СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ КЛИМАКТЕРИЧЕСКОГО ПЕРИОДА Российский патент 2001 года по МПК G01N33/92 

Изобретение относится к области медицины, а именно к терапии, психиатрии и гинекологии, и может быть использовано для ранней диагностики патологического течения климактерического периода.

В настоящее время диагностика патологического течения климактерического периода основывается на клинических проявлениях [1]. Главным недостатком данного способа является неспецифичность клинических проявлений.

Известный способ исследования уровня эстрогенных гормонов с помощью радиоиммуннологического анализа [2] также отличается неспецифичностью вследствие большой вариабельности уровня эстрогенов у женщин в климактерическом периоде [3], и требует специального дорогостоящего оборудования и реактивов.

Наиболее близким к предлагаемому способу является способ дифференциальной диагностики гипертонической болезни и артериальной гипертензии склеротического генеза [4], основанный на исследовании уровня диеновых конъюгатов и кетонов. Известный способ не может быть применен в диагностике патологического течения климактерического периода, так как диеновые конъюгаты и диеновые кетоны являются вторичными продуктами перекисного окисления липидов и не полностью показывают настоящую активность свободно-радикального окисления липидов мембран и липопротеидов организма [5].

Предлагается новый способ диагностики патологического течения климактерического периода путем определения дислипопротеидемии с сопутствующим изменением активности свободно-радикального окисления (СРО) основных липопротеидов плазмы. Этот способ отличается от ранее предложенного тем, что в качестве определения уровня СРО используется показатель интенсивности хемилюминесценции продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в присутствии избытка ионов железа (II). Для повышения специфичности диагностики вводится коэффициент, который зависит как от уровня дислипопротеидемии, так и от уровня хемилюминесценции липопротеидов плазмы.

Предлагаемый способ позволяет определить уровень СРО липидов на фоне измененного липидного обмена, что приводит к повышению диагностической ценности обнаруживаемых изменений в диагностике патологических состояний, в том числе патологического течения климактерического периода.

Факт, что изменение уровня эстрогенов в климактерическом периоде приводит к атерогенным сдвигам липопротеидов плазмы (повышение уровня атерогенных липопротеидов низкой (ЛПНП), очень низкой плотности (ЛПОНП) и снижение антиатерогенных липопротеидов высокой плотности (ЛПВП)) является доказанным [1]. Кроме того, эстрогенные гормоны, и в частности 17- β -эстрадиол, проявляют антиокислительную активность по отношению к СРО липидов [6], что приводит к тому, что при изменении уровня эстрогенов изменяется уровень перекисного окисления липидов. Таким образом, нарушения липидного обмена и повышение уровня свободно-радикального окислительного повреждения липидов лежат в основе патогенетических изменений при патологическом течении климактерического периода, и обнаружение данных изменений с большой долей вероятности позволяет предположить патологическое течение климактерического периода.

Предложенный способ осуществляется следующим образом. С целью диагностики исследуется липидный состав плазмы (сыворотки) крови пациентов, взятой утром натощак из локтевой вены. Разделение фракции липопротеидов проводят осаждением ЛПНП и ЛПОНП фракций липопротеидов добавлением хлорида магния в конечной концентрации 170 ммоль, в присутствии 200 ЕД/мл гепарина. Затем после предварительной инкубации на льду в течение 30 мин пробу центрифугируют при 1500g. При этом в элюате остается фракция ЛПВП, а фракцию (ЛПНП+ЛПОНП) извлекают растворением осадка 2 молярным раствором сульфата аммония. В разделенных фракциях и цельной плазме определяют содержание холестерина любыми известными способами, а также определяют хемилюминесценцию продуктов перекисного окисления липидов. Инициированную перекисью водорода в присутствии избытка ионов железа (II) хемилюминесценцию определяют следующим образом. В кювету хемилюминометра последовательно вносят 0,2 мл фосфатного буфера рН 7,4; 0,1мл пробы (плазмы или разделенные фракции липопротеидов); 0,4 мл сульфата железа (II) (28 мг в 100 мл дистил. воды) и 0,2 мл 3% - ного раствора перекиси водорода. Определяют общую светосумму за 30 и 60 с в кФотон, среднюю скорость реакции за каждые 10 секунд измерения и максимальное значение интенсивности хемилюминесценции за время измерения. Наиболее информативным и общим показателем является показатель общей светосуммы за 60 с. Для повышения специфичности диагностики рассчитывается коэффициент:

