ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И ПРОТИВОДИАБЕТИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО НА ЕЕ ОСНОВЕ Российский патент 2003 года по МПК A61K35/32 A61K38/28 A61P3/10 

Настоящее изобретение относится к фармакологии, медицине, в частности к эндокринологии, и касается фармацевтических композиций для профилактики и лечения сахарного диабета I и II типа.

В медицинской практике известно использование большого числа фармацевтических препаратов, используемых в качестве противодиабетических средств. К таким средствам относится ряд препаратов инсулина, получаемых из поджелудочных желез крупного рогатого скота и свиней (инсулин, суинсулин и т.д.), а также синтетические лекарственные средства, не обладающие гормональной активностью, а либо стимулирующие выработку инсулина, либо препятствующие его разрушению (Машковский М.Д. Лекарственные препараты. В 2-х томах, 11-е изд. стер., М., Медицина, 1988, 576 с.).

Недостатком известных препаратов является высокая их токсичность, многочисленные негативные побочные эффекты и противопоказания.

Известны биологически-активные добавки к пище, предназначенные для непосредственного приема с пищей с целью обогащения рациона биологически-активными веществами или их комплексом при различных заболеваниях. Одной из таких пищевых добавок является, например, топинамбур (ТУ 9741-002-11866470-94), рекомендуемый для использования при заболевании сахарным диабетом и представляющий собой концентрат натурального биологически активного вещества, полученного при переработке корней растительного сырья - топинамбура, в корнях которого содержится инулин - растительное вещество, обладающее сахароснижающим действием. Однако топинамбур оказывает сахаропонижающий эффект при диабете II типа, но в случае инсулинозависимой формы такие пищевые добавки неэффективны, так как в последней ситуации у больных своего инсулина нет и его приходится вводить извне.

Известен порошкообразный биогенный препарат из окостенелых рогов оленя (RU, А, 2077887), который содержит комплекс биологически активных компонентов аминокислот, пептидов, липидов углеводов, стероидных гормонов, жирных кислот, фосфоорганических содинений, йод, а также большое число микро- и макроэлементов (калий, кальций, железо, магний, цинк, медь, марганец, никель, олово, хром, литий, барий и др.) Благодаря оригинальной композиции ингридиентов порошка достигается многообразие воздействия на организм человека, обеспечивающее повышение адаптогенных ресурсов, нормализующее метаболический эффект, включающий коррекцию липидного, белкового и углеводного обмена, регуляцию окислительно-восстановительных процессов, процессов кроветворения, повышения иммунобиологических и защитных сил организма, стимуляцию роста и развития костно-мышечной ткани, выведение из организма тяжелых металлов, токсинов и др.

Данный биогенный препарат с сохраненной природной активностью исходного продукта обладает широким спектром фармакологического действия, который до конца не изучен. Это не позволяло использовать его в качестве противодиабетического средства.

Задача, решаемая настоящим изобретением, заключается в использовании известного препарата из окостенелых рогов оленя по новому назначению в качестве средства для лечения и профилактики диабета за счет выявления у него гипогликемического действия.

Поставленная задача решается тем, что фармацевтическая композиция, представляющая собой порошок из окостенелых оленьих рогов, содержит инсулин в количестве 0,5 нг и инсулиноподобный фактор роста-I в количестве 18 нг на 1 грамм сухой исходной композиции. Благодаря этому стало возможным применение данной фармацевтической композиции в качестве противодиабетического средства.

Содержание инсулина и инсулиноподобного фактора роста-I (ИФР-I) было выявлено методом ионообменной хроматографии с достаточно высокой степенью очистки.

Порошок препарата из окостенелых рогов оленя в количестве 180 г экстрагировали в 20-и объемах раствора солянокислого этанола при встряхивании в течение 4-х часов. Полученную суспензию центрифугировали с получением супернатанта, который после подведения рН до 2,3 сохраняли при +4^oС.

