ВАКЦИНА АССОЦИИРОВАННАЯ ПРОТИВ СТРЕПТОКОККОЗА И ВИРУСНОЙ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ КРОЛИКОВ Российский патент 2011 года по МПК A61K39/09 A61K39/12 A61P31/00 

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к ассоциированным вакцинам, и может быть использовано в учреждениях, занимающихся конструированием биологических препаратов, а также на предприятиях биологической промышленности.

Известна ассоциированная вакцина против диареи телят, содержащая бактериальные клетки Escherichia coli штаммы: 0138 К88,09К99, 200; рода Salmonella, штаммы: ГИСК №195, ГИСК №196, ГИСК №197; рода Proteus, штаммы: ГИСК №198, ГИСК №199; Klebsiella pneumoniae, штаммы: ГИСК №201, ГИСК №202 (патент на изобретение РФ №2035916 от 17.06.93, МКИ А61 39/125, 39/135). Данная вакцина предназначена для профилактики инфекционных заболеваний у телят, вызываемых эшерихиями, сальмонеллами, протеями и клебсиеллами.

Известна инактивированная эмульсин-вакцина против сальмонеллеза телят (патент РФ на изобретение №2154495 от 15.10.97, МКИ А61К 39/112, C12N 1/20, А61К 39/39). Данная вакцина содержит в качестве антигенов смесь инактивированных формалином вирулентных штаммов рода Salmonella (S. dublin №1449, S. typhimurium №159) в качестве иммуномодулятора взвесь клеток Rodococcus equi №2 в маслоланолиновой смеси. Данная вакцина применяется для профилактики сальмонеллеза телят. Использование маслоланолиновой смеси в вакцине может вызывать у привитых животных различные поствакцинальные осложнения (воспалительные процессы, абсцессы на месте введения, хромоту и др.)

Техническим решением изобретения является устранение перечисленных недостатков, в частности повышение специфичности, эффективности вакцины против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, путем введения новых чистых культур возбудителей, компонентов, исключая отрицательного и побочного влияний.

Решение задачи достигается тем, что вакцина, ассоциированная против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, содержащая суспензии клеток чистых культур возбудителей стрептококкоза Streptococcus pneumoniae и вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, полученных путем отбора пораженных органов от павших животных из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделения чистых культур возбудителей, их раздельного выращивания и получением 10-15%-ной суспензии печени от кроликов, после заражения вирусной геморрагической болезнью кроликов с активностью не менее 10^3,0 ЛД 50/см³, смешивают их в равных соотношениях формалина и гидроокиси алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры   возбудителя стрептококкоза Str. pneumoniae,   выделенного из местного эпизоотического очага   в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в   1 см³ 38,0-41,5 суспензия печени кроликов с вирусом вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенного из местного эпизоотического очага в физиологическом растворе с активностью 10^3,0-4,0 ЛД 50/см³ 38,0-41,5 глюкоза 2,0-1,0 формалин 2,0-1,5 гидроокись алюминия остальное.

Новизна заявляемого технического решения обусловлена тем, что в отличие от известных ассоциированных вакцин для получения сырья проводят отбор пораженных органов от павших кроликов из местного эпизоотического очага, приготовление суспензии, посев на дифференциально-диагностические среды, выделение чистых культур возбудителей стрептококкоза Str. pneumoniae и вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, выращивание чистых культур возбудителей проводят раздельно, что позволяет повысить специфичность и иммуногенность вакцины.

Раздельное культивирование чистых культур возбудителей позволяет получать концентрацию Str. pneumoniae не менее 4-5 млрд в 1 мл в течение 12-14 часов инкубирования и вируса вирусной геморрагической болезни кроликов с активностью не менее 10^3,0 ЛД 50/см³. Инактивирование сырья формалином в 0,1-0,4%-ной конечной концентрации при температуре 37°С в течение 72-96 часов позволяет подавить патогенность возбудителей и сохранить их иммуногенные свойства в течение 12 месяцев. Смешивание инактивированных антигенов Str. pneumoniae и вируса вирусной геморрагической болезни кроликов в равных соотношениях, внесение гидроокиси алюминия и тщательное перемешивание не вызывает у привитых кроликов поствакцинальных осложнений, позволяет обеспечить формирование напряженного иммунитета через 12-15 суток после двукратного введения с интервалом 7-10 дней в дозе кроликам по 1,0 см³ против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, продолжительностью не менее 12 месяцев. Использование чистых культур возбудителей стрептококкоза Str. pneumoniae и вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенных из местного эпизоотического очага от больных и павших животных, позволяет значительно повысить специфичность вакцины, после вакцинации обеспечивает защиту животных сразу против двух опасных инфекционных болезней стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов.

