СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ГНОЙНО-СЕПТИЧЕСКИХ ОСЛОЖНЕНИЙ У ПАЦИЕНТОВ В ОСТРОМ ПЕРИОДЕ ПОЛИТРАВМЫ Российский патент 2002 года по МПК G01N33/92 G01N33/68 

Предложенный способ относится к медицине, к клинической диагностике и может быть использован для прогнозирования гнойно-септических осложнений у больных в острый период политравмы. Нейтрофилы являются важным звеном неспецифической резистентности, высокоспециализированными клетками, практически завершившими дифференцировку, и предназначены для экстренной мобилизации при острых нарушениях гомеостаза. В связи с тем что полное замещение циркулирующего пула нейтрофилов крови происходит каждые 10-20 часов, функциональное состояние этих клеток является своеобразным маркером состояния барьерных функций, гомеостаза организма, поэтому динамическая оценка функционального состояния нейтрофилов может быть использована для прогноза риска развития гнойно-септических осложнений и эффективности лечебных мероприятий у больных с выраженными патофизиологическими изменениями, в частности, в течении острого периода политравмы (Маянский А.Н., Пикуза О.И. Клинические аспекты фагоцитоза. - Казань. - 1993. - C. 11-13).

Известен способ дифференциальной диагностики клинических форм бруцеллеза у людей, основанный на определении цитохимических показателей ферментативных реакций в нейтрофилах периферической крови. Недостатком данного метода является узкий спектр характеристик нейтрофильных гранулоцитов и применение его лишь у больных с бруцеллезом. (Патент 2103687, Б.И. 1998. 3 (2). C. 332).

Наиболее близким к заявляемому является способ прогнозирования возможности генерализации инфекции при ожоговой болезни, включающий исследование свободнорадикального потенциала нейтрофилов крови. (Патент РФ 2134419, М. кл. G 01 N 33/49, 33/53. Б.И. 1999. 22 (2). C. 390).

Недостатками этого метода являются изучения лишь одной из характеристик нейтрофилов, а именно показателей кислородзависимых механизмов образования свободных радикалов, но известно, что есть данные о снижении бактерицидности нейтрофилов при усилении их окислительного метаболизма - факт, неоднократно отмечающийся у больных с бактериальными инфекциями (Маянский А.Н., Галиулин А. Н. Реактивность нейтрофила. - Казань: Изд-во Казанского ун-та, 1984. - С. 54-60). Причиной таких изменений является избыточная продукция активированных форм кислорода стимулированными клетками, что приводит к повышению внутриклеточного свободнорадикального аутоокислительного процесса и тем самым снижает активность нейтрофилов (Маянский А.Н., Пикуза О.И. Клинические аспекты фагоцитоза. - Казань:/ - 1993. - С. 115-116).

Задача настоящего изобретения состоит в повышении точности и объективности комплексного прогноза гнойно-септических осложнений.

Поставленная задача достигается тем, что определяют общую бактерицидность нейтрофилов, активность внутриклеточного фермента щелочной фосфатазы, активность внутриклеточной лактатдегидрогеназы, активность внутриклеточного фермента каталазы, концентрации малонового диальдегида на 1-е, 2-е, 3-и, 5-е, 7-е и 10-е сутки после травмы и при увеличении концентрации малонового диальдегида в нейтрофилах на 39±6% на 3-и сутки после травмы относительно исходного уровня, полученного в 1-й день после травмы, снижении активности каталазы в нейтрофилах на 20±4% на 5-е сутки после травмы относительно исходного уровня и уменьшении бактерицидной активности нейтрофилов на 12±3%, увеличении активности щелочной фосфатазы и лактатдегидрогеназы соответственно на 50±9% и 85±8% на 7-е сутки после травмы относительно исходного уровня прогнозируют развитие гнойно-септических осложнений.

Новизна способа:
1. Комплексное исследование нейтрофилов позволяет оценить функциональную активность клеток в динамике всего острого периода политравмы и определить категорию больных с высокой степенью развития гнойно-септических осложнений.

2. Количественное изменение этих показателей выбрано в результате большого количества исследований, является достоверным и объективно точным.

