Штамм в/ленинград/489/80 вируса гриппа,используемый для приготовления инактивированной гриппозной вакцины Советский патент 1984 года по МПК C12N7/00 A61K39/145 

Изобретение относится к вирусо- логин и касается создания нового штамма вируса гриппа, пригодного дл получения гриппозной вакцины, совре менной антигенной структуры. Известен штамм вируса гриппа в(Ленинград) 14/76, используемый для приготовления инактивированной гриппозной вакцины flj . Однако известный штамм по антигенной структуре близкородственен эталонному вирусу В(Гонконг) 5/72 и отличается от современного эталона В(Сингапур) 222/79. Цель изобретения - создание штам ма вируса гриппа, соответствующего по антигенной структуре эталонному и циркулирующим вирусам и характеризующегося высокой репродуктивиой активностью. Эта цель достигается с помощью штамма В (Ленинград)489/80 вируса гриппа. Штамм выделен в Ленинграде в июл 1980 г. от больного ребенка. Хранит ся в Государственной коллекции вирусов гриппа под номером ГКВ 1817 и характеризуется следующими признаками. Морфология. Полиморфная структура, типичная для вирусов гриппа. Физические свойства. Коэффициент седиментации 750 5 плавучая плотность 1,21 г/см. По антигенной структуре штамм В Ленинград}489/80 близок к эталонному вирусу В (Сингапур) 222779. В перекрестной реакции торможения гемагглютинации нейтрализуется анти сывороткой в(Сингапур) 222/80 от 1/ до полного титра. Чувствительно.сть к ингибиторам. Штамм В (Ленинграду 489/80 чувствителен к термослабильным ингиби-. торам (тли) нормальных сывороток мо ских свинок, белых мышей, кроликов, телят, достигая титров (К 80)-(Г.32 и нечувствителен к ТЛИ сывороток крыс и лошадей. Ингибирующзя активность полностью устранялась прогреванием сывороток при в течение 1ч. Активность к специфическим антит лам человеческих сывороток. Было проведено сравнительное из чение способности указанного штамма выявлять антитела в-человеческих сы воротках в сопоставлении с диагностическим штаммом В(Ленинград) 369/75 и вирусом В(Сингапур) 222/79. Оказалось, что штамм обладает высокой диагностической активностью в РТГА. Среднегеометрические титры антител при использовании предлагаемого штамма-приближаются к показателям эталонного вируса В(Сингапур) 222/79. Спектр нейтрализующей активности специфических антител. Изучена сравнительная характеристика спектра нейтрализующей активности специфических антител, полученных после иммунизации белых крыс эталонными штаммами и различными вирусами 1975-1981 гг. выделения. Показано, что штамм в(Ленинград)489/80 характеризуется высоким показателем нейтрализующей активности специфических антител - коэффициент нейтрализации составляет 0,57 и превосходит по этому показателю эталонный штамм В(Сингапур) 222/79 (коэффициент 0,29). Репродукционная активность. Вирусный изолят на уровне 2-3 пассажа характеризовался умеренной репродукционной активностью. Повьш1ение гемагглютинирующей и инфекционной активности достигнуто в результате.последовательного пассирования в развивающихся куриных эмбрионах с чередованием инфицирующих доз. Аллантоисный вирус: титр инфекционнный - 7,5-8,5 Е ЭЙДj- /0,2 мл, титр гемагглютинина - (1; 256) -(11024) в 0,2. мл с 1%-ными эритроцитами кур. Лиофилизированный вирус: титр инфекционный - 7,0-7,5 eg ЭИД5.д/0,2 мл, Титр гемагглютинина- 1:256 в 0,2 мл. Стабильность биологическихсвойств прослежена дополнительно до. 20 пассажа на развивающихся куриных эмбрионах. Штамм используют следующим образом. Пример. Маточный материал вируса В Ленинград) 489/80, прошедший контроли на стерильность, наличие посторонних гемагглютинирующих вирусов, биологическую активность и безвредность для белых мышей при подкожном введении, разводят в 100000 раз (Ю )на фосфатно-солевом буфере (рН 7,2), содержащем антибиотики. Куриные эмбрионы 11-дневного возраста заражают полученным разведением вируса из расчета по 0,2 мл на эмбрион в аллантоисиую полость в дозе 10 ЭИДуд/0,2 мл. Зараженные куриные эмбрионы инкубируют в термостате с увлажнением воздуха в течение 72 ч при , после чего их охлаждают при 4°С в течение 18 ч. Куриные эмбрионы стерильно вскрывают, всю аллантоисную жидкость собирают и выдерживают при в течение 18 ч. Полученный материал проверяют в реакции гемагглютинации с 1%-ной взвесью эритроцитов кур в физиологическом растворе и проводят все указанные биологические контроля. Полученная аллантоисная вируссодержащая жидкость является материало для дальнейшего приготовления инактивированнрй вакцины различными методами. Экспериментальные сериИ) 3,4 и 6 вакцины имеют гемагглютинирующую активнос:тв 414 ME/мл, 200 МЕ/мл и 600 МЕ/мл соответственно овальбумин

в количестве 0,26 мкг/мл, 0,16 мкг/м и 0,5 мкг/мл. Среднегеометрические титры к типу В у иммунизированных мышей равны 1;182, 1;182 и 1; 120. При проверке иммуногенности на людях сероконвексия к типу В составила у серии 3 70%, у серии 4 - 73% и у серии 6 - 73%. Среднегеометрические титры антител равны соответственно 1.97, 1 :104 и 1:97.

Использование штамма в(Ленинград 489/80 вируса гриппа позволит повысить иммуногенность инактивирован ной гриппозной вакцины типа В за счет антигенного соответствия вак-. цинного штамма эпидемическому.

Кроме того, предлагаемый штамм характеризуется высокой гемагглютинирующей активностью и использование его в промышленном производстве инактивированной вакцины позволит снизить расход куриных эмбрионов, являющихся ценным пищевым сырьем.

Штамм В(Ленинград)489/80 вируса гриппа ГКВ 1817 (Государственная коллекция вирусов Института вирусологии им. Д.И.Ивановского), использye fidй для приготовления инактивированной гриппозной вакцины.