СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОГО ГАСТРОДУОДЕНИТА И ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ ДИСПЕПСИИ У ДЕТЕЙ Российский патент 2005 года по МПК G01N33/49 

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии.

Использование данного метода помогает дифференцировать воспалительные и невоспалительные заболевания гастродуоденальной зоны, является нетравматичным, что позволяет использовать его в качестве скринингового теста диагностики хронического гастродуоденита и для целенаправленного отбора детей для проведения инструментальных методов исследования. Применение данного метода позволит сократить сроки пребывания детей в стационаре.

Метод определения функциональной активности лейкоцитов в настоящее время используется для диагностики различных заболеваний у детей: лимфатизма (М.Ю.Федорова, 1999), бронхиальной астмы (О.В.Кузнецова с соавт., 2002).

Мы поставили перед собой задачу разработать диагностические критерии для более точной, ранней и необременительной для организма ребенка диагностики хронической гастродуоденальной патологии и функциональной желудочной диспепсии.

Наличие хронического воспалительного процесса в гастродуоденальной зоне имеет иммунологические особенности, ярко проявляющиеся уже на этапе адгезии, которая является одним из важнейших свойств лейкоцитов. Адгезия характеризует способность клеток прикрепляться к определенным субстратам и задерживаться на них, и выраженность ее зависит от состояния в первую очередь рецепторного аппарата клетки: способность связывать С5а, С1, СЗb-фрагменты комплемента, Fc-фрагменты IgG, контактировать с фибронектином, определяет интенсивность адгезии гранулоцитов и мононуклеаров крови (Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. - Медицина, Новосибирск, 1983. - 255с; Воспаление// Под ред. В.В.Серова, B.C.Паукова. - М.: Медицина, 1995. - 640с). Усиление исходной спонтанной адгезивной активности лейкоцитов носит аддитивный характер и повышение доли адгезировавшихся на эндотелии клеток связано с возрастанием доли адгезировавшихся лейкоцитов различных классов - полиморфно-ядерных лейкоцитов, моноцитов, лимфоцитов (Жеребин Е.А., Комар В.Е., Симбирцева Л.П. и др. Изучение спонтанной адгезии лейкоцитов крови у онкологических больных и здоровых лиц// Вопр. онкол. - 1986. - N12. - С. 1443-1448). Изучение адгезии лимфоцитов патогенетически оправдано, так как они осуществляют основные иммунологические функции в организме, а, кроме того, состояние их рецепторного аппарата зависит от степени их зрелости и может служить маркером наличия воспалительного процесса в организме. В качестве модуляторов адгезии лимфоцитов нами использованы фитогемагглютинин (ФГА), теофиллин и тималин, как вещества, усиливающие адгезионную активность клеток (Хомерики С.Г., Кубатиев А.А., Шляпников В.П. Лектининдуцированная агрегация нейтрофильных гранулоцитов до и после облучения гелий-неоновым лазером// Гематол. и трансфузиол. - 1993. - N 7. - С.26-28). Изменения в системе циклических нуклеотидов и конформационная перестройка мембраны с усилением экспрессии ответственных за образование Е-РОК мембранных рецепторов под действием ФГА, теофиллина и тималина приводит к трансформации количественного и качественного состава других компонентов рецепторного аппарата клетки, в частности адгезионных молекул.

Таким образом, уровень спонтанной адгезии лимфоцитов крови и характер изменения их адгезионной активности в ответ на добавление индукторов (ФГА, теофиллин, тималин) - являются одним из параметров иммунореактивности организма ребенка и могут быть использованы для определения воспалительного и невоспалительного процесса гастродуоденальной зоны.

В качестве прототипа был использован учебник Н.П.Шабалова “Детские болезни” (СПб, Сотис, 1993, с.240-248), где приведены сведения о признаках, используемых для диагностики хронического гастродуоденита и функциональной диспепсии.

Технический результат предлагаемого способа диагностики заключается в определении адгезивной способности лейкоцитов, в котором в качестве дифференцирующего критерия используется различный уровень спонтанной адгезии лейкоцитов и их чувствительность к модуляторам клеточной адгезии - фитогемаглютинину (ФГА), теофилину и тималину.