Сущность способа заключается в следующем: забор крови производился из локтевой вены в пробирку с гепарином (20 Ед на 1 мл крови), полученную кровь разводят 0,15 М раствором хлористого натрия в соотношении 1:2. Разведенную кровь в количестве 2 мл наслаивают на двойной градиент плотности фиколл-верографина (р=1,06 и 1,12 г/мл). Центрифугируют 40 минут при 1000 g и 220^oС. Образовавшееся кольцо, состоящее из нейтрофилов, между градиентом плотности фиколл-верографина 1,06 г/мл и 1,12 г/мл аккуратно отсасывают пастеровской пипеткой и помещают в стерильную пробирку. Для лизиса попавших в пробу эритроцитов в пробирку добавляют 2 мл дистиллированной воды, перемешивают, после чего добавляют 2 мл 0,30 М раствора NaCl. Суспензию отмывают трехкратно раствором 0,15 М NaCl при 400 g.

Количество нейтрофилов доводят до 5•10⁶ на 1 мл с помощью подсчета в камере Горяева разведением полученной пробы 0,15 М NaCl либо ее концентрацией с помощью цетрифугирования. Суспензия полученных нейтрофилов делилась на 2 пробы; первая в количестве 0,5 мл использовалась для определения бактерицидности нейтрофилов, вторая проба подвергалось физической обработке включающей в себя замораживание клеток при -20^oС и последующем размораживании при 37^oС, центрифугирование при 5000 g. Данные манипуляции применялись для лизиса клеток и возможности определения внутриклеточных ферментов и содержимого цитоплазмы с помощью стандартных биохимических методик.

Бактерицидность нейтрофильных гранулоцитов определяли путем их инкубации в среде 199 с живой культурой St.aureus штамм 209 в течение 1 часа при 37^oС.

Для прогнозирования развития гнойно-септических осложнений у больных в острый период политравмы необходимо проводить динамическое исследование функциональной активности нейтрофилов периферической крови, включающее определение бактерицидности нейтрофилов, внутриклеточной активности ферментов (лактатдегидрогеназы, щелочной фосфатазы, каталазы), содержание малонового диальдегида на 1 (исходный уровень), 2, 3, 5, 7 и 10-е сутки после травмы.

Комплексная оценка функционального состояния нейтрофилов проводилась на основе следующих параметров:
1. Определение общей бактерицидности нейтрофилов с использованием живой культуры St.aureus. Данный метод был применен нами для оценки общей фагоцитарной и бактерицидной функции нейтрофилов периферической крови для регистрации грубых нарушений данной функции.

2. Определение активности внутриклеточного фермента щелочной фосфатазы в суспензии лизированных нейтрофилов, так как увеличение концентрации данного фермента в нейтрофильных гранулоцитах наблюдается на фоне присоединения бактериальной инфекции.

3. Определение активности внутриклеточного фермента лактатдегидрогеназы в суспензии лизированных нейтрофилов проводили для оценки уровня гликолитических процессов.

4. Концентрацию малонового диальдегида определяли в суспензии лизированных нейтрофилов для определения уровня перекисного окисления липидов.

5. Выраженность антиперекисных защитных биохимических механизмов исследуемых клеток оценивали путем определения активности фермента каталазы.

О высокой вероятности развития гнойно-септического осложнения свидетельствует:
1. Увеличение концентрации малонового диальдегида в нейтрофилах на 39±6% относительно исходного уровня на 3-и после травмы.

2. Снижение активности каталазы в нейтрофилах на 20±4% относительно исходного уровня на 5-е сутки после травмы.

3. На 7-е сутки после травмы - уменьшение бактерицидной активности нейтрофилов на 12±3%, увеличение активности щелочной фосфатазы и лактатдегидрогеназы, соответственно, на 50±9% и 85±8% относительно исходного уровня.

Пример 1.

Больной К. 48 лет (истор. болезни 1134) поступил в отделение реанимации МСЧ ГНКЦ ОЗШ 3.02.99, с диагнозом: политравма, перелом 3-9 ребер справа по задней подмышечной линии. Перелом локтевой и лучевой костей слева, перелом левой м/берцовой кости. Сотрясение головного мозга, тупая травма передней брюшной стенки. Состояние тяжелое, шок 2-3 степени. При поступлении проведены неотложные мероприятия, иммобилизация поврежденных верхних и нижних конечностей гипсовыми повязками, диагностическая лапароскопия. Остеосинтез проведен 11.02.99. Продолжительность пребывания в отделении реанимации - 14 дней, в стационаре 96 дней.

Осложнения: Диффузный двухсторонний эндобронхит, остеомиелит левой м/берцовой кости. Проводилась антибактериальная терапия.

