СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ЗЕРНОВОГО МИЦЕЛИЯ ВЫСШИХ ГРИБОВ Российский патент 2002 года по МПК A01G1/04 

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способам приготовления зернового мицелия грибов для последующего использования при выращивании плодовых тел данных грибов.

В качестве прототипа выбран способ приготовления зернового мицелия высших грибов по патенту РФ 2101914, 1998 (Кузнецов О.Ю.), который реализуется поэтапно следующим образом.

1. Сухое зерно затаривается в емкости на 2/3 от их полезного объема.

2. Емкости с зерном заполняют водой таким образом, чтобы вода не доходила до краев емкостей приблизительно на 8-10 см, поскольку при набухании сухого зерна его объем увеличивается примерно в полтора раза.

3. Емкости с зерном оставляются на 24 ч для замачивания зерна и инициации прорастания спор низших грибов, т.е. перевода из покоящегося состояния в вегетативную фазу развития. По истечении данного времени или позднее (возможна задержка в 6-8 ч) вода сливается через сито из емкостей, а зерно оставляют влажным в емкостях еще в течение суток. На данном этапе при необходимости туда могут быть добавлены различные композитные добавки, например мел и гипс. После внесения данных добавок каждую емкость встряхивают и добавки равномерно распределяют по всему объему емкости, а горловину емкости закрывают алюминиевой фольгой.

Таким образом, зерно в емкостях до момента автоклавирования должно находиться в общей сложности 48 ч в двух фазах - водная фаза (замачивание зерна в емкостях) - 24 ч и влажная фаза (вода удалена из емкостей, а зерно инкубируется там еще сутки) - 24 ч.

4. Емкости помещают в автоклав и стерилизуют при температуре 121^oС, давлении 1 атм (101,325 кПа) и времени стерилизации 2-2,5 ч в зависимости от объема стерилизуемого зерна в емкостях (определяется опытным путем).

5. Емкости с зерном охлаждают до комнатной температуры и после этого проводят инокуляцию маточным мицелием на плотной агаризованной питательной среде из "сахарных" пробирок или чашек Петри.

6. После посева емкости инкубируют в термостате при температуре 24-26^oС или при комнатной температуре в специальных комнатах на стеллажах.

7. Через 7-10 дней емкости с проросшим мицелием встряхивают для предотвращения склеивания зерна и активизации роста мицелия.

Данный этап возможно совместить с перетариванием зерна из емкостей в полиэтиленовые пакеты. Пакеты наглухо запаковывают и делают в нескольких местах проколы стерильной иглой для сохранения газообмена внутренней емкости пакета, где находится растущий мицелий на зерновках, с окружающей средой. Пакеты после этого помещают в рефрижератор с температурой 2-4^oС. В результате развития мицелия на зерне идет саморазогрев в массе мицелия до 24-26^oС и поэтому условия рефрижератора не оказывают ингибирующего действия на растущий мицелий и он постепенно охватывает все зерновки в своем пакете. Этому способствует тот факт, что внутри пакета образуется конденсат, создавая необходимую влажность.

8. Окончательная готовность мицелия определяется визуально - мицелий разрастается и соединяет зерновки между собой в единый цельный брикет белого цвета. До высева в массу подготовленного субстрата мицелий продолжают хранить в условиях рефрижератора при той же температуре - 2-4^oС.

Недостатками данного способа является использование алюминиевой фольги, как уплотнительного материала, охватывающего горловину емкости, не гарантирует сохранение стерильности зерна в течение длительного времени из-за неплотного прилегания фольги к горловине емкости. Кроме того, при встряхивании зерна в емкости возможно повреждение фольги плотными частицами субстрата (зерновками) с последующим нарушением стерильности.

Предлагаемый способ приготовления зернового мицелия съедобных грибов реализуется также поэтапно следующим способом.

1. Сухое зерно затаривается в гибкие незамкнутые емкости (см. чертеж).

2. Данные емкости с зерном заполняют водой таким образом, чтобы вода покрывала зерно и была выше его края приблизительно на 8-10 см, поскольку при набухании сухого зерна последнее увеличивает свой объем примерно в полтора раза.

3. Емкости с зерном оставляются на 24 ч заполненными водой для замачивания зерна и инициации прорастания спор низших грибов, т.е. перевода из покоящегося состояния в вегетативную фазу развития.

По истечении данного времени или позднее (возможна задержка в 6-8 ч) вода сливается из емкостей, а зерно оставляют влажным в емкостях еще в течение суток. На данном этапе при необходимости туда могут быть добавлены различные композитные добавки, например мел и гипс. После внесения данных добавок каждую емкость встряхивают и добавки равномерно распределяют по всему объему емкости.

4. Затем гибкая незамкнутая с одной стороны емкость пропускается этой стороной через геометрически неизменяемую систему (Советский Энциклопедический Словарь, 1986, с. 291) таким образом, что материал незамкнутой гибкой емкости оказывается между используемыми компонентами геометрически неизменяемой системы. При этом с внутренней стороны гибкой незамкнутой емкости (примерный перечень материалов для изготовления емкости см. табл. 1) используется уплотнительный компонент геометрически неизменяемой системы, отделяющий внутренний объем емкости от окружающей среды и позволяющий сохранить стерильность находящегося в емкости зерна, а также обеспечить свободный газообмен между внутренним объемом и окружающей средой.

