ВАКЦИНЫ С АДЪЮВАНТОМ LTB Российский патент 2003 года по МПК A61K39/39 A61K39/145 

Настоящее изобретение относится в вакцине, содержащей субъединицы В термолабильного энтеротоксина (LTB) Eschefichia coli (E. coli) в качестве иммуноадъюванта для слизистых оболочек. Настоящее изобретение относится, в частности, к вакцине этого типа, предназначенной для профилактики инфекций вируса гриппа у человека. Однако настоящее изобретение не ограничивается в своем применении вакцинами против вируса гриппа.

Целью вакцинации против инфекционных заболеваний является предотвращение или, по крайней мере, сдерживание инфекции у вакцинированного субъекта путем стимулирования иммунного ответа на инфекционный агент, посредством введения антигенной композиции, полученной из конкретного патогенного агента. В идеале, индуцированный иммунный ответ должен состоять из двух компонентов, гуморального ответа (выработки антиген-специфичных антител) и клеточного ответа (генерации специфичных цитотоксических Т-лимфоцитов, способных элиминировать клетки, инфицированные этим патогенным агентом).

Многие методики вакцинации включают введение композиции, содержащей инактивированный или ослабленный цельный патогенный агент. Однако в случае некоторых патогенных агентов вакцинация цельным патогенным агентом создает значительные неудобства, поскольку такие препараты, несмотря на то, что они обычно являются высокоиммуногенными, могут иметь нежелательные побочные эффекты. Этот факт объясняет современную тенденцию применения и строго определенных субъединичных вакцин или синтетических вакцин, практически не имеющих неблагоприятных побочных эффектов, присущих цельному инфекционному агенту. Однако по сравнению с цельным патогенным агентом субъединичные вакцины или синтетические вакцины часто не очень иммуногенны, по крайней мере, в отсутствие добавленного адъюванта.

Адъюванты представляют собой вещества или материалы, которые вводятся вместе с антигеном, чтобы стимулировать иммунный ответ на антиген. Существует потребность в соответствующих адъювантах, которые усиливают иммунный ответ на антигены-субъединицы или синтетические антигены, не вызывая при этом неблагоприятных побочных эффектов.

Композиции вакцин против вируса гриппа долгое время содержали и в некоторых случаях все еще содержат инактивированный или ослабленный цельный вирус. Такая композиция может иметь значительные побочные эффекты, из которых наиболее выраженными являются лихорадка и реакции в месте инъекции. В настоящее время вакцинацию обычно осуществляют композицией на основе субъединиц. Эта субъединичная вакцина, которая вызывает меньше побочных реакций, содержит только два главных поверхностных антигена вируса, гемагглютинин (НА) и нейраминидазу (NA), в более или менее очищенном виде. В наиболее современных вакцинных композициях добавленный адъювант отсутствует.

Вакцину против вируса гриппа на основе инактивированного или ослабленного цельного вируса, а также субъединичную вакцину обычно вводят посредством однократной внутримышечной (в/м) инъекции. Защита от инфекции вируса гриппа, которая достигается какой-либо из названных методик вакцинации, является относительно низкой, особенно у людей старшего возраста. Эта относительно низкая эффективность вакцинации против вируса гриппа частично обусловлена высокой антигенной изменчивостью этого вируса. Однако существуют причины полагать, что защита от инфекции вируса гриппа путем вакцинации может быть усовершенствована путем стимуляции и/или модификации иммунного ответа на антиген.

В случае гриппа или вообще в случаях, когда инфекция передается через дыхательные пути, стратегия улучшения эффективности вакцинации должна ставить перед собой цель генерации не только адекватного ответа IgG, зависимого от Т-клеток, в системе кровообращения, но также и локального иммунного ответа (выработка секреторных IgA) в легких и носовой полости как первой линии защиты от проникновения инфицирующего вируса. Более того, клеточный иммунный ответ (цитотоксические Т-клетки) также должен быть важным, особенно для сдерживания инфекции. Было показано, что введение вакцины против вируса гриппа посредством в/м инъекции (один современный путь введения) не вызывает локального IgA ответа в дыхательных путях.

