СМЕСЬ ИЗОМЕРОВ 2-МОНОЭТАНОЛАМИНО-5(6)-НИТРО-1-(ТИЕТАНИЛ-3)БЕНЗИМИДАЗОЛА Российский патент 2003 года по МПК C07D409/04 A61K31/38 A61P29/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, и может быть использовано для получения новых противовоспалительных средств.

Технический результат - расширение арсенала биологически активных веществ, в том числе обладающих противовоспалительной активностью.

Сущность изобретения: смесь изомеров 2-моноэтаноламино-5(6)-нитро-1-(тиетанил-3)бензимидазола в мольном соотношении 1:3 общей формулы

проявляющая противовоспалительную активность.

В качестве препарата сравнения взят эталонный синтетический нестероидный противовоспалительный препарат диклофенак натрия (2-[(2,6-дихлорфенил)амино] бензолуксусной кислоты натриевая соль), противовоспалительная активность которого описана в многочисленных оригинальных и обзорных работах (Шварц Г. Я. Успехи в изучении механизмов действия и создании новых нестероидных противовоспалительных препаратов (обзор). Хим. -фарм.-журнал, 1980, т.14, вып. 9, с. 22-41; Саратиков А.С., Прищеп Т.П. Современная концепция антифлогистического действия нестероидных противовоспалительных средств (обзор). - Фармакол. и токсикол., 1982, т.45, вып. 2, с.133-138; Шварц Г.Я., Сюбаев P. Д. Cooтношение антиэкссудативного, анальгетического и жаропонижающего компонентов в действии нестероидных противовоспалительных препаратов. - Фармакол. и токсикол., 1982, т.45, вып. 1, с.46-49).

Заявляемое соединение синтезируют следующим образом.

Взаимодействием 5(6)-нитро-2-хлорбензимидазола с эпитиохлоргидрином в щелочной среде получают 5(6)-нитро-1-(тиетанил-3)-2-хлорбензимидазол, который при кипячении в среде ацетона с моноэтаноламином превращают в 2-моноэтаноламино-5(6)-нитро-1-(тиетанил-3)бензимидазол.

Пример 1. Синтез заявляемого соединения
5(6)-Нитро-2-хлорбензимидазол 9,88 г (50 ммоль) растворяют в 22 мл 10% раствора гидроксида натрия. К раствору при температуре 30-35^oС добавляют 6,0 г (55 ммоль) эпитиохлоргидрина и перемешивают 1 час. Кристаллический осадок отфильтровывают, промывают диэтиловым эфиром, водой, сушат при 60^oС. Получают 2,29 г (85%) смеси изомеров 5(6)-нитро-1-(тиетанил-3)-2-хлорбензимидазола, очищают кристаллизацией из смеси этанол-вода (1:1).

ИК-спектр, ν_max, см^-1: 750 и 845 (C-NO₂), 1350 и 1522 (NO₂), 1470 (C=N)
Спектр ЯМР ¹Н (CDC1₃), δ, м.д.:
3,6-3,7 м (2Н, S(СН)₂)
4,12-4,23 м (2Н, S(СН)₂)
5,9-6,1 м (1H, NCH)
7,7-8,7 м (3Н, Н аром.)
Элементный анализ.

Найдено, %: С 44,15, Н 3,3, N 13,85, S 12,04 - C₁₀H₈N₃ClO₂S
Вычислено, %: С 44,52, Н 2,96, N 15,58, S 11,80
Спектр ЯМР ¹³С 5(6)-нитро-1-(тиетанил-3)-2-хлорбензимидазола (СОСl₃), δ, м.д.:
5-нитро-1-(тиетанил-3)-2-хлорбензимидазол: 32,57 (С¹¹, С¹²); 51,73 (С¹⁰); 110,40 (С⁷); 116,40 (С⁴); 119,30 (С⁶); 132,83 (С⁸); 141,30 (С²); 144,0 (С⁹); 144,20 (С⁵).