Полученный супернатант наносили на колонку, заполненную сульфокатионитом в Н⁴" форме. Последующие тапы очистки состояли из обезжиривания комплекса белок-катионит 70% этанолом, отмывки от балластных белков (0,5 М раствор уксуснокислого аммония), элюции инсулина (0,2 N раствор аммонийного буфера). Контроль состава элюатов осуществляли на спектрофотометре при длине волны 280 нм. Белковый пик, обнаруживаемый в тех же условиях, что и стандартный инсулин, собирали и после приведения к рН 2,3 проводили его первую, а после лиофилизации элюатов - вторую рехроматографии. Три последовательные процедуры ионнообменной хроматографии позволили получить (измеренной при 280 нм) раствор элюата с максимальной концентрацией белка 0,66 мг/мл.

После двух последних хроматографических процедур в элюатах осуществляли изоэлектрическое осаждение. Сопутствующие инсулиновой субстанции балластные белки осаждали ступенчатым приведением рН раствора до 2,0 и после добавления ацетона (20% от объема раствора) - до 4,0. Смеси давали стоять при комнатной температуре в течение 1 часа, после чего оставляли на ночь при +4^oС. Затем раствор центрифугировали, осадок отбрасывали.

В процессе осаждения комплексов цинк-ИПП к супернатанту добавляли 10%-ный раствор ацетата цинка (2% к объему), и доводили рН до 5,95. Раствор оставляли при комнатной температуре в течение часа, затем помещали на 72 часа в холодильник. Осадок отделяли центрифугированием.

Выделенный пептидный материал тестировали радиолигандным методом в двух специфических радиорецепторных системах - по способности связываться с рецептором инсулина и рецептором ИФР-I. Каждая из систем включала меченый гормон, плазматические мембраны тканей и стандартные немеченые гормоны. Свиной кристаллический инсулин и ИФР-I человека метили ¹²⁵NaI (Фирма "Изотоп") хлораминовым методом. Удельная активность ¹²⁵I-инсулина и ¹²⁵I-ИФР-I составила 160-180 мкю/мг в обоих препаратах.

Для тест-системы инсулина использовали плазматические мембраны печени крыс, выделенные по методу Невилла (в градиенте сахарозы 42,3%, со степенью обогащения мембран рецепторами в 15-20 раз). В тест-системе ИФР-I использовали плазматические мембраны мозга крыс, имеющие повышенное содержание рецепторов этого гормона (фракция 20000 g с уровнем специфического связывания ¹²⁵I-ИФР-I не менее 10%).

Таким образом, предлагаемая композиция содержит компоненты, составляющие определенным образом сбалансированную инсулинкомпетентную систему. Этим и объясняется инсулиновая активность композиции, благодаря которой стало возможным ее использование по новому назначению - для профилактики и лечения диабета I и II типа.

Изучение переносимости и терапевтической эффективности порошка проведено при лечении больных сахарным диабетом II типа легкой и средней степени тяжести с сопутствующим ожирением.

Под наблюдением находилось 40 больных сахарным диабетом II типа легкой и средней степени тяжести. В контрольной группе было 20 больных, получающих базовую терапию. Возраст больных - от 16 до 65 лет, все больные имели легкую или среднюю степень тяжести сахарного диабета II типа. Исключение составляли больные с острыми или с обострениями хронических заболеваний.

Больным сахарным диабетом II типа легкой степени тяжести предлагаемая композиция назначалась по 400 мг (1 порошок) в день, при средней степени тяжести - по 800 мг (2 порошка). Порошок добавляли в блюда во время первого завтрака и в ужин. Продолжительность клинических испытаний составляла 21 день.

Все больные получали традиционный курс лечения, включавший редуцированную по калорийности диету (степень редукции варьировали в зависимости от степени тяжести заболевания от 1200 ккал до 1500 ккал в сутки), лечебную физкультуру, гидро- и физиопроцедуры.