Настоящее изобретение относится к неожиданному открытию того факта, что наличие LTB в интраназальной вакцинной композиции не только стимулирует IgG ответ в системе кровообращения, соотносительный с в/м иммунизацией иммуногенной вакциной, не содержащей адъюванта, но также генерирует локальный IgA ответ в дыхательных путях.

Интактный термолабильный энтеротоксин (LT) и близкородственный ему холерный токсин (СТ) состоят из одной субъединицы А и пентамерной кольцевой структуры, состоящей из пяти идентичных субъединиц В. Субъединица А обладает ферментативной активностью, осуществляя АДФ-рибозилирование, и вносит свой вклад в токсическую активность этих токсинов. В кишечном эпителии субъединица А индуцирует устойчивый синтез вторичного мессенджера цАМФ, что приводит к избыточной секреции электролитов и сопутствующей ей избыточной секреции жидкости в просвет кишечника.

LT и СТ являются мощными иммуногенами для слизистых оболочек. После локального введения в слизистую оболочку эти молекулы вызывают не только индукцию системного антительного ответа, направленного против токсина, но также выработку локально секретируемых антител, а именно секреторных IgA (S-IgA). LT и СТ являются также мощными иммуноадъювантами для слизистых оболочек. Иными словами, при совместном введении с неродственным по отношении к ним иммуногеном LT и СТ могут стимулировать системный антительный ответ и антительный ответ слизистой оболочки на этот иммуноген. Однако токсичность LT и СТ до сих пор значительно мешала использовать LT или СТ в человеческих вакцинных композициях.

В попытках отделить токсическую активность LT или СТ от иммуностимулирующей активности были изучены на предмет иммуноадъювантной активности детоксицированные мутанты этих токсинов или немодифицированная изолированная пентамерная субъединица В (LTB или СТВ соответственно). Понятно, что поскольку токсическая АДФ-рибозилирующая активность этих токсинов сосредоточена в субъединице А, наличие даже следовых количеств немодифицированной субъединицы А или голотоксина LT или СТ в человеческой вакцине крайне нежелательно.

Использование LTB в качестве адъюванта для гриппозных антигенов изучали Tamura и соавторы (Hirabashi et al.: Vaccine 8: 243-248 [1990]; Kikuta et al. : Vaccine 8: 595-599 [1990]; Tamura et al.: J. Immunology 3: 981-988 [1992] ; Tamura et al.: Vaccine 12: 419-426 [1994]; Tamura et al.: Vaccine 12: 1083-1089 [1994]. В этих исследованиях, в которых изучалось применении вакцины на основе растворимого гемагглютинина вируса гриппа (НА), экстрагированного и очищенного из вируса гриппа путем обработки Твином/эфиром, согласно Davenport et al. (J. Lab. & Clin. Med. 63 (I): 5-13 [1964], было установлено, что LTB, не содержащий субъединицы А, не обладает иммуноадъювантной активностью для слизистой оболочки при интраназальном введении мышам в сочетании с растворимым НА антигеном. Было показано также, что наличие следовых количеств голотоксина, например остаточного голотоксина, имеющегося в препаратах субъединицы В, выделенной из голотоксина, восстанавливает проявление адъювантной активности LTB в отношении растворимого НА антигена. Более того, когда использовался LTB из рекомбинантных источников (и, следовательно, полностью свободный даже от малейших следовых количеств субъединицы А), потребовалось добавить следовое количество голотоксина, чтобы LTB смог проявить активность в отношении слизистой оболочки при интраназальном совместном введении с растворимым НА антигеном.

Неожиданно было установлено, что изолированный LTB рекомбинантного происхождения и, следовательно, полностью свободный от субъединицы А, в самом деле обладает мощной иммуноадъювантной активностью, зависящей от природы или приданной формы интраназально совместно вводимого иммуногена.

