СПОСОБ ПОДБОРА ИММУНОКОРРЕКТОРА И ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ИММУНОТЕРАПИИ ПРИ УРОГЕНИТАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЯХ Российский патент 2003 года по МПК G01N33/52 

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматовенерологии, и может найти свое применение для оптимизации лечения больных с инфекциями, преимущественно передаваемыми половым путем.

На сегодняшний день не вызывает сомнения, что важным фактором, способным оказать влияние на развитие инфекционного заболевания, в частности инфекции, передаваемые половым путем, является состояние восприимчивости организма, зависящее от иммунной структуры населения [1, 2, 3, 4, 5, 6].

Нарушение иммунной системы организма является одним из существенных факторов патогенеза инфекций, преимущественно передаваемых половым путем, оказывая влияние на основные клинические проявления болезни, определяя полиморфизм клинических симптомов одного и того же заболевания у разных больных [2, 4, 6, 7]. Кроме того, изменения, происходящие в иммунной системе макроорганизма в результате реализации воспалительного процесса, вызываемого урогенитальной инфекцией, нередко являются причиной нетипичного течения, а так же частых осложнений ИППП [7, 8, 9]. Но главная проблема для практического врача - это сложности терапии как классических ИППП, а особенно вызванных условно патогенными микроорганизмами и их ассоциациями.

Известно, что при гонококковой инфекции имеет место как гуморальные, так и клеточные реакции, но не развивается иммунитет защитный, способный предотвратить реинфекцию [10]. Между тем кроме реинфекции возможна и суперинфекция при сохранении гонококков в организме. Однако отрицать полностью защитную роль иммунитета при гонорее, по мнению исследователей, нельзя. Для гонореи характерным является незавершенная фагоцитарная реакция (эндоцитобиоз), при которой микроорганизмы находят благоприятные условия для внутриклеточной персистенции [11]. В результате многочисленных исследований также определено, что ассоциация гонококков с другими патогенными и условно-патогенными микроорганизмами приводит к усилению повреждающего воздействия на лейкоциты [10, 12]. Так же отмечено нарушение фагоцитарной активности лейкоцитов крови. Аналогичные изменения описаны авторами и при изучении местного иммунитета в материале из соскоба со слизистой уретры и эякуляте у пациентов с различными осложнениями урогенитальных инфекций [4, 6, 8]. Микоплазмы поражают не только эпителиальные клетки слизистых оболочек, но и вызывают повреждение нейтрофилов и макрофагов, пагубно влияя на активность фагоцитоза в воспалительном процессе [13, 14]. Исследования многих авторов свидетельствуют о том, что фагоцитарная система у больных хламидиозом функционирует неэффективно [7, 8, 9]. Так, у них установлено снижение переваривающей функции полиморфных нуклеаров периферической крови, выявлены клетки-микробные мишени - показатели внутриклеточного персистирования хламидий и сопутствующей бактериальной микрофлоры. Хламидии персистируют не только в мембраноограниченных зонах эпителиальных клеток и влагалищных трихомонад, но и в профессиональных фагоцитах (нейтрофилах и макрофагах). Такая устойчивость хламидий к фагоцитозу может свидетельствовать как о мощных механизмах подавления ими фагоцитарной системы, так и об изначальной несостоятельности ее у больных [15, 16, 17].

Таким образом, недостаточность фагоцитоза является одним из ведущих патогенетических механизмов, способствующих развитию ИППП, длительному их сохранению в организме хозяина. С этим, в частности, связывают упорное течение уретритов, вульвовагинитов и цервицитов, а также образование ассоциированной урогенитальной инфекции, которая трудно поддается традиционной терапии.

В этой связи, разработка методов терапии заболеваний урогенитального тракта с учетом состояния иммунной системы и прогнозирование эффективности этой терапии является одной из актуальных проблем венерологии.

Известен способ подбора иммунокоррегирующих препаратов in vitro, включающий определение поверхностных маркеров на клетках: Е-розеткообразование (Е-РОК). Для определения чувствительности лимфоцитов к иммунокорректорам ставят реакцию Е-РОК по методике M.F. Mendes и соавт. (1973) в описании А.В. Караулова с соавт. (1999).

