ИММУНОРЕГУЛИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА КОМПЛЕКСА ПРИРОДНЫХ ЦИТОКИНОВ В ПРЕДУПРЕЖДЕНИИ РАЗВИТИЯ КАТАРАКТЫ ПОСЛЕ АНТИГЛАУКОМАТОЗНЫХ ОПЕРАЦИЙ Российский патент 2002 года по МПК A61K38/19 A61P27/12 

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии. В последние годы в различных областях медицины, и в частности в офтальмологии, с успехом применяется естественный гетерологичный комплекс природных цитокинов, полученный Л.В.Ковальчуком и Л.В.Ганковской из культур стимулированных лейкоцитов периферической крови [Ковальчук Л.В., Баярт Б., Ганковская Л.В. // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. - 1989. - 9. - С. 340-342.; Ковальчук Л.В., Ганковская Л. В. // Иммунология. - 1995. - 1 - С. 4-7] В состав указанного комплекса входят интерлейкины: IL1-β, IL-6, фактор некроза опухоли ФHO-α, трансформирующий фактор роста TGF-β1, а также миграцию ингибирующий фактор (МИФ).

Цитокины являются низкомолекулярными медиаторами межклеточных взаимодействий, обладающими высокой биологической активностью. Способность продуцировать цитокины присуща иммунокомпетентным и некоторым другим клеткам организма, в том числе и тканям глаза [Образцова Е.Н, Анализ состава цитокинов слезной жидкости и сыворотки крови в норме и при некоторых видах офгальмопатологии: Автореф. дис....канд. мед. наук. - М., 1996]. Посредством цитокинов регулируются характер, глубина и продолжительность воспаления и иммунного ответа при воспалении.

Было установлено, что под влиянием экзогенного введения комплекса аутологичных или гетерологичных цитокинов происходит изменение собственного цитокинового фона тканей [Ковальчук Л.В., Баярт Б., Ганковская Л.В. // Бюлл. эксперим. Биологии и медицины. -1989. - 9. - С. 340-342]. Это индуцирует приток в воспалительный очаг не нейтрофилов, а моноцитарных макрофагов. Мононуклеарная воспалительная реакция имеет локальный и менее выраженный характер. Усиление функциональной активности макрофагов под влиянием комплекса экзогенных цитокинов способствует более быстрой резорбции продуктов распада, что имеет принципиальное значение для восстановления нормального метаболизма тканей глаза и сохранения прозрачности хрусталика.

Прогрессирование катаракты наблюдается у 30% [Am. J. Ophthal mol., 1970, v. 69. - P. 740-746) - 81% больных (J. Fr. Ophthalmol., v. 12. - Р. 527-534] и является одной из основных причин снижения остроты зрения после операций по поводу первичной открытоугольной глаукомы, приводя к необходимости повторного хирургического вмешательства с целью удаления мутного хрусталика.

Среди причин, вызывающих это осложнение, существенное значение имеют активизация пролиферативных процессов в переднем отрезке глаза под влиянием нарушения проницаемости гематоофтальмического барьера во время операции [Курышева Н.И., Федоров А.А., Еричев В.П.; // Вестн. офтальмол. - 2000, 2. - С. 13-16; Hales A., Chaberlain С., McAvoy J. // Invest. Ophthalmol. Vis Sci. - 1995. - Vol. 36, N 8. - P. 1709-1713; Tripathi R., Borisuth N., Tripathi B. // Drug Devel. Research. - 1991.-V.22.- P. 1-23] и усиление аутоиммунных процессов после нее [Курышева Н.И., Слепова О.С., Еричев В.П. // Вестн. офтальмол. - 1997. - 1. - С. 8-11; Лихванцева В.Г. Клинико-иммунологические факторы у больных катарактой при имплантации ИОЛ: Дис...канд. мед наук. - М. 1992].

Технический результат направлен на снижение частоты развития катаракты после антиглаукоматозных операций за счет иммунорегулирующих свойств комплекса природных цитокинов, индуцирующих продукцию эндогенного интерферона гамма и подавляющих пролиферативные и аутоиммунные процессы, ответственные за формирование помутнений хрусталика.

