СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРОМЫШЛЕННОГО АЛЛЕРГЕНА Российский патент 2002 года по МПК A61K39/35 G01N33/00 

Изобретение относится с области медицины, а именно к технологиям приготовления аллергенов с целью их последующего применения для тестирования работников при приеме на работу и в процессе работы в различных областях производства, связанного с выделением различных газов, пыли, и т.п., в частности в резино-технической промышленности, в производстве пластмасс.

Для больных, сенсибилизированных к аллергенам, а также для врачей важное значение имеют сведения о содержании в воздухе аллергических частиц определенного химического аллергена. Для идентификации и определения количества частиц в воздухе применяют различные методы сбора и подсчета [1].

Известно, что специфическая диагностика при приеме на работу позволяет на некоторых производствах в последующие три года снизить заболеваемость на предприятии в 8 раз (Н.А. Лоогна, М.М. Лейси, 1977). Проблема широкого использования аналогичных диагностических возможностей связана, с одной стороны, с полиморфизмом химических производств, с другой - с отсутствием стандартных промышленных аллергенов.

Одна из частых причин профессиональной БрА - производственный контакт с тримеллитиновым ангидридом (ТИА), используемым в производстве пластмасс в качестве пластификатора. Профессиональную БрА могут вызывать различные химические и биологические материалы промышленного и профессионального характера. Загрязнение воздуха и его роль в патогенезе различных заболеваний - одна из наиболее часто обсуждаемых тем. Большинство пульмонологов отмечают важную роль поллютантов в провоцировании симптомов аллергической и неаллергческой БрА и аллергического и вазомоторного ринита.

Большое значение для этиологического диагноза ПБА (профессиональной бронхиальной астмы) атопического, т.е. IgE-обусловленного типа, имеют кожные тесты. Чаще применяются безопасные и достаточно информативные скарификационный и prick-методы тестирования. Такие аллергены, как перхоть животных, перо птиц, пыльца растений, обычно выпускаются в стандартных наборах; некоторые их них могут применяться в натуральном виде, например мука. Однако в настоящее время отсутствуют препараты для тестирования промышленных аллергенов.

Некоторые авторы (Платков Е.М., 1972) использовали для специфической диагностики "химической" астмы аппликационный метод кожного тестирования и получали положительный результат в 76% случаев [2].

Известен способ выделения аллергена из биологического сырья [3], по которому препарат получают методом ультрафильтрации. Культурный фильтрат возбудителя туберкулеза, выращенного на синтетической питательной среде и инактивированного нагреванием, пропускают через фильтрующие мембраны с задерживающей способностью 100 кДа, затем полученный фермент концентрируют на мембранах с задерживающей способностью 15 кДа и нормализуют по содержанию ME, хлорида натрия и фенола в 1 мл раствора.

Данный способ не применим к условиям промышленности, когда необходимо выделить промышленный аллерген.

Известен также способ получения аллерегена для выявления сенсибилизации организма грибами рода CANDIDA [4], по которому штамм Candida tropikalia ВСБ 928 выращивают в ферментере в жидкой среде в режиме циклического культивирования при рН 5,5, насыщении кислородом рО не ниже 80% с поддержанием уровня глюкозы в среде 0,6-0,8%. Отделенную культуральную жидкость концентрируют, пропуская через полые волокна марки HIP8, и разделяют методом мембранной фильтрации. Полученный аллергический материал с молярной массой от 10 до 300 кД подвергают фракционированию на ДЭАЕ-целлюлозе с последующим скринингом в аллергостате в гомологичной и гетерологичной системах.

Данный способ предназначен для диагностики заболеваний, вызванных дрожжеподобными грибами Candida tropikalia, процентами биомасс кормового назначения и не может быть использован для получения промышленных аллергенов.

Известен также способ получения аллергена из пчелиного яда [5], по которому производят выделение пчелиного яда и его обработку, причем выделение яда осуществляют путем электростимуляции пчел, производят сбор яда и его высушивание, а обработку высушенного яда проводят путем растворения его в воде, добавления альбумина в концентрации 0,03-0,033% с последующей инкубацией смеси в течение 18-20 часов при 3-5^oС, затем центрифугируют и диализуют при 3-5^oС.

Данный способ также специфичен и применим только для пчелиного яда и не применим для промышленных аллергенов.

Задачей, решаемой данным изобретением, является создание диагностических промышленных аллергенов различных производств.

Поставленная задача решается способом приготовления промышленного аллергена, заключающимся в экстрагировании поллютантов из воздуха производственного помещения, отличающимся тем, что забираемый через сборник всасывающего типа воздух пропускают последовательно через два аппарата Боброва, содержащие 70% этиловый спирт, взбалтывании смеси, центрифугировании ее, высушивании, обезжиривании полученного осадка, например, эфиром с последующим разведением аллерегена стандартной разводящей жидкостью.

Забор воздуха в производственном помещении производят в течение 7 дней по 15 минут каждые 8 часов рабочего дня на высоте 1,60-1,70 м пылесосом.

Забираемый воздух пропускают через два аппарата Боброва, сперва через первый сосуд, потом через 2-ой, при этом первый аппарат содержит в два раза больше 70% этилового спирта, чем второй.