Например, адъювантная активность в отношении произвольно смешанных малорастворимых антигенов, таких как овальбумин или растворимый эктодомен гликопротеина оболочки вируса иммунодефицита человека (gp120), является низкой и часто не поддающейся выявлению. С другой стороны, было установлено, что LTB в самом деле обладает очень мощной адъювантной активностью в отношении произвольно смешанных крупноагрегированных иммуногенов или иммуногенов в корпускулярной форме. Эти иммуногены включают антиген субъединицы вируса гриппа и гемоцианин блюдечка (брюхоногого моллюска) (KLH).

Соответственно, настоящее изобретение относится к вакцине, содержащей по меньшей мере один иммуноген в корпускулярной форме и адъювантное количество LTB, совершенно не содержащего субъединицы А или токсичного LT голотоксина.

Как определено в настоящем документе, "корпускулярный" означает любую ассоциацию с вирусными, бактериальными или грибковыми антигенами, характерными для этих соответственных микроорганизмов. Более конкретно, термин "корпускулярный иммуноген" включает агрегаты, кластеры, мицеллы, виросомы, розетки, вирусоподобные иммуногенные частицы и т.п.

В частности, в вакцине по настоящему изобретению можно использовать LTB, изготовленный с помощью методики рекомбинантной ДНК. Иммуноген или иммуногены могут быть получены из инфекционных агентов, таких как вирусы или бактерии.

Было установлено, что вакцины, соответствующие вышеприведенному описанию, не только индуцируют системные иммуноглобулины (например, IgG) против иммуногена после введения через слизистую оболочку (например, интраназально, но также индуцируют локальную секрецию IgA.

Это последнее свойство особенно благоприятно для иммунизации против заболеваний, передающихся путем инфицирования слизистых оболочек вирусами (такими как вирус гриппа, вирус герпеса, вирус папилломы) или бактериями (такими как Chlamydia, пневмококки) или грибами.

Особым преимуществом введения через слизистые оболочки является простота нанесения вакцины, что, помимо прочего, преодолевает потенциальный страх перед иглой у вакцинируемых лиц, подвергаемых внутримышечной иммунизации.

Несмотря на то, что, например, в случае инфекции вируса гриппа, высокие сывороточные титры IgG важны для предотвращения системного распространения вируса и защиты легких от инфекции, локальные антитела S-IgA имеют ключевое значение в качестве первой линии обороны для защиты верхних дыхательных путей.

Сообщалось, что вакцинация через слизистые оболочки путем и/н введения инактивированного вируса гриппа в отсутствии адъюванта для слизистых оболочек потерпела неудачу (Clancy: Drugs 50: 587-594 [1995]; Katz et al., J. Infect. Dis. 175:352-369 [997], возможно потому, что непосредственное введение антигена в ткань слизистой оболочки не приводит к ответу S-IgA. Одновременное введение адъюванта для слизистых оболочек, как представляется, является необходимым условием для индукции локального иммунного ответа против иммуногена. Примечателен тот факт, что, как было установлено, путем и/н иммунизации по настоящему изобретению так называемая неспецифическая иммунная система слизистых оболочек активируется, что приводит к секреции S-IgA не только в месте применения (и/н), но также и в отдаленных слизистых оболочках (например, в слизистой оболочке влагалища).

Вакцины по настоящему изобретению могут содержать иммуногены, например, вирусного или бактериального происхождения, такие как бактериальные антигены, вирусные субъединицы (необязательно инактивированные), расщепленные вирусы (необязательно инактивированные), инактивированные вирусы или бактерии или аттенуированные (например, в результате холодовой обработки) живые вирусы в корпускулярной форме.

LTB, используемый согласно настоящему изобретению, совершенно не содержит токсичную LTA или токсичный голотоксин. Предпочтительное LTB получают с помощью методики рекомбинантной ДНК. В настоящем контексте "не содержащий токсичную LTA" означает "совершенно не содержащий LTA".

В вакцине по настоящему изобретению LTB можно использовать в произвольно смешанной с корпускулярным антигеном форме - может также использоваться ковалентное связывание антигена и адъюванта, хотя это и не является необходимым условием для достижения адекватного адъювантного эффекта.

