СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МОНОСАХАРИДОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ Российский патент 2001 года по МПК G01N33/50 

Описание патента на изобретение RU2163722C2

Изобретение относится к медицине, биологии, в частности к лабораторной диагностике.

Известны методы определения моносахаридов о-тулоидиновым способом, методом тонкослойной хроматографии [1] на слоях кизельгурт-гипс, силикогель-гипс, с использованием ядерно-магнитного резонанса [2], с помощью масс-спектрометрии [3], методом хроматографии на бумаге [4]; однако перечисленные методы не обладают достаточной специфичностью для близких сахаров (например, глюкозы, сахарозы, манозы). Единственным рутинным методом идентификации и количественного анализа родственных моносахаридов в биологических объектах считается газожидкостная хроматография. Наиболее удобным для этого считается способ приготовления производных простого триметилсилилового эфира [5,6], осуществляющийся следующим образом: 0,1 мл сыворотки с помощью пипетки вводят в центрифужную пробирку; для осаждения сопутствующих компонентов добавляют 0,5 мл 2% ZnSO4·7H2O и 0,5 мл 1,8% Ba(ОН)2, 0,9 мл дистиллированной H2O; раствор перемешивают в смесителе Vortex, отстаивают в течение 5 минут; раствор надосадочной жидкости лиофилизируют; сухой материал переносят в пробирку с крышкой, добавляют 1 мл пиридина, 0,2 мл гексаметилдисилазана, 0,1 мл триметилхлорсилана, все это тщательно перемешивают, приблизительно через 20 минут смесь центрифугируют и хранят в пробирке с тефлоновым покрытием. Препарат стабилен в течение недели при температуре 4oC. Для газохроматографического анализа пробу объемом 1-5 мкл с помощью микрошприца вводят в стеклянную или металлическую колонку длиной 1,7 м и сечением 3 мм, наполненную 15% EGS или 3% SE-52 на промытом кислотой силализированном газ-хроме P. Температура колонки при этом должна составлять около 140oC при изотермическом режиме или программироваться от 110 до 195oC со скоростью 5oC в минуту.

Цель изобретения - увеличение сроков хранения препаратов, упрощение условий их хранения.

Предлагаемый метод отличается тем, что для проведения газохроматографического анализа используется приготовление ацетилированных альдононитрилов моносахаридов сыворотки крови следующим образом: 1 мл сыворотки крови с помощью пипетки вносится в центрифужную пробирку; для осаждения сопутствующих компонентов добавляют 2 мл 1,8% раствора Ba(ОН)2 и 2 мл Zn SO4 ·7H2O, перемешивают стеклянной палочкой в течение 1 минуты и 10 минут отстаивают при комнатной температуре; затем смесь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 минут, 2 мл надосадочной жидкости переносят в чистую сухую пробирку, использующуюся в дальнейшем как реакционный сосуд, и выпаривают на водяной бане досуха; к полученному остатку добавляют 2 мл пиридина, 100 мг гидроксиламина, запаивают в ампулу и нагревают на водяной бане в течение 1 часа; ампулу вскрывают, добавляют 2 мл уксусного ангидрида, вновь запаивают и нагревают на водяной бане 1 час; затем содержимое ампулы с помощью разделительной воронки дважды промывают хлороформом по 2 мл, хлороформы объединяют и выпаривают досуха в сухожаровом шкафу при температуре 60oC.

Подготовленный данным способом препарат стабилен в течение 1 года при комнатной температуре, что позволяет создавать банки проб сыворотки крови, проводить повторные анализы в динамике лечебного процесса.

Для газохроматографического анализа полученный после выпаривания хлороформа осадок разводят 20 микролитрами хлороформа, пробу объемом 0,5-1 микролитр вводят в металлическую колонку хроматографа длиной 2 м, сечением 3 мм, заполненную 3% Silicone XE-60 на отмытом кислотой хроматоне. Температура колонки составляет 220oC при изотермическом анализе или программируется от 210 до 245oC со скоростью 12oC в минуту.