Клинические исследования проведены на 50 больных (53 глаза) первичной открытоугольной глаукомой в начальной стадии (5 глаз), развитой (28 глаз) и далеко зашедшей стадии (20 глаз) с некомпенсированным офтальмотонусом. У 20 обследованных пациентов хрусталики были прозрачными, у 21 больного имелась начальная катаракта, у 9 - незрелая. Всем больным была выполнена антиглаукоматозная операция: в 20 случаях - трабекулэктомия, в 33 - непроникающая глубокая склерэктомия (НГСЭ) в классическом варианте. Ни в одном случае не наблюдалось осложнений ни во время операции, ни в послеоперационном периоде. Наряду с традиционной противовоспалительной терапией после операции пациентам основной группы (33 глаза) назначался комплекс природных цитокинов по разработанной нами схеме: инстилляции препарата по 1 капле 3 раза в день в течение 2 недель, а затем 1 раз в день в течение недели. При этом содержимое ампулы (100 мг препарата) разводилось в 2 мл физиологического раствора и, согласно инструкции препарат вводился отдельно от других местно применяемых медикаментов.

Контрольную группу составили 15 больных (20 глаз), лечение которых отличалось тем, что в послеоперационном периоде цитокины не применялись. Группы были сопоставимы по полу, возрасту (средний возраст 66 лет), стадиям глаукомы, а также виду хирургического вмешательства.

Пациенты наблюдались в динамике в течение года. О состоянии хрусталика судили по данным компьютерного анализа его изображений, полученных при фоторегистрации на фотощелевой лампе "Carl Zeiss" (Германия).

Всем больным проводилось иммунологическое обследование: определяли содержание интерферона-гамма (ИФH-γ) и фактора некроза опухоли (ФHО-α) в слезной жидкости. Исследование проводили методом иммуноферментного анализа с применением коммерческих тест-систем (фирма "АО ЦИТОКИН", Санкт-Петербург, чувствительность 20 пкг/мл) до операции, через одну неделю, один, три и шесть месяцев после операции. Для сравнения исследовали слезную жидкость 10 здоровых доноров того же возраста.

Статистическая обработка проведена с помощью критерия Стьюдента и χ².
Обследование оперированных больных в динамике показало, что в группе пациентов, получавших в послеоперационном периоде цитокинотерапию, катаракта прогрессировала в 3 раза реже, чем в контроле: в 10% (3 глаза) и в 30% (6 глаз) соответственно. Во всех случаях развитие помутнений хрусталика у пациентов опытной группы наблюдалось после трабекулэктомии, причем у всех больных уже перед операцией была выявлена незрелая катаракта. В контрольной группе прогрессирование помутнений хрусталика отмечено в 5 случаях после трабекулэктомии и в одном - после НГСЭ. При этом на момент операции у половины больных с последующим прогрессированием катаракты хрусталики были прозрачными.

Полученные результаты можно объяснить по-видимому тремя механизмами действия комплекса природных цитокинов: противовоспалительным, антипролиферативным, а также его способностью подавлять местные аутоиммунные процессы.

Уменьшение воспалительной реакции в послеоперационном периоде у пациентов опытной группы подтверждается результатами исследования ФHO-α в слезной жидкости, как цитокина, отражающего уровень воспалительной реакции (или готовности к ней) [Слепова О.С., Герасименко В.А., Макаров В.П. и соавт. // Вестн. офтальмол. - 1998. - N 3. - C. 28-32]. Если в течение первой недели после операции было отмечено повышение его уровня в обеих группах больных (уровень цитокина достигал 560±56,2 пкг/мл, а частота выявления его составила 100%), то к концу первого месяца после операции отмечалось более существенное снижение частоты выявления (60%) данного цитокина и его уровня (332±88,5 пкг/мл) у больных, получавших "Суперлимф", по сравнению с пациентами группы сравнения, у которых на данном этапе ФHO-α выялялся в 75% случаев, а уровень его в слезе составлял 555±79,5 пкг/мл (р<0,05).

Было установлено, что повышенное содержание ФHO-α в слезной жидкости (выше 440 пкг/мл) к концу первой недели после операции ассоциировалось с более частым прогрессированием катаракты (91%); коэффициент корреляции составил 0,73.

Антипролиферативное действие комплекса цитокинов подтверждается результатами исследования ИФН-γ в слезной жидкости как интерферона, способного ингибировать продукцию пролиферативного фактора макрофагами [Dey A., Kim L., Li W. // J. Cell Biochem. - 1999. - Vol. 72, N 2. - P. 232-241] и стимулировать синтез интерлейкина 1 [Ершов Ф.И. Система интерферона в норме и патологии. - М., 1996. - С. 93].

Мы полагаем, что комплекс природных цитокинов может моделировать выработку эндогенных цитокинов таким образом, что происходит усиление продукции ИФН-γ, синтез которого является сдерживающим фактором в аномальной пролиферации и миграции под заднюю капсулу абберантных клеток хрусталикового эпителия и тем самым ограничивает развитие субкапсулярной катаракты.

Динамика содержания ИФН-γ в слезной жидкости у оперированных больных глаукомой представлена на чертеже.

