СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПАНКРЕАТИТА Российский патент 2003 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области клинической медицины, а именно к способам исследования или анализа биологических материалов, в частности сока поджелудочной железы (ПЖ).

В настоящее время существуют проблемы надежной диагностики панкреатита (П). Особенно это касается способов, доступных для проведения в медицинских учреждениях 1-4 категорий. Для диагностики П используют комплекс клинических, лабораторных, радиоиммунных и инструментальных методов исследований.

Однако их чувствительность колеблется в пределах 60-80%, а чувствительность определения панкреатоспецифического фермента трипсина в сыворотке крови радиоиммунным методом достигает лишь 40%.

Чувствительность инструментальных методов (ультрасонография, эндоскопическая ультрасонография, компьютерная томография, эндоскопическая ретроградная панкреатохолангиография) составляет 60-80%. При этом большая часть указанных методов недоступна медицинским учреждениям 1-4 категорий в силу того, что для их выполнения требуются уникальные технологии и специалисты.

Применение же поляризационно-оптического метода исследования доступно клинической лаборатории любого уровня оснащенности.

Известен способ диагностики панкреатита с применением поляризационно-оптического метода исследования биожидкостей (Шурыгина Е.П. Автореф. дис. на соискание ученой степени канд. мед. наук. Клиническое использование структурно-оптических параметров биожидкостей для улучшения диагностики и исходов острого панкреатита. Свердловск, 1990). В качестве биожидкости используется сыворотка крови.

Однако сыворотка крови является интегральным биосекретом (т.е. суммированным биосекретом, характеризующим секреторную деятельность всех внутренних органов) и не может отражать с большой точностью истинное состояние ПЖ, поэтому точность диагностики данного способа составила только 78,7%.

Наиболее близким к заявляемому и выбранному за прототип является способ диагностики П, включающий получение дуоденального аспирата (ДА), добавление в него ускорителя кристаллизации, поляризационно-оптическое исследование полученного препарата с последующей диагностикой по виду и размеру образующихся кристаллов (описание к а.с. СССР 1486932, МКИ G 01 N 33/92). В этом способе дуоденальным зондированием получают ДА, основным компонентом которого является желчь и небольшое количество сока ПЖ, в качестве ускорителя кристаллизации используют 25-40%-ный водный раствор сульфата магния. Этот способ дает возможность диагностировать П по наличию массивных (200 мкм и более) двулучепреломляющих кристаллов суммарных липидов на солевой недвулучепреломляющей подложке, растущих от края по направлению к центру препарата или ярких двулучепреломляющих сферолитов (диаметром 50 мкм и более).

Однако прототип имеет недостаточную точность диагностики панкреатита (81,1%). Обусловлено это тем, что в данном способе подвергают анализу препарат, преобладающим компонентом которого является желчь как продукт внешнесекреторной деятельности печени, а доля сока ПЖ, характеризующая ее функциональное состояние, незначительна, что существенно снижает точность диагностики П.

Технический результат, получаемый при осуществлении заявляемого способа, состоит в повышении точности диагностики П. Этот результат достигается тем, что в способе диагностики П, включающем получение ДА, добавление в него ускорителя кристаллизации, поляризационно-оптическое исследование полученного препарата с последующей диагностикой по виду и размеру образующихся кристаллов, авторы предлагают при получении ДА воздействовать на поджелудочную железу стимуляторами панкреатической секреции, в качестве ускорителя кристаллизации использовать 1-10%-ный водный раствор гидрокарбоната натрия и при наличии в препарате одного или нескольких следующих морфотипов: разветвленных дендритов с пластинчатыми ветвями, сферолитов (диаметром 200 мкм и более), сферодендритов (диаметром 200 мкм и более) и их переходных форм диагностировать П.

Авторами установлена связь между наличием П и характером образующихся кристаллов.

В качестве объекта исследования используют ДА, содержащий большое количество сока поджелудочной железы, обогащенного основными пищеварительными ферментами (амилазой, липазой, трипсином). Данный ДА получают дуоденальным зондированием путем воздействия на ПЖ стимуляторами панкреатической секреции: 30 мл 0,5%-ного водного раствора соляной кислоты, вводимого интрадуоденально, и 1 мл 0,05%-ного водного раствора прозерина, вводимого подкожно (стимуляторы соответственно гидрокинетической и экболической функций ПЖ). [Справочник по функциональной диагностике / Под ред. И.А. Кассирского. - М.: Медицина, 1970, с. 615; Богер М.М. Методы исследования поджелудочной железы. - Новосибирск: Наука, 1982].

Примененный в прототипе в качестве ускорителя кристаллизации 25-40%-ный водный раствор сульфата магния при использовании его в препарате, полученном из ДА, и богатом соком ПЖ, в заявляемом способе не вызывает формирования различимых форм кристаллов у здоровых лиц и лиц больных П, т.е. не позволяет диагностировать П.

Поэтому в качестве ускорителя кристаллизации авторы предлагают использовать 1-10%-ный водный раствор гидрокарбоната натрия, естественный компонент сока ПЖ, введение которого в оптимальных количествах вызывает четко выраженный эффект декорирования, таким образом способствуя наглядности формирования типичных морфологических структур. Авторами установлено, что при концентрации водного раствора гидрокарбоната натрия меньше 1% наблюдаются слабые процессы кристаллизации без образования в препарате четких кристаллических структур как у здоровых лиц, так и у больных П. При концентрации более 10% происходит быстрый рост кристаллов, недающий возможности различить формы и размеры кристаллических структур как у здоровых лиц, так и у больных П.

