СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ХОЛАНГИТА Российский патент 2003 года по МПК G01N33/49 

Изобретение относится к медицине, в частности к физическому анализу жидких биологических материалов, и может быть использовано в качестве дополнительного теста для экспресс-диагностики заболевания желчевыводящих путей, осложненных холангитом.

Трудности диагностики заболевания желчевыводящих путей, осложненных холангитом, связаны с отсутствием ярких клинических проявлений в начале заболевания. Как правило, отсутствуют гистологические подтверждения воспаления в ткани холедоха, посевы желчи из протоков не всегда бывают адекватными присутствующей флоре в протоках. Остаются вопросы сроков дренирования желчных путей, длительности консервативной терапии в послеоперационном периоде, а также критерии оценки эффективности проводимого лечения больных с заболеваниями желчевыводящих путей, осложненных острым холангитом. В этой ситуации особое значение приобретает разработка новых высокочувствительных методов ранней диагностики холангита, что позволило бы их использование в мониторинге динамики воспалительного процесса в желчевыводящих путях и для оценки эффективности проводимого лечения.

Известен способ диагностики заболевания желчевыводящих путей, заключающийся в микроскопическом исследовании центрифугатов желчи, полученной дуоденальным зондированием, с использованием поляризационно-оптической микроскопии, в частности, для диагностики калькулезного холецистита (В.М.Лисиенко и др. "Экстракорпоральная жидкокристаллическая диагностика холецистита", Свердловск: Издательство Уральского университета, 1989, с. 6). По наличию скоплений кристаллов холестерина (холестериновых микролитов), судят о наличии калькулезного холецистита или предрасположенности к нему.

Наиболее близким к предлагаемому является способ диагностики заболеваний, сопутствующих заболеванию желчевыводящих путей, заключающийся в поляризационно-оптичсском исследовании желчи больного. Способ включает морфологическое исследование желчи больных холециститом и желчно-каменной болезнью, путем изучения текстуры ее жидкокристаллической структуры в динамике в поляризованном свете. У больных этой категории каких-либо особенностей структурообразования в желчи, характерных для холангита, не выявлено (В.М.Лисиенко и др. "Экстракорпоральная жидкокристаллическая диагностика холецистита", Свердловск: Издательство Уральского университета, 1989, с. 52-66, с. 62).

Недостаток известных способов прежде всего заключается в том, что они не позволяют диагностировать холангит, что сужает их диагностические возможности. В наиболее близком к предлагаемому способе отсутствие особенностей структурообразования в желчи при холангите можно объяснить тем, что желчь для исследований брали у больных холециститом и желчно-каменной болезнью. Поскольку желчь характеризует только состояние органов, непосредственно связанных с ее выработкой, и не несет в себе информацию о состоянии всего организма в целом, а желчь для исследований брали у больных холециститом и желчно-каменной болезнью, это снижает чувствительность способа, сужает его диагностические возможности и не позволяет диагностировать холангит, как сопутствующее заболевание. Кроме того, недостаток известных способов заключается в сложности получения исследуемого препарата, поскольку процедура взятия желчи у больного является сложной, неприятна для больного и сопряжена с определенными трудностями как для медперсонала, так и для самого больного. Это усложняет известные способы.

Таким образом, выявленные в результате патентного поиска известные способы диагностики заболевания желчевыводящих путей, аналог и прототип заявленного способа, при осуществлении не позволяют достичь технического результата, заключающегося в возможности диагностики холангита, в повышении чувствительности способа, расширении диагностических возможностей, в упрощении способа.

Предлагаемое изобретение решает задачу создания способа диагностики заболевания желчевыводящих путей, осуществление которого обеспечивает достижение технического результата, заключающегося в возможности диагностики холангита, в повышении чувствительности способа, расширении диагностических возможностей, в упрощении способа.

