Изобретение относится к медицине, биологии, в частности к лабораторной диагностике.
Известны методы определения моносахаридов о-тулоидиновым способом, методом тонкослойной хроматографии [1] на слоях кизельгурт-гипс, силикогель-гипс, с использованием ядерно-магнитного резонанса [2], с помощью масс-спектрометрии [3], методом хроматографии на бумаге [4]; однако перечисленные методы не обладают достаточной специфичностью для близких сахаров (например, глюкозы, сахарозы, манозы). Единственным рутинным методом идентификации и количественного анализа родственных моносахаридов в биологических объектах считается газожидкостная хроматография. Наиболее удобным для этого считается способ приготовления производных простого триметилсилилового эфира [5,6], осуществляющийся следующим образом: 0,1 мл сыворотки с помощью пипетки вводят в центрифужную пробирку; для осаждения сопутствующих компонентов добавляют 0,5 мл 2% ZnSO4·7H2O и 0,5 мл 1,8% Ba(ОН)2, 0,9 мл дистиллированной H2O; раствор перемешивают в смесителе Vortex, отстаивают в течение 5 минут; раствор надосадочной жидкости лиофилизируют; сухой материал переносят в пробирку с крышкой, добавляют 1 мл пиридина, 0,2 мл гексаметилдисилазана, 0,1 мл триметилхлорсилана, все это тщательно перемешивают, приблизительно через 20 минут смесь центрифугируют и хранят в пробирке с тефлоновым покрытием. Препарат стабилен в течение недели при температуре 4oC. Для газохроматографического анализа пробу объемом 1-5 мкл с помощью микрошприца вводят в стеклянную или металлическую колонку длиной 1,7 м и сечением 3 мм, наполненную 15% EGS или 3% SE-52 на промытом кислотой силализированном газ-хроме P. Температура колонки при этом должна составлять около 140oC при изотермическом режиме или программироваться от 110 до 195oC со скоростью 5oC в минуту.
Цель изобретения - увеличение сроков хранения препаратов, упрощение условий их хранения.
Предлагаемый метод отличается тем, что для проведения газохроматографического анализа используется приготовление ацетилированных альдононитрилов моносахаридов сыворотки крови следующим образом: 1 мл сыворотки крови с помощью пипетки вносится в центрифужную пробирку; для осаждения сопутствующих компонентов добавляют 2 мл 1,8% раствора Ba(ОН)2 и 2 мл Zn SO4 ·7H2O, перемешивают стеклянной палочкой в течение 1 минуты и 10 минут отстаивают при комнатной температуре; затем смесь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 минут, 2 мл надосадочной жидкости переносят в чистую сухую пробирку, использующуюся в дальнейшем как реакционный сосуд, и выпаривают на водяной бане досуха; к полученному остатку добавляют 2 мл пиридина, 100 мг гидроксиламина, запаивают в ампулу и нагревают на водяной бане в течение 1 часа; ампулу вскрывают, добавляют 2 мл уксусного ангидрида, вновь запаивают и нагревают на водяной бане 1 час; затем содержимое ампулы с помощью разделительной воронки дважды промывают хлороформом по 2 мл, хлороформы объединяют и выпаривают досуха в сухожаровом шкафу при температуре 60oC.
Подготовленный данным способом препарат стабилен в течение 1 года при комнатной температуре, что позволяет создавать банки проб сыворотки крови, проводить повторные анализы в динамике лечебного процесса.
Для газохроматографического анализа полученный после выпаривания хлороформа осадок разводят 20 микролитрами хлороформа, пробу объемом 0,5-1 микролитр вводят в металлическую колонку хроматографа длиной 2 м, сечением 3 мм, заполненную 3% Silicone XE-60 на отмытом кислотой хроматоне. Температура колонки составляет 220oC при изотермическом анализе или программируется от 210 до 245oC со скоростью 12oC в минуту.
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
СПОСОБ ТОТАЛЬНОЙ КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ОЦЕНКИ МИОКАРДА ЖЕЛУДОЧКОВ СЕРДЦА ПО РЕЗУЛЬТАТАМ ВЫБОРОЧНОГО СТЕРЕОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА | 2000 |
|
RU2199149C2 |
СПОСОБ ОБЩЕГО ЛЕЧЕНИЯ ПАРОДОНТИТА | 1999 |
|
RU2158582C1 |
СПОСОБ АНТИОКСИДАНТНОЙ ТЕРАПИИ | 1997 |
|
RU2149032C1 |
СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ГИПОТИРЕОЗА | 1997 |
|
RU2165648C2 |
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ О-ТОЛУИДИНА В КРОВИ | 1991 |
|
RU2023258C1 |
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МОНОСАХАРИДОВ В ВАГИНАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ | 2014 |
|
RU2604140C2 |
УЛЬТРАЗВУКОВОЙ СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АСПЕРМАТОГЕНЕЗА У ПАЦИЕНТОВ, ПЕРЕНЕСШИХ ОСТРЫЙ ПАРОТИТНЫЙ ОРХИТ | 2001 |
|
RU2200470C2 |
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГИПОСПЕРМАТОГЕНЕЗА И АТРОФИИ СПЕРМАТОГЕННЫХ КЛЕТОК ЯИЧКА | 2001 |
|
RU2199117C2 |
СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ВОЗМОЖНОСТИ ВОЗНИКНОВЕНИЯ РЕЦИДИВИРУЮЩЕГО ИНФАРКТА МИОКАРДА | 1999 |
|
RU2197889C2 |
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДЕТЕРГЕНТА В ПРОБЕ | 2003 |
|
RU2247986C1 |
Способ может быть использован в медицине, биологии для лабораторной диагностики. Для проведения газохроматографического анализа используют ацетилированные альдононитрилы моносахаридов сыворотки крови, анализ проводят на двухметровой колонке диаметром 3 мм, заполненной 3% Selicone ХЕ-60 на отмытом кислотой хроматоне при температуре 220°С в изотермическом режиме или режиме программирования температур от 210 до 245°С со скоростью 12°С в минуту. Способ увеличивает сроки хранения препаратов и упрощает условия их хранения.
Способ определения моносахаридов в сыворотке крови путем осаждения сопутствующих компонентов исследуемой пробы, лиофилизирования надосадочной жидкости и газожидкостной хроматографии на металлической колонке сечением 3 мм, отличающийся тем, что при проведении анализа используют приготовление ацетилированных альдононитрилов моносахаридов сыворотки крови путем прибавления к исследуемой пробе уксусного ангидрида, перемешивания и выпаривания досуха при температуре 60oC, после чего полученный осадок разводят в хлороформе, пробу вводят в колонку хроматографа длиной 2 м, заполненную 3% Silicone XE-60 на отмытом кислотой хроматоне при температуре 220oC в изотермическом режиме или режиме программирования температур от 210 до 245oC со скоростью 12oC в минуту.
МИТРУКА Б.М | |||
Применение газовой хроматографии в микробиологии и медицине | |||
- М.: Медицина, 1982, с.209,210 | |||
0 |
|
SU158399A1 | |
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБЩЕГО СОДЕРЖАНИЯ ГЛЮКОЗЫ В ЦЕЛЬНОЙ КРОВИ И КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ | 1990 |
|
RU2050546C1 |
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ГЛЮКОЗЫ В ЦЕЛЬНОЙ КРОВИ, ФОТОМЕТР ДЛЯ ЕГО РЕАЛИЗАЦИИ | 1990 |
|
RU2050545C1 |
Авторы
Даты
2001-02-27—Публикация
1999-05-12—Подача