На чертеже приведена схема осуществления заявляемого способа, где 1 - воздухозаборник всасывающего типа, например пылесос, 2 и 3 - сосуды аппарата Боброва, 4 - соединительные каналы.

Забор воздушной смеси в производственном помещении производят пылесосом 1 на высоте 160-170 см от пола в течение 7 дней по 15 минут каждые 8 часов для наиболее полного представления содержания в воздухе аллергенов. Полученную воздушную смесь пропускают последовательно через аппараты Боброва 2 и 3 с содержащимся в них 70% этиловым спиртом, причем сперва пропускают через сосуд с содержанием 500,0 мл, затем через сосуд с содержанием 250,0 мл 70% этилового спирта. Спиртовые смеси в первом и втором сосудах тщательно взбалтывают, после чего центрифугируют при 2000 об/мин в течение 10 минут. Полученный при этом осадок серовато-желтого цвета высушивают, обезжиривают эфиром. Для получения конечного продукта порошок разводят стандартной разводящей жидкостью.

Аллергическое обследование с использованием полученного аллергена проводили с помощью аппликационной пробы по следующей методике: на однослойный марлевый материал размером 1 кв. см наносили испытуемый препарат и прикладывали его к коже на внутреннюю поверхность предплечья. Затем этот квадрат покрывали большим квадратом медицинской клеенки размером 4 кв. см, края которой закрепляли лейкопластырем. Спустя сутки повязку снимали и учитывали реакцию кожи через 24 и 48 часов. Все испытуемые были предупреждены о том, что при проявлении сильного зуда или жжения под повязкой ее необходимо снять, нанесенное вещество смыть проточной водой.

В Кандринском цехе резиново-технических изделий Нижнекамского завода, производящем авторезину из натрий-бутадиенового синтетического каучука, проведено выделение промышленного аллергена, изготовление аллерегена для проведения аппликационного кожного теста, аллергическое обследование работающих.

Исследование проведено у 23 из 26 работающих в этом цехе. При этом положительные кожные тесты обнаружены у 3 обследованных. Все они имели отягощенную аллергологическую наследственность: один из них страдал полленозом - аллергией на пыльцу растений (в периоде ремиссии на момент исследования) и двое в анамнезе имели проявления крапивницы. Лица с положительной реакцией на промышленный аллерген имели срок контакта с ним в производственных условиях от четырех (двое рабочих) до шести (1 работающий) месяцев. Важно отметить, что пациенты не отмечали никаких клинических проявлений на рабочем месте, что позволило считать сенсибилизацию как субклиническую.

Таким образом, нами разработан способ приготовления промышленного аллергена, дающий возможность раннего (4-6 месяцев экспозиции) выявления у рабочих с субклинической сенсибилизацией, что позволяет своевременно выявить группу профессионального риска и обеспечить рациональное трудоустройство. Способ прост в реализации, универсален в отношении разных типов аллергенов и разных производств. Реализация способа не требует сложного специального оборудования, что обеспечивает его экономичность, расширяет возможности его применения.

Источники информации
1. Аллергические болезни. Диагностика и лечение (перевод с англ.). Рой Паттерсон, Лесли К. Грэммер, Пол. А. Гринберг. Изд-во ГОЭОТАР, Медицина, М., 2000 г., Стр.98.

2. В. Н. Пыцкий, Н.В. Андрианов, А.В. Артамасова. Аллергические заболевания, Изд.III, М., "Триада-Х", 1999 г.

3. АС СССР 1573578, МПК 6 А 61 К 39/35, 35/56, 27.03.96 г.

4. Патент РФ 2031657, МПК 6 А 61 K 39/35, C 12 N 1/14, 27.03.95.

5. AC СССР 1524226, МПК 6 А 61 К 35/64, 27.05.96.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу приготовления аллергенов с целью их последующего применения для выявления аллергических реакций пациента при профотборе. Сущность изобретения состоит в создании приготовления промышленного аллергена, который заключается в экстрагировании полютантов из воздуха производственного помещения, при этом забираемый воздух пропускают последовательно через два аппарата Боброва, содержащие 70%-ный этиловый спирт, взбалтывают смесь, центрифугируют ее, высушивают, полученный осадок обезжиривают, например, эфиром с последующим разведением аллергена стандартной разводящей жидкостью. Технический результат: расширение арсенала мероприятий для борьбы с аллергическими заболеваниями. 2 з.п.ф-лы, 1 ил.

1. Способ приготовления промышленного аллергена, заключающийся в экстрагировании полютантов из воздуха производственного помещения, отличающийся тем, что забираемый через сборник всасывающего типа воздух пропускают последовательно через два аппарата Боброва, содержащие 70%-ный этиловый спирт, взбалтывают смесь, центрифугируют ее, высушивают, полученный осадок обезжиривают, например, эфиром с последующим разведением аллергена стандартной разводящей жидкостью. 2. Способ приготовления промышленного аллергена по п. 1, отличающийся тем, что забираемый из промышленных помещений воздух пропускают через два аппарата Боброва, первый из которых содержит в два раза больше 70%-ного этилового спирта, чем второй. 3. Способ приготовления промышленного аллергена по п. 1, отличающийся тем, что забор воздуха в промышленных помещениях производят в течение 7 дней по 15 мин каждые 8 ч.