где ХЛ(ЛПНП+ЛПОНП) и ХЛ(ЛПВП) - общая светосумма интенсивности хемилюминесценции за 60 с фракций (ЛПНП+ЛПОНП) и ЛПВП соответственно, а ХС(ЛПНП+ЛПОНП) и ХС(ЛПВП) - уровень холестерина соответствующих фракций. Положительное свойство данного коэффициента - независимость от выбранных единиц измерения холестерина и уровня хемилюминесценции.

Для иллюстрации приводится таблица N 1. Обращает на себя внимание повышение общего холестерина плазмы у женщин с патологическим течением климактерического периода (p<0,001) по сравнению с контролем, на фоне этого нет атерогенных сдвигов в уровне холестерина липопротеидов, коэффициент атерогенности у обеих групп женщин находится в пределах нормы и достоверно не различается. Уровень холестерина антиатерогенных ЛПВП у женщин с патологическим течением даже несколько повышен. При этом хемилюминесценция фракции ЛПНП+ЛПОНП значительно выше, чем в контроле (женщины с физиологическим течением климактерического периода), что отражается на коэффициенте - k. Коэффициент k достоверно различается и равен: у женщин с физиологическим течением климактерического периода -2,13 ± 0,18 (границы доверительного интервала при P= 0,99 2,01-2,47); у женщин с патологическим течением -3,08 ± 0,12 (3,00-3,29). Таким образом, повышение диагностического коэффициента k выше 3,0 свидетельствует о патологическом течении климактерического периода (при наличии соответствующего возрастного параметра).

Пример 1. Больная Н., 48 лет, поступила психоневрологическое отделение с жалобами на общее ухудшение самочувствия, головные боли, подавленность, бессонницу, снижение настроения. Последние 6 месяцев менструации нерегулярные. При исследовании липидного обмена было выявлено: общий холестерин плазмы - 6,55 ммоль/л; холестерин ЛПНП+ЛПОНП - 3,59 ммоль/л; холестерин ЛПВП - 1,34 ммоль/л; ХЛ(ЛПВП) - 1205 кФотон; ХЛ(ЛПНП+ЛПОНП) - 1750 кФотон; коэффициент атерогенности k - 3,88. Был поставлен диагноз: патологическое течение климактерического периода. После назначения заместительной гормонотерапии состояние больной значительно улучшилось.

Пример 2. К. , 50 лет. Диспансерный осмотр. Жалоб нет. Менструальные выделения отсутствуют 8 месяцев. При исследовании липидного обмена было выявлено: общий холестерин плазмы - 5,5 ммоль/л; холестерин ЛПНП+ЛПОНП - 3,15 ммоль/л; холестерин ЛПВП - 1,56 ммоль/л; ХЛ(ЛПВП) - 1280 кФотон; ХЛ(ЛПНП+ЛПОНП) - 1350 кФотон; коэффициент атерогенности - 2,02; k - 2,13. Диагноз: физиологическое течение климактерического периода.