Помимо LTB и одного или более иммуногенов, вакцина по настоящему изобретению может содержать водный растворитель, в частности буфер, более конкретно, ФСБ (фосфатно-солевой буфер), а также стабилизатор (например, PEG или метилцеллюлозу) и/или глюкозу.

Компоненты вакцины по настоящему изобретению могут быть высушены замораживанием или иметь жидкую форму.

Вакцина по настоящему изобретению может представлять из себя, например, нерасфасованный материал или помещаться в ампулу, или шприц, или аэрозольный баллончик.

Вакцину по настоящему изобретению можно вводить подкожно, или внутримышечно, или интрабронхиально, или интраназально, или интравагинально, или перорально.

Пример 1
Изготовление рекомбинантного LTB и антигена субъединицы вируса гриппа
Рекомбинантный LTB
Рекомбинантные гены LTB и рекомбинантные молекулы LTB, как упоминалось в настоящем изобретении, могут быть получены с помощью генов, кодирующих молекулы LT-1, например, из свиного или человеческого источника. Ген LT свиньи (pLT) был субклонирован в векторе pUC18 (Vieira and Messing: Gene 19:259-268 [1982] с помощью технологии ПЦР (DeHaan et al.: Vaccine 14: 260-266 [1996]). Вектор EWD299, впервые описанный Dallas et al. (J. Bacteriol. 139: 850-858 [1979] ) использовался в качестве матрицы в реакции ПЦР. Как было установлено, первичная последовательность pLT этой конструкции точно соответствовала первичной последовательности pLT, зарегистрированной в базе последовательностей EMBL, что было подтверждено секвенированием ДНК. Из конструкции pUC18-pLT был субклонирован ген pLTB в экспрессирующем векторе pROFIT, который содержит промотор γPR с температурной индукцией (van der Linden et al. : Eur. J. Biochem. 204: 197-202 [1992]).

В качестве штамма-хозяина для плазмидных конструкций pROFIT использовали Е. coli MC1061. Бактерии выращивали на среде Луриа-Бертани, содержавшей 50 мкг канамицина в одном мл. Индукцию экспрессии pLTB получали путем повышения температуры культивирования во время log-фазы культур MC1061, несущих вектор pROFIT-LTB, от 28 до 42 градусов по Цельсию, как описано De Haan et al. (выше).

pTLTB, полученный из рКК экспрессирующий вектор (Pharmacia Ltd.), кодирующий LTB человека (т.е. ген LTB, полученный из гена LT, выделенного из бактерии Е. coli, энтеротоксигенной для человека), получили от Tamura и его сотрудников. Секвенирование ДНК выявило 3 замещения аминокислот в зрелом LTB человека (hLTB) по сравнению с pLTB (Thr в положении 4 на Ser, Glu в положении 46 на Аlа и Lys в положении 102 на Glu). В качестве хозяина для pTLTB использовали штамм Е. coli JM101. Бактерии выращивали на среде LB, содержавшей 100 мкг ампициллина в одном мл. Индукцию экспрессии hLTB получали путем добавления IPTG к культурам JM101, несущим pTLTB, в log-фазе до конечной концентрации 5 мМ.

Для выделения pLTB и hLTB собирали переэкспрессирующие бактерии, которые затем лизировали посредством ультразвуковой обработки. Затем клеточный детрит удаляли ультрацентрифугированием. Необработанные клеточные экстракты, содержавшие рекомбинантный pLTB или hLTB, затем помещали на иммобилизованную колонку с D-галактозой (Pierce). После отмывания большими объемами рекомбинантный очищенный pLTB или hLTB получали путем элюирования с D-галактозой, как описано Uesaka et al. (Mictob. Path. 16: 71-76 [1994]). Было установлено, что рекомбинантные pLTB и hLTB сохраняли оптимальные свойства связывания с GM1 в ловушке GM1 ELISA, как было ранее описано (DeHaan et al.: Vaccine 14; 260-266 [1996] ). Колоночные фракции, содержавшие очищенный белок, объединяли, диализировали против ФСБ и хранили при 4^oС.