6-Hитро-1-(тиетанил-3)-2-хлорбензимидазол: 32,77 (С¹¹, С¹²): 51,81 (С¹⁰); 107,10 (С⁷); 119,0 (С⁵); 120,2 (С⁴); 137,65 (С⁹); 141,30 (С²); 143,90 (С⁸); 146,10 (С⁶).

Количественный состав обоих изомеров определен путем сравнения интегральных интенсивностей сигналов соответствующих атомов углерода 6-нитро-1-(тиетанил-3)-2-хлорбензимидазола и 5-нитро-1-(тиетанил-3)-2-хлорбензимидазола в мольном соотношении 3:1.

К раствору 2,70 г (10 ммоль) 5(6)-нитро-1-(тиетанил-3)-2-хлорбензимидазола в 50 мл ацетона добавляют 3,06 г (50 ммоль) моноэтаноламина и кипятят в течение 4 часов. Раствор фильтруют в горячем виде, фильтрат упаривают до 1/4 начального объема, охлаждают до 0-5^oС. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают водой, сушат. Получают 0,88 г (30%) смеси изомеров 2-моноэтаноламино-5(6)-нитро-1-(тиетанил-3)бензимидазола, очищают кристаллизацией из диоксана.

Элементный анализ.

Найдено, %: С 49,2, Н 4,7, N 19,2, S 10,7 - C₁₂H₁₄N₄O₃S
Вычислено, %: С 49,0, Н 4,8, N 19,0, S 10,9
Спектр ЯМР ¹Н (DMFA-d7), δ, м.д.:
3,55-3,65 м (4Н, (СН₂)₂)
3,7-3,85 м (2Н, S(CH)₂)
4,2-4,35 м (2Н, S(СН)₂)
5,15-5,25 м (NН и ОН)
7,8-8,6 м (3Н, Н аром.)
Спектр ЯМР ¹³С 2-моноэтаноламино-5(6)-нитро-1-(тиетанил-3)-бензимидазола (DMFA-d7), δ, м.д.:
2-моноэтаноламино-5-нитро-1 -(тиетанил-3)-бензимидазол:
33,05 (С¹¹, С¹²); 50,90 (С¹⁰); 52,80 (С₁₃); 60,50 (С₁₄); 112,60 (C₇); 115,80 (С₄); 119,30 (С₆); 135,20 (C₈); 138,20 (С₅); 141,80 (С₉); 147,50 (С₂).

2-моноэтаноламино-6-нитро-1-(тиетанил-3)-бензимидазол:
33,10 (С¹¹, С¹²); 50,90 (С¹⁰); 52,80 (C₁₃); 60,50 (С₁₄); 108,50 (С₇); 119,10 (С₅); 120,20 (С₄); 134,20 (С⁸); 139,90 (С₉); 144,20 (С⁶); 147,50 (С₂).

При сравнении интегральных интенcивностей сигналов соответствующих атомов углерода 2-моноэтаноламино-6-нитро-1-(тиетанил-3)-2-хлорбензимидазола и 2-моноэтаноламино-5-нитро-1-(тиетанил-3)-2-хлорбензимидазола подтверждено мольное соотношение изомеров 3:1.

Заявляемое соединение представляет собой желтый кристаллический порошок, растворимый в диметилсульфоксиде, диметилформамиде, горячем диоксане.

Пример 2. Острая токсичность заявляемого соединения
Острую токсичность определяли при внутрижелудочном и внутрибрюшинном введении неинбредным мыщам-самцам по методу Litchfield J. и Wilcoxon F. в модификации Рота (Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. - Л.: Медгиз, 1963). Выживаемость животных наблюдали в течение 14 суток. Результаты приведены в таблице 1.

Как видно из таблицы 1, заявляемое соединение при введении в желудок относится к 3 классу опасности - умеренно опасные (Н.Ф.Измеров, И.В.Саноцкий, К. К.Сидоров Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии (справочник) // М. - Медицина. - 1977). Вещество при внутрибрюшинном введении является малотоксичным (Сидоров К.К. Токсикология новых промышленных химических веществ. // Вып. 13. - Л. - Медицина. - 1973. - С. 47-51).

