экстракта из сухих листьев с цветами Crataegus в соответствии с примером 1, добавлялись к 50 мл 45 объемных процентов этанола при перемешивании и загружались в колонну, содержащую 200 г сшитого поливинилпирролидона, образующего суспензию в 45 объемных процентах этанола. Устанавливалась скорость потока (расход) 40 мл в течение 8 минут. При помощи фракционного коллектора производился сбор фракций 40 мл. Первые фракции, содержащие активное вещество, сливались и концентрировались до сухости в роторном испарителе при температуре ванны 60^oC и под давлением 120-50 мбар.

Выход: 8,9 г концентрата активного компонента (свободного от флавоноидных соединений и процианидинов), что соответствует 44,5% в пересчете на экстракт.

Пример 7
6,65 г экстракта из листьев с цветами Crataegus, полученного с помощью 40 весовых процентов ацетона в воде в соответствии с примером 2, были диспергированы в 20 мл деминерализованной воды при нагревании до 50^oC и при обработке ультразвуком. Полученный таким образом раствор пропускался через слой геля, образованный гидрофильным сшитым декстраном (средство Sephadex G-25^®) в воде (высота 57 см, диаметр 2,8 см). Первые 240 мл элюата колонны, содержащие (активное) вещество, комбинировались и концентрировались до сухости в роторном испарителе при температуре ванны 60^oC и под давлением 50 мбар.

Выход: 0,13 осадка (свободного от флавоноидных соединений и процианидинов), что соответствует 1,95% в пересчете на экстракт.

Пример 8
Таблетки с 50 мл полного экстракта Crataegus.

50 г экстракта
50 г коллоидальная кремниевая кислота (Aerosil^®)
100 г лактоза
25 г микрокристаллическая целлюлоза
24 г зерновой крахмал
1 г стеарат магния.

Первые пять ингредиентов перемешивались, гранулировались и прессовались после добавки стеарата магния в таблетировочной пресс-машине для получения таблеток 250 мг.

Применение экстракта листьев с цветами разновидностей Crataegus для предотвращения внезапной смерти в результате остановки сердца и вызванных реперфузией сердечно-сосудистых поражений и других вызванных реперфузией угрожающих жизни патологических условий. В качестве экстрагента применяются вода или органические растворители, в частности ацетон, алканол С₁-C₄ или их смеси с водой. Изобретение позволяет реализовать указанное назначение. 1 ил. , 2 табл.

Применение экстракта, полученного экстракцией листьев с цветами разновидностей Crataegus водой или органическими растворителями, в частности ацетоном, алканолом C₁-C₄, или смесями воды и указанных растворимых в воде органических растворителей, для предотвращения внезапной смерти в результате остановки сердца и вызванных реперфузией сердечно-сосудистых поражений и других вызванных реперфузией угрожающих жизни патологических условий.