СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВИРУСА-ИНДУКТОРА ИНТЕРФЕРОНА Российский патент 2001 года по МПК A61K38/21 A61K35/14 A61K39/17 C12N15/19 C12N15/20 

Изобретение относится к области медицинской промышленности, в частности к получению вируса-индуктора для производства человеческого лейкоцитарного интерферона.

В производстве человеческого лейкоцитарного интерферона предусматривается использование в качестве вируса-индуктора интерферона вакцинного штамма "Н" вируса болезни Ньюкастл (ВБН). Этот штамм используется во многих странах мира, выпускающих человеческий лейкоцитарный интерферон для медицинской и ветеринарной практики или в научных исследованиях. Это наиболее безопасный вирус-индуктор, обладающий индуцирующими свойствами при получении лейкоцитарного интерферона человека или животных.

Известен способ получения вируса-индуктора интерферона путем культивирования штамма "Н" вируса болезни Ньюкастл в 9-11 дневных куриных эмбрионах [1] . Заражающая доза вируса составляет 10⁶ ЦПД/50/0,2 мл. Вирус-индуктор разводят в 0,1 М фосфатно-солевом буфере. Эта доза вводится в аллантоисную полость эмбриона шприцем с соблюдением условий стерильности. Затем эмбрионы инкубируют 48 ч при (32±0,5)^oC. После инкубации эмбрионы охлаждают при 4^oC и отсасывают вируссодержащую аллантоисную жидкость, которая после необходимых контролей используется в качестве вируса-индуктора интерферона. Вируссодержащая жидкость должна отвечать следующим требованиям: быть бактериологически стерильной, иметь гемагглютинирующую активность (ГА) 256 единиц, инфекционный титр не ниже 10¹¹ ЦПД/50/мл. При использовании этого индуктора в производстве человеческого лейкоцитарного интерферона получают интерферон с противовирусной активностью 11 000 - 14 000 МЕ/мл.

Задача изобретения - повышение интерферониндуцирующей способности вирусного индуктора.

Для решения поставленной задачи в способе получения вируса-индуктора интерферона маточный материал (штамм "Н" вируса болезни Ньюкастл ГКВ N 2348) разводят фосфатно-солевым буфером с добавлением 10,0% Д(+)-лактозы, вводят в аллантоисную полость куриных эмбрионов в концентрации 10⁶ ЦПД/50/0,2 мл, с последующим инкубированием и отбором вируссодержащей жидкости.

Отличительным признаком предлагаемого способа является добавление Д(+)-лактозы в фосфатно-солевой буфер при разведении маточного штамма, что обеспечивает получение более высоких титров интерферона с активностью 16 000 - 18 000 МЕ/мл против 11 000 - 14 000 МЕ/мл у прототипа (cм. таблицу).

Пример 1. Штамм "Н" вируса болезни Ньюкастл (ГКВ N 2348) использовали в качестве маточного штамма. Для получения производственного штамма в аллантоисную полость 9-10 дневного куриного эмбриона вводят с соблюдением условий стерильности в концентрации 10⁶ ЦПД/50/0,2 мл исходной суспензии маточного штамма, разведенного в фосфатно-солевом буфере, с добавлением 10,0% Д(+)-лактозы. Инкубируют в течение 48 ч при температуре (32±0,5)^oC. После инкубации эмбрионы охлаждают в течение 18-20 ч при 4^oC, отсасывают вируссодержащую аллантоисную жидкость. Титр интерферона α -типа, полученный с данным индуктором, составляет 16 000 МЕ/мл.

Пример 2. Штамм "Н" вируса болезни Ньюкастл (ГКВ N 2348) использовали в качестве маточного штамма. Для получения производственного штамма в аллантоисную полость 9-10 дневного куриного эмбриона вводят с соблюдением условий стерильности в концентрации 10⁶ ЦПД/50/0,2 мл исходной суспензии маточного штамма, разведенного в фосфатно-солевом буфере, с добавлением 10,0% Д(+)-лактозы. Инкубируют в течение 48 ч при температуре (32±0,5)^oC. После инкубации эмбрионы охлаждают в течение 18-20 ч при 4^oC, отсасывают вируссодержащую аллантоисную жидкость. Титр интерферона α-типа, полученный с данным индуктором, составляет 18 000 МЕ/мл.

Источники информации
1.Патент РФ N 2140284, кл. А 61 К 38/21, публ. 27.10.99.

Изобретение относится к области биотехнологической промышленности, в частности к получению вируса-индуктора для производства человеческого лейкоцитарного интерферона. Способ предусматривает получение вируса-индуктора интерферона; полученный маточный материал (штамм "Н" вируса болезни Ньюкастл ГКВ 2348) разводят фосфатно-солевым буфером с добавлением 10,0% Д(+)-лактозы, вводят в аллантоисную полость куриных эмбрионов в концентрации 10⁶ ЦПД/50/0,2 мл с последующим инкубированием и отбором вируссодержащей жидкости. Способ обеспечивает получение титров интерферона с активностью 16000 - 18000 МЕ/мл против 11000 - 14000 МЕ/мл у аналога. 1 табл.

Способ получения вируса-индуктора интерферона, включающий введение вируса болезни Ньюкастла, штамм "Н", ГКВ 2348 в фосфатно-солевом буфере в аллантоисную полость куриных эмбрионов с последующим их инкубированием и отбором вируссодержащей жидкости, отличающийся тем, что используют фосфатно-солевой буфер с добавлением 10% Д (+)-лактозы.