СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ УГНЕТЕНИЯ ГАРМОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ЯИЧНИКОВ Российский патент 2002 года по МПК A61K31/704 A61P35/00 

Изобретение относиться к области экспериментальной медицины и касается способов моделирования угнетения гормональной активности яичников
Известен способ моделирования гормональной активности яичников путем частичной пищевой денривацией [1]. Угнетение гормональной активности яичников, вызванное хроническим недоеданием, осуществляется на центральном уровне и связано с дисфункцией гипоталамуса. При этом происходит снижение частоты и выброса фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов из гипофиза и, как следствие, снижение уровня эстрогенов и увеличение продолжительности эстрального цикла.

Однако данный способ неудобен, так как предполагает длительное голодание животных.

Известен способ моделирования угнетения гормональной активности яичников крыс путем однократного введения противоопухолевого препарата метотрексата в дозе 4 мг/кг [2]
Однако данный способ также неудобен, так как гормональная активность яичников угнетается в течение длительного времени - 18-30 дней.

Наиболее близким (прототипом) для предлагаемого способа угнетения гормональной активности яичников является способ моделирования гормональной активности яичников путем однократного введения в максимально переносимой дозе противоопухолевого препарата платидиама крысам-самкам [3]. Угнетение гормональной активности яичников в данном случае связано с непосредственным токсическим действием препарата на гормонпродуцирующие клетки яичников. Однако этот способ имеет ряд недостатков, а именно слишком короткий срок угнетения гормональной активности яичников, что снижает удобство пользования.

Задачей, решаемой данным изобретением, является повышение удобства пользования.

Поставленная задача реализуется путем однократного внутривенного введения в максимально переносимой дозе крысам-самкам линии Вистар противоопухолевого препарата фарморубицина.

Новым является то, что в качестве противоопухолевого препарата вводят фарморубицин.

Авторы проанализировали научно-медицинскую патентную литературу и не нашли данной совокупности отличительных признаков. Данная совокупность сличительных признаков не вытекает явным образом для специалистов из уровня техники. Данный способ прошел экспериментальные исследования в НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН. Таким образом, данное техническое решение соответствует критериям изобретения "новизна", "изобретательский уровень", "промышленно применимо".

Предлагаемый способ реализован путем однократного внутривенного введения в максимально-переносимой дозе 30 крысам-самкам линии Bистap противоопухолевого препарата фарморубицина и 30 самкам контрольной группы растворителя. Животные имели массу тела 200-250 г (питомник "Рассвет", г. Томск). Гормональную активность яичников оценивали по продолжительности каждой из фаз эстрального цикла, который исследовали методом изучения вагинальных мазков [4] . Противоопухолевый препарат вводили самкам, находящимся в одной фазе цикла (проэструс). Изучение эстрального цикла проводили в течение 30 дней после начала эксперимента. При статистической обработке был использован непараметрический критерий Вилкоксона-Манна-Уитни.

Установлено, что продолжительность всего цикла в контрольной группе составила 104,33±1,87 ч (диэструс - 57,83±1,87 ч; проэструс - 15,0±1,33 ч; эструс - 26,00±1,00 ч; метаэструс - 6,50±0,34 ч). У крыс-самок, получавших фарморубицин, продолжительность первого и второго после введения препарата эстрального цикла была достоверно увеличена и составила 155,25±38,02 ч и 168,00±20,00 ч соответственно (P<0,05). Увеличение продолжительности полового цикла произошло за счет удлинения стадии диэструс на 53,75±35,61 ч и 54,75±17,89 ч соответственно (Р<0,05). Впоследствии эстральный цикл самок опытных групп нормализовался. У крыс-самок, получавших платидиам (однократно внутривенно в максимально переносимой дозе), длительность первого после введения препарата цикла в отличие от такового на фоне введения фарморубицина, была сходна с таковой в контроле [3]. Продолжительность второго после начала цикла была увеличена и составила 144,00±17,66 ч (Р<0,05). Увеличение продолжительности полового цикла произошло за счет удлинения стадии диэструс на 45,14±20,77 ч (Р<0,05). Впоследствии эстральный цикл восстанавливался. Таким образом, угнетение гормональной активности яичников при введении фарморубицина было более продолжительным, чем при использовании платидиама.

С целью выяснения механизма угнетения гормональной активности яичников, наблюдаемого при введении фарморубицина, был проведен морфологический анализ женских половых желез. Для этого животных забивали (методом смещения шейных позвонков) на стадии эструс (по 5 животных на каждый срок эксперимента) в течение 30 дней после введения препарата. Крыс вскрывали, извлекали яичники, фиксировали их в жидкости Карнуа. Парафинированные срезы (через весь орган) толщиной 5 мкм окрашивали гематоксилин-эозином. На срезах яичников подсчитывали количество примордиальных фолликулов и фолликулов с двумя и более слоями гранулезных клеток, количество зрелых фолликулов, атрезирующихся фолликулов, желтых тел и общее число генеративных элементов [4]. При статистической обработке полученного экспериментального материала использовали критерий Вилкоксона - Манна - Уитни.

