СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ МИЕЛОПАТИИ ПРИ ТУБЕРКУЛЕЗЕ ПОЗВОНОЧНИКА Российский патент 2003 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для диагностики миелопатии (МП) при туберкулезе позвоночника.

Диагностика МП очень важна для лиц, страдающих туберкулезом позвоночника, осложненным компрессией спинного мозга (СМ).

Под МП следует понимать глубокое поражение спинного мозга, которое чаще всего необратимо. У больных с миелопатией спинного мозга восстановление функции спинного мозга происходит в минимальном объеме (некоторое изменение чувствительности в конечностях, появление единичных движений в пальцах стоп, что не позволяет больным самостоятельно передвигаться), или спинномозговые расстройства остаются без изменений.

Для установления МП необходимо длительное клиническое наблюдение за больными, подкрепленное данными миелографии (Лучевая диагностика воспалительных заболеваний позвоночника, осложненных спинномозговыми расстройствами: - Пособие для врачей-рентгенологов /СПбНИИ фтизиопульмонологии: Н.А. Советова, Г. М. Митусова, И.Б. Савин, А.З. Некачалова. -СПб, 1997. -23с.), магнитно-резонансной томографией (Холин А.В., Макаров А.Ю., Мазуркевич Е.А. Магнитная резонансная томография позвоночника и спинного мозга. - СПб, 1995. - 131с.), лабораторными анализами спинномозговой жидкости (СМЖ). Среди последних наиболее распространены определение общего белка, клеточного состава, постановка реакций Нонне-Апельта и Панди и определение ликвородинамических проб (Угрюмов В. М. Повреждения позвоночника и спинного мозга и их хирургическое лечение. М. , Медгиз, 1961. - 247с.; Станиславлева Е.Н. Хирургия параплегии при туберкулезном спондилите: Метод. указания /МНИИРТ. - М., 1964.- 28с.). Диагноз МП выставляется при отсутствии изменений СМ по данным этих исследований и отсутствии положительной неврологической динамики в течение 6 мес и более.

Комплекс указанных способов помогает установить наличие и степень компрессии СМ, но не дает представления об истинном функциональном состоянии СМ и о необратимости спинномозговых расстройств, при этом диагностическая точность комплекса рентгенолабораторных методов не превышает 30%.

С позиций современной клинической иммунологии невропатологических состояний особый интерес вызывает изучение содержания в СМЖ одного из важнейших провоспалительных цитокинов короткодистантного действия фактора некроза опухоли-альфа (ФНО-α) (А. А. Тотолян, И.С. Фрейдлин. Возможности иммунологической лабораторной диагностики// Клин. лаб. диагностика. - 1997. - 2. - С. 16). Полифункциональность ФНО-α позволяет расценивать колебания его уровня и как маркер остроты воспаления, и как индикатор процессов репарации тканей (Bona С., Bonilla F. Textbook of immunology, second ed:, Harwood Acad. Publ. , Amsterdam. -1996. -406р.

Изучение уровня ФНО-α в СМЖ для диагностики МП до сих пор никем не предпринималось.

Задачей предлагаемого изобретения является повышение точности диагностики МП у лиц, страдающих туберкулезом позвоночника, осложненным компрессией СМ, что достигается за счет дополнительного определения концентрации ФHО-α в СМЖ, полученной путем пункции субарахноидального пространства СМ на уровне L4-L5 позвонков, с помощью иммуноферментной тест-системы и при выявлении концентрации ФНО-α, равной или меньшей 400 пг/мл, диагностируют МП.

Чувствительность заявляемого способа повышается до 80%, а общая информативность достигает 89%. Кроме того, сокращается время обследования больных и наряду с повышением надежности способа диагностики МП предлагаемый способ в значительной степени упрощает диагностику МП. Новый способ диагностики позволяет установить МП в кратчайшие сроки (до 1 недели).

Способ осуществляют следующим образом: содержание ФНО-α определяют в цельной СМЖ с помощью твердофазного иммуноферментного анализа согласно инструкции, прилагаемой к набору тест-системы ("R and D", Systems, USA).

1). "Посадочные" моноклональные антитела к ФНО-α заранее иммобилизованы на внутренних поверхностях лунок микропланшета.

В первые два вертикальных ряда лунок вносят по 200 мкл стандартных растворов ФНО-α, содержащих: А - 0 пг/мл; В - 15,6 пг/мл; С - 31,2 пг/мл; D - 62,5 пг/мл; Е - 125 пг/мл; F - 250 пг/мл; G - 500 пг/мл; Н - 1000 пг/мл ФНО-α.

Стандарты, содержащие указанные концентрации ФНО-α, готовят в день исследования из навески лиофилизированного рекомбинантного препарата ФНО-α и разводящей жидкости из набора тест-системы.

В остальные лунки микропланшета вносят по 200 мкл исследуемых образцов СМЖ. Микропланшет инкубируют 2 ч при комнатной температуре.

2). По окончании инкубации содержимое лунок удаляют вакуумным насосом и 3 раза промывают буфером, отсасывая его с помощью вакуумного насоса.

3). В лунки вносят по 200 мкл конъюгата (биотин-стрептавидин-пероксидаза) и инкубируют в течение 2 ч при комнатной температуре.

Осушение и промывку лунок осуществляют, как описано в п.2.

4). В лунки вносят по 200 мкл субстрат - хромогенной смеси. Экспозиция длится в темноте в течение 20 мин при комнатной температуре.

Реакцию останавливают с помощью внесения в каждую лунку по 50 мкл серной кислоты. Через 30 мин учитывают результаты на вертикальном фотометре типа "Мультискан" при длине волны 450 нм.

Используя калибровочную кривую, значения единиц оптической плотности каждого образца переводят в пг/мл ФНО-α.

