СПОСОБ КОМПЛЕКСНОЙ ДИАГНОСТИКИ АЛЛЕРГИИ У ДЕТЕЙ С ИНФЕКЦИОННОЙ ПАТОЛОГИЕЙ Российский патент 2002 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к области медицины, в частности к комплексной диагностике аллергической патологии у детей.

Известны способы диагностики аллергического статуса клиническими методами, основанными на испытании аллергенов непосредственно на больном (1). Недостатками известных методов являются определенная опасность для здоровья, провокация обострения заболевания, реактогенность, большое число испытуемых аллергенов, длительная возможность подбора специфического аллергена для десенсибилизации, постановка in vivo и др.

Предлагаемый способ диагностики аллергических состояний отличается рядом преимуществ перед существующими: полностью исключается опасность для здоровья, реактогенность, провокация обострений, постановка его осуществляется in vitro доступными методами.

Формирование аллергического статуса у ребенка может быть следствием перенесенной инфекции, сенсибилизации промежуточными или конечными продуктами обмена, микробными или другими аллергенами. Внешние проявления аллергии могут носить разный характер.

Индикаторами формирования аллергии как патогенетического фактора могут служить свидетели аллергической настроенности организма - эозинофилы, базофилы, реагины из числа иммуноглобулинов различных классов, в частности IgЕ, IgG, обнаружение аллергоопасных биологически активных веществ, освобождаемых микроорганизмами под влиянием гистидин-декарбоксилазы (гистамин).

Целью настоящего изобретения явилась разработка комплексного способа диагностики аллергии у детей на основе изучения гистидиндекарбоксилазной активности возбудителей основного или сопутствующих инфекционных заболеваний, уровня индикаторов аллергии - эозинофилов и базофилов, также изучения концентрации наиболее доступных и частых участников аллергических процессов особенно цитотоксического генеза-IgG.

Диагностическое значение перечисленного комплекса отработано нами на примере или модели острых и хронических кишечных инфекций у детей с разнообразной этиологией - шигеллезной (разных видов), сальмонеллезной, гастроэнтеритах, вызванных условно-патогенной микрофлорой: разными видами стафилококков, представителями семейства Enterobacteriaceae (эшерихии, клебсиеллы, цитробактеры, эдвардсиеллы и др.)
Примеры конкретного действия.

Выполнение способа производится в несколько этапов, последовательных или одновременных:
1 этап может быть выполнен в двух вариантах:
1.1 Выделение в баклаборатории чистых культур возбудителей производится по традиционной схеме с последующей идентификацией микробного рода и вида (Равич-Биргер, 1994);
1.2 Посев культуры, инкубация в термостате, смыв выросших микробов 0,5% изотоническим раствором NaCl или 0,85% физиологическим раствором.

2 этап. Определение гистидиндекарбоксилазной активности чистой выделенной культуры микробов или смытой микробной взвеси ускоренным методом в описании В. М. Никитина (1986)(3). Поскольку метод малоизвестен, описываем его принципы и последовательность.

Принцип метода заключается во взаимодействии бактериальных гистидиндекарбоксилаз с аминокислотой гастидином, в процессе которого происходит его дезаминирование. Под влиянием добавленного реактива Несслера освобождаются амины, в данном случае гистамин, выпадающие в виде мутного осадка, который регистрируется либо простым глазом, либо на аппарате ФЭК-56.

Последовательность выполнения реакции:
1. Суточную культуру микробов (или смесь) смывают изотоническим раствором, или дистиллированной водой, или ацетатным буфером с рН 5,4. Дважды отмывают в нем центрифугированием.

2. Отмытый бактериальный осадок ресуспендируют в 5-6 мл ацетатного буфера и разливают по 2 пробиркам по 1,5-2 мл.

3. В первую пробирку вносят 0,1 мл 0,02 М раствора гистидина. Во второй пробирке (контроль) культуру убивают кипячением, остужают и также добавляют ту же аминокислоту.

4. Пробирки встряхивают, инкубируют при + 37^oС в течение часа.

5. Пробирки с содержимым центрифугируют при 2000-3000 тыс. об/мин. в течение 10-20 мин.

6. Берут 0,1-0,2 мл надосадочного субстрата приливают дистиллированную воду до 2 мл и 0,2 мл реактива Несслера.

7. Учет результатов проводят на ФЭК-56 против контрольной (кипяченой) пробы при длине волны 400 нм.

