СРЕДСТВО ДЛЯ СТИМУЛЯЦИИ ГЕНЕРАТИВНОЙ ФУНКЦИИ Российский патент 2015 года по МПК A61K31/4184 A61K31/38 A61P15/00 A61P15/08 

Предлагаемое изобретение относится к медицине и фармакологии, и может быть использовано в качестве средства для стимуляции генеративной функции, и может быть использовано для повышения индекса беременности и индекса плодовитости, снижения эмбриональной гибели плодов.

Известен способ стимулирования воспроизводительной функции животных, заключающийся в том, что в качестве лекарственного средства используют препараты тимуса, которые вводят подкожно животным во второй период эмбриогенеза в терапевтической дозе [патент RU 1727241, 1995 г.].

Известно производное бензимидазола - препарат диабенол, оказывающий стимулирующее влияние на процессы зачатия у крыс-самок в терапевтической дозе [А.А. Спасов, Е.А. Кузубова, Л.И. Бугаева, Д.Н. Реброва. Влияние производного имидазобензимидазола, проявляющего гипогликемическую активность, на процессы репродукции крыс-самок. Экспериментальная и клиническая фармакология №10, т. 73, с. 31-33 (2010)].

Наиболее близким аналогом изобретения является производное бензимидазола - препарат бемитил, оказывающий стимулирующее влияние на процессы зачатия у крыс-самок в терапевтической дозе [Е.В. Кожевникова, Е.А. Кузубова, Л.И. Бугаева. Влияние препарата бемитил на генеративную функцию крыс-самок / Сб. научн. трудов «Материалы 55-й региональной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров». Пятигорск. 2000. - С. 202-203].

Задачей изобретения является расширение арсенала биологически активных веществ, в том числе обладающих стимулирующим генеративную функцию действием.

Технический результат - получение средства для стимуляции генеративной функции.

Сущность изобретения: применение калиевой соли 2-[1-(1,1-диоксотиетанил-3)бензимидазолил-2-тио]уксусной кислоты (соединение 1) формулы

в качестве средства для стимуляции генеративной функции: укорачивающего фазу эструс и увеличивающего фазу проэструс овуляторного цикла, активирующего рецептивные половые мотивации и процессы зачатия, уменьшающего до и постимплантационную эмбриональную гибель.

Известно применение калиевой соли 2-[1-(1,1-диоксотиетанил-3)бензимидазолил-2-тио]уксусной кислоты (соединение 1) в качестве средства, обладающего анксиолитическим действием [патент RU 2519191 от 10.06.2014].

В доступной научно-медицинской и патентной литературе сведений об использовании калиевой соли 2-[1-(1,1-диоксотиетанил-3)бензимидазолил-2-тио]уксусной кислоты в качестве средства для стимуляции генеративной функции не обнаружено.

Эксперименты проводились на 96 конвенционных белых крысах (66 крысах самках и 30 крысах самцах) 4-х месячного возраста массой 220-240 г. Содержание крыс соответствовало правилам, принятым Международной конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (Страсбург, 1986 г.). Испытуемые крысы-самки перед началом экспериментов были расформированы на две опытные и одну контрольную группы по 22 особи. Опытным группам самок соединение 1 вводили внутрижелудочно в дозах 5 мг/кг (соответствует экспериментально доказанной эффективной дозе) - 1 группа [О.В. Черненко, А.В. Курочка, С.А. Сергеева и др. Изучение антигипоксических свойств производных тиетанилбензимидазола // Материалы Второй Всероссийской конференции «Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция». - М.: БЭБиМ. - 1999] и 50 мг/кг (доза, превышающая эффективную в 10 раз) - 2 группа. Контрольной группе крыс-самок внутрижелудочно вводили дистиллированную воду в объеме 20 мл/кг (данный объем использовался в качестве растворителя вещества у опытных животных). Курс введения вещества крысам и, соответственно, дистиллированной воды составлял 14 дней, что приравнивается к 3-4 эстральным циклам [Методические рекомендации по изучению репродуктивной токсичности лекарственных средств / Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств (Часть первая). - М.: Гриф и К, 2012, С. 80-92; И.В. Саноцкий, В.Н. Фоменко. Отдаленные последствия влияния химических соединений на организм / М.: «Медицина». - 1979. - 390 с.]. Крысы самцы в период исследований были интактными и участвовали в период проведения экспериментов по изучению полового поведения и процессов зачатия у самок.