Суть изобретения заключается в том, что в способе диагностики заболевания желчевыводящих путей, включающий морфологическое исследование жидкой биологической среды организма больного путем изучения текстуры ее жидкокристаллической структуры в динамике в поляризованном свете, анализ результатов и констатацию факта отсутствия или наличия заболевания, в качестве жидкой биологической среды организма используют сыворотку крови, для чего на поверхность предметного стекла наносят каплю исследуемой сыворотки крови и накрывают покровным стеклом, затем, поддерживая условия окружающей среды постоянными, препарат выдерживают до появления на предметном стекле выраженных типичных текстур, после чего производят поляризационно-оптическое исследование препарата путем осмотра всей поверхности образца, если на предметном стекле наблюдают в большом количестве жидкокристаллические линии, единичные игольчатые и пластинчатые кристаллы, конфокальные домены, недвулучепреломляющие дендриты, то диагностируют отсутствие холангита, если на предметном стекле наблюдают, по сравнению с нормой, значительное увеличение игольчатых и пластинчатых кристаллов, конфокальных доменов, недвулучепреломляющих дендритов, а также появление скелетных и тонких дендритов, сферолитов и сферодендритов малых, средних и крупных форм, липидных капель и атипичных форм, то диагностируют холангит.

Технический результат достигается следующим образом. Многие жидкие биологические среды организма человека способны кристаллизоваться, а в определенных условиях - переходить в промежуточное жидкокристаллическое состояние. В жидкокристаллическом состоянии среда, сохраняя текучесть, проявляет в поляризованном свете специфические картины - текстуры. Известно, что биологические жидкости представляют собой многокомпонентные системы, в большинстве своем проявляющие структурную гетерогенность (неоднородность) и обладающие высокой чувствительностью к составу и форме существования компонентов. Состав биологических жидкостей адекватно отражает физиологическое состояние организма человека, а также функциональную полноценность его отдельных органов и систем. Например, регуляторные механизмы и фармакологические факторы влияют на количественное содержание белка и солей кальция в моче, на соотношение насыщенных и ненасыщенных липидов в сыворотке крови, характер агрегирования липидного комплекса желчи, количество фосфолипидов, производных холестерина и его эфиров, проявляющих жидкокристаллические свойства. Эти изменения на тонком молекулярном уровне проявляются, в частности, в особенностях агрегирования биологических жидкостей на уровне микроструктур. Морфология текстур жидкокристаллической фазы коррелирует с состоянием организма и изменяется при наличии патологии, что и позволяет наблюдать это в динамике в поляризованном свете при оптических обычных увеличениях (В.М.Лисиенко и др. "Экстракорпоральная жидкокристаллическая диагностика холецистита", Свердловск: Издательство Уральского университета, 1989, с. 9-23; авт. св. СССР 1209168, А 61 В 10/00, 07.02.86; aвт. cв. СССР 1486932, G 01 N 33/92, 15.06.89; авт. св. СССР 1723527, G 01 N 33/92, 30.03.92).

В предлагаемом способе для диагностики заболевания желчевыводящих путей используют морфологическое исследование биологической среды, а именно: сыворотки крови. Биологическую жидкость - сыворотку крови получают из плазмы. В своем составе она содержит все основные части плазмы, кроме фибриногена: белок, различные соли, углеводы, липиды, промежуточные продукты обмена веществ, гармоны, ферменты, компоненты свертывающей системы, витамины, пигменты, растворенные газы и другое (Краткая медицинская энциклопедия, главный редактор Б.П.Петровский, 2-е издание, т. 2. Криз гипертонический - Риккетсии, М. : Советская энциклопедия, 1989, с. 18). При этом все составляющие сыворотки крови находятся в таких же пропорциях, в каких они существуют в организме обследуемого пациента. Таким образом, состав сыворотки крови адекватно отражает функциональное состояние организма в целом, отражает степень интоксикации организма и своим составом иллюстрирует системный воспалительный ответ на инфекцию, что и обеспечивает в способе возможность диагностики холангита.