Все больные имели верифицированный диагноз сахарного диабета II типа легкой или средней степени тяжести в течение 1-8 лет.

При лечении анализировались показатели: сахар крови, ХС, ТГ, общий белок, мочевая кислота, билирубин, ACT, АЛТ, протромбин, фибриноген, время фибринолиза, Na, К, Са, Мg, Fe, Zn, Сu. Так как диагноз больных был верифицирован, нагрузочная проба с глюкозой не проводилась.

Клинические испытания выполнялись на следующих группах больных:
1. Больные опытной группы с сахарным диабетом II типа средней степени тяжести - 20 человек (8 мужчин и 12 женщин) в возрасте от 36 до 65 лет, индекс Кегле - от 28 до 42,2 кг/м².

2. Больные опытной группы с сахарным диабетом II типа легкой степени тяжести - 20 человек (9 мужчин и 11 женщин) в возрасте от 36 до 60 лет, индекс Кегле - от 32 до 42 кг/м².

3. Контрольная группа больных с сахарным диабетом легкой и средней степени тяжести, получавшие базовую терапию без включения предлагаемой композиции, - 20 человек была аналогична опытной по половозрастному составу и клинической симптоматике (8 мужчин и 14 женщин в возрасте от 32 до 63 лет), индекс Кегле - от 32,1 до 43,7 кг/м².

У больных всех групп нарушения углеводного обмена наблюдались на фоне ожирения I-III степени. Из других сопутствующих заболеваний констатированы: артериальная гипертония (70% в опытной группе и 65% в контрольной), деформирующий полиостеоартроз и остеохондроз позвоночника (76 и 72% соответственно), хронический холецистит в стадии ремиссии (30 и 35%), дискинезия толстой кишки по гипомоторному типу с синдромом запоров (70 и 75%).

Как видно из табл.2, у больных сахарным диабетом средней тяжести отмечался достаточно высокий уровень гликемии. Анализ динамики показателей углеводного обмена свидетельствует о значительном снижении уровня глюкозы у больных опытной группы (на 20% у больных с диабетом средней тяжести и на 12% при легкой форме этого заболевания), в контрольной группе этот показатель снижался только на 6%. Уровень холестерина крови уменьшался у больных опытной группы с сахарным диабетом средней и легкой степени тяжести соответственно на 19 и 13%, а у больных контрольной группы - на 15%.

При анализе состояния минерального обмена у больных опытной группы в процессе лечения предлагаемой композицией отмечалось повышение уровня Са в сыворотке крови на 10% по сравнению с исходным, что обусловлено высоким содержанием этого элемента в композиции.

Терапевтический эффект проведенного лечения всех сравниваемых групп оценивался как хороший при снижении уровня гликемии до нормальных значений, удовлетворительный - если снижение уровня сахара крови было достаточно выраженным, но все же несколько превышало нормальные показатели, и неудовлетворительным - если изменения показателя не произошло. Как видно из табл.3, применение композиции из окостенелых рогов оленя при лечении больных сахарным диабетом II типа, протекающего на фоне ожирения, позволило добиться нормализации показателей углеводного обмена у 65% больных, против 30% в группе контроля.

Органолептические свойства препарата полностью удовлетворяли больных, которые отмечали его нейтральный вкус, удовлетворительный внешний вид, консистенцию и цвет.

За весь период клинических испытаний не было отмечено ни одного случая непереносимости препарата, аллергических реакций и других побочных явлений.

Эффективной терапевтической дозой предлагаемой фармацевтической композиции является 400 мг в день (1 порошок) при сахарном диабете II типа легкой степени тяжести и 800 мг (2 порошка) - при средней тяжести этого заболевания.

Кроме того, были получены позитивные результаты при изучении эффективности данного препарата на клинические проявления деструктивного туберкулеза легких у больных, страдающих также сахарным диабетом II типа легкой и средней степени тяжести.