Пример 3. Противовоспалительная активность
Противовоспалительную активность изучали на моделях каррагениннового воспаления лапок мышей и крыс.

Мыши получали внутрь исследуемое соединение в дозе 1/10 от LD₅₀. Далее у животных вызывали воспаление лапок субплантарным введением 0,1 мл 1% суспензии каррагенина. Через сутки после введения животных забивали в камере с диэтиловым эфиром, в дальнейшем "воспаленные" и "здоровые" лапки отрезались на уровне коленного сустава и взвешивались. О противовоспалительной активности судили по разнице веса "воспаленной" и "здоровой" лапок.

Сравнение противовоспалительного действия исследуемых соединений проводили с таковым эффектом диклофенака натрия в дозе ED₅₀ (10 мг/кг).

Результаты эксперимента представлены в таблице 2.

Как видно из таблицы 2, соединение оказывает статистически достоверное уменьшение воспаления по сравнению с эталонным препаратом диклофенаком натрия (P<0,001).

Противовоспалительное действие изучалось на модели каррагенинового воспаления лапок крыс в динамике. Объем лапок определяли онкометрически при помощи прибора "Эпитест".

Предварительно определялся исходный объем лапок, затем животные получали соединение в дозе 1/10 от LD₅₀ внутрь. Препаратом сравнения также служил диклофенак натрия в дозе ED₅₀ (10 мг/кг). Затем субплантарно вводили 0,1 мл 1% раствора каррагенина. Далее определялся объем лапок через 1, 3, 6, 12, 24, 48 и 72 часа.

Результаты исследования представлены в таблице 3.

Как видно из таблицы 3, начиная с 12 часа эксперимента отмечалось статистически достоверное угнетение воспаления по сравнению с контролем (P<0,02). На 48-й час наблюдения у животных, получавших 2-моноэтаноламино-5(6)-нитро-1-(тиенанил-3)бензимидазол, отмечалось полное исчезновение отека, в то время как в контроле и в группе животных, получавших диклофенак натрия, отек был значительным.

В третьей серии опытов изучали влияние на экссудативную и пролиферативную фазы воспаления по Селье на модели имплантации стерильных ватных тампонов (m= 50 мг) в подкожную клетчатку крыс (I.P. Giroud et al., 1973). Затем животные в течение 7 дней получали перорально суспензии исследуемых соединений в дозировке 1/10 от LD₅₀, группа животных получала диклофенак натрия в дозе ED₅₀ (10 мг/кг).

О влиянии препаратов на экссудативную фазу воспаления судили по весу экссудата, который определяли по различные веса между "влажными" и "высушенными" тампонами.

О влиянии соединений на пролиферативную фазу воспаления судили по разнице веса "высушенных" ватных тампонов и начальным весом тампона (50 мг). Результаты опытов представлены в таблице 4.

Как видно из таблицы 4, соединение статистически достоверно уменьшает вес экссудата (P<0,002), а также значительно активнее диклофенака натрия подавляет пролиферативную стадию воспаления (P<0,001).

Представленное химическое соединение обладает большей противовоспалительной активностью, чем диклофенак натрия при сходных показателях токсичности.

Изобретение относится к новым соединениям - смеси изомеров 2-моноэтаноламино-5(6)-нитро-1-(тиетанил-3)бензимидазола формулы I. Изомеры присутствуют в мольном соотношении 1:3 и проявляют противовоспалительную активность. Изобретение может быть использовано для получения новых противовоспалительных средств. 1 з.п. ф-лы, 4 табл.

1. Смесь изомеров 2-моноэтаноламино-5(6)-нитро-1-(тиетанил-3)-бензимидазола в мольном соотношении 1: 3 общей формулы

2. Смесь изомеров по п. 1, обладающая противовоспалительной активностью.