СПОСОБ ИММУНОХИМИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОГО ПРОСТАТИТА Российский патент 2004 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины, а именно биохимии, и может быть использовано, в частности, для диагностики хронического простатита.

В практической медицине известен способ лабораторной диагностики хронического простатита, основанный на микроскопическом исследовании нативного препарата секрета предстательной железы (Тиктинский О.Л., Михайличенко В.В. Андрология. - СПб: 1999, - с.94, 95).

Недостатками этого способа являются:

- низкая воспроизводимость;

- трудоемкость;

- частая встречаемость ложноотрицательных результатов.

Наиболее близким способом к предлагаемому является способ диагностики хронического простатита, основанный на определении уровня церрулоплазмина в секрете предстательной железы (Тарасов Н.И., Серегин С.П., Волчегорский И.А. О роли определения церрулоплазмина в лабораторной диагностике хронического простатита // Клинич. лаб. диагн. - 1998, -№1, - c.19-20).

Однако данный способ не является достаточно точным, так как при определении уровня церрулоплазмина в секрете предстательной железы существует так называемая “серая зона”, в которой значения границ нормы и патологии перекрываются, что значительно снижает специфичность способа, уменьшает диагностическое значение положительного и отрицательного результатов.

Целью представленного изобретения является повышения точности способа диагностики хронического простатита.

Поставленная цель в изобретении достигается тем, что в секрете предстательной железы определяют соотношение между уровнем спермоспецифического ингибитора трипсина и уровнем церрулоплазмина и при соотношении 12 и больше у пациента диагностируют хронический простатит.

Спермоспецифический ингибитор трипсина является органоспецифическим белком, который синтезируется и секретируется предстательной железой (Николаев А.А., 1980). При хроническом простатите уровень спермоспецифического ингибитора трипсина в секрете предстательной железы возрастает, что происходит компенсаторно в ответ на активацию экзогенных и эндогенных протеиназ при хроническом воспалении предстательной железы (Луцкий Д.Л., Николаев А.А., 1999). Уровень церрулоплазмина при хронических простатитах в секрете предстательной железы напротив снижается за счет расхода этого фермента в условиях активации перекисного окисления липидов при воспалании (Серегин С.П., Тарасов Н.И., 2000).

По полученным нами данным при хронических простатитах соотношение между уровнем спермоспецифического ингибитора трипсина и церрулоплазмина в секрете предстательной железы возрастает по сравнению с нормой и достигает 12 и более.

Таким образом, преимущество предлагаемого способа в более высокой диагностической точности при выявлении хронического простатита. При этом высокая специфичность, относительно низкая себестоимость и простота выполнения (что делает предлагаемый способ доступным для широкого практического применения) обеспечивается применением иммунохимического метода определения уровней спермоспецифического ингибитора трипсина и церрулоплазмина с последующим расчетом соотношения между их уровнями.

Положительный эффект предлагаемого способа достигается точностью оценки уровней спермоспецифического ингибитора трипсина и церрулоплазмина в секрете предстательной железы с последующим расчетом соотношения между их уровнями. Это позволяет при соотношении 12 и более диагностировать хронический простатит, а при соотношении менее 12 - исключить хронический простатит. Специфичность предлагаемого способа составляет 90,4%, чувствительность 96,2%, эффективность 95%, прогностическое значение положительного результата 97,4%, прогностическое значение отрицательного результата 86,3%, что превышает аналогичные показатели других способов (таблица).

Предложенный способ был успешно апробирован в урологическом отделении I Александро-Мариинской ОКБ г. Астрахани, ОКВД г. Астрахани и в Астраханском городском ЦПСиР с ноября 2001 года по ноябрь 2002 года на 200 пациентах.

Ниже приводятся результаты апробации.

Пример 1. Пациент И. 1971 года рождения /медицинская карта амбулаторного больного №1016.11.01/. Обратился с жалобами на периодические тянущие боли в промежности. Кожные покровы чистые, губки не изменены, выделения скудные слизистые. Мазок без особенностей, лейкоцитов мало. В секрете предстательной железы лейкоцитов - 7-10 в поле зрения, липоидных телец - умеренно, гонококки отсутствуют, трихомонады отсутствуют. Уровень церрулоплазмина в секрете предстательной железы - 121,5 мкг/мл, что соответствует норме.

Для диагностики хронического простатита проведено определение уровня спермоспецифического ингибирора трипсина в секрете предстательной железы и соотношения между его уровнем и уровнем церрулоплазмина.

Определения содержания спермоспецифического ингибитора трипсина проводили иммунохимическим методом. Принцип метода состоит в том, что внесенные в агаровый гель антиген и антитела при встречной диффузии реагируют друг с другом, образуя визуально определяемый преципитат при оптимальном количественном соотношении.