В период 2-недельного курса введения соединения 1 у крыс-самок исследовали эстральную цикличность (по вагинальным мазкам) с учетом правила одного часа [Т.Г. Боровая, О.В. Волкова. Бюл. эксперим. биол. и мед., №9, 326-328 (1994)]. В вагинальных мазках самок отмечали частоту встречаемости фаз: диэструс, проэструс, эструс и метаэструс [Методические рекомендации по изучению репродуктивной токсичности лекарственных средств / Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств (Часть первая). - М.: Гриф и К, 2012, с. 80-92]. После окончания введения соединения 1 у крыс самок исследовали половое поведение и способность к зачатию. Половое поведение изучали в установке «открытое поле» [Л.И. Бугаева, А.А. Спасов, Е.А. Кузубова Экспериментальная и клиническая фармакология, т. 67, №3, стр. 58-60 (2004)], модифицированной под площадку зоосоциальных предпочтений (ПЗП), в которой у самок в паре с интактными самцами фиксировали процептивные (латентный период начала половой активности, длительность половой активности) и рецептивные (количество подходов самки к интактному самцу, число лордозов, свидетельствующих о готовности самки к спариванию) половые мотивации.

Способность к зачатию у самок в контрольных и опытных группах исследовали после их спаривания с интактными самцами в течение 10 дней в соотношении 2:1. На 20 день всех тестируемых самок подвергали эвтаназии (методом дислокации шейных позвонков). На вскрытии у самок определяли наличие беременности. По количеству забеременевших и не беременных самок рассчитывали индекс беременности. У беременных самок выделяли рога матки. В рогах матки подсчитывали количество резорбций и плодов, у которых определяли возраст и, соответственно, рассчитывали сроки зачатия. В яичниках подсчитывали количество желтых тел беременности. На основании полученных данных рассчитывали до и постимплантационную эмбриональную гибель с использованием классических формул [Методические рекомендации по изучению репродуктивной токсичности лекарственных средств / Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств (Часть первая). - М.: Гриф и К, 2012, с. 80-92].

Результаты исследований подвергали статистической обработке с использованием программы Microsoft Excel. О достоверности изменений судили с помощью t-критерия Стьюдента.

Результаты изучения астрального цикла крыс самок, получавших 2-недельным курсом соединения 1, представлены в таблице 1. Из приведенных данных прослеживаются однонаправленные тенденции изменений в частоте встречаемости отдельных фаз эстрального цикла у самок в опытных группах 1 и 2. Так, относительно группы контроль, частота встречаемости фазы эструс достоверно снижалась на 11,8% (p<0,05) в 1-й опытной группе и не достоверно на 5,9% у самок во 2-й опытной группе. Частота встречаемости фазы проэструс у этих самок наоборот повышалась на 22,2% (p>0,05) в 1-й опытной группе и на 6,7% (p>0,05) - во 2-й опытной группе. При этом частота встречаемости фаз диэструс и метаэструс у самок в опытных группах изменялась не существенно и разнонаправлено.

Таким образом, из проведенных исследований можно установить, что соединение 1 не нарушает овуляторную цикличность крыс самок, но при этом повышает частоту встречаемости фазы проэструс и снижает частоту встречаемости фазы эструс при отсутствии существенных изменений встречаемости фаз диэструс и метаэструс. Известно, что процессы репродукции и овуляторная цикличность млекопитающих находится под нейрогуморальным регуляторным контролем гипоталамо-гипофизарных структур [Йен С.С.К., Джаффе Р.Б. Репродуктивная эндокринология // Пособие для врачей: В 2-х томах. - 1998. - 704 с.] и обусловлена цикличной выработкой женских половых гормонов - эстрогенов и гестагенов. В этой связи на следующем этапе работы сочли целесообразным изучить у самок, получавших соединение 1, половое поведение в паре с интактными самцами.