Накануне операции ИФН-γ был обнаружен в 47% случаев (25 глаз), и уровень его составил в среднем 112,8±9,6 пкг/мл (р<0,1). Было отмечено постепенное нарастание концентрации ИФН-γ у пациентов, получавших комплекс цитокинов в послеоперационном периоде, достигающее пика к 3 месяцу после операции. При этом частота выявления ИФН-γ составила 100% через неделю, 85% через месяц и 90% через 3 месяца после операции, возвращаясь к исходной 50% к концу первого полугода. У пациентов контрольной группы также наблюдалось повышение содержания ИФН-γ в раннем послеоперационном периоде. Однако средние значения его уровня в слезе к концу первого месяца после операции были в среднем на 230 пкг/мл ниже, чем в опытной группе (р<0,05), и это различие усиливалось к окончанию третьего послеоперационного месяца.

Третий месяц после антиглаукоматозных операций является критическим в плане активизации аутоиммунных реакций, что ассоциируется с более частым прогрессированием катаракты [Курышева Н.И., Слепова О.С, Еричев В.П. // Вестн. офтальмол. - 1997. - 1.- С. 8-11]. С этих позиций важным представляется усиление продукции ИФН-γ у пациентов, получавших цитокинотерапию. Нарастание уровня ИФН-γ в слезной жидкости косвенно свидетельствует об увеличении выработки лимфоцитов звена Т-хелперов Th1. При этом продукция Т-хелперов Th2, ответственных за выработку аутоантител, снижается [Ершов Ф.И. Система интерферона в норме и патологии. - М., 1996. - С. 102].

Таким образом, комплекс природных цитокинов может способствовать подавлению аутоиммунных реакций.

Результаты показали, что прогрессирование катаракты после антиглаукоматозных операций ассоциировалось с более низким содержанием ИНФ-γ в слезной жидкости больных глаукомой на всех этапах обследования. Особенно показательными в этом плане следует считать окончание 1-го и 3-го месяцев после операции: уровень ИHФ-γ в слезе у пациентов с прогрессированием катаракты был в несколько раз ниже, чем у больных без прогрессирования помутнений хрусталика (см. таблицу).

Эффективность предлагаемого лечения подтверждается следующим клиническим примером.

Пример. Больная Л. , 60 лет. Диагноз: открытоугольная далеко зашедшая глаукома с высоким офтальмотонусом левого глаза. При обследовании хрусталики обоих глаз прозрачны. Острота зрения 1,0. Выполнена НГСЭ. В послеоперационном периоде больная получала раствор дексаметазона (0,1%) и левомицетина (0,3%) в виде инстилляциий и подконъюнктивальных инъекций, а также раствор препарата, содержащего комплекс природных цитокинов, по 1 капле 3 раза в день в течение 2 недель, а затем 1 раз в день в течение недели. Послеоперационный период протекал спокойно: воспалительная реакции в виде слабой смешанной инъекции наблюдалась только в первые двое суток после операции. При биомикроскопии выявлено сохранение прозрачности хрусталика на всех этапах обследования, что было подтверждено результатами компьютерного анализа фотоизображений хрусталика. Через полгода хрусталики обоих глаз прозрачны, острота зрения 1,0.

Исследование цитокинов слезной жидкости показало снижение уровня ФHO-α с 565,0 пкг/мл в конце первой недели после операции до 113,0 пкг/мл через месяц, а также повышение содержания ИФН-γ с 44,0 пкг/мл накануне операции до 410,0 пкг/мл к концу первого месяца и 920,0 пкг/мл через три месяца после операции.

Таким образом, заявляемое средство оказывает целенаправленное терапевтическое действие, предотвращающее прогрессирование катаракты после антиглаукоматозных операций, что позволяет добиться более высокого функционального результата хирургического лечения глаукомы.

Изобретение относится к медицине. Предложено применение комплекса природных цитокинов, включающего интерлейкины IL-β, IL-6, фактор некроза опухоли ФHO-α, трансформирующий фактор роста TGF-β1, а также миграцию ингибирующий фактор для предупреждения прогрессирования катаракты после антиглаукоматозных операций в алкиленовой цепи. Средство модулирует выработку эндогенных цитокинов, усиливая продукцию ИНФ-γ, синтез которого сдерживает развитие субкапсулярной катаракты. 1 табл., 1 ил.

Применение комплекса природных цитокинов, включающего интерлейкины IL-β, IL-6, фактор некроза опухоли ФHO-α, трансформирующий фактор роста TGF-β1, а также миграцию ингибирующий фактор для предупреждения прогрессирования катаракты после антиглаукоматозных операций.