АЛЛЕРГЕН НЕЙССЕРИЯ ПЕРФЛАВА, СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К НЕЙССЕРИИ ПЕРФЛАВА И СПОСОБ ИММУНОТЕРАПИИ БОЛЬНЫХ ИНФЕКЦИОННО-АЛЛЕРГИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ Российский патент 2002 года по МПК A61K39/35 A61K39/95 

Изобретение относится к области медицины, а именно иммунологии, и касается создания препарата для диагностики чувствительности к нейссерии перфлава и способа иммунотерапии.

В патентной литературе аллергена нейссерии перфлава не обнаружено.

Задачей настоящего изобретения является получение аллергена нейссерия перфлава для диагностики чувствительности к нейссерии перфлава и специфической иммунотерапии.

Для решения поставленной задачи предложена группа изобретений, объединенных общим изобретательским замыслом.

Аллерген нейссерия перфлава представляет собой смесь инактивированных фенолом микробных клеток штаммов "57", "11" и продуктов их метаболизма с концентрацией 300 - 500 млн микробных клеток/мл, pH 6,5 - 7,3.

Аллерген нейссерии перфлава может быть использован для специфической диагностики повышенной чувствительности к нейссерии перфлава, при этом аллерген вводят внутрикожно в объеме 0,05 мл в среднюю треть ладонной поверхности предплечья с последующей оценкой реакции кожи на введение аллергена через 20 минут и 24 часа.

Способ иммунотерапии больных инфекционно-аллергическими заболеваниями осуществляется путем введения аллергена нейссерия перфлава путем подкожных инъекций в постепенно возрастающих дозах с интервалом между инъекциями 3 - 5 дней.

Для изготовления аллергена использованы штаммы "57", "11" вида Neisseria perflava, депонированные в коллекции музея живых культур ГНСК им. Л.А. Тарасевича ( 080230 и 080232).

Аллерген представляет собой прозрачную или слегка опалесцирующую, бесцветную или окрашенную жидкость, в которой возможно наличие взвеси конгломератов инактивированных микробных клеток.

Концентрация микробных клеток составляет 300 - 500 млн/мл; белковый азот не более 3000 PNU/мл. Препарат стерильный, апирогенный. Пирогенность препарата определялась введением внутривенно тест-дозы 250000 микробных клеток/мл на 1 кг массы кролика.

Препарат нетоксичный. Токсичность определялась не белых мышах массой 18-20 г путем внутрибрюшинного введения 0,5±0,1 мл препарата.

Для специфической диагностики аллерген вводят внутрикожно в объеме 0,05 мл в среднюю треть ладонной поверхности предплечья, обработанную 70^o этиловым спиртом. Одновременно в качестве контроля вводят внутрикожно 0,05 мл разводящей жидкости (последняя используется в качестве тест-контрольной жидкости). Реакция на разводящую (тест-контрольную) жидкость должна быть отрицательной, при положительной реакции на разводящую жидкость реакцию на аллерген не учитывают.

Перед постановкой кожной пробы с аллергеном для определения реактивности кожи вводят внутрикожно 0,01%-ный раствор гистамина в объеме 0,02 мл, который готовят путем разведения гистамина-дигидрохлорида (1 часть) 0,9%-ным раствором натрия хлорида изотонического для инъекций (9 частей). Реакция кожи на гистамин должна быть положительной, при отрицательной реакции на гистамин аллерген не вводят.

Аллерген, разводящую жидкость, 0,01%-ный раствор гистамина набирают с соблюдением правил асептики в стерильные шприцы вместимостью 1,0 мл с делениями на 0,1 мл стерильными иглами путем прокола резиновой пробки флакона, предварительно обработанной 70^o этиловым спиртом. Шприцы и иглы должны быть индивидуальными для каждого препарата и больного.

У лиц, имеющих повышенную чувствительность к нейссерии перфлава, в месте введения препарата развивается реакция кожи в виде волдыря или инфильтрата и гиперемии.

Реакцию кожи учитывают через 20 минут (реакции немедленного типа) и через 24 часа (реакции замедленного типа) и регистрируют согласно прилагаемым схемам.

Критерием оценки положительной кожной реакции служит размер волдыря или инфильтрата.

Схема учета кожной реакции через 20 минут приведена в табл.1.

Схема учета кожной реакции через 24 часа приведена в табл. 2.

Специфическую иммунотерапию (СИТ) проводят путем подкожных инъекций различных разведений аллергена в постепенно возрастающих дозах.