Антиген субъединицы вируса гриппа
Антиген субъединицы вируса гриппа изготавливали из вируса В/Харбин/7/94 (В/Харбин) или из вируса А/Йоханнесбург/33/94 (А/Йоханнесбург), выращенных на куриных эмбрионах, согласно способу, описанному Bachmayer et al. (описание патента Великобритании 1 498 261, от 18 января 1978 г.) и Chaloupka et al. (Eur. J. Microbiol. Infect. Dis. 15: 121-127 [1996]). Этот способ включает этапы обработки вирусов, инактивированных формальдегидом, подходящим катионным детергентом, отделение высвободившихся антигенов (гемагглютинина и нейраминидазы) от резидуального ядра вируса. Этот способ обеспечивает получение корпускулярных, т.е. в форме мицелл, антигенов после удаления детергента.

Мощность препаратов антигена субъединицы, выраженная в мкг на мл, определяли с помощью метода отдельной радиальной диффузии, согласно Wood et al. (J. Biol. Stand. 5: 237-241 [1977]).

Пример 2
Системный антительный ответ на субъединичную вакцину вируса гриппа
Группы из четырех мышей иммунизировали и/н без анестезии 5 мкг антигена субъединицы вируса гриппа, полученного из вируса В/Харбин или А/Йоханнесбург, согласно способу, описанному в примере 1. Антиген вводили как отдельно (НА), так и в сочетании с 2,0 мкг pLTB (pLTB), во всех случаях в объеме 20 мкл, на 0, 7 и 14 день. Контрольные мыши получали те же объемы ФСВ. Мышей умерщвляли на 28 день. Сывороточный антительный ответ IgG определяли с помощью прямого ELISA.

Фигура 1 показывает наблюдавшиеся сывороточные антительные ответы IgG на НА В/Харбин (заштрихованные столбики и НА А/Йоханнесбург (незаштрихованные столбики).

Интраназальное введение антигена субъединицы без адъюванта вызывало слабый системный антительный ответ, в то время как добавление к антигену субъединицы pLTB усиливало сывороточный антительный ответ более чем на два порядка. Разница между ответами у мышей, иммунизированных В/Харбин и А/Йоханнесбург, была статистически не достоверной.

Эти результаты показывают, что нетоксичный pLTB является мощным адъювантом, способным индуцировать выраженные системные антительные ответы на и/н введенный антиген субъединицы вируса гриппа.

Пример 3
Сравнение системных антительных ответов с использованием человеческого и свиного LTB
Группы из четырех мышей иммунизировали и/н без анестезии 5 мкг антигена субъединицы вируса гриппа, полученного из вируса гриппа В/Харбин, согласно способу, описанному в примере 1.

Антиген вводили как отдельно (без адъюванта), так и в сочетании с 2,0 мкг pLTB (pLTB) или 2/0 мкг hLTB (hLTB), во всех случаях в объеме 20 мкл, на 0, 7 и 14 день. Контрольные мыши получали ФСБ. Мышей умерщвляли на 21 день. Сывороточный антительный ответ IgG определяли с помощью прямого ELISA на 21 день.

Фигура 2 показывает наблюдавшиеся сывороточные антительные ответы IgG на НА В/Харбин.

Интраназальное введение антигена субъединицы без адъюванта снова вызывало слабые системные антительные ответы, в то время как добавление к антигену субъединицы pLTB и hLTB усиливало сывороточный антительный ответ также более чем на два порядка. Наблюдавшаяся разница между ответами у мышей, которым вводили pLTB и hLTB, была статистически не достоверной.

Пример 4
Индукция локального антительного ответа слизистых оболочек на субъединичную вакцину вируса гриппа
С целью изучения способности pLTB вызывать НА-специфичные S-IgA ответы смывы из носовой полости мышей из примера 2 анализировали на наличие специфичных в отношении вируса гриппа IgA антител. Смывы из носовой полости получали ретроградным ополаскиванием 0,5 мл ФСБ через носоглотку к верхней части трахеи, отсасыванием и сбором промывной жидкости через ноздри.