Благодаря тому, что сыворотка крови способна кристаллизоваться, проходя промежуточное жидкокристаллическое состояние, обеспечивается возможность морфологического исследования путем изучения текстуры ее жидкокристаллической структуры в динамике в поляризационном свете: поляризационно-оптическое исследование препарата путем осмотра всей поверхности образца. При этом, поскольку в сыворотке крови при наличии воспалительного процесса в организме изменяется количественное содержание практически каждой составляющей, то даже незначительные изменения в составляющих сыворотки крови вызывают заметные изменения текстур ее жидкокристаллической структуры, что повышает чувствительность способа и позволяет фиксировать начальную стадию заболевания, расширяя диагностические возможности.

В предлагаемом способе для исследований готовят препарат из сыворотки крови, для чего каплю сыворотки крови наносят на предметное стекло. Благодаря тому, что препарат накрывают покровным стеклом, исключается возможность его химического взаимодействия с окружающей средой, что обеспечивает достоверность результатов исследований, а следовательно, и возможность самой диагностики. Сохранение постоянных условий окружающей среды при выдержке препарата также обеспечивает достоверность результатов исследований. Образование выраженных типичных базовых текстур на предметном стекле означает окончание процесса агрегирования. Это делает нецелесообразным дальнейшее увеличение времени выдержки препарата и определяет время начала исследования текстуры. При этом, если в результате исследования на предметном стекле наблюдают в большом количестве жидкокристаллические линии, единичные игольчатые и пластинчатые кристаллы, конфокальные домены, недвулучепреломляющие дендриты, то диагностируют отсутствие холангита, если на предметном стекле наблюдают значительное увеличение, по сравнению с нормой, игольчатых и пластинчатых кристаллов, конфокальных доменов, недвулучепреломляющих дендритов, а также появление скелетных и тонких дендритов, сферолитов и сферодендритов малых, средних и крупных форм, липидных капель и атипичных форм, то диагностируют холангит.

Поскольку состав сыворотки крови отражает функциональное состояние организма в целом, то можно утверждать, что текстура исследуемой сыворотки крови отражает информацию о всех видах метаболизма в организме данного больного, в том числе и обуславливающих холангит, что обеспечивает возможность диагностики данного заболевания и достоверность диагностики предлагаемым способом. Присутствие в препаратах сыворотки, как в норме, так и при наличии заболевания, в большом количестве жидкокристаллических линий говорит о постоянном присутствии в желчи определенных составляющих, наиболее для нее характерных. Наличие жидкокристаллических линий в текстурах может являться своеобразным тестом для правильного выполнения исследований при констатации факта появления на предметном стекле выраженных типичных текстур, что повышает достоверность диагностики. При этом значительное количественное увеличение игольчатых и пластинчатых кристаллов, конфокальных доменов, недвулучепреломляющих дендритов указывает на количественное увеличение в исследуемой сыворотке крови, по сравнению с нормой, соответствующих им составляющих. Появление в больших количествах новых текстур, отсутствующих в норме: скелетных и тонких дендритов, сферолитов и сферодендритов малых, средних и крупных форм, липидных капель и атипичных форм, указывает на наличие в препарате составляющих, отсутствующих в препарате сыворотки крови, соответствующей норме. Появление новых текстур, указывает на изменение качественного состава сыворотки крови и появление в ней составляющих, не характерных для сыворотки крови в норме. Отсюда следует, что при патологии каждая текстура соответствует нарушениям метаболизма разного вида, что повышает чувствительность способа и позволяет использовать его для диагностики холангита. При этом, чем больше заметно количественное изменение кристаллов в текстурах, тем в большей степени качественный и количественный состав исследуемой сыворотки крови отличается от нормы, тем острее форма заболевания. Отсюда следует, что предлагаемый способ диагностики холангита позволяет не только диагностировать наличие заболевания на любой стадии, но и оценить его тяжесть, что расширяет его диагностические возможности.

