СПОСОБ ОЦЕНКИ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ АТОПИЧЕСКОГО ДЕРМАТИТА У ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА Российский патент 2003 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии и дерматологии.

Лечение и прогноз атопического дерматита зависит от оценки тяжести заболевания. В настоящее время сделаны попытки выявить биохимические параметры, позволяющие предсказать развитие атопического дерматита и тяжесть его течения у детей с генетической предрасположенностью. Однако пока еще эти лабораторные показатели не нашли широкого практического применения. Более того, неоднозначна предсказательная ценность таких лабораторные критериев как уровень сывороточного Ig E и количество эозинофилов (Гомберг М.А., Соловьев А.М., Аковбян В.А. Атопический дерматит. //Русский медицинский журнал, 1998, 20, т.6, с.1332-1333).

За прототип авторами взят патент 2140082 "Способ диагностики формы аллергодерматоза у детей раннего возраста" авторов Сучковой Г.Д., Шиляева P.P. , Чемоданова В. В. , Баклушина А. В., Фадеевой О.Ю., БИ 29, от 20.10.99. Предложенный способ повышает точность и сокращает время диагностики формы аллергодерматоза в момент сочетанных проявлений аллергодерматозов в виде экземы и нейродермита у детей до трех лет с помощью определения спонтанной адгезии нейтрофильных клеток, выделенных из 0,8-1 мл венозной крови пациента на двухступенчатом градиенте плотности фиколл-верографина. При этом оценивалась способность нейтрофилов к прилипанию на пластиковой поверхности иммунологических планшетов с v-образным дном при двухчасовой инкубации при температуре 37^oС. Показатель спонтанной адгезии (САД) рассчитывали по формуле
САД= К_к - К_неадг/К_к•100%,
где К_к - количество нейтрофилов в 5 больших квадратах камеры Горяева до инкубации,
К_неадг - количество нейтрофилов в 5 больших квадратах камеры Горяева после инкубации.

Если показатели спонтанной адгезии нейтрофилов находились на уровне 53,75% ± 3,48%, то у ребенка имело место преобладание нейродермита в случае трансформации экземы в нейродермит, тогда как снижение показателя спонтанной адгезии нейтрофилов до 29,18%±1,83% свидетельствовало о преобладании экземы. В результате клинических наблюдений и исследований авторами обнаружена корреляционная связь между тяжестью атопического дерматита и показателем спонтанной адгезии нейтрофилов и разработан способ диагностики клинической формы аллергодерматоза с помощью простой доступной методики определения спонтанной адгезии нейтрофилов, выполняемой в короткий промежуток времени.

Технический результат предлагаемого авторами способа заключается в быстрой оценке степени тяжести в короткий период времени у детей раннего возраста с атопическим дерматитом за счет измерения показателя спонтанной адгезии нейтрофилов.

Диагностика осуществляется следующим образом.

Из 0,8-1 мл венозной крови пациента после внесения ее в раствор, состоящий из 2,7% раствора трилона Б и 6% Декарта (раствор полиглюкина) в соотношении 1:2 (0,5 мл раствора трилона Б и 1 мл полиглюкина), выделялись лейкоцитарные клетки.

Полученная смесь после перемешивания отстаивалась при комнатной температуре в течении 30 мин. Плазма, обогащенная лейкоцитами, собиралась пастеровской пипеткой и наслаивалась на двухступенчатый градиент плотности фиколл-верографина. Центрифугированием при 1000 об/мин в течении 30 мин получали две субпопуляции лейкоцитов (нейтрофилы и мононуклеары), которые дважды отмывали в среде Хенкса (рН 7,2-7,4).

Определение жизнеспособности ядросодержащих клеток и их подсчет проводили с помощью витальной окраски 0,1%-ным раствором трипанового синего, приготовленного на фосфатном буфере (рН 7,2-7,4). Подсчет жизнеспособных клеток проводили в камере Горяева. Число жизнеспособных клеток в суспензиях составляло 90-95%.

По 0,1 мл взвеси нейтрофилов и 0,1 мл раствора Хенкса (рН 7,4) смешивали, после чего 0,1 мл взвеси помещали в камеру Горяева и подсчитывали количество клеток в 5 больших квадратах, а другую часть смеси, состоящую из 0,05 мл клеток и 0,05 мл раствора Хенкса (рН 7,4), раскапывали в планшеты для иммунологических исследований с v-образным дном и помещали в термостат на 2 ч при 37^oС. После инкубации планшет тщательно встряхивали, перемешивали и переносили содержимое в счетную камеру Горяева, где в 5 больших квадратах подсчитывалось число клеток, неадгезировавшихся при инкубировании.

Показатель спонтанной адгезии (САД) (%) рассчитывали по формуле
САД=К_к - К_неадг/К_к•100%,
где К_к - количество нейтрофилов в 5 больших квадратах камеры Горяева до инкубации,
К_неадг - количество нейтрофилов в 5 больших квадратах камеры Горяева после инкубации.

