ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ НАРУШЕНИЙ ФУНКЦИИ ГЕПАТОБИЛИАРНОЙ СИСТЕМЫ Российский патент 2003 года по МПК A61K39/395 A61P1/16 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для лечения нарушений функции гепатобилиарной системы различного происхождения.

Из уровня техники известно использование антител для лечения патологических синдромов (SU 1131508 А, А 61 К 39/00, 1984; SU 1730144 А1, С 12 N 7/00, 1992).

Известен способ лечения нарушений функции гепатобилиарной системы путем медикаментозного воздействия на ферментные системы печени и регенерацию клеток печени при повреждении (см. Регистр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств. 2001. М., 2000, с. 1052-1053). При этом вводят лекарственный препарат на основе "эссенциальных" фосфолипидов, что оказывает гепатопротективное действие.

Однако для получения выраженного терапевтического эффекта необходим длительный прием препарата (не менее 3 мес).

Изобретение направлено на создание эффективного средства и способа лечения нарушений функции гепатобилиарной системы различного происхождения; безопасных, не вызывающих формирования толерантности.

Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что лекарственное средство содержит активированную форму моноклональных, поликлональных или естественных антител к холецистокинину в малых или сверхмалых дозах, приготовленную путем многократного последовательного разведения и внешнего воздействия, преимущественно по гомеопатической технологии.

Кроме того, в способе лечения нарушений функции гепатобилиарной системы различного происхождения путем модификации эффектов эндогенного холецистокинина используют активированные формы сверхмалых доз антител к холецистокинину, полученные в результате многократного последовательного разведения и внешнего воздействия.

Предпочтительно использование смеси различных, преимущественно сотенных, гомеопатических разведений указанных антител.

Полученное в соответствии с изобретением лекарственное средство представляет собой новый фармакологический препарат, который модифицирует биологические эффекты эндогенного холецистокинина, в результате чего отчетливо выраженный гепатопротекторный и холеспазмолитический эффект достигается в течение нескольких дней.

Активация (потенцирование) антител к холецистокинину приводит к сохранению в сверхразбавленных растворах или насыщенных ими наполнителях лекарственных средств биологической (фармакологической) активности, проявляющейся модификацией молекулярно-клеточных и системных эффектов эндогенного холецистокинина. При этом в отличие от физиологических и терапевтических (нективированных) доз антител к холецистокинину, подавляющих активность холецистокинина, активированная форма антител к холецистокинину в малых и сверхмалых дозах оказывает воздействие, качественно идентичное (синергическое, однонаправленное) холецистокинину.

Лекарственный препарат приготовляют преимущественно следующим образом.

Методом твердофазного пептидного синтеза получают синтетический полипептид, соответствующий октапептиду холецистокинина (26-33, аминокислотная последовательность Asp Туr Met Gly Trp Met Asp Phe).

Полученный пептид, конъюгированный с метилированным бычьим сывороточным альбумином в качестве носителя, используют в качестве иммуногена при иммунизации кроликов. Моноспецифическую сыворотку к холецистокинину получают иммунизацией кроликов указанным иммуногеном по известной схеме (Вязов О.Л. Лабораторные методы исследования в неинфекционной иммунологии. М.: Медицина, 1968-356 c. ). Забор крови проводят из краевой ушной вены в стерильные пробирки. После ретракции сгустка сыворотку отделяют центрифугированием, прогревают 10 мин при 56^oС для дезактивации комплемента.

Выделенные антитела к холецистокинину последовательно многократно разводят, одновременно подвергая стандартизованному по правилам гомеопатической технологии, до получения малых или сверхмалых доз (не содержащих молекул исходного вещества) (см. Гомеопатические лекарственные средства. Руководство по описанию и изготовлению, В. Швабе, Москва, 1967, с.12-38). При этом производят равномерное уменьшение концентрации путем последовательного разведения 1 объемной части исходной субстанции (антител) в 9 объемных частях (для десятичных разведений D) или в 99 объемных частях (для сотенных разведений С) нейтрального растворителя с многократным вертикальным встряхиванием каждого полученного разведения и использованием преимущественно отдельных емкостей для каждого последующего разведения до получения требуемой дозы (потенции).

Внешнюю обработку в процессе уменьшения концентрации также можно осуществлять ультразвуком, электромагнитным или иным физическим воздействием.