Для приготовления лечебных разведений аллерген последовательно десятикратно разводят разводящей жидкостью по следующей схеме:
1 разведение 1:10 (10^-1)
2 разведение 1:100 (10^-2)
3 разведение 1:1000 (10^-3)
4 разведение 1:10000 (10^-4)
5 разведение 1:100000 (10^-5)
6 разведение 1:1000000 (10^-6)
Для этого берут 6 маркированных флаконов, содержащих по 4,5 мл разводящей жидкости. В первый флакон вносят стерильным шприцем при соблюдении условий асептики 0,5 мл аллергена. Этот флакон будет соответствовать разведению 1: 10 (10^-1). После тщательного перемешивания из первого флакона другим стерильным шприцем 0,5 мл смеси переносят во второй флакон, вновь перемешивают, затем 0,5 мл смеси из второго флакона переносят в третий и так последовательно до флакона 6 (каждый раз новым шприцем).

Разведенные аллергены хранят при температуре (+4) - (+8)^oC не более месяца.

До начала проведения специфического лечения определяют пороговую чувствительность к аллергену. Для этого на ладонной поверхности предплечья одновременно ставят внутрикожно 3-4 пробы с разведением аллергена 10^-6, 10^-5, 10^-4 в дозе 0,1 мл. При наличии положительных реакций начальной лечебной дозой считается наибольшее разведение аллергена, которое дает сомнительную или отрицательную кожную реакцию. В том случае, если повышенная чувствительность отсутствует, лечение можно начинать с больших концентраций аллергена (10^-3 или 10^-2).

В дальнейшем повышение доз аллергена производят индивидуально в зависимости от переносимости больным препарата.

Интервалы между инъекциями составляют 3 дня, а в разведении 10^-2 и 10^-1 - 5 дней.

Инъекции проводят подкожно в области предплечья или плеча в дозе от 0,1 до 0,7-1,0 мл (от 4 до 10 инъекций каждого разведения). Первые 2-3 инъекции могут сопровождаться возникновением не резко выраженной реакции в виде усиления кашля, ринита и других симптомов основного заболевания, что не является препятствием продолжения лечения.

При наличии более выраженной реакции следующую инъекцию аллергена пропускают. В дальнейшем лечение продолжают с дозы на один-два порядка ниже той, при которой возникла реакция обострения.

Схема специфической иммунотерапии аллергеном нейссерия перфлава приведена в табл.3/
Курс СИТ продолжается от четырех до шести месяцев, может быть сокращен до 3-5 месяцев, после чего назначают поддерживающую терапию, которую больной может получать 1-3 года. Инъекции аллергена в разведении 1:10 в дозе 1 мл проводят в течение 1-3 лет, из них первые 6 месяцев с интервалом 2 недели и в последующем - 1 раз в месяц. В тех случаях, когда больной плохо переносит большие дозы аллергена, в качестве поддерживающей дозы используют дозу, переносимую больным. В процессе лечения проводят исследование крови 1 раз в месяц.

Аллерген нейссерия перфлава выпускают в комплекте, включающем 1 флакон с аллергеном (2,0 мл) и 9 флаконов с разводящей жидкостью (4,5 мл). Срок годности аллергена 2 года. Аллерген хранят в темном помещении с относительной влажностью воздуха не более 60% при температуре (6±2)^oC.

Аллерген нейссерия перфлава разрешен к применению в медицинской практике Министерством здравоохранения РФ.

Производственные штаммы микроорганизмов.

Характеристика производственных штаммов микроорганизмов приведена в табл.4.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии. Предложен аллерген нейссерия перфлава, представляющий собой смесь инактивированных фенолом микробных клеток штаммов "57", "11" и продуктов их метаболизма с концентрацией 300-500 млн микробных клеток/мл, рН 6,5-7,3. Данный аллерген может быть использован для специфической диагностики к нейссерии перфлава и в способах иммунотерапии больных инфекционно-аллергическими заболеваниями. Техническим результатом является диагностика чувствительности к нейссерии перфлава и проведение специфической иммунотерапии. 3 с.п. ф-лы, 4 табл.

1. Аллерген нейссерия перфлава, представляющий собой смесь инактивированных фенолом микробных клеток штаммов "57", "11" и продуктов их метаболима с концентрацией 300-500 млн микробных клеток/мл, рН 6,5-7,3. 2. Способ диагностики чувствительности к нейссерии перфлава, характеризующийся тем, что аллерген нейссерии перфлава по п. 1 вводят внутрикожно в объеме 0,05 мл в среднюю треть ладонной поверхности предплечья с последующей оценкой реакции кожи на введение аллергена через 20 мин и 24 ч. 3. Способ иммунотерапии больных инфекционно-аллергическими заболеваниями, характеризующийся введением аллергена нейссерии перфлава по п. 1, при этом аллерген вводят путем подкожных инъекций в постепенно возрастающих дозах с интервалом между инъекциями 3-5 сут.