Однако этот метод позволяет оценить изменение функциональной активности лимфоцитов, а именно, их Т-клеточной популяции. Тогда как иммунологический механизм защиты при ИППП основан преимущественно на фагоцитарных реакциях. Кроме того, методика достаточно трудоемка, длительна в исполнении и оценка результатов весьма субъективна. Известно также, что при клинических лабораторных исследованиях функциональную активность нейтрофилов оценивают с помощью реакции безсубстратного восстановления нитросинего тетразолия (НСТ) [5] . Данная реакция отражает активность кислородозависимой интралейкоцитарной микробицидной активности лейкоцитов и используется для оценки степени тяжести гнойно-септических заболеваний в акушерско-гинекологической и урологической практике. Однако для прогнозирования эффективности выбранного курса иммунотропной терапии эта реакция не использовалась.

НСТ-тест основан на поглощении красителя нитросинего тетразолия форменными элементами крови с дальнейшим восстановлением его под влиянием активных форм кислорода внутри клетки и на ее мембране в виде нерастворимого диформазана темно-синего цвета. Для оценки используют световую микроскопию, посчитывают процент нейтрофилов, содержащих диформазан. НСТ-тест ставят в двух вариантах: спонтанном и индуцированном (с продигиозаном), количество выпавшего диформазана служит критерием интенсивности реакции. Спонтанный НСТ-тест отражает степень функционального раздражения нейтрофилов in vivo, являясь своеобразным зеркалом гомеостаза. Индуцированный НСТ-тест характеризует потенциальную способность нейтрофилов ответить "респираторным взрывом" на адекватное раздражение. Отношение показателей индуцированного НСТ к спонтанному НСТ-тест рассматривают как биохимический критерий готовности нейтрофила к завершенному фагоцитозу и называют функциональным резервом. Стандартный способ выполнения методики НСТ-теста достаточно трудоемок, длителен, требует навыков микроскопирования и не лишен субъективности. Для его выполнения затрачивается два часа тридцать минут времени. Можно учитывать результаты НСТ-теста на спектрофотометре (Разник С.Д., 1999), однако этот тест использован автором для оценки механизмов действия термостабильного токсина псевдотуберкулезного микроба.

Задача изобретения: разработать достоверный способ подбора иммунокоррегирующего прапарата и прогноза эффективности иммунотерапии, способствующей быстрой эррадикации возбудителя и выздоровлению. Поставленная задача реализуется выполнением спонтанного и индуцированного НСТ-теста, причем в индуцированном тесте используют иммунотропные средства разных групп, учет реакции проводят на спектрофотометре, определяя показатели оптической плотности контрольной и всех опытных групп рассчитывают индекс чувствительности для каждого препарата и по индексу, равному или превышающему 1,3, прогнозируют эффективную иммунотерапию, а для лечения выбирают препарат с максимальным индексом чувствительности. Индуцированный НСТ-тест позволяет косвенно судить о стимулирующем действии лекарственных препаратов на клетки фагоцитирующего звена посредством оценки резервов функционально-метаболической активности фагоцитирующих клеток. Метод основан на определении количества формазана, образующегося в цитоплазме клеток после их инкубации с НСТ и с растворами лекарственных препаратов в концентрациях, близких к физиологическим.

Постановку реакции осуществляют по общепринятой методике, однако в опытные пробы добавляют по 0,1 мл иммунотропных средств разных групп (ликопид, имунофан, лейкинферон, миелопид). Во все пробирки добавяют по 0,1 мл взвеси клеток и по 0,1 мл 0,2% НСТ. Инкубируют, центрифугируют и проводят оценку результатов на спектрофотометре. Определяют индекс чувствительности каждого препарата, разделив результат опытной пробы конкретным препаратом на контрольную.

Полученный индекс прогнозирует эффективность иммунотерапии. Положительным считается показатель, превышающий или равный 1,3 ед. Для лечения пациента назначают препарат с максимальным индексом чувствительности. Например, при подборе иммунокорректора пациенту М., индекс чувствительности к лейкинферону - 1,89; ликопиду - 1,64; имунофану - 1,32, ридостину - 1,2, в данном случае препаратом выбора является лейкинферон, хотя эффективно будет лечение любым препаратом с индексом, равным или превышающим показатель 1,3.

