ФИТОКОМПЛЕКС, ОБЛАДАЮЩИЙ АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТЬЮ, И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 2002 года по МПК A61K35/78 A61P39/06 

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается способа получения нового фитокомплекса из коры лиственницы, обладающего антиоксидантной активностью.

Известны способы получения из растительных источников как индивидуальных соединений, так и суммы экстрактивных веществ, обладающих антиоксидантной активностью. Экстракцией измельченной древесины лиственницы органическим растворителем и водой получают флавоноидное соединение - дигидрокверцетин, обладающее антиоксидантным и капилляроукрепляющим действием [Патент РФ 2158598, А 61 К 35/78, 2000], на его основе создан лекарственный препарат "Диквертин", рекомендованный МЗ РФ для использования при лечении сердечно-сосудистых и бронхо-легочных заболеваний.

Описана антиоксидантная активность суммы флавоноидных соединений, выделенных из маакии амурской [ХПС, 1985, 775с]. При изучении химического состава этого экстракта были идентифицированы изофлавоны - формононетин, генистеин, ретузин, стильбены - резвератрол, мааказин, 3,3',4',5'-тетрагидроксистильбен.

Установлена антиоксидантная активность соединений фенольной природы, выделенных из Triadenum japonicum [ХПС, 1986, 4, с.376], а также из Apuncus dioicus и Adenocaulon adhaerescens [ХПС, 1986, 4, с. 506-507], таких как кофейная кислота, этиловый эфир кофейной кислоты, (+) - катехина, гиперина.

Наиболее близким к заявляемому по сути и используемому экстрактивному методу является способ получения растительного полифенольного экстракта, обладающего антиоксидантной активностью [Патент РФ 2133621, А 61 К 35/78, 1999] . В качестве сырьевого источника используют одревесневшие побеги и/или кору дальневосточного кустарника леспедецы двухцветной, заготавливаемого в зимний период. Сырье подвергают резке и дроблению на соответствующих дробильных устройствах или обрабатывают на специальной дробилке с рифлеными валками, вращающимися с разным числом оборотов, что позволяет отделить наружную кору от волокнистой древесной массы. Экстракцию полученной таким образом коры проводят этиловым спиртом троекратно. Затем экстрагент выпаривают и получают полифенольный экстракт с определенной антиоксидантной активностью. По оценке авторов, веществами, отвечающими за антиоксидантную активность экстракта, являются: кофейная кислота, ее этиловый эфир, кофеилбетулиновая, протекатеховая кислоты и серия пренилированных изофлавоноидов. Недостатками этого способа являются:
1. Сезонная заготовка сырья.

2. Специальная механическая подготовка сырья.

3. Вследствие использования в качестве экстрагента этилового спирта требуются либо значительные энергетические затраты на его регенерацию, либо предварительная сушка сырья.

Задачи настоящего изобретения:
1. Расширение сырьевой базы получения растительных антиоксидантов.

2. Решение экологической задачи, связанной с утилизацией коры лиственницы.

3. Получение нового фитокомплекса, обладающего антиоксидантной активностью.

4. Разработка способа получения фитокомплекса из коры лиственницы, обладающего антиоксидантной активностью.

Поставленные задачи решаются следующим образом: с помощью экстракционного метода, используя в качестве сырьевого источника измельченную кору лиственницы сибирской и/или даурской, получают комплекс соединений, обладающий антиоксидантной активностью (АОК). Используя в качестве позитивного эталона известный антиоксидант из древесины лиственницы - дигидрокверцетин, определено, что суммарная антиоксидантная активность получаемого фитокомплекса в 1,5 раза превышает эталонный.

По внешнему виду АОК представляет собой порошок насыщенного бордового цвета, без запаха, с горьковатым вкусом; растворим в спирте, этилацетате, ацетоне.

По химическому составу АОК является смесью фенолокислот и флавоноидов. Методом обращенно-фазной ВЭЖХ идентифицированы кислоты: n-оксибензойная, протокатеховая, ванилиновая, сиреневая, n-кумаровая (цис-, транс-формы), феруловая (цис-, транс-формы) и кофейная. Флавоноидные соединения представлены мономерными, олигомерными и полимерными продуктами. Среди мономерных продуктов идентифицированы: флаванонон - нарингенин, флаванонолы - аромодендрин, дигидрокверцетин, флавонолы - кемпферол, кверцетин, изорамнетин, мирицетин, флаван-3-олы - (-)-эпифецелихин, (+)-катехин, (-)-эпикатехин, антоцианидин - листвинидин. В составе комплекса обнаружены димерные продукты - лиственол, а также полимерная часть, представленная проантоцианидинами и конденсированными таннинами.

При изучении токсичности АОК в опытах на мышах при внутрибрюшном введении было установлено, что доза 1500 мг/кг не токсична. Согласно современной классификации, вещества, имеющие ЛД₅₀ при внутрибрюшинном введении 101-1000 мг/кг, относятся к группе малотоксичных. Фитокомплекс из коры удовлетворяет этим условиям, а следовательно, является малотоксичным веществом.