Авторами исследованы морфотипы кристаллов в препаратах группы здоровых лиц и группы больных П. Было обнаружено, что наиболее часто у больных П встречаются разветвленные дендриты с пластинчатыми ветвями, представляющие собой анизотропные фрактальные структуры. Кроме того, авторы выявили у больных П реже встречающиеся морфотипы:
- крупные сферолиты (диаметром 200 мкм и более) - радиально-лучистые, ярко светящиеся белково-липидные образования;
- крупные сферодендриты (диаметром 200 мкм и более) - фрактальные кристаллические образования с выраженными преимущественными направлениями, аналогичными первым ветвям дендритов, а по морфологии - вторичным ветвям, напоминающие незавершенные сферолиты;
- переходные формы - белково-липидные комплексы измененной морфологии, обусловленной гетерогенностью кристаллизационной среды. Выше перечисленные морфотипы кристаллов, обнаруженные у больных П, авторы считают патологическими. Таким образом, авторами получен ранее неизвестный качественный критерий диагностики П, который позволяет повысить точность диагностики за счет увеличения чувствительности способа.

Способ осуществляли следующим образом. Обследованы 2 группы людей: группа здоровых лиц (18 чел.) и группа лиц, страдающих П (30 чел.).

По стандартной методике у обследуемых людей производили отбор проб ДА. Из полученного ДА брали 5 мкл и переносили на предметное стекло. В указанный объем вносили 1-2 мкл 6%-ного водного раствора гидрокарбоната натрия и закрывали покровным стеклом. Препарат просматривали в поляризованном свете на оптическом микроскопе "Полам" при увеличении Х 130 через 24 часа после выдержки в темном, защищенном от пыли месте при комнатной температуре.

Результаты исследований препаратов, приготовленных из ДА, приведены в таблице.

У лиц, страдающих П, вышеописанные патологические морфологические образования выявлены у 27 человек из 30.

Чувствительность заявляемого способа составила 90% (частота положительного результата у больных П), а специфичность - 88,9% (частота отрицательного результата у здоровых лиц).

Пример 1. Больная Е., 60 лет.

При поступлении в стационар состояние средней тяжести. Выражены симптомы интоксикации. Живот умеренно вздут. Зона проекции ПЖ резко болезненна, особенно в 1 и 3 позиции по Гротту, положительные симптомы Кача, Федорова. В общем анализе крови СОЭ 18 мм/час. В копрограмме большое количество нейтрального жира и кристаллов жирных кислот. Содержание трипсина в сыворотке крови достигает 6,6 нмоль/мл• мин. Ультрасонография брюшной полости: размеры ПЖ 12-8-11 мм, эхогенность ее повышена. Предварительный диагноз: хронический панкреатит. Поляризационно-оптическое исследование ДА: через 24 часа в препарате видны разветвленные дендриты с пластинчатыми ветвями, пересекающие 1-3 поля зрения подряд, сферолиты диаметром 320 мкм, сферодендриты диаметром 210-230 мкм, а также переходные формы. Присутствуют все патологические морфотипы.

На основании приведенных данных установлен диагноз: хронический панкреатит.

Пример 2. Больная Н., 38 лет.

При поступлении в стационар состояние средней тяжести. В связи с выраженностью болевых и диспептических проявлений язык обложен, влажный. Живот весьма болезненный в эпигастральной области, правом и левом подреберьях, особо выражена болезненность в зоне проекции ПЖ при пальпации по Гротту и Бояновичу. В общем анализе крови СОЭ 17 мм/час. В копрограмме большое количество нейтрального жира, содержание трипсина в сыворотке крови составляет 8,3 нмоль/мл•мин. Размеры ПЖ по данным ультрасонографии 19-7-15 мм, эхогенность ее повышена. Предварительный диагноз: хронический панкреатит. Поляризационно-оптическое исследование ДА: через 24 часа в препарате наблюдаются разветвленные дендриты с пластинчатыми ветвями, пересекающие 1-3 поля зрения, а также переходные формы. Присутствуют 2 из 4 патологических морфотипов.

На основании приведенных данных установлен диагноз: хронический панкреатит.

Таким образом, авторы предложили новый способ диагностики П с использованием морфологического критерия при просмотре препаратов из ДА, богатых соком ПЖ, в поляризованном свете. При этом повышена чувствительность и специфичность способа, что повышает точность диагностики П.

Изобретение относится к медицине, а именно к способам исследования биологических материалов. Способ заключается в следующем: воздействуют на поджелудочную железу стимуляторами панкреатической секреции, получают дуоденальный аспират, добавляют в него ускоритель кристаллизации, в качестве которого используют 1-10%-ный водный раствор гидрокарбоната натрия, и подвергают препарат поляризационно-оптическому исследованию. При наличии в препарате одного или нескольких следующих морфотипов: разветвленных дендритов с пластинчатыми ветвями, сферолитов диаметром 200 мкм и более, сферодендритов диаметром 200 мкм и более и их переходных форм диагностируют панкреатит. Способ позволяет повысить точность диагностики. 1 табл.

Способ диагностики панкреатита, включающий получение дуоденального аспирата, добавление в него ускорителя кристаллизации, поляризационно-оптическое исследование полученного препарата с последующей диагностикой по виду и размеру образующихся кристаллов, отличающийся тем, что при получении дуоденального аспирата на поджелудочную железу воздействуют стимуляторами панкреатической секреции, в качестве ускорителя кристаллизации используют 1-10% водный раствор гидрокарбоната натрия и при наличии в препарате одного или нескольких следующих морфотипов: разветвленных дендритов с пластинчатыми ветвями, сферолитов диаметром 200 мкм и более, сферодендритов диаметром 200 мкм и более и их переходных форм диагностируют панкреатит.