На основании данных, приведенных в таблице (см. в конце описания), можно сделать вывод, что применение НСТ-теста определяет излеченность в 94% при моноурогенитальной инфекции и 78% при сочетанных ИППП, в то время как без использования индуцированного НСТ-теста процент излеченности только 32% и 26% (соответственно), а при подборе иммунокорректора в тесте Е-РОК только 54% и 38% (соответственно). Та же тенденция сохраняется и в показателе процента рецидивов при использовании НСТ-теста только 6% рецидивов, при моноинфекции, по сравнению с 68% - без иммунотерапии и 46% - при выборе в тесте Е-РОК.

Пример. Больной М., 1964 года рождения, история болезни 1245/2000, поступил в КВД г. Владивостока. Пациент обследован согласно формуляру МЗ РФ обследования пациентов с ИППП. Диагноз: острый трихомонадный уретрит, осложненный хламидийной и кандидозной (Candida albicans) урогенитальной инфекцией. Было проведено поэтапное комплексное этиотропное лечение, включающее: противопротозойный препарат, антибактериальное средство, иммунотропный препарат и традиционную местную терапию. После проведенного амбулаторного лечения пациент повторно обследован через 21 день. Жалобы на незначительный дискомфорт в уретре, болезненность во время полового акта, утренний, белый налет на головке полового члена. При повторном обследовании идентифицирована Chlamidia trachomatis. Диагноз: хронический хламидийный уретрит, обострение хронического простатита. Проведено лечение, включающее: антибактериальный препарат, противовоспалительная терапия, иммунотропная терапия и традиционный местный и физиотерапевтический комплекс. Двухкратное, контрольное лабораторное обследование не идентифицировало микроорганизм, вызывающий заболевание, пациент был выписан. Через 2 месяца вновь обратился с перечисленными жалобами. Во время обследования чувствительность к антибактериальным препаратам - умеренная, снижены показатели фагоцитоза, спонтанный НСТ-тест ниже 1,2 ед., что определяет нецелесообразность назначения антибактериальной терапии. Было принято решение провести подбор иммунотропного средства предлагаемым нами способом. Был получен результат (ликопид - 1,34; имунофан - 1,42; ридостин - 1,78; лейкинферон - 1,81), препаратом выбора является препарат - лейкинферон. Ввиду отсутствия препарата с максимальным индексом чувствительности, на момент лечения, в аптечной сети г.Владивостока, иммунокоррегирующая терапия была проведена препаратом ридостин. В результате спрогнозированной иммунотерапии, повторно проведенный курс лечения с трехкратным контрольным обследованием и клиническим контролем в течение 6 месяцев позволил снять обсуждаемый диагноз.

На постановку всей реакции, и ее учет затрачивают один час тридцать минут. Что обеспечивает реальную экономию, одного часа времени работы врача-лаборанта и исключает субъективный фактор в оценке цитохимической реакции.

Таким образом, предлагаемый нами способ подбора иммунокорректора и прогнозирования иммунокоррегирующей терапии позволяет в более короткие сроки, с реальной экономией времени, независимо от индивидуальной подготовки врача-лаборанта, достоверно провести расчет индекса чувствительности и осуществить подбор иммунокоррегирующего препарата, учитывая реактивность клеток, имеющих важную защитную роль, при урогенитальных инфекциях. Подбор иммунокорректора с использованием НСТ-теста позволяет выбрать патогенетически обоснованную терапию для пациента.

Литература
1. Аковбян В.А., Резайкина А.В., Тихонова Л.И. Характеристика эпидесиологических закономерностей, определяющих распространение заболеваний, передаваемых половым путем в России.//Вестник дерматологии и венерологии. - 1998. - 1. - С. 4-6.

2. Мальцева Л. И., Андрушко И.А. и др. Патогенетическая роль нарушений системы гемостаза при урогенитальной инфекции у женщин.//Архив патологии. - 1995. - 5. - С. 118-122.

3. Евсиков О.Н., Сухова Л.П. Состояние иммунитета у больных некоторыми заболеваниями, передающимися половым путем.//Тезисы докладов. - Рязань. - 1995. - С. 7-8.