По данным патентной и научно-технической литературы не обнаружена аналогичная совокупность признаков, компонентов, что позволяет судить об изобретательском уровне заявленного технического решения.

Что касается критерия «промышленная применимость», то компоненты, входящие в состав вакцины, известны и широко применяются в ветеринарной практике при изготовлении инактивированных вакцин: ассоциированная вакцина против миксоматоза и вирусной геморрагической болезни кроликов (СТО 00495549-0044-2007); ассоциированная вакцина против сальмонеллеза, пастереллеза и энтерококковой инфекции поросят ТУ 10.09-62-90, утверждено 01.08.90 г., инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена Главным управлением ветеринарии 16.07.90 г.; вакцина против энтерококковой инфекции телят, ягнят и поросят ТУ 10.09-91-90, утверждено 15.12.90 г.; вакцина против геморрагической болезни кроликов тканевая инактивированная гидроокись алюминиевая СТО 00495549-0005-2006; представлены все необходимые сведения о микроорганизмах. Однако для кроликов эти вакцины не применяются.

Методы выделения и характеристика стрептококков представлены в «Методических указаниях по лабораторной диагностике стрептококкоза животных», утвержденных 25.09.1990 г., Главным управлением ветеринарии с государственной инспекцией при Государственной комиссии СМ СССР по продовольствию и закупкам, а также в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А., Москва. - Колос, 1995, стр.90-95.

Методы выделения и характеристика вирусной геморрагической болезни кроликов описаны в «Методических указаниях по лабораторной диагностике вирусной геморрагической болезни кроликов», утвержденных ГУВ Госагропрома СССР 28.12.88.г.; в книге «Вирусная геморрагическая болезнь кроликов», авторы: Шевченко А.А., Вишняков И.Ф., Бакулов И.А., Власова Т.А. М.: «Две Короны», 1995, 48 с.; в книге «Болезни кроликов», авторы: Шевченко А.А., Шевченко Л.В., Литвинов A.M. М.: «Аквариум», 2002, стр.42-57.

Предложенная вакцина, ассоциированная против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, проста в исполнении, доступна и является промышленно применимой.

Вакцина, ассоциированная против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, содержит суспензии клеток инактивированных формалином возбудителей стрептококкоза Str. pneumoniae и вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, адсорбированные на гидрате окиси алюминия. По внешнему виду вакцина представляет собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым осадком, который при встряхивании легко разбивается в гомогенную взвесь. Срок хранения в сухом, темном месте при температуре от 2 до 10°С 1 год. Вакцина предназначена для профилактики опасных инфекционных заболеваний против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов. Она вызывает образование специфического иммунитета против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов. Вакцина безвредна и ареактогенна. Иммунитет у кроликов, привитых вакциной против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, формируется через 12-15 суток после двукратного введения с интервалом 7-10 дней в дозе по 1,0 см³ против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, продолжительностью не менее 12 месяцев. Вакцину применяют в неблагополучных и угрожаемых по стрептококкозу и вирусной геморрагической болезни кроликов хозяйствах в дозах, указанных выше. Продукты убоя вакцинированных животных используют без ограничений независимо от сроков вакцинации.

К факторам, обуславливающим получение вакцины заданного свойства, относятся последовательность изготовления и процентное соотношение между компонентами, входящими в препарат.

Приведено пять примеров, содержащих компоненты в различных соотношениях на 100 мл вакцины.

Пример 1

Берут пораженные органы от павших кроликов в эпизоотическом очаге, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей стрептококкоза Str. pneumoniae и вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 75,0 с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 0,5, инактивируют внесением формалина 1,0, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя   стрептококкоза Str. pneumoniae,   выделенного из местного эпизоотического очага   в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в   1 см³ 37,5 суспензия печени кроликов с вирусом вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенного из местного эпизоотического очага в физиологическом растворе с активностью 10^3,0-4,0 ЛД 50/см³ 37,5 глюкоза 0,5 формалин 1,0 гидроокись алюминия остальное.

При данном соотношении компонентов вакцина, ассоциированная против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, обладает недостаточной иммуногенной активностью.

Пример 2

Берут пораженные органы от павших кроликов в эпизоотическом очаге, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей стрептококкоза Str. pneumoniae и вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 78,0 с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 1,0, инактивируют внесением формалина 1,0, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Str. pneumoniae, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³ 39,0 суспензия печени кроликов с вирусом вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенного из местного эпизоотического очага в физиологическом растворе с активностью 10^3,0-4,0 ЛД 50/см³ 39,0 глюкоза 1,0 формалин 1,0 гидроокись алюминия остальное.

При данном соотношении компонентов вакцина, ассоциированная против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, обладает иммуногенной активностью.