Используют приготовленное таким образом лекарственное средство, преимущественно, в принятых в гомеопатической практике лекарственных формах и разведениях, в виде спиртовых или водных растворов или таблеток (гранул), полученных путем пропитывания до насыщения содержащегося в лекарственной форме наполнителя потенцированным раствором или непосредственным введением последнего в жидкую лекарственную форму.

Пример 1.

При исследовании гепатопротекторных свойств активированной формы антител к холецистокинину (А-Х) при терапевтическом введении крысам с острым СС14-гепатитом острый гепатит у крыс вызывали введением 50% раствора СС14 на оливковом масле в дозе 1,25 мл/кг внутрижелудочно в течение 4 дней. Иммунные кроличьи аффинно очищенные антитела к холецистокинину (смесь гомеопатических разведении С12+С30+С200) (А-Х) вводили по 0,5 мл на крысу внутрижелудочно через 1-2 ч после введения гепатотоксина. Контрольные животные получали вместо препарата активированную дистиллированную воду (С12+С30+С200) в том же объеме и в те же сроки, что и препарат. Крыс забивали декапитацией через сутки после последнего введения А-Х. В каждой экспериментальной и контрольной группе было не менее 5 животных. Биохимически в сыворотке крови определяли содержание билирубина, активность щелочной фосфатазы, аспартат- и аланин-аминотрансферазы (вычисляли коэффициент де Ритиса -АсТ/АлТ), используя стандартные наборы фирмы Лахема (Чехия) и Соrmау. Рассчитывали весовой коэффициент печени (отношение массы органа к массе животного), показатель, определяемый для интегральной оценки наличия гепатотропного влияния ксенобиотиков. Для характеристики антитоксической функции печени и активности микросомальной системы использовали гексеналовый тест. Гексенал вводили внутрибрюшинно в виде 1% раствора в дозе 80 мг/кг. Время сна регистрировали по длительности нахождения животных в боковом положении и отсутствию рефлекса переворачивания.

Кусочки печени фиксировали в жидкости Карнуа, заливали в парафин. Депарафинированные срезы окрашивали гематоксилином-эозином и в хроническом эксперименте по Ван-Гизону на соединительную ткань. На гистологических препаратах подсчитывали количество гепатоцитов в состоянии некроза или апоптоза и фигур митозов на 1000 печеночных клеток. С помощью окулярной сетки Г.Г. Автандилова определяли относительную площадь инфильтрации печеночной паренхимы макрофагами и лейкоцитами и относительную площадь коллагеновых волокон. Для выявления липидов готовили криостатные срезы печени толщиной 10 мкм. Срезы фиксировали 4% кальций-формолом и окрашивали суданом черным В. Степень жировой дистрофии оценивали в баллах.

Результаты исследования показали, что через 10 дней после начала введения СС14 в сыворотке крови крыс имеется тенденция к повышению активности АсТ, АлТ и понижению коэффициента Де Ритиса. Активность щелочной фосфатазы статистически достоверно повышается при сравнении с группой интактных животных. Известно, что печеночные изоформы щелочной фосфатазы выделяются в кровь в повышенных количествах при холестазе, поскольку в этих условиях усиливается их диффузия через синусоидальную мембрану гепатоцитов вследствие затрудненой экскреции в желчь. При введении А-Х на фоне СС14-гепатита наблюдается нормализация активности щелочной фосфатазы. Отмечается также снижение активности АсТ при сравнении с группой "Гепатит+вода" (табл.2).

На гистологических препаратах печени у всех крыс наблюдалась гиперемия, дискомплексация, умеренная жировая дистрофия и некроз отдельных гепатоцитов. В центральных отделах долек и вокруг перипортальных сосудов желчных протоков отмечалось очаговое скопление макрофагов и лимфоцитов. Степень жировой дистрофии и относительная площадь инфильтрации печени у животных, получавших препарат и воду, не отличались. У крыс, получавших А-Х, количество некротизированных гепатоцитов было достоверно меньше, чем у контрольных крыс (табл.3).

Таким образом, активированная форма антител к холецистокинину, приготовленная по гомеопатической технологии, в условиях интоксикации четыреххлористым углеродом обладает гепатозащитным действием. Препарат препарата снижает тяжесть метаболических и морфологических нарушений печени.

Пример 2.