Похожие патенты RU2163722C2

название год авторы номер документа
СПОСОБ ТОТАЛЬНОЙ КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ОЦЕНКИ МИОКАРДА ЖЕЛУДОЧКОВ СЕРДЦА ПО РЕЗУЛЬТАТАМ ВЫБОРОЧНОГО СТЕРЕОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА 2000
  • Хубутия Б.И.
  • Калинин Р.Е.
RU2199149C2
СПОСОБ ОБЩЕГО ЛЕЧЕНИЯ ПАРОДОНТИТА 1999
  • Курякина Н.В.
  • Морозова С.И.
  • Алексеева О.А.
RU2158582C1
СПОСОБ АНТИОКСИДАНТНОЙ ТЕРАПИИ 1997
  • Бяловский Ю.Ю.
  • Морозов В.Н.
  • Абросимов В.Н.
RU2149032C1
СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ГИПОТИРЕОЗА 1997
  • Чугунова Л.Г.
  • Рябков А.Н.
  • Савилов К.В.
RU2165648C2
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ О-ТОЛУИДИНА В КРОВИ 1991
  • Зайцева Н.В.
  • Землянова М.А.
  • Нурисламова Т.В.
RU2023258C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МОНОСАХАРИДОВ В ВАГИНАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ 2014
  • Стулова Светлана Васильевна
  • Мельников Владимир Александрович
  • Платонов Игорь Артемьевич
  • Никитченко Наталья Викторовна
RU2604140C2
УЛЬТРАЗВУКОВОЙ СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АСПЕРМАТОГЕНЕЗА У ПАЦИЕНТОВ, ПЕРЕНЕСШИХ ОСТРЫЙ ПАРОТИТНЫЙ ОРХИТ 2001
  • Соловьев А.А.
  • Астраханцев А.Ф.
  • Синяков В.Ф.
RU2200470C2
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГИПОСПЕРМАТОГЕНЕЗА И АТРОФИИ СПЕРМАТОГЕННЫХ КЛЕТОК ЯИЧКА 2001
  • Астраханцев А.Ф.
  • Соловьев А.А.
RU2199117C2
СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ВОЗМОЖНОСТИ ВОЗНИКНОВЕНИЯ РЕЦИДИВИРУЮЩЕГО ИНФАРКТА МИОКАРДА 1999
  • Сазонова Н.С.
  • Суснина А.В.
  • Якушин С.С.
RU2197889C2
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДЕТЕРГЕНТА В ПРОБЕ 2003
  • Галебская Л.В.
  • Тарасова Ю.В.
RU2247986C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 163 722 C2

Реферат патента 2001 года СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МОНОСАХАРИДОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

Способ может быть использован в медицине, биологии для лабораторной диагностики. Для проведения газохроматографического анализа используют ацетилированные альдононитрилы моносахаридов сыворотки крови, анализ проводят на двухметровой колонке диаметром 3 мм, заполненной 3% Selicone ХЕ-60 на отмытом кислотой хроматоне при температуре 220°С в изотермическом режиме или режиме программирования температур от 210 до 245°С со скоростью 12°С в минуту. Способ увеличивает сроки хранения препаратов и упрощает условия их хранения.

Формула изобретения RU 2 163 722 C2

Способ определения моносахаридов в сыворотке крови путем осаждения сопутствующих компонентов исследуемой пробы, лиофилизирования надосадочной жидкости и газожидкостной хроматографии на металлической колонке сечением 3 мм, отличающийся тем, что при проведении анализа используют приготовление ацетилированных альдононитрилов моносахаридов сыворотки крови путем прибавления к исследуемой пробе уксусного ангидрида, перемешивания и выпаривания досуха при температуре 60oC, после чего полученный осадок разводят в хлороформе, пробу вводят в колонку хроматографа длиной 2 м, заполненную 3% Silicone XE-60 на отмытом кислотой хроматоне при температуре 220oC в изотермическом режиме или режиме программирования температур от 210 до 245oC со скоростью 12oC в минуту.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2001 года RU2163722C2

МИТРУКА Б.М
Применение газовой хроматографии в микробиологии и медицине
- М.: Медицина, 1982, с.209,210
0
SU158399A1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБЩЕГО СОДЕРЖАНИЯ ГЛЮКОЗЫ В ЦЕЛЬНОЙ КРОВИ И КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ 1990
  • Ян Эверт Лилья[Se]
  • Свен-Эрик Леннарт Нильссон[Se]
RU2050546C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ГЛЮКОЗЫ В ЦЕЛЬНОЙ КРОВИ, ФОТОМЕТР ДЛЯ ЕГО РЕАЛИЗАЦИИ 1990
  • Ян Эверт Лилья[Se]
  • Свен-Эрик Леннарт Нильссон[Se]
RU2050545C1

RU 2 163 722 C2

Авторы

Строев Е.А.

Бухов В.А.

Окороков В.Г.

Чурилов Г.И.

Даты

2001-02-27Публикация

1999-05-12Подача