Заключение: увеличение концентрации малонового диальдегида на 38% на 3-и сутки, снижение активности каталазы на 20% на 5-е сутки, снижение бактерицидной активности на 12% и увеличение активности щелочной фосфатазы на 49% и активности лактатдегидрогеназы на 85% на 7-е сутки позволяет сделать вывод о высокой вероятности развития гнойно-септического осложнения у данного больного, что и было зарегистрировано на 9-е сутки пребывания в стационаре.

Пример 2.

Больной Н. 28 лет (истор. болезни 1187) поступил в отделение реанимации 1.03.99 г. , с диагнозом политравма. Перелом лонной и седалищной костей с обеих сторон. Перелом крестцовой кости справа. Отрыв мочевого пузыря. Состояние тяжелое, шок 2 степени. При поступлении проведены неотложные мероприятия - лапаротомия. 01.03. проведена операция - остеосинтез правого крестцово-подвздошного сочленения и костей таза. Продолжительность пребывания в отделении реанимации - 6, в стационаре - 36 койко-дней. Выписан в удовлетворительном состоянии. Проводилась антибактериальная терапия.

Заключение: В данном случае концентрация малонового диальдегида увеличилась на 13% на 3-и сутки наблюдения и в дальнейшем его значения не превышали 20%, снижение активности каталазы на 5-е сутки составило 3%, бактерицидная активность увеличилась на 3% к 7-м суткам, активность щелочной фосфатазы увеличилась на 6%, активность лактатдегидрогеназы увеличилась на 26% на 7-е сутки относительно исходных значений. Опираясь на полученные данные, можно сделать заключение, что развитие гнойно-септического осложнения маловероятно.

Таким образом, предлагаемый способ комплексной оценки функционального состояния нейтрофилов крови является ценным диагностическим критерием для прогнозирования гнойно-септических осложнений у больных в острый период политравмы. Это достигается широким спектром исследования характеристик нейтрофильных гранулоцитов. Данный метод информативен, доступен позволяет динамически отслеживать изменения в нейтрофилах крови и прогнозировать с высокой вероятностью возможные гнойно-септические осложнения.

Изобретение относится к области медицины, в частности к травматологии и хирургии. Способ позволяет повысить точность и объективность комплексного прогноза гнойно-септических осложнений. У пациентов в остром периоде политравмы проводят исследование нейтрофилов крови, при этом определяют общую бактерицидность нейтрофилов, активность внутриклеточного фермента щелочной фосфатазы, активность внутриклеточного фермента лактатдегидрогеназы, активность внутриклеточного фермента каталазы, концентрацию малонового диальдегида на 1-е, 2-е, 3-и, 5-е, 7-е и 10-е сутки после травмы и при увеличении концентрации малонового диальдегида в нейтрофилах на 39±6% на 3-и сутки после травмы относительно исходного уровня, полученного в 1-й день после травмы, снижении активности каталазы в нейтрофилах на 20±4% на 5-е сутки после травмы относительно исходного уровня и уменьшении бактерицидной активности нейтрофилов на 12±3%, увеличении активности щелочной фосфатазы и лактатдегидрогеназы соответственно на 50±9% и 85±8% на 7-е сутки после травмы относительно исходного уровня прогнозируют развитие гнойно-септических осложнений. 2 табл.

Способ прогнозирования гнойно-септических осложнений у пациентов в остром периоде политравмы, основанный на исследовании нейтрофилов крови, отличающийся тем, что определяют общую бактерицидность нейтрофилов, активность внутриклеточного фермента щелочной фосфатазы, активность внутриклеточного фермента лактатдегидрогеназы, активность внутриклеточного фермента каталазы, концентрацию малонового диальдегида на 1-е, 2-е, 3-е, 5-е, 7-е и 10-е сутки после травмы и при увеличении концентрации малонового диальдегида в нейтрофилах на 39±6% на 3-и сутки после травмы относительно исходного уровня, полученного в 1-й день после травмы, снижении активности каталазы в нейтрофилах на 20±4% на 5-е сутки после травмы относительно исходного уровня и уменьшение бактерицидной активности нейтрофилов на 12±3%, увеличении активности щелочной фосфатазы и лактатдегидрогеназы соответственно на 50±9% и 85±8% на 7-е сутки поле травмы относительно исходного уровня прогнозируют развитие гнойно-септических осложнений.