Способ диагностики осуществляется следующим образом. Разделение клеток крови на популяции проводилось в двойном градиенте плотности фиколл-верографина центрифугированием в течение 35 мин со скоростью 1500 об/мин, и последующим двукратным отмыванием в среде 199 (рН 7,4). Для удаления остаточных эритроцитов использовали гипоосмотический шок: к 1 мл суспензии отмытых клеток добавляли 18 мл холодной дистиллированной воды, а через 20 с осмолярность восстанавливали добавлением 6,25 мл 0,6 М раствора хлорида натрия (Хомерики С.Г. и др., 1993). Жизнеспособность ядросодержащих клеток оценивали путем витального окрашивания суспензии 0,1% раствором трипанового синего, приготовленного на фосфатном буфере (рН 7,4). Содержание жизнеспособных клеток в суспензии составляло 90-95%. В дальнейшем в камере Горяева подсчитывали концентрацию лейкоцитов в 1 мл и готовили необходимые разведения каждой суспензии клеток.

Разделение мононуклеаров на моноциты и лимфоциты проводили методом адгезии к стеклу (Заречнева Н.В., 1989). Для идентификации клеток проводили витальную окраску азурэозином с подсчетом количества лимфоцитов и моноцитов. Популяция клеток, прилипающая к стеклу, на 90% состояла из моноцитов, а не прилипающая - из лимфоцитов. Жизнеспособность мононуклеаров составляла 90-95%.

Оценку миграционной способности лейкоцитов проводили в реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) с применением фитогемаглютинина (ФГА) в качестве индуктора синтеза лимфоцитами фактора, угнетающего миграцию (George M., Vaughan J.H., 1962). РТМЛ ставилась капиллярным микрометодом с цельной кровью (Артомова А.Г., 1973) в модификации Польнера А.А., Серовой Т.И. (1976). Измерялась длина зоны миграции лейкоцитов в опытном (с добавлением ФГА) и контрольном капиллярах, и по отношению последних определялся индекс миграции в процентах. Продукцию фактора, определяющего миграцию, оценивали косвенно по показателю торможения миграции (ПТМ):

ПТМ=100-ИМ, где ИМ - индекс миграции.

Определение спонтанной адгезии нейтрофилов, моноцитов и лимфоцитов проводилось раздельно для каждого типа клеток по методу Goldrosen M.H. (1979) в модификации Вартаняна Н.Л. с соавт. (1988). Показатель спонтанной адгезии определяли как отношение разности количества клеток до инкубации и после нее в 5 больших квадратах камеры Горяева к количеству клеток до инкубации, выраженному в процентах. Оценку резервов функционального состояния рецепторного аппарата, необходимого для усиления адгезии, осуществляли исследованием адгезивной способности клеток с модуляторами адгезии (ФГА, теофиллин, тималин).

Нами обследовано 115 детей в возрасте 6-15 лет: 67 - с хроническим гастродуоденитом, 26 - с функциональной желудочной диспепсией, 22 ребенка составили контрольную группу.

Диагноз хронический гастродуоденит у детей ставился на основании клинико-лабораторных показателей с привлечением ряда дополнительных методов обследования (ЭГДС с биопсией, уреазный тест, микроскопия мазка отпечатка, внутрижелудочная рН-метрия, УЗИ внутренних органов).

Для доказательства адекватности оценки воспалительного и невоспалительного процесса гастродуоденальной зоны по показателям адгезии и чувствительности клеток к ее модуляторам провели сопоставление данных предложенного способа у детей с гастродуоденитом, функциональной диспепсией и у лиц контрольной группы. Выявленные изменения адгезивной активности клеток сравнивались с результатами контрольной группы обследования (см. таблицу).