Из результатов тестирования полового поведения у крыс самок не обнаружено изменений в процептивных половых мотивациях (в латентом периоде первого подхода к самцам и длительности половой активности), но повышение рецептивных. В рецептивном поведении у этих самок повышалось: количество эмоциональных подходов к интактным самцам на 15,0% (p>0,05) в 1-й опытной группе и на 8,8% (p>0,05) во 2-й опытной группе и количество лордозов - на 60% (p>0,05) в 1-й опытной группе, и на 40% (p>0,05) у самок во 2-й группе.

В последующих исследованиях проанализировали влияние соединение 1 на процессы зачатия. Результаты исследований представлены в таблице 2. Из приведенных данных видно, что индекс беременности у самок в опытных группах повышался на 16,6% (p>0,05) в опытной группе 1 и на 55,5% (p<0,01) в опытной группе 2. При этом количество желтых тел беременности у этих самок практически соответствовало контрольным значениям, тогда как количество плодов повышалось на 9,2% (p>0,05) в 1-й опытной группе и на 10,5% (p>0,05) - во 2-й опытной группе. Вместе с этим у этих самок отмечалось снижение числа резорбций на 41,7% (p>0,05) в 1-й опытной группе и на 48,2% (p>0,05) во 2-й опытной группе. На основании проведенных расчетов у беременных крыс самок выявлено снижение как доимплантационной эмбриональной гибели плодов (на 26,8%, p>0,05 в 1-й опытной группе и на 29,9%, p>0,05 - во 2-й опытной группе), так и постимплантационной гибели (на 50%, p>0,05 в обеих опытных группах). Наряду с этим у беременных крыс самок обнаружено, что сроки наступления зачатий в обеих опытных группах (оценивали по возрасту выделенных эмбрионов) наступали раньше, чем у самок в контрольной группе на 0,5-1 день, что, вероятно, может свидетельствовать о более ранних сроках спаривания опытных самок с интактными самцами.

Таким образом, на основании проведенных исследований установлено наличие положительного влияния соединения 1 в дозах 5 и 50 мг/кг на процессы зачатия и качество эмбриогенеза. Данный вывод основан на повышении индекса беременности и плодовитости у опытных самок и снижении у них общей эмбриональной гибели плодов. При этом полученные результаты в какой-то степени могут свидетельствовать о возможности мягкого вмешательства соединения 1 в нейрогуморальный обмен половых гормонов, обуславливающего повышение уровня гестагенов в крови, что также согласуется и с активацией рецептивного полового поведения у самок и изменениями в эстральной цикличности (уменьшение стадии эструс и увеличение стадии проэструс).

Предлагаемое изобретение относится к медицине и фармакологии. Предложено применение калиевой соли 2-[1-(1,1-диоксотиетанил-3)бензимидазолил-2-тио]уксусной кислоты (ранее известной как иммунотропное и анксиолитическое средство) в качестве средства для стимуляции генеративной функции: укорачивающего фазу эструс и увеличивающего фазу проэструс овуляторного цикла, активирующего рецептивные половые мотивации и процессы зачатия, уменьшающего до и постимплантационную эмбриональную гибель. Технический результат: калиевая соль 2-[1-(1,1-диоксотиетанил-3)бензимидазолил-2-тио]уксусной кислоты повышала индекс беременности и плодовитость опытных самок крыс, а также снижала эмбриональную гибель плодов. 2 табл.

Применение калиевой соли 2-[1-(1,1-диоксотиетанил-3)бензимидазолил-2-тио]уксусной кислоты в качестве средства для стимуляции генеративной функции: укорачивающего фазу эструс и увеличивающего фазу проэструс овуляторного цикла, активирующего рецептивные половые мотивации и процессы зачатия, уменьшающего до и постимплантационную эмбриональную гибель.