СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕНТИАКАУЛЕИНА, ОБЛАДАЮЩЕГО ХОЛАТОСТИМУЛИРУЮЩИМ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 2002 года по МПК A61K35/78 A61P1/16 

Изобретение относится к области медицины и касается способа получения биологически активного соединения из растительного сырья, обладающего холатостимулирующим действием.

Известен способ получения гентиакаулеина 1,7-дигидрокси-3,8- диметоксиксантона из надземной части Swertia japonica и S. chirata, обладающего противовирусной и противотуберкулезной активностями, путем экстракции сырья метиловым спиртом, хроматографирования суммы извлечения на колонках полиамида и силикагеля. Выход составляет 0,1% от массы исходного сырья [Komatsu М. , Tomimori Т. , Mikuriga N. japan 7127, 558 сер. 2 Сб. 3288. C1 В 01 D, A 61 K, C 07 d; Komatsu M" Tomimori T. 01. 02. 69 7127, 558 C1 В 01 d, A 61 К; Taisho Pharmacephtical Co Ltd] . Кроме того, известен также способ получения гентиакаулеина из Swertia connata (надземной части и корней), заключающийся в том, что сырье экстрагируют метанолом, упаривают и хроматографируют на колонке силикагеля. Выход гентиакаулеина составляет 0,5% от массы исходного сырья [Соловьева Е. В. , Денисова О. А. , Глызин В. И. , Патудин А. В. Ксантоновые соединения Swertia connata schrenh // Химия природных соединений. - 1980. -N 6, - с. 840 - 841] . Недостатками указанных способов являются низкий выход целевого продукта, длительность и трудоемкость технологического процесса (многократная экстракция и низкий выход целевого продукта).

Наиболее близким по технологической сущности и достигаемому результату является способ получения гентиакаулеина из S. connata, заключающийся в том, что надземную часть экстрагируют этанолом, этанольные извлечения упаривают и фракционируют хлороформом, этилацетатом и бутанолом. Хлороформное извлечение хроматографируют на колонке силикагеля и получают гентиакаулеин. Выход составляет 0,5% от массы исходного сырья [Соловьева Е. В. , Денисова О. А. , Глызин В. И. , Патудин А. В. Ксантоновые соединения S. connata sclrenh // Химия природных соединений. - 1980. -N 6. - с. 840-841] . Недостатком этого метода является также низкий выход целевого продукта.

Задачей предлагаемого способа является повышение выхода целевого продукта из надземной части горечавника бородатого с холатостимулирующей активностью и расширение сырьевой базы.

Указанная задача достигается следующим способом: растительное сырье экстрагируют 95% спиртом, содержащим от 1 до 2% соляной кислоты при кипячении, упаривания объединенных экстрактов и извлечения ксантоновых агликонов хлороформом. Хлороформное извлечение после упаривания и хроматографирования на колонке силикагеля с элюцией хлороформом позволяет получить готовый продукт с увеличением выхода до 1,5%. Этот способ приводит к увеличению выхода готового продукта в 2 раза, имеющего характеристики, представленные в табл. 1.

Нижеследующие примеры иллюстрируют заявляемый способ.

Пример 1. 100 г измельченной водушно-сухой части травы горечавника бородатого заливают по 300 мл 70% C₂Н₅ОН + 25 мл HCl (1%) трижды при нагревании по 2 часа. Объединенные извлечения фильтруют и упаривают до 400 мл, добавляют 100 мл воды и извлекают в делительной воронке хлороформом по 1 л трижды (три раза). Объединенные хлороформные извлечения упаривают досуха. Выход суммы ксантоновых агликонов - 18,7 г. Хлороформное извлечение наносят на колонку силикагеля L 40/100μ и элюируют хлороформом. При 1300 мл хлороформа выделяется вещество гентиакаулеин, конец элюции 1600 мл. Фракции собирают, упаривают досуха, добавляют 20 мл 95% спирта. Осадок технического гентиакаулеина отфильтровывают и перекристаллизовывают (растворяют в 300 мл, упаривают до 100 мл и оставляют для кристаллизации на 10 часов при температуре 2-4^oC в холодильнике). Осадок отфильтровывают, сушат в сушильном шкафу при 100-105^oC в течение 3-х часов. Получают 1,50 г гентиакаулеина, что составляет 1,5% от массы исходного сырья.

Использование предлагаемого способа в сравнении с известным обеспечивает повышение выхода целевого продукта с 0,5% до 1,5%.

Пример 2 100 г измельченной воздушно-сухой травы горечавника бородатого заливают по 350 мл 95% C₂H₅OH+30 мл HCl (2%) трижды при нагревании по 2 часа. Объединенные извлечения фильтруют и упаривают до 400 мл, добавляют 100 мл воды и извлекают хлороформом по 1 л (три раза). Объединенные хлороформные извлечения упаривают досуха. Выход суммы агликонов - 17,6 г. Хлороформные извлечения наносят на колонку силикагеля L 40/100μ и элюируют хлороформом. При 1300 мл хлороформа выделяется вещество гентиакаулеин, конец элюции 1600 мл. Фракции собирают, упаривают досуха, добавляют 20 мл спирта. Осадок технического гентиакаулеина отфильтровывают и перекристаллизовывают из спирта (растворяют в 300 мл, упаривают до 100 мл и оставляют для кристаллизации на 10 часов при температуре 2-4^oC в холодильнике). Осадок отфильтровывают, сушат в сушильном шкафу при 100-105^oC в течение 3-х часов. Получают 1,20 г исходного продукта, что составляет 1,2% от массы воздушно-сухого сырья.

