Текст описания в факсимильном виде (см. чертежи) Т Тн
Изобретение может быть использовано в селекции растений. Нуклеотидные последовательности, кодирующие инсектицидный протеин, вводят в растения. Оптимизация вводимых в растение последовательностей применительно к геному кукурузы позволяет увеличить сопротивляемость растения насекомым более, чем в 100 раз. Использование ткане-предпочтительных и тканеспецифических промоторных последовательностей обеспечивает высокие уровни инсектицидной активности в растениях кукурузы. 6 с. и 22 з.п.ф-лы, 38 ил., 2 табл.
1. Нуклеотидная последовательность, содержащая последовательность, оптимизированную для кукурузы, которая кодирует протеин, способный убивать насекомых, где указанная кодирующая последовательность содержит по меньшей мере 90% последовательности, оптимизированной для кукурузы, выбранной из группы, включающий SEQ ID Nos 2, 3 и 4, или из группы последовательностей, приведенных на фиг.6, 7, 9, 11, 13 и 15. 2. Нуклеотидная последовательность по п.1, где указанная кодирующая последовательность кодирует CryIA(b) протеин и является последовательностью 3, последовательностью 4 или последовательностью, представленной на фиг.7. 3. Нуклеотидная последовательность по п.1, где указанная кодирующая последовательность кодирует CryIA(b) протеин, который термостабилен по сравнению с нативным CryIA(b) протеином, и является последовательностью, выбранной из группы, включающей последовательность, представленную на фиг.9, 11, 13 и 15. 4. Нуклеотидная последовательность по п.1, где указанная кодирующая последовательность содержит последовательность, которая кодирует CryIВ протеин, и представлена на фиг.6. 5. Нуклеотидная последовательность по п.1, дополнительно включающая первый промотор, обеспечивающий направленную экспрессию нуклеотидной последовательности в растительной клетке, операбельно связанный с указанной кодирующей последовательностью. 6. Нуклеотидная последовательность по п.5, где указанный промотор обеспечивает направленную экспрессию связанной с ним кодирующей последовательности в клетке кукурузы. 7. Нуклеотидная последовательность по п.5, где указанный промотор выбирается из группы, включающей индуцибельные промоторы, конститутивные промоторы, промоторы, регулируемые в процессе развития или во времени, ткане-предпочтительные или ткане-специфические промоторы. 8. Нуклеотидная последовательность по п. 5, где указанный промотор обеспечивает направленную специфическую для зеленых тканей экспрессию указанного гена в растительных клетках. 9. Нуклеотидная последовательность по п.5, где указанный промотор выбирают из группы, включающей СаМV 35S промотор, СаМV 19S промотор, промотор РЕР карбоксилазы, промотор, обеспечивающий предпочтительную для сердцевины стебля экспрессию, и промотор, обеспечивающий специфичную для пыльцы экспрессию. 10. Нуклеотидная последовательность по п.8, где указанный промотор является промотором РЕР карбоксилазы. 11. Нуклеотидная последовательность по п.5, где указанный промотор обеспечивает предпочтительную для сердцевины стебля экспрессию и содержит последовательность ДНК, представленную на фиг.24. 12. Нуклеотидная последовательность по п.5, где указанный промотор обеспечивает специфическую для пыльцы экспрессию и содержит последовательность ДНК, представленную на фиг.35. 13. Нуклеотидная последовательность по п.5, дополнительно включающая второй промотор, обеспечивающий направленную экспрессию связанной с ним кодирующей последовательности в растительной клетке, операбельно связанный со второй последовательностью, как описано в любом из пп.5-12. 14. Нуклеотидная последовательность по п.13, где указанная вторая кодирующая последовательность является оптимизированной последовательностью, которая кодирует протеин, убивающий насекомое. 15. Нуклеотидная последовательность по п.14, где указанная вторая последовательность кодирует протеин Bacillus thuringiensis (B.t.). 16. Нуклеотидная последовательность по п.15, где указанная вторая последовательность кодирует CryIA(b) протеин. 17. Нуклеотидная последовательность по п.13, где указанная вторая кодирующая последовательность является маркерным геном. 18. Нуклеотидная последовательность, обеспечивающая направленную предпочтительную для сердцевины стебля экспрессию связанного с ней структурного гена в растении и содержащая последовательность ДНК, представленную на фиг. 24. 19. Нуклеотидная последовательность, обеспечивающая специфическую для пыльцы экспрессию связанного с ней структурного гена в растении и содержащая последовательность ДНК, представленную на фиг.35. 20. Рекомбинантная молекула ДНК, содержащая нуклеотидную последовательность по п.18 или 19, операбельно связанную со структурным геном, кодирующим протеин насекомых. 21. Рекомбинантная молекула ДНК по п.20, где указанный структурный ген представляет собой последовательность, которая кодирует инсектицидный протеин, по любому из пп.1-17. 22. Способ получения оптимизированной для кукурузы нуклеотидной последовательности по любому из пп.1-4, включающий определение аминокислотной последовательности кодируемого указанной нуклеотидной последовательностью инсектицидного протеина и замену нативных кодонов в кодирующей этот протеин последовательности на кодоны, которые наиболее предпочтительны для кукурузы. 23. Способ защиты растений кукурузы по меньшей мере от одного насекомого-вредителя, включающий стабильную трансформацию растения кукурузы по меньшей мере одной нуклеотидной последовательностью по любому из пп.1-17, или рекомбинантной молекулой ДНК по п.20 или 21, где кодирующая последовательность кодирует инсектицидный протеин; за счет чего трансформированное растение кукурузы экспрессирует инсектицидный протеин в количестве, достаточном для защиты растения от насекомых-вредителей. 24. Способ по п.23, где инсектицидные протеины экспрессируются в количестве, достаточном для борьбы с чешуекрылыми или жесткокрылыми насекомыми-вредителями. 25. Способ по п.23, где инсектицидный протеин экспрессируется в количестве, достаточном для борьбы с насекомыми, выбранными из группы, состоящей из мотылька кукурузного, огневки сахарного тростника, совки, бабочки, походных червей, листоедов, проволочника и тлей. 26. Способ по любому из пп.22-25, где указанный инсектицидный протеин является протеином В.t. 27. Способ по 23, где протеин B.t. является CryIА(b) протеином. 28. Способ по п.23, в котором используют ткане-специфический или ткане-предпочтительный промотор.
Приоритет по пунктам:
04.10.1991 по пп.1-3, 5-14,
25.09.1992 по пп.4, 15-28.