Проведенные обследования показали, что у детей с ХГД отмечаются повышенные показатели адгезии, как спонтанной, так и индуцированной всех лейкоцитарных клеток, особенно выраженной у нейтрофилов. По-видимому, это связано с тем, что нейтрофилы представляют с собой первую линию защиты от действия агентов и отражают наличие воспалительного процесса. Повышенная способность лейкоцитов к адгезии, как мы полагаем, обеспечивает взаимодействие клеток для реализации эффекторного потенциала в очаге воспаления.

Таким образом, различные уровни адгезии лейкоцитов могут быть использованы для диагностики воспалительных и невоспалительных процессов гастродуоденальной зоны (см. таблицу).

Клинический пример 1

Аня Ч., 11 лет. Поступила в 1 ДКБ с жалобами на периодические боли в животе в эпигастральной области ноющего характера, не связанные с приемом пищи, при осмотре - состояние удовлетворительное, нормального питания, по органам без изменений, живот при пальпации мягкий, болезненный в пилородуоденальной зоне, стул не нарушен. Данные исследования: OAK - эр - 4,0 Т/л; Hв - 122 г/л; ЦП - 0,91; лей - 5,6 г/л; б - 1%; э – 5%; с - 38%; лим - 48%; мон - 8%; СОЭ - 5 мм/час; функциональная активность лейкоцитов: адгезия нейтрофилов: спонтанная - 33,71%; ФГА-стимулированная - 37,66%; теофиллин-модулированная - 36,78%, тималин-модулированая - 42,47%; адгезия моноцитов: спонтанная - 36,77%; ФГА-стимулированная - 48,75%; теофиллин-модулированная - 37,97, тималин-модулированая - 40,98%; адгезия лимфоцитов: спонтанная - 28,54%; ФГА-стимулированная - 55,99%; теофиллин-модулированная - 41,24%, тималин-модулированая - 53,52%; ИМ - 64,85%; МИФ - 35,15%. Учитывая повышенные данные функциональной активности лейкоцитов, предположительный диагноз: хронический гастродуоденит. Направлена на дообследование: проведена ФЭГДС - хронический гастродуоденит; уреазный тест - положительный; микроскопия мазка отпечатка - выявлены НР(++); внутрижелудочная рН - метрия - гиперацидное состояние, декомпенсация ощелачивания в антральном отделе.

Проведено лечение: амоксициллин + фуразолидон 7 дней, гастросидин, гастал, физиолечение (магнитотерапия на пилородуоденальную зону).

Через 12 дней состояние улучшилось, болевой синдром купирован, при пальпации - живот мягкий, безболезненный; общий анализ крови - в норме; функциональная активность нейтрофилов, моноцитов - соответствуют норме, лимфоциты - с тенденцией к нормализации.

Выписана домой в удовлетворительном состоянии.

Клинический пример 2

Илья Г., 12 лет. Поступил в 1ДКБ с жалобами на периодические боли в эпигастральной области ноющего характера, не связанные с приемом пищи, тошноту. При осмотре - состояние удовлетворительное, нормального питания, кожные покровы обычной окраски, по органам без изменений. Живот при пальпации мягкий, умеренно болезненный в эпигастрии, печень не увеличена, стул не нарушен. Данные исследования: OAK - эр - 4,8 т/л; Нв - 12,5 г/л; ЦП - 0,91; лей - 5,1 г/л; э - 4%, с - 48%; лим - 40%, мон - 4; СОЭ - 10 мм/ч.; функциональная активность лейкоцитов: адгезия нейтрофилов: спонтанная - 26,8%; ФГА-стимулированная - 30%; теофиллин-модулированная - 29,8%, тималин-модулированая - 30,5%; адгезия моноцитов: спонтанная - 28,5%; ФГА-стимулированная - 31,9%; теофиллин-модулированная - 30,84%, тималин-модулированая - 30,5%; адгезия лимфоцитов: спонтанная - 19,13%; ФГА-стимулированная - 20,8%; теофиллин-модулированная - 19,65%, тималин-модулированая - 21,5%; ИМ - 45,45%; МИФ - 54,55%. Учитывая, что данные функциональной активности лейкоцитов в пределах возрастной нормы, предположительный диагноз: функциональная желудочная диспепсия. Направлена на дообследование: проведена ФЭГДС: воспалительных изменений в слизистой оболочке желудка и двенадцатиперстной кишки не выявлено. Обнаружен дуодено-гастральный рефлюкс. Внутрижелудочная рН-метрия - гиперацидное состояние, компенсация ощелачивания в антральном отделе.