Апробацией заявляемого способа служат результаты обследования двух групп больных туберкулезом позвоночника и его последствиями, имеющих различной степени выраженности неврологические нарушения, обусловленные компрессией СМ, всего 55 человек.

I группу составили 15 больных с МП, характеризующейся наличием у пациентов стойких глубоких спинномозговых расстройств и отсутствием тенденции к восстановлению функции спинного мозга или наличием этой тенденции в очень незначительной степени, несмотря на проводимое медикаментозное и хирургическое лечение.

Диагноз МП не вызывал сомнения, так как был верифицирован результатами рентгенологического и неврологического обследования, исследований СМЖ, длительным наблюдением за больным, показавшим отсутствие компрессии СМ, восстановление нормальных показателей в СМЖ при сохраняющихся спинномозговых расстройствах.

II группу составили 40 больных без миелопатии с различной степенью восстановления функции СМ после оперативного лечения.

Оказалось, что у 12 больных I группы концентрация ФНО-α в СМЖ ≤400 пг/мл (140-400); у 3 больных концентрация ФНО-α>400 пг/мл (410 -430). Следовательно, чувствительность способа составляет 80%.

У 37 больных II группы концентрация ФНО-α в СМЖ>400 пг/мл и лишь у 3 оказалась ниже порогового значения (340-400), таким образом, специфичность предлагаемого способа составляет 92,5%.

В целом, с помощью предлагаемого способа правильный диагноз по двум группам больных был поставлен в 49 случаях из 55, значит, диагностическая эффективность теста составляет 89%.

Примеры реализации заявляемого способа:
1. Больной У., и/б 115, 51 г. с туберкулезным спондилитом Th8-Th10 позвонков, осложненным нижней спастической параплегией с нарушением функции тазовых органов. Болен в течение 10 мес. При обследовании в ликворе - белок 0,33 г/л, цитоз - 16/3, реакции Нонне-Апельта и Панди (3+). Ликвородинамические пробы - блок ликворных путей I степени. Миелография - умеренная костная компрессия спинного мозга на уровне поражения. Уровень ФНО-α в спинномозговой жидкости - 366 пг/мл. После операции регресс неврологической симптоматики начал определяться через 1 мес, но восстановление функции спинного мозга в последующие 6 мес было минимальным, функция тазовых органов полностью не восстановилась. Отсутствие положительной динамики в неврологическом статусе после операции объясняется миелопатией.

2. Больной Г. , и/б 1049, 46 лет с туберкулезным спондилитом Th10-Th12 позвонков, осложненным нижним спастическим парапарезом глубокой степени с нарушением функции тазовых органов. Давность спинномозговых расстройств 4 мес. При обследовании в ликворе - белок 2,6 г/л, цитоз - 2/3, реакции Нонне-Апельта и Панди (2+). Ликвородинамические пробы - полный блок ликворных путей. Миелография - выраженная компрессия спинного мозга эпидуральным абсцессом на уровне поражения. Уровень ФНО-α в спинномозговой жидкости - 300 пг/мл. После операции через 3 нед. начался регресс неврологической симптоматики, но достичь удалось только минимальной степени восстановления функции спинного мозга к 8 мес наблюдения, что вызвано наличием миелопатии.

При отсутствии миелопатии восстановление функции спинного мозга происходит в короткие сроки и в большем объеме.

3. Больная 3., и/б 10, 49 лет с туберкулезным спондилитом Th6-Th7 позвонков, осложненным нижней спастической параплегией с нарушением функции тазовых органов. Больна в течение 1 года. При обследовании в ликворе - белок 0,55 г/л, цитоз - 23/3, реакции Нонне-Апельта и Панди (+). Ликвородинамические пробы - полный блок ликворных путей. Миелография - выраженная костная компрессия спинного мозга на уровне поражения. Уровень ФНО-α в спинномозговой жидкости - 550 пг/мл. После операции, начиная со второй недели, начался регресс неврологической симптоматики и достиг значительной степени к 2 мес, что позволило больной самостоятельно ходить; полностью восстановилась функция тазовых органов.

4. Больной Р., и/б 269, 29 лет с туберкулезным спондилитом Th8-Th9 позвонков, осложненным нижним спастическим парапарезом глубокой степени с нарушением функции тазовых органов. Давность спинномозговых расстройств 2 мес. При обследовании в ликворе - белок 1,32 г/л, цитоз - 7/3, реакции Нонне-Апельта (2+) и Панди (3+). Ликвородинамические пробы - клапанный блок ликворных путей. Миелография - выраженная компрессия спинного мозга эпидуральным абсцессом на уровне поражения. Уровень ФНО-α в спинномозговой жидкости - 470 пг/мл. После операции через 1 мес начался регресс неврологической симптоматики и достиг значительной степени к 2 мес. Больной ходит свободно без дополнительной опоры. Полностью нормализовалась функция тазовых органов.

Предлагаемый способ позволяет повысить точность диагностики до 89% за счет повышения эффективности на 59%. Кроме того, диагноз МП устанавливается в кратчайшие сроки (в течение недели).

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для диагностики миелопатии при туберкулезе позвоночника. Сущностью способа является определение в спинномозговой жидкости концентрации фактора некроза опухоли-альфа иммуноферментным анализом, и при достижении значения 400 пг/мл и менее диагностируют миелопатию. Техническим результатом является повышение чувствительности, специфичности и точности диагностики.

Способ диагностики миелопатии при туберкулезе позвоночника путем рентгенологического и лабораторного исследования спинного мозга, отличающийся тем, что в спинномозговой жидкости больного дополнительно с помощью иммуноферментной тест-системы определяют концентрацию фактора некроза опухоли-альфа (ФНО-α) и при ее значении, равной или меньшей 400 пг/мл, диагностируют миелопатию.