Таким образом, решение поставленных целей достигается тем, что предварительно обессмоленную измельченную кору лиственницы дважды обрабатывают этилацетатом при определенном соотношении сырье/экстрагент (1:3-10), заданной температуре (20-75^oС), определенном количестве времени (1-5 ч). Затем экстракт отфильтровывают, этилацетатат отгоняют, остаток высушивают до порошкообразного состояния. Получают АОК с выходом 2,45-6,42% от массы абсолютно сухой коры.

Предлагаемый способ получения нового антиоксидантного фитокомплекса имеет следующие преимущества перед прототипом:
1. В качестве исходного сырья используют кору лиственницы, являющуюся отходом деревоперерабатывающей промышленности.

2. Используемое сырье не требует специальной сезонной заготовки.

3. Не требуется дополнительное измельчение сырья, так как этот параметр не оказывает существенного влияния на выход целевого продукта.

4. В качестве экстрагента используют этилацетат (вместо этилового спирта в прототипе). Поскольку растворимость воды в этилацетате мала (7-8%), экстрагент легко регенерируется и полностью возвращается в технологический процесс. Не требуется предварительной сушки сырья.

5. АОК имеет хорошо изученный химический состав, что позволяет обеспечить его надежную сертификацию. Химический состав АОК (комплекс известных флавоноидов и фенолокислот) обуславливает широту его биологического действия.

Способ получения АОК демонстрируется следующими примерами.

Пример 1
100 г предварительно обессмоленной коры лиственницы помещают в круглодонную колбу, снабженную мешалкой, обратным холодильником и термометром, добавляют этилацетат в количестве 1000 мл (гидромодуль 1:10). Колбу помещают на водяную баню и термостатируют при температуре 60^oС в течение 3 ч при перемешивании. Затем экстракт отфильтровывают. Экстракцию повторяют при тех же условиях. Экстракты объединяют. Этилацетатат отгоняют на роторном испарителе, остаток высушивают на воздухе до порошкообразного состояния. Получают АОК с выходом 6,42% от а.с.н. коры.

Пример 2
В условиях примера 1 обрабатывают кору лиственницы, подверженную дополнительному измельчению таким образом, чтобы частицы проходили через сито 1 см². Получают АОК с выходом 6.93% от а.с.н. коры.

Примеры 3-11
Процесс проводят в условиях примера 1. Изменяемые параметры процессов и выход целевого продукта приведены в таблице 1.

Антиоксидантную активность получаемого из коры лиственницы фитокомплекса определяли согласно [Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. // Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.: Наука, 1972, с.241-242]. В качестве субстрата использовали соевый лецетин (New Spirit Naturals С A, USA) в трис-HCl (10мМ) концентрацией 1мг/мл [Huang S.W., Frankel E.N. Antioxidant activity of tea catechins in different lipid systems//J. Agr. And Food Chem. , 1997, Vol. 45, 8, p.3033-3038]. Окисление индуцировали аскорбатом железа (200 мкМ). Инкубировали 1 ч при 25^oС при постоянном перемешивании. Процесс останавливали 30% трихлоруксусной кислотой. С помощью 0,06М тиобарбитуровой кислоты (ТБК) определяли количество образовавшегося в реакционной среде малонового альдегида. Контроль вели спектрофотометрически при λ 532 нм. Измерения проводили против контроля (среда с лецитином и без фенольных соединений) с индуцированным окислением. В качестве позитивного контроля использовали среду, содержащую дигидрокверцетин, выделенный из древесины лиственницы. Полученные результаты представлены в таблице 2.

Изобретение относится к медицине. Антиоксидантный фитокомплекс из коры лиственницы сибирской и даурской. Обессмоленную кору лиственницы обрабатывают этилацетатом при соотношении сырье/экстрагент 1:3-10 при 20-75^oС в течение 2-5 ч. Экстракт отфильтровывают, этилацетат отгоняют, остаток высушивают до порошкообразного состояния. Изобретение позволяет исключить сезонную заготовку сырья и его специальную предобработку, использовать отход деревоперерабатывающей промышленности. 2 с.п.ф-лы, 2 табл.

1. Фитокомплекс, обладающий антиоксидантной активностью, полученный из коры лиственницы сибирской и/или даурской путем ее экстракции этилацетатом при соотношении сырье/экстрагент 1: 3-10 при 20-75^oС в течение 1-5 ч с дальнейшим упариванием экстрагента и сушкой продукта. 2. Способ получения антиоксидантного фитокомплекса из коры природного сырья, включающий экстракцию сырья органическим растворителем, с последующим упариванием экстрагента и сушкой целевого продукта, отличающийся тем, что в качестве сырья используют кору лиственницы сибирской и/или даурской, в качестве экстрагента - этилацетат, причем экстракцию ведут при соотношении сырье/экстрагент 1:3-10, температуре 20-75^oС в течение 1-5 ч.