СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ МИКСТ-ИНФЕКЦИЙ ПРИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ УРЕТРЫ И ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ Российский патент 2003 года по МПК G01N33/52 

Изобретение относится к области медицины, а именно биохимии, и может быть использовано, в частности, для диагностики микст-инфекций при воспалительных заболеваниях уретры и предстательной железы.

В практической медицине известны различные способы диагностики микст- инфекций при воспалительных заболеваниях уретры и предстательной железы, основанные на выявлении антигенов возбудителей с использованием антител к данным антигенам с помощью иммуноферментного анализа (Колкова Н. И., Мартынова В. Р. К вопросам диагностики хламидийных инфекций. - Клиническая лабораторная диагностика. - М., 1998. - 2. - С. 20, 21) на реакции антигена и антитела с детекцией образовавшихся комплексов с помощью иммунофлюоресцентного анализа (Микроскопическая техника: Руководство / Под ред. Д. С. Саркисова и Ю.Л. Перова. - М., 1996. -С. 315, 316).

Недостатками этих методов являются:
недостаточно хорошая воспроизводимость;
трудоемкость, применение дорогостоящей аппаратуры;
сравнительно частая встречаемость ложноположительных и ложноотрицательных результатов.

Наиболее близким способом к предлагаемому является способ выявления микст-инфекций при использовании метода ДНК-гибридизации с применением меченного биотином ДНК-зонда, включающий обнаружение в нанесенном на нитроцеллюлозный фильтр исследуемом образце ДНК-возбудителя (Квасов А.В., Жданов А.В., Письменская И. В. , Файзуллина Н.М., Файзуллин Л.3., Сухих Г.Т. Применение меченного биотином ДНК-зонда для выявления возбудителей хронических урогенитальных инфекций // Клиническая лабораторная диагностика. - М., 1998. - 11. - С. 12-15.).

Данный способ при диагностике микст-инфекций имеет следующие недостатки:
способ не является достаточно точным, так как имеет невысокую чувствительность (из-за малого объема исследуемой пробы), низкое прогностическое значение отрицательного результата;
способ трудоемкий, требует применения дорогостоящих реагентов;
способ имеет высокую субъективность в оценке результатов, так как сравнение интенсивности окраски пятна опытной и контрольной пробы проводится визуально.

Целью представленного изобретения является повышение точности и упрощение способа диагностики микст-инфекций при воспалительных заболеваниях уретры и предстательной железы при одновременной простоте и доступности для широкого практического применения.

Поставленная цель в изобретении достигается тем, что в секрете предстательной железы иммунохимически определяют уровень лактоферрина и по его увеличению выше 150 мг/л диагностируют микст-инфекцию при воспалительных заболеваниях уретры и предстательной железы.

Негемовый ферропротеин лактоферрин является нормальным секреторным продуктом предстательной железы (Николаев А.А., Луцкий Д.Л., 1998;) и периуретральных желез (Reese J. H. et al., 1992), в то же время лактоферрин справедливо относят к белкам острой фазы воспаления, так как он способен синтезироваться лейкоцитами и является показателем их дегрануляции (Hogevold H. E. et al., 1997). При воспалительных заболеваниях уретры и предстательной железы уровень лактоферрина в секрете предстательной железы формируется из двух источников:
1. секреция предстательной железы и периуретральных желез;
2. дегрануляция лейкоцитов.

То есть лактоферрин отражает как собственную белоксинтезирующую активность желез уретры и предстательной железы, так и выраженность воспалительного процесса, характеризующуюся дегрануляцией лейкоцитов.

По полученным нами данным, при микст-инфекции уровень лактоферрина в секрете предстательной железы значительно повышен по сравнению с воспалительным процессом, вызванным каким-либо одним инфекционным агентом. Способ не зависит от непосредственного выявления возбудителя, так как основан на исследовании ответа организма хозяина на молекулярном уровне. Это тем более важно, поскольку многие урогенитальные инфекции протекают латентно, микст-инфекции могут быть обусловлены ассоциациями внутриклеточных паразитов (например, хламидии, уроплазмы), непосредственное выявление которых весьма затруднено, а иногда и невозможно.

Таким образом, преимущество предлагаемого способа в более высокой диагностической точности при выявлении микст-инфекций. При этом высокая специфичность, относительно низкая себестоимость и простота выполнения (что делает предлагаемый способ доступным для широкого практического применения) обеспечивается применением иммунохимического метода определения уровня лактоферрина.