Пример 3

Берут пораженные органы от павших кроликов в эпизоотическом очаге, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей стрептококкоза Str. pneumoniae и вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 80,0 с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 1,7, инактивируют внесением формалина 1,3, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя   стрептококкоза Str. pneumoniae,   выделенного из местного эпизоотического очага   в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в   1 см³ 40,0 суспензия печени кроликов с вирусом вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенного из местного эпизоотического очага в физиологическом растворе с активностью 10^3,0-4,0 ЛД 50/см³ 40,0 глюкоза 1,7 формалин 1,3 гидроокись алюминия остальное.

При данном соотношении компонентов вакцина, ассоциированная против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, обладает иммуногенной активностью.

Пример 4

Берут пораженные органы от павших кроликов в эпизоотическом очаге, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей стрептококкоза Str. pneumoniae и вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 83,0 с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 1,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя   стрептококкоза Str. pneumoniae,   выделенного из местного эпизоотического очага   в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток   в 1 см³ 41,5 суспензия печени кроликов с вирусом вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенного из местного эпизоотического очага в физиологическом растворе с активностью 10^3,0-4,0 ЛД 50/см³ 41,5 глюкоза 1,0 формалин 1,5 гидроокись алюминия остальное.

При данном соотношении компонентов вакцина, ассоциированная против стрептокккоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, обладает иммуногенной активностью, формирует после вакцинации выраженный напряженный иммунитет, не вызывает поствакцинальных осложнений, стабильна при хранении в течение 12 месяцев (таблица).

Пример 5

Берут пораженные органы от павших кроликов в эпизоотическом очаге, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей стрептококкоза Str. pneumoniae и вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 85,0 с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 2,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя   стрептококкоза Str. pneumoniae,   выделенного из местного эпизоотического очага   в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в   1 см³ 42,5 суспензия печени кроликов с вирусом вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенного из местного эпизоотического очага в физиологическом растворе с активностью 10^3,0-4,0 ЛД 50/см³ 42,5 глюкоза 2,0 формалин 1,5 гидроокись алюминия остальное.

При данном соотношении компонентов вакцина, ассоциированная против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, обладает слабой иммуногенной активностью, формирует напряженный иммунитет, у отдельных животных на месте введение препарата вызывает слабое раздражение.

Из данных таблицы видно, что предлагаемая вакцина, ассоциированная против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, имеет значительные преимущества в сравнении с вакциной по прототипу.

Изобретение относится к ветеринарной медицине. Вакцина в качестве антигенов содержит суспензию клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Str. pneumoniae и вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, полученных путем отбора пораженных органов от павших кроликов из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделения чистых культур возбудителей, выращивание проводят раздельно в мясо-пептонном бульоне Е.coli с глюкозой с концентрацией микробных клеток 4-5 млрд в 1 см³ и получением 10-15%-ной суспензии печени от кроликов, после заражения вирусной геморрагической болезнью кроликов с активностью не менее 10^3,0 ЛД 50/см³ смешивают их в равных соотношениях формалина и гидроокиси алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%: суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Str. pneumoniae, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³ 38,0-41,5, суспензия печени кроликов с вирусом вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенным из местного эпизоотического очага в физиологическом растворе с активностью 10^3,0-4,0 ЛД 50/см³ 38,0-41,5, глюкоза 2,0-1,0, формалин 2,0-1,5, гидроокись алюминия - остальное. Изобретение обеспечивает повышение специфичности и эффективности вакцины. 1 табл.

Вакцина ассоциированная против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, содержащая инактивированные антигены, адъювант, отличающаяся тем, что в качестве антигенов содержит суспензию клеток чистых культур возбудителей стрептококкоза Str. pneumoniae и вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, полученных путем отбора пораженных органов от павших кроликов из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделения чистых культур возбудителей стрептококкоза и вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, выращивание проводят раздельно в мясо-пептонном бульоне Str. pneumoniae с глюкозой до концентрации микробных клеток 4-5 млрд в 1 см³ и получением 10-15%-ной суспензии печени от кроликов, после заражения вирусной геморрагической болезнью кроликов с активностью не менее 10^3,0 ЛД 50/см³, смешивают их в равных соотношениях формалина и гидроокиси алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%:
суспензия клеток чистой культуры возбудителя   стрептококкоза Str. pneumoniae, выделенного   из местного эпизоотического очага в питательной   среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³ 38,0-41,5 суспензия печени кроликов с вирусом вирусной   геморрагической болезни кроликов,   выделенным из местного эпизоотического очага   в физиологическом растворе с активностью   10^3,0-4,0 ЛД 50/см³ 38,0-41,5 глюкоза 2,0-1,0 формалин 2,0-1,5 гидроокись алюминия остальное