Морфологический анализ показал, что в течение 1-й недели после введения фарморубицина (1-й и 2-й эструсы) в яичниках крыс наблюдалось расширение сосудов, отек и лимфоидная инфильтрация стромы. Клетки фолликулярного эпителия, желтых тел, текальных оболочек набухали. В последующие дни опыта отмеченные изменения были не выражены. Токсическому действию препарата подвергались прежде всего примордиальные фолликулы. Так, их число через один день после цитостатического воздействия (1-й эструс) составило 55% от контроля (см. таблицу). На протяжении последующих сроков наблюдения (2-й, 3-й и 4-й эструсы) количество примордиальных фолликулов также было ниже контрольных значений, но эти различия оказались статистически не значимыми (см. таблицу). Количество многослойных фолликулов в яичниках крыс, получавших фарморубицин, во все дни опыта достоверно не отличалось от такового в контроле. Кроме того, во многих из них наблюдалось появление очагов дезорганизации гранулезы и текальных оболочек. Клетки текальных оболочек часто были набухшими. Отмеченные морфологические нарушения были наиболее выражены в течение 1-й недели эксперимента (1-й и 2-й эструсы). Количество граафовых пузырьков и желтых тел как в опыте, так и в контроле на протяжении всего опыта было сходно. Через 2 недели после введения антибиотика (3-й эструс) количество атрезирующихся фолликулов было увеличено более чем в 2 раза по сравнением с контролем (см. таблицу). Подсчет общего количества генеративных элементов показал, что их число в яичниках крыс опытной группы на протяжении всего периода наблюдения достоверно не отличалось от контрольных значений (см. таблицу).

Таким образом, в ранние сроки после однократного введения в МИД фарморубицина в яичниках крыс наблюдались деструктивные и дистрофические изменения. Наиболее чувствительными к действию антибиотика оказались примордиальные фолликулы, клетки гранулезы и текальных оболочек. Через 2 недели после начала эксперимента наблюдалось усиление атретических процессов.

Максимальное количество эстрогенов у крыс наблюдается в конце диэструса - в начале проэструса [5]. В этот период очередная партия яйцеклеток вступает в фолликулогенез. Данные морфологического анализа показали, что при введении фарморубицина часть вступающих в рост фолликулов погибает. Кроме того, в первые дни после введения препарата происходят дистрофические изменения клеток фолликулярного эпителия и клеток теки. В синтезе женских половых гормонов принимают участие как фолликулярные клетки, так и клетки теки [6]. Их повреждение и приводит к снижению женских половых гормонов, что и является причиной увеличения продолжительности астрального цикла за счет более длительного диэструса. Следовательно, угнетение гормональной активности яичников на фоне введения фарморубицина происходит за счет прямого токсического действия препарата на половые железы. Этот же механизм угнетения гормональной активности яичников наблюдается и при введении платидиама [3]. По сравнению с данным имеющимся прототипом предложенный способ показал следующее преимущество: угнетение гормональной активности происходит в течение более длительного времени. Это более удобный и надежный способ моделирования угнетения гормональной активности яичников для поиска стимуляторов функции женских половых желез, действующих на уровне гормонпродуцирующих клеток.

Источники информации
1. Зеленина Н. В, Корхов В.В., Новиков B.C. Действие низкомолекулярных пептидов яичников на репродуктивную функцию при угнетении ее частичной пищевой депривацией // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины - 1996. - Т. 123, 6. - С. 610-613.

2. Савицкий A. Г. , Иванова Р.Д., Никитин Л.И. Влияние метотрексата на фолликулярный аппарат яичника // Вопросы онкологии. - 1977. - Т. 23, 3. - С. 84-86.

3. Гольдберг Е.Д., Боровская Т.Г., Фомина Т.И. Морфофункциональное состояние яичников после введения платидиама // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины - 1996. - 11. С. 571-578.

4. Саноцкий И.В., Фоменко В.И. Отдаленные последствия влияния химических соединений на организм. М: Наука. - 1979. - 210 с.

5. Самсонова В.М., Бабичев В.Н. Щитовидная железа и гонады: их взаимосвязь и взаимодействие // Проблемы эндокринологии. - 1977. - Т. 23, 2. - С. 13-118.

6. Королев И.В. Интерстициальные клетки яичников млекопитающих // Цитология и генетика. - 1984. - Т. 18, 2. - С. 147-151.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и касается способов моделирования угнетения гормональной активности яичников. Предложено однократно внутривенно вводить в максимально переносимой дозе крысам-самкам противоопухолевый препарат фарморубицина. Способ позволяет увеличить продолжительность угнетения гормональной активности яичников, повысить удобство в пользовании. 1 табл.

Способ моделирования угнетения гормональной активности яичников, заключающийся в однократном внутривенном введении противоопухолевого препарата в максимально переносимой дозе крысам-самкам, отличающийся тем, что в качестве противоопухолевого препарата вводят фарморубицин.