Авторами обследован 51 ребенок раннего возраста с различной степенью тяжести атопического дерматита. При этом легкое течение атопического дерматита наблюдалось у 13 детей, у 17 была диагностирована средняя тяжесть дерматоза, а у 21 - тяжелая. Клиническая картина оценивалась по универсальному статусу формализованной истории болезни 53 Ленинградского ОТКЗ МЗ РСФСР (1982), где высоко информативными оказались, прежде всего, интенсивность кожных высыпаний, распространенность процесса, размеры лимфатических узлов, частота обострении в год, продолжительность ремиссии. Проведено сопоставление данных клинического осмотра с данными предложенного способа, а также наблюдение за течением дерматоза в динамике. Оценка тяжести проводилась согласно предложенным клиническим критериям Ревякиной В.А., Балаболкиным И.И., Намазовой Л. С. и др. Ранняя диагностика, особенности клинического течения и принципы терапии атопического дерматита у детей. - Москва, 1998, с.11-12.

В ходе исследований (см. таблицу) авторами были установлены следующие показатели спонтанной адгезии нейтрофилов. В первой группе детей показатели спонтанной адгезии нейтрофилов были равны 32,54%±4,89%, что соответствовало легкой форме атопического дерматита (р<0,002), во второй группе детей показатели спонтанной адгезии нейтрофилов были равны 44,28%±3,45% (р<0,035), что соответствовало средней степени тяжести, у третьей группы детей показатели спонтанной адгезии нейтрофилов были равны 51,81%±2,02%.

Таким образом, показатели спонтанной адгезии нейтрофилов имеют достаточную значимость в оценке тяжести атопического дерматита у детей раннего возраста, что позволяет назначать патогенетическую терапию в более ранние сроки.

Клинические примеры
Пример 1. Больной Г. 1 г. 5 месяцев. Ребенок от 3 беременности, протекавшей с угрозой прерывания, вторых преждевременных родов. При рождении крик сразу. Вес при рождении 2650 г, длина 52 см. На искусственном вскармливании с 4 месяцев. Психомоторное развитие по возрасту. Фоновая патология: энцефалопатия, симптом двигательных нарушений. У дяди ребенка по линии матери - экзема кистей. Из перенесенных заболеваний: ОРВИ 5 раз, острый бронхит. Первые высыпания с 1 месяца на коже щек в виде эритемы, шелушения. К году процесс стал распространенным. На коже разгибательных поверхностей конечностей, туловища, лица появились эритематосквамозные очаги, папулезные элементы, отрубевидные и мелко-пластичные чешуйки, корки, гиперпегментированные и депигментированные пятна, очаги микровезикуляции и мокнутия. В локтевых сгибах лихенификация. Зуд постоянный, усиливающийся ночью. Лимфатические узлы увеличены до размеров фасоли. Дермографизм белый, стойкий. По данным клинического осмотра состояние ребенка оценено как атопический дерматит средней тяжести. При исследовании спонтанной адгезии нейтрофилов получен показатель 58,32%, дана оценка атопического дерматита тяжелой степени тяжести. Наблюдение за ребенком в динамике (6 месяцев) показало, что обострения были больше 5 раз с кратковременными ремиссиями, увеличилась площадь поражения кожи, и степень тяжести клинически была оценена как тяжелая. Таким образом, заявленный способ является объективным и информативным, отражает изменения в организме, развившиеся до клинической манифестации.

Пример 2. Больной Г. Возраст 6 месяцев. Ребенок от 1 беременности, масса при рождении 2700 г, длина 48 см. Крик при рождении сразу. Фоновая патология: энцефалопатия, врожденный порок сердца. Психомоторное развитие по возрасту. Первые высыпания с 4 месяцев в области щек, лба в виде эритемы и шелушения. В 4,5 месяца появились эритематосквамозные очаги на кожи плеч, предплечий, голений, бедер, поясницы, усилился зуд. В возрасте 6 месяцев госпитализирован в клинику с диагнозом атопический дерматит, врожденный порок сердца. Во время осмотра дана клиническая оценка тяжести атопического дерматита - легкая. Проведено исследование спонтанной адгезии нейтрофилов, получен показатель 28,84%, что соответствовало легкой степени атопического дерматита. Наблюдение за ребенком в динамике (8 месяцев) показало, что кожные высыпания после проведенного лечения разрешились и наступила ремиссия, что подтвердило правильность оценки тяжести атопического дерматита, проведенной заявленным способом.

Таким образом, по показателю спонтанной адгезии нейтрофилов определяется степень тяжести атопического дерматита у детей раннего возраста, в случае тяжелого течения дерматоза показатель превышает 51,81%±2,034% и находится ниже уровня 32,54%±4,89% в случае легкого течения атопического дерматита.

Изобретение относится к области медицины, в частности к педиатрии и дерматологии. Способ обеспечивает быструю оценку степени тяжести атопического дерматита у детей раннего возраста. Проводят оценку клинических признаков дерматоза, при этом в случае тяжелого течения атопического дерматита показатель спонтанной адгезии нейтрофилов превышает 51,81%±2,03 и находится ниже уровня 32,54%±4,89 в случае легкого течения атопического дерматита. 1 табл.

Способ оценки степени тяжести атопического дерматита у детей раннего возраста, включающий оценку клинических признаков дерматоза, отличающийся тем, что в случае тяжелого течения атопического дерматита показатель спонтанной адгезии нейтрофилов превышает 51,81 %±2,03% и находится ниже уровня 32,54%±4,89% в случае легкого течения атопического дерматита.