Установлено, что в 1-й группе больных деструктивным туберкулезом легких в сочетании с сахарным диабетом II типа, получавших данный препарат на фоне комбинированной химиотерапии, у 6 из 10 удалось снизить уровень гликемии до нормального значения. В то время как во 2-ой группе, получавшей только химиотерапию, - у 3 из 10 пациентов.

Для больных туберкулезом легких в сочетании с сахарным диабетом II типа купирование клинических проявлений сахарного диабета является необходимым условием для лечения основного заболевания. Поэтому гипогликемический эффект предлагаемого препарата у данной категории больных позволяет повысить эффективность химиотерапии этой тяжелой категории пациентов.

Достоверно отмечено, что при применении данного препарата у больных сахарным диабетом I типа (инсулинзависимым) в дозировке 400-800 мг в сутки наблюдалось снижение сахара в крови, что позволило больным уменьшить дозу вводимого инсулина.

Эффективность применения предлагаемой композиции подтверждается также нижеприведенными примерами.

1. Больная П. 68 л. Больна сахарным диабетом II типа средней тяжести. До лечения препаратом сахар в крови натощак - 16,2 ммоль/л. Провела курс лечения в течение одного месяца по 0,8 г (2 капсулы по 0,4 г) один раз в день. После приема сахар в крови натощак - 6,48 ммоль/л. Одновременно снизились вторичные признаки диабета: отсутствие жажды, нормализация сна, уменьшение кожного зуда, снижение аппетита.

2. Больная К. 8 лет страдает сахарным диабетом II типа. Сахар в крови после принятия препарата в течение двух месяцев по 2 капсулы снизился с 16 ммоль/л до 7 ммоль/л.

3. Больная И. 41 г. Больна сахарным диабетом II типа средней тяжести. До принятия препарата - сахар в крови натощак - 20 ммоль/л, давление - 170/110. После двух недель применения препарата по 2 капсулы в день сахар снизился на 9 ед., давление нормализовалось - 130/90.

Кроме того, были проведены клинические исследования по выявлению влияния препарата на уровень глюкозы крови у здоровых людей. Было выявлено, что препарат не оказывает гипогликемического действия при применении его здоровыми людьми.

Таким образом, результаты биохимических и клинических исследований свидетельствуют о выраженной инсулиновой активности фармацевтической композиции из окостенелых рогов оленя, благодаря чему она оказывает профилактическое и терапевтическое действие при сахарном диабете. Кроме того, препарат можно с успехом применять для лечения и профилактики возможных осложнений основного заболевания (сахарного диабета): ангиопатий, включающих в себя различные трофические нарушения), ретинопатий, различных нервно-мышечных патологий. Это обусловлено богатым элементным составом препарата, который позволяет нормализовать белковый, липидный и углеводный обмен, улучшить реологические свойства крови, позитивно повлиять на состояние сосудистого русла, улучшить качество нервно-мышечной передачи, восполнить недостаток минералов.

Изобретение относится к фармакологии, медицине, а именно к эндокринологии, и касается фармацевтических композиций для профилактики и лечения сахарного диабета I и II типа. Фармацевтическая композиция антидиабетического действия характеризуется тем, что она представляет собой порошок, выделенный из окостенелых оленьих рогов, содержащий инсулин в количестве 0,5 нг и инсулиноподобный фактор роста-1 в количестве 18 нг на 1 г композиции. Технический результат: препарат обеспечивает выраженную инсулиновую активность, оказывает профилактическое и терапевтическое действие при сахарном диабете и применим для лечения и профилактики его осложнений, нормализуя белковый, липидный и углеводный обмен. 3 табл.

Фармацевтическая композиция антидиабетического действия, характеризующаяся тем, что она представляет собой порошок, выделенный из окостенелых оленьих рогов содержащий инсулин в количестве 0,5 нг и инсулиноподобный фактор роста-1 в количестве 18 нг на 1 г композиции.