Таким образом, заявленный способ является объективным и информативным и, характеризуя адгезивнный потенциал лейкоцитарных клеток диагностирует наличие хронического гастродуоденита или функциональной диспепсии.

Способ диагностики хронического гастродуоденита и функциональной диспепсии у детей

Показатели адгезии лейкоцитов у детей с хроническим гастродуоденитом (ХГД), функциональной диспепсией (ФД)Показатели (%)ХГДФДНормаНейтрофилы:Спонтанная адгезияПовышенаНормальна28,03±2,00ФГА-стимулированная адгезияПовышенаНормальна31,02±1,27Теофиллин-модулированная адгезияПовышенаНормальна30,88±1,07Тималин-модулированная адгезияПовышенаНормальна32,66±2,01Лимфоциты:Спонтанная адгезияПовышенаНормальна20,81±0,97ФГА-стимулированная адгезияПовышенаНормальна23,05±1,27Теофиллин-модулированная адгезияПовышенаНормальна22,14±1,12Тималин-модулированная адгезияПовышенаНормальна21,98±1,09Моноциты:Спонтанная адгезияПовышенаНормальна30,04±1,27ФГА-стимулированная адгезияПовышенаНормальна32,15±1,11Теофиллин-модулированная адгезияПовышенаНормальна31,02±2,07Тималин-модулированная адгезияПовышенаНормальна31,54±1,21

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии. Для дифференциальной диагностики хронического гастродуоденита и функциональной диспепсии у детей исследуют клинико-лабораторные показатели, при этом дополнительно определяют спонтанную адгезию лейкоцитов и их чувствительность к модуляторам клеточной адгезии – фитогемаглютинину (ФГА), теофиллину, тималину. При показателях функциональной активности лейкоцитов в пределах нормы: спонтанная адгезия нейтрофилов 28,03±2,0%; моноцитов 30,04±1,27%; лимфоцитов 20,81±0,97% и модулированной адгезии нейтрофилов: ФГА 31,02±1,27%, теофиллин 30,88±1,07%, тималин 32,66±2,01%; моноцитов: ФГА-32,15±1,11%, теофилин 31,02±2,07%, тималин 31,54±1,21%, лимфоцитов: ФГА 23,05±1,27%, теофиллин 22,14±1,12%, тималин 21,98±1,09%, устанавливают диагноз функциональной диспепсии. При показателях функциональной активности лейкоцитов, превышающих пределы нормы, диагностируют хронический гастродуоденит. Предлагаемый способ позволяет осуществлять более точную, раннюю и необременительную для организма ребенка диагностику хронического гастродуоденита и функциональной желудочной диспепсии. 1 табл.

Способ дифференциальной диагностики хронического гастродуоденита и функциональной диспепсии у детей путем исследования клинико-лабораторных показателей, отличающийся тем, что дополнительно определяют спонтанную адгезию лейкоцитов и их чувствительность к модуляторам клеточной адгезии – фитогемаглютинину (ФГА), теофилину, тималину и при показателях функциональной активности лейкоцитов в пределах нормы: спонтанная адгезия нейтрофилов 28,03±2,0%; моноцитов 30,04±1,27%; лимфоцитов 20,81±0,97% и модулированной адгезии нейтрофилов: ФГА 31,02±1,27%, теофилин 30,88±1,07%, тималин 32,66±2,01%; моноцитов: ФГА 32,15±1,11%, теофилин 31,02±2,07%, тималин 31,54±1,21%, лимфоцитов: ФГА 23,05±1,27%, теофилин 22,14±1,12%, тималин-21,98±1,09% устанавливают диагноз функциональной диспепсии, а при показателях функциональной активности лейкоцитов, превышающих пределы нормы, диагностируют хронический гастродуоденит.