Положительный эффект предлагаемого способа достигается точностью оценки уровня лактоферрина в секрете предстательной железы. Это позволяет при уровне лактоферрина выше 150 мг/л диагностировать микст-инфекцию, а при более низком уровне лактоферрина исключить микст-инфекцию. Специфичность предлагаемого способа составляет 90%, чувствительность 95,2%, эффективность 91%, прогностическое значение положительного результата 75,5%, прогностическое значение отрицательного результата 98,7%, что превышает аналогичные показатели других способов (таблица).

Предложенный способ был успешно апробирован в Астраханском областном кожно-венерологическом диспансере и в Астраханском городском центре планирования семьи и репродукции с медико-генетической консультацией с января 2000 года по ноябрь 2000 года на 212 пациентах с воспалительными заболеваниями уретры и предстательной железы.

Ниже приводятся результаты апробации.

Пример 1. Пациент И. 1972 года рождения /медицинская карта амбулаторного больного 119/2000/. Обратился с жалобами на зуд, жжение в уретре. Болеет 2 недели. Выделения скудные слизистые. Кожные покровы чистые, губки не изменены, выделения скудные слизистые. Мазок без особенностей, лейкоцитов мало. В секрете предстательной железы лейкоцитов - 20-30 в поле зрения, липоидных телец - умеренно, гонококки - отсутствуют, трихомонады - отсутствуют. Бактериологическое исследование выявило рост уроплазм. Для исключения микст-инфекции проведено определение лактоферрина в секрете предстательной железы.

Определения содержания лактоферрина проводили иммунохимическим методом. Принцип метода состоит в том, что внесенные в агаровый гель антиген и антитела при встречной диффузии реагируют друг с другом, образуя визуально определяемый преципитат при оптимальном количественном соотношении.

Нами был использован метод радиальной иммунодиффузии в агаре по Манчини. Метод основан на свободной диффузии антигена в агаре, содержащем антитела. Практически это осуществлялось путем смешивания 1,5% агара при 52^oС с поликлональными кроличьими антителами против лактоферрина человека (ICN 55130) до конечной концентрации 10%. На залитых этой смесью пластинках (9х12 см) пробивали лунки (для чего использовался пробойник диаметром 1 мм), в которые вносили исследуемую смесь (секрет предстательной железы, разведенный в 10 раз 0,9% раствором хлорида натрия). Агаровые пластинки инкубировали при комнатной температуре во влажной камере. Через 24 ч образовывались зоны преципитации, площадь которых пропорциональна концентрации антигена. Для повышения точности определения диаметра колец преципитации пластинки после отмывания окрашивали 1% амидочерным. Калибровочные кривые для определения уровня лактоферрина строили для каждой пластинки отдельно. Для этого на каждой пластинке проставляли препарат очищенного (чистота препарата ≥98%) лактоферрина человека (ICN 194692) в 5 разведениях.

У обследуемого больного уровень лактоферрина в секрете предстательной железы составил 173,4 мг/л. Так как уровень лактоферрина превышал 150 мг/л, результат считали положительным, что свидетельствует о наличие микст-инфекции.

Повторное проведение бактериологического анализа позволило выявить наличие хламидий, подтвердить, таким образом, наличие микст-инфекции и назначить адекватную терапию.

Пример 2. Пациент А. 1969 года рождения /медицинская карта амбулаторного больного 365/2000/. Обратился с жалобами на рези при мочеиспускании, зуд, жжение в уретре. Болеет 3 недели. Выделения умеренные слизисто-гнойные. Кожные покровы чистые, губки уретры инфильтрированы, гиперемированы, выделения слизисто-гнойные. Мазок: лейкоциты - до закрытия полей зрения, слизи умеренно, трихомонады - отсутствуют, гонококки - отсутствуют. В секрете предстательной железы лейкоцитов - 60-80 в поле зрения, липоидных телец - умеренно, гонококки - отсутствуют, трихомонады - отсутствуют. Уровень лактоферрина в секрете предстательной железы определяли методом радиальной иммунодиффузии в агаре по Манчини (см. пример 1) и он составил 302,5 мг/л, что превышает 150 мг/л и свидетельствует о наличие микст-инфекции. Бактериологическое исследование выявило рост уроплазм. При повторном исследовании мазка из уретры: лейкоциты - до закрытия полей зрения, слизи умеренно, трихомонады - обнаружены, гонококки - отсутствуют. Наличие микст-инфекции, таким образом, подтверждено, назначено соответствующее лечение.