При изучении влияния активированной формы антител к холецистокинину (А-Х) на экспериментальное хроническое поражение печени ССl₄ крысам вводили внутриже-лудочно 50% раствор ССl₄ на оливковом масле в дозе 2 мл/кг в течение 5 недель 2 раза в неделю, моделируя тяжелый токсический хронический гепатит. С 10 дня после начала интоксикации крысы получали моноклональные антитела к холецистокинину (смесь гомеопатических разведении D6+C30+C1000) внутрижелудочно в дозе 0,5 мл на крысу через 1-2 ч после введения гепатотоксина в течение 30 дней. Контрольные животные получали вместо препарата потенцированную по гомеопатической технологии дистиллированную воду (смесь гомеопатических разведении D6+C30+C1000) в том же объеме и в те же сроки. Крыс забивали декапитацией через сутки после последнего введения препарата и воды.

Результаты биохимического исследования показали, что хроническая интоксикация животных четыреххлористым углеродом приводит к резкому увеличению активности щелочной фосфатазы при сравнении с группой интактных животных. Введение А-Х в течение 30 суток приводит к статистически достоверному снижению активности щелочной фосфатазы сыворотки крови в этой группе животных при сравнении с группой "гепатит + вода".

Макроскопически печень у всех крыс, получавших и препарат, и воду, была уплотнена, серо-коричневого цвета с равномерно мелкозернистой поверхностью. На гистологических препаратах паренхима печени представлена мелкими дольками приблизительно равномерной величины, разделенными прослойками соединительной ткани - септами. В септах лимфогистиоцитарная инфильтрация, пролиферация желчных протоков. В дольках нарушено балочное строение, характерна жировая дистрофия гепатоцитов, особенно по периферии, явления холестаза различной степени выраженности. Встречается большое количество фигур митозов и гепатоцитов с гиперплоидными ядрами. Степень жировой дистрофии, митотический индекс и количество некротизированных гепатоцитов у крыс, получавших препарат или воду, не отличались. У крыс, получавших А-Х, относительная площадь коллагеновых волокон была достоверно меньше, чем у контрольных животных (табл. 5).

Таким образом, активированная форма антител к холецистокинину, приготовленная по гомеопатической технологии, в условиях тяжелой хронической интоксикации четыреххлористым углеродом снижает тяжесть метаболических нарушений в печени крыс и задерживает развитие соединительной ткани (цирроза печени).

Пример 3.

Больной Р., 49 лет, длительное время злоупотребляющий алкоголем, обратился к врачу с жалобами на желтушность кожи, тяжесть в правом подреберье, периодические боли в эпигастрии, иррадиирующие в спину, общую слабость, похудание, головные боли, ежедневные носовые кровотечения, чередование запоров с поносами. Объективно: состояние средней тяжести, кожные покровы и видимые слизистые иктеричны, на коже сосудистые звездочки, пальмарная эритема. Печень +3 см от края реберной дуги, край гладкий, плотный. УЗИ: печень увеличена, гиперэхогенна, воротная вена расширена. Поджелудочная железа увеличена, отмечаются очаги с повышенной эхогенностью. В биохимическом анализе крови: снижен общий белок, фибриноген, повышен уровень общего и непрямого билирубина, ферментов Аct, Алт, альфа-амилазы. HBs антиген - отрицательный. Диагноз: хронический алкогольный гепатит, портальный цирроз, хронический панкреатит. Назначено: поликлональные аффинно очищенные кроличьи антитела к холецистокинину (смесь гомеопатических разведении С12+С30+С200) - по 1 таблетке 2 раза в день. Через 7 дней после начала лечения: состояние относительно удовлетворительное, больной отмечает уменьшение болей, улучшение общего тонуса, нормализацию стула, носовых кровотечений не было. В биохимическом анализе крови: нормализация уровня общего белка, снижение уровня билирубина, трансаминаз, альфа-амилазы. Рекомендовано продолжить прием препарата - по 1 таблетке 2 раза в день. При повторной явке через 1 месяц: состояние удовлетворительное, жалоб не предъявляет, прибавил в весе 4 кг. Объективно: легкая субиктеричность слизистых, печень +1 см от края реберной дуги; в биохимическом анализе крови: уровень общего и непрямого билирубина, ферментов Аст, Алт, альфа-амилазы - на верхней границе нормы.

Пример 4.