3 этап. Определение IgG и IgЕ по Mancini с соавт. (1965) (4) проводится традиционно способом иммунодиффузии реагентов- антигена (сыворотка крови больного) с антителами (антиглобулиновая сыворотка) при наличии и в сравнении с заведомо положительными пробами.

Учет результатов производится в отличие от традиционного с учетом возрастной нормы по Ig G (Лебедев К.А, Понякина И.Д., 1990)(2).

Дети до 1 года 4,24±0,15 г/л;
1-3 года 9,45±0,27 г/л;
7-10 лет 7,82±0,35 г/л;
11-14 лет 9,25±0,38 г/л;
взрослые 6-12 г/л.

4 этап. Цитограммное содержание индикаторных клеток в мазке крови, окрашенном по Романовскому-Гимзе. Поиск с помощью микроскопа или автоматического анализатора. Подсчет клеток крови осуществляется традиционно. Но при оценке результатов также должна учитываться возрастная норма (Лебедев К.А. с соавт, 1990) (см. табл. А).

При использовании способа для диагностики аллергии у взрослого контингента больных возрастные нормы Ig и клеток крови можно найти в том же руководстве.

Комплексная оценка полученных данных и постановка диагноза проводится по совокупности превышения показателей уровней IgG, IgЕ, удельного веса клеточных индикаторов аллергии - эозинофилов и базофилов, а также гистидин-декарбоксилазной активности возбудителей и(или)сопутствующей микрофлоры. Последний показатель весьма важен как для специфической десенсибилизации организма, так и для патогенетической терапии (гистаминаза).

Пример II конкретного действия
При выделении чистой культуры возбудителей и контроля их гистидиндекарбоксилазной активности следует ориентироваться на родо-видовую принадлежность испытуемых культур, частоту дезаминирования ими аминокислоты гистидина (табл.1).

Пример III конкретного действия
При различной тяжести течения дисбиозов степень дезаминирования гистидина бактериями неоднозначна. Это необходимо учитывать в процессе оценки возможной природы аллергического статуса (табл.2).

Исходя из приведенных данных, аллергозы при I степени дисбиоза практически не возникают, за исключением случаев стафилококковой природы, которые в 1/4 части связаны с дезаминирующей активностью декарбоксилаз. Не отмечено последней и при участии в этиологии дисбиозов III степени тяжести микробов родов Acinetobacter, Edwardsiella, Providencia.

Пример IV конкретного действия способа, связанный с применением его с учетом клинических проявлений аллергозов, сочетанных или возникающих на фоне дисбиоза (табл.3)
Очень важное значение в оценке аллергических состояний имеет еще один показатель реактивности - функциональная оценка аллергической настроенности организма - АНО, которое рассчитывается по данным гемограммы согласно формулы Н.П. Мель (1984).

Для чего подсчитывается число эозинофилов, базофилов и находится их соотношение с общим количеством лейкоцитов.

Примером характеристики АНО при аллергозах разного типа на фоне дисбиозов у детей могут служить следующие показатели (табл.4).

Используемая литература
1. Адо А.Д. Общая и частная аллергология, М., Медгиз, 1983.

2. Лебедев К.А., Понякина И.Д. Иммунограмма в клинической практике, М., Изд. "Наука", 254 с.

3. Никитин В.М. Справочник методов биохимической экспресс-индикации микробов 1986, с.201.

4. Mancini G, Carbonare А.О., Haremans J.F. Immunochemical guatiation of antigens by single radial diffusion. - Immunochemistry, 1965, v.2, p.235.

Изобретение относится к области медицины, в частности к комплексной диагностике аллергии у детей. Сущностью изобретения является определение гистидин-декарбоксилазной активности культуры микроорганизма, выделенного от больного, уровня IgG и IgE, эозинофилов, базофилов, показателя общей аллергической настроенности организма (АНО), и при превышении определяемыми величинами возрастной нормы диагностируют аллергию. Техническим результатом является разработка комплексного способа диагностики аллергии у детей. 5 табл.

Способ комплексной клинико-лабораторной диагностики аллергии у детей с инфекционным заболеванием, отличающийся тем, что определяют гистидин-декарбоксилазную активность культуры микроорганизма, выделенного от больного, уровень IgG, IgE, а также уровень цитологических индикаторов аллергии-эозинофилов, базофилов, их интегральную роль в развитии общей аллергической настроенности организма (АНО) и при превышении определяемыми величинами возрастной нормы диагностируют аллергию.