Кроме того, адекватность изменения характера текстуры при изменении качественного или количественного состава сыворотки крови или при их совокупном изменении, в сочетании с повышенной чувствительностью способа позволяют диагностировать заболевание на ранней стадии и, кроме того, обеспечивают возможность использования заявленного способа для экспресс оценки эффективности терапии, используемой при лечении холангита.

Поскольку в способе в качестве критерия оценки используют характер текстур (кристаллическую картину), который соответствует вполне определенному составу исследуемой биологической жидкости, предлагаемый способ при диагностировании автоматически принимает во внимание физиологический коридор, который позволяет учесть индивидуальные особенности организма конкретного пациента, что повышает информативность и достоверность способа, расширяет его диагностические возможности.

Упрощение способа достигается благодаря использованию в качестве исследуемой биологической жидкости сыворотки крови, поскольку проще операция отбора крови у больного, по сравнению с дуоденальным зондированием. Кроме того, предлагаемый способ позволяет сократить время для получения окончательных результатов исследований, поскольку последние являются результатом визуального обзора препарата и не требуют дополнительной обработки результатов исследований.

Сравнительная простота выполнения способа обеспечивает его достоверность, так как уменьшает вероятность ошибки.

Таким образом, заявленный способ диагностики заболевания желчевыводящий путей при осуществлении обеспечивает достижение технического результата, заключающегося в возможности диагностики холангита, в повышении чувствительности способа, расширении диагностических возможностей, за счет возможности диагностики холангита на ранней стадии, в упрощении способа.

Кроме того, способ обеспечивает достижение дополнительного, по сравнению с прототипом, технического результата: возможность использования способа для экспресс оценки эффективности терапии при лечении холангита.

Способ диагностики заболевания желчевыводящих путей осуществляют следующим образом. Проводят морфологические исследования сыворотки крови путем изучения текстуры ее жидкокристаллической структуры в динамике в поляризационном свете. Для этого на поверхность предметного стекла наносят каплю сыворотки крови и накрывают покровным стеклом. Затем, поддерживая условия окружающей среды постоянными, препарат выдерживают, до появления на предметном стекле выраженных типичных текстур. После чего производят поляризационно-оптическое исследование препарата путем осмотра всей поверхности образца. Результаты осмотра анализируют. При этом, если на предметном стекле наблюдают в большом количестве жидкокристаллические линии, единичные игольчатые и пластинчатые кристаллы, конфокальные домены, недвулучепреломляющие дендриты, то диагностируют отсутствие холангита, если на предметном стекле наблюдают значительное увеличение, по сравнению с нормой игольчатых и пластинчатых кристаллов, конфокальных доменов, недвулучепреломляющих дендритов, а также появление скелетных и тонких дендритов, сферолитов и сферодендритов малых, средних и крупных форм, липидных капель и атипичных форм, то диагностируют холангит.

Во всех примерах выполнения способа для приготовления препаратов из сыворотки брали предварительно прошедшие обработку предметные стекла. На стекло наносили каплю сыворотки крови и выдерживали на воздухе в течение 1 минуты. Затем накрывали покровным стеклом. Препарат выдерживали, поддерживая постоянными условия окружающей среды, до появления на поверхности предметных стекол типичных текстур. Обращали внимание на качество обработки предметного стекла, чтобы избежать артефактов при исследованиях. Формирование текстур происходит за счет испарения с краев препарата и, в первую очередь, проявляется в периферийных областях, поэтому просмотр начинали с периферийных областей. После чего просматривали центральные области. Просмотр производили в поляризованном свете при скрещенных николях при увеличении •150...•250. Осмотр всей поверхности образца производили продольно поперечным сканированием с шагом, равным величине поля зрения. Все обнаруженные особенности фиксировали. Для исследований могут быть использованы микроскопы серий БИОЛАМ (с поляризованными фильтрами), ПОЛАМ, МБИ.