Нами был использован метод радиальной иммунодиффузии в агаре по Манчини. Метод основан на свободной диффузии антигена в агаре, содержащем антитела. Практически это осуществлялось путем смешивания 1,5% агара при температуре 52°С с поликлональными кроличьими антителами против спермоспецифического ингибитора трипсина человека до конечной концентрации 10% для определения спермоспецифического ингибитора трипсина. На залитых этой смесью пластинках (9×12 см) пробивали лунки (для чего использовался пробойник диаметром 1 мм), в которые вносили исследуемую смесь (секрет предстательной железы, разведенный в 10 раз 0,9% раствором хлорида натрия). Агаровые пластинки инкубировали при комнатной температуре во влажной камере. Через 24 часа образовывались зоны преципитации, площадь которых пропорциональна концентрации антигена. Для повышения точности определения диаметра колец преципитации пластинки после отмывания окрашивали 1% амидочерным. Калибровочные кривые для определения уровня спермоспецифического ингибитора трипсина строили для каждой пластинки отдельно. Для этого при определении спермоспецифического ингибитора трипсина на каждой пластинке проставляли препарат очищенного (чистота препарата ≥96%) спермоспецифического ингибитора трипсина человека в 5 разведениях.

У обследуемого больного уровень спермоспецифического ингибитора трипсина в секрете предстательной железы составил 1717,4 мкг/мл. Отношение спермоспецифический ингибитор трипсина/церрулоплазмин составило 14,1. Так соотношение превысило 12, результат считали положительным, что свидетельствует о наличие хронического простатита.

Дополнительные исследования, включавшие в себя бактериологический посев секрета предстательной железы и ТРУЗИ предстательной железы, позволили подтвердить наличие хронического простатита и назначить адекватную терапию.

Пример 2. Пациент С. 1967 года рождения /медицинская карта амбулаторного больного №1125 12.01/. Обратился с жалобами на слизисто-гнойные выделения из уретры. В анамнезе хронический цистит. Кожные покровы чистые, губки уретры инфильтрированы, гиперемированы, выделения умеренные слизисто-гнойные. Мазок: лейкоциты - до полузакрытия полей зрения, слизи умеренно, трихомонады отсутствуют, гонококки отсутствуют. В секрете предстательной железы лейкоцитов - 9-12 в поле зрения, липоидных телец - умеренно, гонококки отсутствуют, трихомонады отсутствуют. Уровень церрулоплазмина в секрете предстательной железы составил 100,6 мкг/мл (что входит в диапазон значений, характерных для хронического простатита).

Для уточнения диагноза “хронический простатит” проведено определение уровня спермоспецифического ингибитора трипсина в секрете предстательной железы и соотношения между его уровнем и уровнем церрулоплазмина.

Определения содержания спермоспецифического ингибитора трипсина проводили иммунохимическим методом (см. пример 1). Уровень спермоспецифического ингибитора трипсина составил 995,1 мкг/мл. Отношение спермоспецифический ингибитор трипсина/церрулоплазмин составило 9,89. Так как соотношение меньше 12, результат считали отрицательным, что позволяет исключить хронический простатит.

Дополнительные исследования, включавшие в себя бактериологический посев секрета предстательной железы и ТРУЗИ предстательной железы, позволили исключить хронический простатит и назначить соответствующее лечение.

Пример 3. Пациент М. 1973 года рождения /медицинская карта амбулаторного больного №0814.08.02/. Обратился с жалобами на вялую эрекцию. Кожные покровы чистые, губки уретры не изменены. Мазок: лейкоциты - умеренно, слизи мало, трихомонады отсутствуют, гонококки отсутствуют. В секрете предстательной железы лейкоцитов - 1-3 в поле зрения, липоидных телец - единичные в поле зрения, гонококки отсутствуют, трихомонады отсутствуют. Уровень церрулоплазмина в секрете предстательной железы составил 88,3 мкг/мл (что входит в диапазон значений, характерных для хронического простатита).

Для уточнения диагноза проведено определение уровня спермоспецифического ингибитора трипсина в секрете предстательной железы и соотношения между его уровнем и уровнем церрулоплазмина.

Определения содержания спермоспецифического ингибитора трипсина проводили иммунохимическим методом (см. пример 1). Уровень спермоспецифического ингибитора трипсина составил 2156,0 мкг/мл. Отношение спермоспецифический ингибитор трипсина/церрулоплазмин составило 24,4. Так как соотношение превышает 12, результат считали положительным, что позволяет диагностировать хронический простатит.

Дополнительные исследования, включавшие в себя бактериологический посев секрета предстательной железы и ТРУЗИ предстательной железы, позволили верифицировать хронический простатит и назначить соответствующее лечение.

Предлагаемым способом достигается положительный эффект: повышается точность диагностики хронического простатита за счет увеличения специфичности, эффективности и значительного увеличения прогностического значения отрицательного результата. Это позволяет назначить адекватное лечение, повысить его эффективность. Способ более точный по сравнению с прототипом. Специфичность предлагаемого способа составляет 90,4%, чувствительность 96,2%, эффективность 95%, прогностическое значение положительного результата 97,4%, прогностическое значение отрицательного результата 86,3%.

Предлагаемый способ может быть использован в клинической практике для диагностики хронического простатита.

Изобретение относится к области медицины, а именно биохимии, и может быть использовано для диагностики хронического простатита. В секрете предстательной железы определяют соотношение между уровнем спермоспецифического ингибитора трипсина и уровнем церрулоплазмина. При соотношении 12 и больше у пациента диагностируют хронический простатит. Способ позволяет упростить и повысить точность диагностики. 1 табл.

Способ иммунохимической диагностики хронического простатита путем исследования уровня церрулоплазмина в секрете предстательной железы, отличающийся тем, что в секрете предстательной железы определяют соотношение между уровнем спермоспецифического ингибитора трипсина и уровнем церрулоплазмина и при соотношении 12 и больше у пациента диагностируют хронический простатит.