Пример 3. Пациент М. 1977 года рождения /медицинская карта амбулаторного больного 704/2000/. Обратился с жалобами на жжение в уретре. Болеет 3 недели. Выделения умеренные слизисто-гнойные. Кожные покровы чистые, губки уретры гиперемированы, выделения слизисто-гнойные. Мазок: лейкоциты - до полузакрытия полей зрения, слизи много, трихомонады - отсутствуют, гонококки - отсутствуют. В секрете предстательной железы лейкоцитов - 20-35 в поле зрения, липоидных телец - мало, гонококки - отсутствуют, трихомонады - отсутствуют. Уровень лактоферрина в секрете предстательной железы определяли методом радиальной иммунодиффузии в агаре по Манчини (см. пример 1) и он составил 112,3 мг/л, что не превышает 150 мг/л и свидетельствует об отсутствии микст-инфекций. Реакция иммунофлюоресценции выявила наличие уроплазм. Бактериологическое исследование выявило рост только уроплазм. Назначено соответствующее лечение.

Пример 4. Пациент С. 1971 года рождения /медицинская карта амбулаторного больного 1053/2000/. Обратился для обследования, после контакта с малознакомой женщиной, имевшего место 3 недели назад. Жалобы не предъявляет. Кожные покровы чистые, губки уретры не изменены, выделения незначительные, слизистые. Мазок: лейкоциты - единичные в полей зрения, слизи умеренно, трихомонады - отсутствуют, гонококки - отсутствуют. В секрете предстательной железы лейкоцитов - 3-5 в поле зрения, липоидных телец - много, гонококки - отсутствуют, трихомонады - отсутствуют. Реакция иммунофлюоресценции выявила только хламидии. Уровень лактоферрина в секрете предстательной железы определяли методом радиальной иммунодиффузии в агаре по Манчини (см. пример 1) и он составил 229,2 мг/л, что превышает 150 мг/л и свидетельствует о наличии микст-инфекции. Проведено ПЦР-исследование на хламидии - положительный результат, на уроплазмы - положительный результат. Бактериологическое исследование - рост хламидии, рост уроплазм. Наличие микст-инфекции подтверждено, назначено соответствующее лечение.

Пример 5. Пациент С. 1964 года рождения /медицинская карта амбулаторного больного 1104/2000/. Обратился с жалобами на рези при мочеиспускании, зуд, жжение в уретре. Болеет 4 недели. Выделения умеренные слизисто-гнойные. Кожные покровы чистые, губки уретры инфильтрированы, гиперемированы, выделения слизисто-гнойные. Мазок: лейкоциты -до полузакрытия полей зрения, слизи умеренно, трихомонады - обнаружены, гонококки - отсутствуют. В секрете предстательной железы лейкоцитов - 25-30 в поле зрения, липоидных телец - мало, гонококки - отсутствуют, трихомонады - отсутствуют. ПЦР-исследование на хламидии - положительный результат. Уровень лактоферрина в секрете предстательной железы определяли методом радиальной иммунодиффузии в агаре по Манчини (см. пример 1) и он составил 96,1 мг/л, что не превышает 150 мг/л и свидетельствует об отсутствии микст-инфекции. Бактериологическое исследование не выявило рост хламидии. При повторном ПЦР-исследовании на хламидии - результат отрицательный. В дальнейшем хламидии также не обнаружены. Наличие микст-инфекции, таким образом, не подтверждено, что позволило избежать полипрагмазии и назначить адекватную терапию.

Предлагаемым способом достигается положительный эффект: повышается точность диагностики микст-инфекции при воспалительных заболеваниях уретры и предстательной железы за счет увеличения чувствительности, эффективности и значительного увеличения прогностического значения отрицательного результата. Это позволяет назначить адекватное лечение, повысить его эффективность. Способ менее трудоемок по сравнению с прототипом. Предлагаемый способ не требует применения специального оборудования, чем достигается упрощение. Способ позволяет использовать менее дорогостоящие реагенты по сравнению с прототипом, чем достигается удешевление. Специфичность предлагаемого способа составляет 90%, чувствительность 95,2%, эффективность 91%, прогностическое значение положительного результата 75,5%, прогностическое значение отрицательного результата 98,7%.

Предлагаемый способ может быть использован в клинической практике для диагностики микст-инфекций при воспалительных заболеваниях уретры и предстательной железы.

Изобретение относится к области медицины, а именно к урологии. Способ обеспечивает повышение точности и упрощение способа диагностики микст-инфекций при воспалительных заболеваниях уретры и предстательной железы при одновременных простоте и доступности для широкого практического применения. В секрете предстательной железы иммунохимически определяют уровень лактоферрина и по его увеличению выше 150 мг/л диагностируют микст-инфекцию при воспалительных заболеваниях уретры и предстательной железы. 1 табл.

Способ диагностики микст-инфекций при воспалительных заболеваниях уретры и предстательной железы путем биохимического исследования секрета предстательной железы, отличающийся тем, что в секрете предстательной железы иммунохимически определяют уровень лактоферрина и по его увеличению выше 150 мг/л диагностируют микст-инфекцию при воспалительных заболеваниях уретры и предстательной железы.