ТРАНСПОРТНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ H.INFLUENZAE ИЗ НОСОГЛОТОЧНОЙ СЛИЗИ Российский патент 2002 года по МПК C12Q1/04 C12N1/20 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при транспортировке H. influenzae для посева на специальную питательную среду.

H. influenzae - микроорганизм, вызывающий тяжелые инфекционные заболевания у детей и взрослых и может находится на слизистой носоглотки.

Обычно для транспортировки H.influenzae из носоглоточной слизи с места взятия материала до лаборатории осуществляют с использованием сухого ватного тампона.

Однако возбудитель H.influenzae плохо переносит транспортировку на сухом ватном тампоне. Возможно высыхание тампона и гибель бактерий, кроме того, на H. influenzae губительно действуют другие бактерии, находящиеся в носоглоточной слизи.

Известна питательная среда - агар Левинталя из вареной крови для выделения H. influenzae (Козлов Ю.А. Питательные среды в медицинской микробиологии, М., Медгиз, 1950, с. 92-93).

Однако известная среда может быть использована только для посева H.influenzae. При транспортировке на плотной среде клеткам H.influenzae не хватает X, Y факторов роста и большинство клеток возбудителя H.influenzae гибнет от воздействия других бактерий, находящихся в носоглоточной слизи. А так как H.influenzae формирует очень мелкие колонии, трудно дифференцируемые от других колоний бактерий, находящихся в носоглотке человека, то обнаружить их небольшое количество при посеве практически невозможно.

Известна транспортная среда, которой пропитывают ватный тампон, для выделения менингококов из носоглоточной слизи (Приказ МЗ "по усилению эпидемического надзора и профилактики менингококовой инфекции и гнойных бактериальных менингитов", 375 от 23.12.97, п.10.6.1,. с.42.), содержащая питательную основу, сыворотку животных и раствор ристомицина.

Однако эта среда не пригодна для транспортировки возбудителя H.influenzae, т. к. в ней отсутствуют X, Y факторы роста для H.influenzae и другие бактерии подавляют бактерии H.influenzae.

Техническая задача - защита возбудителя H.influenzae от внешних воздействий и других бактерий носоглоточной слизи при транспортировке и "подращивание" бактерий - решается следующим образом.

Транспортная среда для выделения H.influenzae из носоглоточной слизи, содержащая питательную основу и ристомицин, согласно изобретению в качестве питательной основы используют 0,1% агар из вареной крови.

Исследования авторов показали, что использование транспортной среды для выделения H.influenzae, содержащей питательную основу из 0,1% агара и ристомицин, позволяет за счет снижения плотности среды и подавления грамположительных кокков сохранить минимальное количество (отдельные клетки) возбудителя H.influenzae при транспортировке и получить эффект "подращивания" бактерий еще до момента посева на плотные среды. Бактерии в жидких средах растут и размножаются быстрее, чем на плотных средах, а ристомицин снижает ингибирующее действие сапрофических бактерий, которые вызывают гибель H.influenzae. Исследуя влияние ристомицина на бактерии H.influenzae авторы выявили, что H.influenzae, все его штаммы, полученные из национальной коллекции ГИСК им. Тарасовича (H.influenzae АТСС 94505/81 "b", 11/64 "b", ATCC 10/63 "f", ATCC 5/63 "a", ATCC 27/63 "d", ATCC 8/63 "d", АТСС 9/64 "е", АТСС 52/64 "е", АТСС 7/63 "с"), и штаммы, изолированные от больных, резистентны к ристомицину при концентрации 20 ед на мл среды, а рост находящихся в носоглотке грампозитивных кокков подавляется. Исследования посевов (n=157) из носоглоточной слизи для обнаружения H.influenzae на плотных средах, в частности на агаре Левинталя из вареной крови, транспортированной обычным способом - на сухом ватном тампоне и на ватном тампоне, в предлагаемой транспортной среде показали, что после предварительного подращивания H.influenzae при транспортировке на предлагаемой среде выделение H. influenzae увеличилось на 21±0,8%. Критерий значимости различий d=3,25 (при Р<0,001). Статистическую обработку полученных данных осуществляли по достоверности различий (Бейли В. И., Статистические методы в биологии, М., Мир, 1964, 271 с.).

Таким образом, предлагаемая транспортная среда для выделения H.influenzae из носоглоточной слизи не только защищает бактерий от гибели, но и содержит факторы роста для H.influenzae.

Приготовление транспортной среды осуществляют следующим образом.

Питательную основу среды готовят по Левинталю (Ю.А. Козлов. Питательные среды в медицинской микробиологии, М., 1950, с. 92-93), используя вместо 1-2% агара 0,1% питательный агар. Агар охлаждают до 60^oС, медленно встряхивая и смешивая, добавляют 10% к объему агара свежевзятой дефибринированной крови. Кровь добавляют в 5-6 приемов. Смесь ставят на кипящую водную баню и прогревают в течение 5 мин, постоянно взбалтывая. После охлаждения среды до 45-50^oС добавляют раствор ристомицина из расчета 20 ед/мл среды. Среду разливают в пробирки по 5 мл. Транспортировку осуществляют, соблюдая стерильность в пробирках с предлагаемой средой и ватными тампонами с исследуемым материалом из носоглотки, который опущен в среду.

Таким образом, предлагаемая транспортная среда позволяет защитить бактерии H.influenzae от гибели и "подрастить" их при транспортировке, что позволяет выделить H. influenzae из носоглоточной слизи даже при минимальном количестве.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при транспортировке Н.influenzae для посева на специальную питательную среду. В качестве питательной основы среды используют 0,1%-ный питательный агар из вареной крови. Среда содержит ристомицин из расчета 20 ед/мл среды. Среда обеспечивает защиту бактерий от гибели и способствует их росту при транспортировке.

Транспортная среда для выделения Hacmophilus influenzae из носоглоточной слизи, содержащая питательную основу и ристомицин в концентрации 20 ед/мл среды, отличающаяся тем, что в качестве питательной основы используют 0,1% агар из вареной крови.