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ВЫДЕЛЕННОГО ГЕНТИАКАУЛЕИНА.

Определение желчегонного действия гентиакаулеина проведено на 60 белых крысах обоего пола массой 180-200 г по методике Н. П. Скакуна и А. Н. Олейник [Скакун Н. П. , Олейник А. Н. Сравнительное действие атропина и метацина на внешнесекреторную функцию печени //Фармакология и токсикология. - 1967. - Т. 30. - N 3. - С. 334 - 337] . Животные находились на протяжении 5 часов под наркозом (1% водный раствор барбамила в объеме 1 мл на 100 г массы животных) при комнатной температуре. Желчь собирали с помощью специальной канюли, вставленной в общий желчный проток, через каждый час. Гентиакаулеин изучали в дозах: 10, 50, 100 мг/кг. Крысам контрольной группы вводили дистиллированную воду в эквиобъемном количестве. О степени желчегонного действия исследуемых средств судили по скорости секреции желчи, общему ее объему, а также по количеству выделенных в каждой часовой порции желчи холестерина [Дроговоз С. М. Сравнительное изучение и особенности действия желченных препаратов на желчеобразовательную функцию печени в норме и патологии. Автореферат диссертации доктора медицинских наук. - Харьков. - 1972. - 34 с. ] , билирубина [Скакун Н. П. Нейрогуморальный механизм желчегонного действия инсулина // Проблемы эндокринологии и гормонотерапии. - 1956. - N 6. - С. 75- 78. ] , общих и отдельных конъюгированных (таурохолевую, гликохолевую) и неконъюгированных (холевую и дезоксихолевую) желчных кислот [Карбач Я. И. Количественное определение желчных кислот в желчи и крови с применением хроматографического метода // Биохимия. - 1961. - Т. 26. - N2. -С. 305-309. ] . Полученные данные статистически обработаны с использованием t-критерия Стьюдента [Монцевичюте-Эрингене Е. В. Упрощенные математико-статистические методы в медицинской исследовательской работе // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - 1964. -N 14. - С. 71-78] . Определение ЕД₅₀ гентиакаулеина проведено по методике, описанной Ивановым Ю. И. , Погорелюк О. Н. [Иванов Ю. И. , Погорелюк О. Н. Статистическая обработка результатов медико-биологических исследований на микрокалькуляторах по программам. - М. : Медицина, 1990. - 224 с. ] .

Установлено, что введение гентиакаулеина в дозе 10 мг/кг не оказывало существенного влияния на холеретическую реакцию у крыс (табл. 2). Отмечено лишь повышение концентрации в желчи животных билирубина на 74% и проявилась тенденция к увеличению экскреции холестерина и стимуляции синтеза желчных кислот. На этом фоне, в спектре отдельных желчных кислот возрастали доли конъюгированных, так и не неконъюгированных холатов (табл. 3). Гентиакаулеин в дозе 50 мг/кг массы оказывал умеренное желчегонное действие при введении его интактным белым крысам (табл. 2). Так, скорость секреции желчи через час после его введения возрастала на 15% по сравнению с контролем. Затем холеретическая реакция у крыс имела тенденцию к повышению и только через 4 часа после введения гентиакаулеина возрастала на 11% по сравнению с контролем. При этом возрастало общее количество выделенной желчи, а также ускорялась экскреция билирубина. Гентиакаулеин в указанной дозе стимулировал синтез и выделение общих желчных кислот, концентрация которых в желчи повысилась почти в 1,5 раза по сравнению с контролем. При анализе спектра отдельных желчных кислот, гентиакаулеин наиболее существенно влиял на синтез конъюгированных желчных кислот (табл. 3). При увеличении дозы исследуемого ксантона до 100 мг/кг не было отмечено изменений холеретической реакции у крыс. Гентиакаулеин способствовал ускорению выделения билирубина на 40% и экскреции холестерина (табл. 2). Одновременно установлена умеренная стимуляция синтеза и секреции общих желчных кислот за счет повышения в спектре отдельных желчных кислот только конъюгированных холатов (табл. 3). На основании полученных данных, гентиакаулеин оказывает холатостимулирующее действие.

Установлено, что ЕД₅₀ гентиакаулеина соответствует 31,5 ± 5,9 мг/кг массы.

Изобретение относится к области медицины. Сырье - горечавник бородатый экстрагируют этиловым спиртом, содержащим 1-2% HCl при кипячении. Экстракт упаривают и сумму ксантоновых агликонов извлекают хлороформом. Хлороформное извлечение хроматографируют на колонке силикагеля, упаривают. Выпавший технический гентиакаулеин очищают перекристаллизацией из метилового спирта. Изобретение позволяет повысить выход продукта. 3 табл.

Способ получения гентиакаулеина, обладающего холатостимулирующим действием, путем экстракции растительного сырья спиртовым раствором, упаривания экстракта, обработки хлороформом и отделения адсорбционной хроматографией, отличающийся тем, что в качестве растительного сырья используют горечавник бородатый, экстракцию проводят раствором этилового спирта, содержащим 1-2% соляной кислоты при кипячении, и после обработки хлороформом проводят повторное упаривание.