Пример 3. В. , 47 лет. Диспансерный осмотр. Жалоб нет. Менструации регулярные. При исследований липидного обмена было выявлено: общий холестерин плазмы - 4,30 ммоль/л; холестерин ЛПНП+ЛПОНП - 2,53 ммоль/л; холестерин ЛПВП - 1,67 ммоль/л; ХЛ(ЛПВП) - 560 кФотон; ХЛ(ЛПНП+ЛПОНП) - 1520 кФотон; коэффициент атерогенности - 1,51; k- 4,1. Через 6 месяцев больная обратилась в женскую консультацию с жалобами на приливы жара, боли в области сердца, головные боли, бессонницу. Был поставлен диагноз: патологическое течение климактерического периода.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет значительно улучшить качество диагностики при одновременном упрощении, прогнозировать патологическое течение климактерического периода, то есть использовать его с целью ранней диагностики. Кроме того, позволяет наблюдать за эффективностью проводимого лечения. Упрощение достигается тем, что в отличие от прототипа исследуемые величины определяются в плазме (сыворотке) крови, тогда как в прототипе требуется дополнительная экстракция липидов из отмытых эритроцитарных мембран. Также предлагаемый способ может быть применен в любой клинической лаборатории, оснащенной фотоколориметром и хемилюминометром (или флуориметром), в отличие от радиоимунного способа определения эстрогенных гормонов, для выполнения которого необходима специализированная радиоиммунная лаборатория и специальное оборудование, и реактивы, например меченный тритием эстрадиол и антитела к эстрогенам. Улучшение качества диагностики достигается тем, что вводимый диагностический коэффициент достоверно различен у женщин с патологическим и физиологическим течением климактерического периода в отличие от прототипа, где с целью диагностики определяется уровень общих липидов плазмы и эритроцитарных мембран, уровень диеновых коньюгатов и кетонов. Между тем уровень диеновых кетонов и коньюгатов, являющихся вторичными продуктами ПОЛ, не отражает истинную величину настоящей активности свободно-радикального повреждения липидов. Уровень же эстрогенных гормонов не различается у исследуемых групп женщин и достоверно снижается уже после менопаузы, в то время как изменения липопротеидного обмена и СРО наблюдаются до клинических проявлений, что позволяет использовать предлагаемый способ для ранней диагностики. Также предлагаемый способ является более эффективным способом наблюдения эффекта от проводимой терапии, так как на фоне гормоно-заместительной терапии определение истинного уровня эстрогенных гормонов затруднено.

Литература
1. Сметник В.П. Климактерические расстройства и принципы заместительной гормонотерапии.//Тер.архив.-1995.- 10.-с.70-74.

2. А.с. 1516983, би. 39 от 23.10.89.

3. Замановский Ю.Ф. Возрастные нейрофизиологические особенности и климактерические расстройства у женщин. М.: Медицина,-1975.

4. А.с. 1524587, би. 45 от 07.12.89, прототип.

5. Владимиров Ю. А., Арчков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.: Наука, - 1972.

6. Чукаев С.А., Караченцев А.Н. Влияние половых гормонов на уровень перекисного окисления плазмы крови in vitro.//Бюлл. экспериметальной биологии и медицины.-1997.- 7.-с.73-76.

Способ может быть использован в медицине, а именно в гинекологии для ранней диагностики патологического течения климактерического периода. Исследуют в сыворотке крови линопротеиды низкой плотности (ЛПНП), линопротеиды очень низкой плотности (ЛПОНП), линопротеиды высокой плотности (ЛПВП) и холестерин (ХС), а также хемилюминесценцию (ХЛ) продуктов перекисного окисления липидов, определяют общую светосумму за 60 с в кФотон и рассчитывают диагностический коэффициент по формуле
где ХЛ(ЛПНП + ЛПОНП) и ХЛ(ЛПВП) - общая сумма интенсивности хемилюминисценции за 60с фракций (ЛПНП + ЛПОНП) и ЛПВП соответственно; XC(ЛПНП + ЛПОНП) и XL(ЛПВП) - уровень холестерина соответствующих фракций. При повышении диагностического коэффициента k выше 3,0 диагностируют патологическое течение климактерического периода. Способ упрощает диагностику течения климактерического периода. 1 табл.

Способ диагностики патологического течения климактерического периода путем исследования в сыворотке крови липопротеидов низкой плотности (ЛПНП), липопротеидов очень низкой плотности (ЛПОНП) и липопротеидов высокой плотности (ЛПВП), отличающийся тем, что в сыворотке крови дополнительно определяют холестерин (ХС), а также хемилюминесценцию (ХЛ) продуктов перекисного окисления липидов, определяют общую светосумму за 60 с в кФотон и по показателям рассчитывают диагностический коэффициент, зависящий от содержания липопротеидов и уровня активности перекисного окисления липидов и не зависящий от избранных единиц измерения, по формуле

где ХЛ(ЛПНП + ЛПОНП) и ХЛ(ЛПВП) - общая светосумма интенсивности хемилюминесценции за 60 с фракций (ЛПНП + ЛПОНП) и ЛПВП соответственно;
ХС(ЛПНП + ЛПОНП) и ХС(ЛПВП) - уровень холестерина соответствующих фракций,
и при повышении диагностического коэффициента К выше 3,0 диагностируется патологическое течение климактерического периода.