Пример 1. Пациент Р., возраст 61 год, предварительный диагноз: холидохолитиаз, осложненный гнойным холангитом, механической желтухой, печеночной недостаточностью первой степени по Э.И.Гальперину.

Для приготовления сыворотки у пациента был произведен забор крови из вены. Каплю сыворотки наносили на предметное стекло и покрывали покровным стеклом. После появления на предметном стекле выраженных типичных текстур производили поляризационно-оптическое исследование препарата путем осмотра всей поверхности образца. На предметном стекле наблюдали в сочетании в большом количестве жидкокристаллические линии, игольчатые и пластинчатые кристаллы, конфокальные домены, недвулучепреломляющие дендриты, а также появление новых форм, нехарактерных для нормы: скелетных и тонких дендритов, сферолитов и сферодендритов малых, средних и крупных форм, липидных капель и атипичных форм, что позволило диагностировать острый холангит.

Результаты диагностики были подтверждены общеклиническими, лабораторными исследованиями и проведенной операцией.

Пример 2. Пациент М., возраст 56 лет. Предварительный диагноз: острый калькулезный холецистит в рыхлом инфильтрате, механическая желтуха.

Для приготовления сыворотки у пациента был произведен забор крови из вены. Каплю сыворотки наносили на предметное стекло и покрывали покровным стеклом. После появления на предметном стекле выраженных типичных текстур производили поляризационно-оптическое исследование препарата путем осмотра всей поверхности образца. На предметном стекле наблюдали в сочетании в большом количестве жидкокристаллические линии и единичные игольчатые и пластинчатые кристаллы, конфокальные домены, недвулучепреломляющие дендриты, что позволило диагностировать отсутствие холангита.

Результаты диагностики были подтверждены общеклиническими, лабораторными исследованиями и проведенной операцией.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспресс-диагностике заболевания желчевыводящих путей. Способ заключается в том, что на поверхность предметного стекла наносят каплю исследуемой сыворотки крови и накрывают покровным стеклом, затем, поддерживая условия окружающей среды постоянными, препарат выдерживают до появления на предметном стекле выраженных типичных текстур, после чего производят поляризационно-оптическое исследование препарата путем осмотра всей поверхности образца. Если на предметном стекле наблюдают в большом количестве жидкокристаллические линии, единичные игольчатые и пластинчатые кристаллы, конфокальные домены, недвулучепреломляющие дендриты, то диагностируют отсутствие холангита, если на предметном стекле наблюдают по сравнению с нормой значительное увеличение игольчатых и пластинчатых кристаллов, конфокальных доменов, недвулучепреломляющих дендритов, а также появление скелетных и тонких дендритов, сферолитов и сферодендритов малых, средних и крупных форм, липидных капель и атипичных форм, то диагностируют холангит. Изобретение позволяет повысить чувствительность и упростить проведение способа.

Способ диагностики холангита, включающий исследование биологической жидкости, отличающийся тем, что в качестве биологической жидкости используют сыворотку крови, для чего на поверхность предметного стекла наносят каплю исследуемой сыворотки крови и накрывают покровным стеклом, затем, поддерживая условия окружающей среды постоянными, препарат выдерживают до появления на предметном стекле выраженных типичных текстур, после чего производят поляризационно-оптическое исследование препарата путем осмотра всей поверхности образца, если на предметном стекле наблюдают в большом количестве жидкокристаллические линии, единичные игольчатые и пластинчатые кристаллы, конфокальные домены, недвулучепреломляющие дендриты, то диагностируют отсутствие холангита, если на предметном стекле наблюдают, по сравнению с нормой, значительное увеличение игольчатых и пластинчатых кристаллов, конфокальных доменов, недвулучепреломляющих дендритов, а также появление скелетных и тонких дендритов, сферолитов и сферодендритов малых, средних и крупных форм, липидных капель и атипичных форм, то диагностируют холангит.