Больная Т., 56 лет, госпитализирована по поводу обострения хронического некаль-кулезного холецистита, гипермоторной дискинезии желчевыводящих путей с жалобами на приступообразные тупые боли и тяжесть в правом подреберье, тошноту и рвоту желчью, вздутие живота и запоры. Объективно: по данным УЗИ, желчный пузырь и общий желчный проток расширены, печень не изменена, поджелудочная железа увеличена. В биохимическом анализе крови: повышен уровень прямого билирубина, щелочной фосфатазы, желчных кислот, холестерина. Назначено: моноклональные антитела к холецистокинину (смесь гомеопатических разведении С3+С30+С1000) - по 1 таблетке 3 раза в день. На третий день лечения больная отметила уменьшение болевых ощущений, отсутствие тошноты и рвоты, улучшение общего состояния. Через неделю после начала лечения: состояние удовлетворительное, на УЗИ: желчный пузырь, общий желчный проток и поджелудочная железа - нормальных размеров; в биохимическом анализе крови: уровень прямого билирубина, щелочной фосфатазы, желчных кислот, холестерина в пределах нормы. После выписки рекомендован профилактический прием - по 1 таблетке через день.

Пример 5.

Больная Л., 62 лет, госпитализирована по поводу обострения хронического некаль-кулезного холецистита, гипермоторной дискинезии желчевыводящих путей с жалобами на приступообразные тупые боли и тяжесть в правом подреберье, тошноту и рвоту желчью, вздутие живота и запоры. Объективно: по данным УЗИ, желчный пузырь и общий желчный проток расширены, печень не изменена, поджелудочная железа увеличена. В биохимическом анализе крови: повышен уровень прямого билирубина, щелочной фосфатазы, желчных кислот, холестерина. Назначено: естественные антитела к холецистокинину (смесь гомеопатических разведении С12+С200) - по 1 таблетке 3 раза в день. Естественные антитела к холецистокинину были выделены из пула сывороток больных хроническим некалькулезным холециститом. При выделении использован метод аффинной хроматографии (иммуносорбции) на колонках с сорбированным на твердую фазу (сефадекс) холецистокинином (по методу, описанному, например, в кн. Иммунологические методы. Под ред. Г. Фримеля. М.: Медицина, 1987, с.427-432).

На четвертый день лечения больная отметила уменьшение болевых ощущений, отсутствие тошноты и рвоты, улучшение общего состояния. Через неделю после начала лечения: состояние удовлетворительное, на УЗИ: желчный пузырь, общий желчный проток и поджелудочная железа - нормальных размеров; в биохимическом анализе крови: уровень прямого билирубина, щелочной фосфатазы, желчных кислот, холестерина в пределах нормы. После выписки рекомендован профилактический прием - по 1 таблетке через день.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для лечения нарушений функции гепатобилиарной системы различного происхождения. Сущностью изобретения является лекарственное средство, содержащее активированную форму моноклональных, поликлональных или естественных антител к холецистокинину в малых или сверхмалых дозах, приготовленную путем многократного последовательного разведения и внешнего воздействия, преимущественно по гомеопатической технологии; а также способ лечения нарушений функции гепатобилиарной системы путем модификации эффектов эндогенного холецистокинина, состоящий в использовании активированных форм антител к холецистокинину в малых и сверхмалых дозах, полученных в результате многократного последовательного разведения и внешнего воздействия, предпочтительно в смеси различных, преимущественно сотенных, гомеопатических разведений указанных антител. Техническим результатом является создание эффективного, безопасного средства для лечения нарушений функции гепатобилиарной системы, не вызывающего формирования толерантности. 2 с. и 1 з.п. ф-лы, 5 табл.

1. Лекарственное средство для лечения нарушений функции гепатобилиарной системы на основе антител, отличающееся тем, что содержит активированную форму моноклональных, поликлональных или естественных антител к холецистокинину в малых или сверхмалых дозах, приготовленную путем многократного последовательного разведения и внешнего воздействия, преимущественно по гомеопатической технологии. 2. Способ лечения нарушений функции гепатобилиарной системы различного происхождения, отличающийся тем, что осуществляют модификацию эффектов эндогенного холецистокинина путем использования активированных форм антител к холецистокинину в малых и сверхмалых дозах, полученных путем многократного последовательного разведения и внешнего воздействия. 3. Способ лечения по п. 2, отличающийся тем, что используют смеси различных, преимущественно сотенных, гомеопатических разведений антител к холецистокинину.