Результаты представлены на фигуре 3.

Эти данные показывают, что рекомбинантный pLTB индуцировал мощные локальные S-IgA ответы на НА. Два различных антигена субъединицы вируса гриппа показали идентичные результаты.

Пример 5
Сравнение локальных антительных ответов слизистых оболочек при использовании человеческого и свиного LTB
С целью сравнения способности pLTB и hLTB усиливать назальные НА-специфичные антительные ответы, смывы из носовой полости мышей из примера 3 отбирали, как описано выше, и анализировали на наличие НА-специфичных S-IgA антител на 21 день.

Фигура 4 показывает, что как pLTB, так и hLTB индуцировали выраженные назальные НА-специфичные антительные ответы. Помимо этого, эти ответы, полученные с pLTB и hLTB, были сравнимы по мощности, что свидетельствует о сравнимых адъювантных свойствах обеих молекул.

Пример 6
Индукция генитального антительного ответа слизистых оболочек на субъединичную вакцину вируса гриппа при и/н введении
С целью изучения способности рекомбинантного pLTB вызывать S-IgA ответы, специфичные в отношении гриппозного НА, на слизистых оболочках, которые не являлись местом введения, изучали индукцию S-IgA антител, специфичных в отношении вируса гриппа, в половых путях после и/н иммунизации мышей из примера 2. Лаваж мочеполовых путей осуществляли путем впрыскивания во влагалище и последующего изъятия 100 мкл объема ФСБ десять раз с использованием кончика пипетки. Смывы со слизистых оболочек хранили при 4^oС до исследования на содержание IgA с помощью ELISA. Результаты представлены на фигуре 5.

Эти результаты показывают, что pLTB оказался эффективным в отношении индукции S-IgA ответов в этом отдаленном участке слизистых оболочек. Как В/Харбин, так и А/Йоханнесбург антигены работали одинаково хорошо.

Пример 7
Кинетика IgG ответа
Четыре группы из восьми самок мышей Balb/c (возраст 6-8 недель) получали следующее лечение.

Контроль: получали ФСБ без антигена. 20 мкл и/н без анестезии на 0, 7 и 14 день.

pLTB: 5 мкг НА и 2,0 мкг рекомбинантного pLTB в 20 мкл и/н без анестезии на 0, 7 и 14 день.

НА п/к: 5 мкг НА в 100 мкл п/к без анестезии на 0 день.

Выздоравливающие: выздоравливающие мыши, т.е. мыши, зараженные 10⁸ инфекционных единиц вируса PR8 в 20 мкл без анестезии на 0 день.

У четырех мышей из каждой группы брали образцы крови из хвостовой вены на 6, 13 и 20 день. Далее, на 28 день, всех мышей умерщвляли и обескровливали. В каждом образце измеряли уровень сывороточных IgG с помощью ELISA.

Результаты представлены на фигуре 6. Столбики (слева направо) для каждой из схем вакцинации представляют титры IgG на 6, 13, 20 и 28 день соответственно. Эти результаты показывают, что после и/н вакцинации HA/pLTB индукция IgG по меньшей мере столь же велика, как и после п/к вакцинации только НА или как у выздоравливающих мышей.

Пример 8
Антитела слизистых оболочек носовой полости и легких
Тем же мышам, которые изучались в примере 7, осуществляли лаваж слизистых оболочек носовой полости и мочеполовых путей после умерщвления на 28 день, как описано выше.

Результаты суммированы на фигуре 8. Заштрихованные столбики представляют данные по назальным смывам, а незаштрихованные показывают данные по вагинальным смывам.

Эти результаты показывают, что титр защитных антител первой линии (S-IgA) после и/н вакцинации вакциной HA/pLTB является по меньшей мере таким же высоким, как титр S-IgA у выздоравливающих мышей, в то время как п/к вакцинация вакциной НА (классическая) не обеспечивает появления титра IgA на слизистых оболочках, который бы поддавался выявлению.