5. Емкости с геометрически неизменяемой системой помещают в автоклав и стерилизуют в режиме, который определяется опытным путем, в зависимости от объема стерилизуемого зерна в емкостях.

6. Емкости с ГНС с содержащимся внутри зерном охлаждают до комнатной температуры и после этого проводят инокуляцию маточным мицелием на плотной агаризованной питательной среде из "сахарных" пробирок или чашек Петри через ГНС с соблюдением правил асептики.

7. После инокуляции емкостей с ГНС с соблюдением правил асептики отрезают ГНС от емкости, а образовавшуюся вновь гибкую незамкнутую с одной стороны емкость наглухо запаковывают и делают в нескольких местах проколы (стерильной иглой малого диаметра) для сохранения газообмена внутренней емкости пакета, где находится растущий мицелий на зерновках, с окружающей средой.

8. После посева емкости инкубируют в термостате при температуре 24-26^oС или при комнатной температуре в специальных комнатах на стеллажах.

9. Через 7-10 дней емкости с проросшим мицелием встряхивают для предотвращения склеивания зерна и активизации роста мицелия.

10. Пакеты после этого помещают в рефрижератор с температурой 2-4^oС. В результате развития мицелия на зерне идет саморазогрев в массе мицелия до 24-26^oС и поэтому условия рефрижератора не оказывают ингибирующего действия на растущий мицелий и он постепенно охватывает все зерновки в своем пакете. Этому способствует тот факт, что внутри пакета образуется конденсат, создавая необходимую влажность. Окончательная готовность мицелия определяется визуально - мицелий разрастается и соединяет зерновки между собой в единый цельный брикет белого цвета. До высева в массу подготовленного субстрата мицелий продолжают хранить в условиях рефрижератора при той же температуре - 2-4^oС.

Пример осуществления изобретения.

Для успешного достижения конечной цели - приготовления зернового мицелия высших грибов необходимо поэтапно выполнить все вышеуказанные операции, в ходе которых предполагается использование гибкой незамкнутой с одной стороны емкости, изготовленной из термостойкого материала, например полипропиленовой пленки (температура плавления 170^oС), способной выдержать различные режимы автоклавирования для достижения стерильности находящегося внутри ее зерна. Более полный список материалов для изготовления термостойкой гибкой незамкнутой емкости (см. таблицу).

Таким образом, технический результат предлагаемого способа заключается в повышении надежности стерилизации зерна за счет размещения его в гибкую незамкнутую емкость с геометрически неизменяемой системой, что позволяет выполнить стерилизацию подготовленного зерна непосредственно в емкости без этапа перетаривания, что помогает предотвратить контаминацию зерна в емкости посторонними микроорганизмами-конкурентами при зарастании зерна в емкости и тем самым позволяет длительно сохранять микробиологическую частоту получаемого зернового мицелия высших съедобных грибов.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способам производства зернового мицелия высших (съедобных) грибов. Предлагаемый способ выращивания зернового мицелия высших грибов заключается в следующем: после заполнения емкостей сухим зерном и водой, зерно замачивается в воде в течение 24 ч при комнатной температуре для инициации прорастания спор низших грибов и перевода их в вегетативное состояние, а затем воду сливают. Влажное зерно оставляют в емкостях, затем горловина гибкой незамкнутой с одной стороны емкости используется для сборки геометрически неизменяемой системы таким образом, что материал незамкнутой гибкой емкости оказывается между компонентами геометрически неизменяемой системы. При этом с внутренней стороны гибкой незамкнутой емкости (в качестве одного из компонентов) используется уплотнительный материал, отделяющий внутренний объем емкости от окружающей среды и позволяющий сохранить стерильность находящегося в емкости зерна, а также обеспечить свободный газообмен между внутренним объемом и окружающей средой. Увлажненное зерно инкубируют в течение суток в тех же условиях до последующего автоклавирования при температуре 121^oC, давлении 1 атм в течение 2-2,5 ч. Далее емкости с зерном охлаждают до комнатной температуры и инокулируют маточным мицелием, а затем при соблюдении правил асептики отрезают геометрически неизменяемую систему от емкости, а образовавшуюся вновь гибкую незамкнутую с одной стороны емкость наглухо запаковывают и делают в нескольких местах проколы (стерильной иглой малого диаметра) для сохранения газообмена внутренней емкости пакета, где находится растущий мицелий на зерновках, с окружающей средой. После посева емкости инкубируют в термостате при температуре 24-26^oC или при комнатной температуре в специальных комнатах на стеллажах. Через 7-10 дней проросший мицелий в емкостях встряхивают для предотвращения склеивания зерна и активизации роста мицелия. Способ позволяет повысить надежность стерилизации зерна, снизить трудоемкость приготовления зернового мицелия, длительно сохранять его микробиологическую чистоту. 1 ил., 1 табл.

Способ приготовления зернового мицелия высших грибов, включающий подготовку субстрата путем смешивания зерна с водой в емкости с последующей выдержкой, удаление избытка воды, внесение добавок, инкубацию и стерилизацию, инокуляцию маточным мицелием, отличающийся тем, что зерно помещают в гибкую незамкнутую с одной стороны емкость, которая проходит этой стороной между компонентами геометрически неизменяемой системы, где с внутренней стороны гибкой емкости в месте образования геометрически неизменяемой системы используют уплотнительный материал, обеспечивающий свободный газообмен между окружающей средой и внутренним объемом емкости с сохранением стерильности зерна, находящегося в емкости.