Пример 9
Защита вакцинированных мышей при пробном заражении
Четырех мышей из каждой группы примера 7 заражали на 28 день вирусом PR8 в дозе 5•10⁶ инфекционных единиц и/н в объеме 20 мкл без анестезии. Через три дня после пробного заражения определяли вирусную нагрузку в носу и легких.

Титрование вируса в гомогенатах носа и легких осуществляли на клетках MDCK, выращенных на среде EPISERF (Life Technologies, PAISLY, Scotland) на микротитрационных планшетах способом двукратных разведений и последующего конечного определения с использованием гемагглютинации с эритроцитами морской свинки.

Результаты суммированы на фигуре 7. Заштрихованные столбики представляют титры вируса в носу, а незаштрихованные столбики - в легких. Титры вируса в легких для выздоравливающих мышей и после вакцинации с pLTB были статистически незначимыми. Следовательно, эти данные показывают, что путем использования pLTB в качестве адъюванта для слизистых оболочек достигается полная защита от инфекции вируса гриппа.

Изобретение относится к медицине и касается вакцины с адъювантом LTB, содержащей по меньшей мере один корпускулярный иммуноген и адъювантное количество субъединиц В термолабильного энтеротоксина, характерного для Е. coli, при этом адъювантный LTB не содержит контаминирующих субъединиц А или голотоксина, а вакцина предназначена для введения на слизистые и может применяться как для индукции системного иммуноглобулинового ответа, так и для индукции общего иммунного ответа. Преимущество изобретения заключается в установлении того, что изолированный LTB, свободный от субъединицы А и голотоксина, обладает сильной адъювантной активностью при введении совместно с корпускулярным иммуногеном. 5 с. и 4 з.п. ф-лы, 8 ил.

1. Вакцина для введения на слизистые оболочки, содержащая по меньшей мере один корпускулярный иммуноген и адъювантное количество субъединиц В термолабильного энтеротоксина (LTB), характерного для Е. coli, совершенно не содержащего субъединиц А или токсического LT голотоксина. 2. Вакцина по п. 1, в которой LTB получают с помощью методик рекомбинантных ДНК. 3. Вакцина по пп. 1 и 2, в которой в качестве иммуногена используются вирусные, или бактериальные, или грибковые антигены. 4. Вакцина по пп. 1-3, в которой иммуноген обеспечивает иммунизацию против заболевания, которое передается инфекцией слизистых оболочек. 5. Вакцина по п. 4, в которой в качестве иммуногена используются антигены вируса гриппа. 6. Способ индукции системного иммуноглобулинового ответа на иммуноген путем введения на слизистые оболочки указанного иммуногена в корпускулярной форме и адъювантного количества субъединиц В термолабильного энтеротоксина, характерного для Е. coli, совершенно не содержащего субъединиц А или токсического LT голотоксина. 7. Способ индукции общего иммунного ответа слизистых оболочек на иммуноген путем введения на слизистые оболочки указанного иммуногена в корпускулярной форме и адъювантного количества субъединиц В термолабильного энтеротоксина, характерного для Е. coli, совершенно не содержащего субъединиц А или токсического LT голотоксина. 8. Применение субъединиц В термолабильного энтеротоксина (LTB), характерного для Е. coli, совершенно не содержащего субъединиц А или токсического LT голотоксина, в изготовлении вакцины, включающей корпускулярный иммуноген и адъювантное количество указанного LTB, подходящей для индукции системного иммуноглобулинового ответа на указанный иммуноген у индивидуума после введения на слизистые оболочки. 9. Применение субъединиц В термолабильного энтеротоксина (LTB), характерного для Е. coli, совершенно не содержащего субъединиц А или токсического LT голотоксина, в изготовлении вакцины, включающей корпускулярный иммуноген и адъювантное количество указанного LTB, подходящей для индукции общего иммунного ответа слизистых оболочек на указанный иммуноген у индивидуума после локального введения на слизистые оболочки.