4. Кошкин С.В., Зайцева Г.А. Результаты иммунологического мониторинга у больных урогенитальным хламидиозом.//Российский съезд дерматологов и венерологов, 7-й. Тезисы докладов. - Казань. - 1996. - 3. - С. 114-115.

5. Глазкова Л.К., Герасимова Н.М. Состояние факторов неспецифической защиты организма женщин при хламидиозе.//Вестник дерматологии и венерологии. - 1998. - 1. - С. 7-10.

6. Гомберг М. А., Соловьев А.М., Некрасов А.В., Иванова А.С. Иммунотерапия при хроническом персистирующем урогенитальном хламидиозе.//ЗППП. - 1987. - 4. - С. 34-36.

7. Логинова Н.С., Файзуллин Л.З., Жданов А.В., Бурменская О.В., Малинина Э. В. , Божедомов В. А., Сухих Г.Т. Интерфероновый статус больных урогенитальным хламидиозом.//ЗППП. - 1997. - 6. - С. 19-21.

8. Рюмин Д. В., Коваленко Е.В., Новицкая С.А. Характеристика иммунного статуса у больных с хроническим рецидивирующим урогенитальным хламидиозом. //Вест. Рос. ассоц. акуш. гинек. - 1999. - 1. С. 26-28.

9. Семенов В.М. Клинико-эпидемиологическая характеристика хламидиозов. //Российский медицинский журнал. - 2000. - 1. - С. 48-53.

10. Дмитриев Г.А. Обнаружение герпетического вируса в гонококках.// Вестник дерматологии и венерологии. - 1984. - 5. - С. 23-24.

11. Кисина В. И. Урогенитальный инфекционные заболевания: Современное состояние проблемы.//Consilium medicum. - 2001. - Toм 3. - 7. - С. 307-310.

12. Васильев М.М., Мелькумов А.А., Масюкова С.А., Боровик В.З. Клинические особенности и лечение хронических гонорейно-хламидийно-уреаплазменных инфекций у мужчин. //Вестник дерматологии и венерологии. - 1988. - 9. - с. 34-37.

13. Эшбаев И.У., Балуянц Э.С. Клинико-лабораторная диагностика и иммунологические особенности урогенитального хламидиоза, уреапалзмоза и их ассоциаций.//Актуальные вопросы бесплодного брака, обусловленного болезнями, передающимися половым путем. - Свердловск. - 1989. - С. 39.40.

14. Делекторский В. В. , Осмоналиев М.К., Яшкова Г.Н., Акышбаева К.С., Джалагания И. Д. , Кахидзе Д.М. Гонорейно-микоплазменная инфекция у мужчин (клинико-лабораторное исследование).//Вестник дерматологии и венерологии. - 1983. - 7. - С. 11-15.

15. Глазкова Л.К. с соавт. Генитальная хламидийная инфекция. Руководство для врачей. Екатеринбург. - 1994.

16. Глазкова Л.К., Герасимова Н.М. Современные аспекты лечения хламидийной инфекции.//ЗППП. - 1996. - 4. - С. 9-13.

17. Глазкова Л. К. , Герасимова Н.М. Клинико-иммунологические критерии развития нарушений репродуктивной функции у женщин с генитальной хламидийной инфекцией.//ЗППП. - 1997. - 2. - С. 18-20.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для подбора иммунокорректора и прогнозирования эффективности иммунотерапии при урогенитальных инфекциях. Проводят индуцированный НСТ-тест, в котором используют иммунотропные средства, а учет реакции осуществляют на спектрофотометре, последовательно определяя показатели оптической плотности контрольной и всех опытных проб. Рассчитывают индекс чувствительности для каждого препарата, и при индексе, равном или превышающем 1,3, прогнозируют эффективную иммунотерапию, а для лечения выбирают препарат с максимальным индексом чувствительности. Способ позволяет повысить достоверность подбора иммунокорректора и прогнозирования эффективности иммунотерапии при урогенитальных инфекциях. 1 табл.

Способ подбора иммунокорректора и прогнозирования эффективности иммунотерапии при урогенитальных инфекциях, включающий проведение НСТ-теста, отличающийся тем, что в индуцированном тесте используют иммунотропные средства, а учет реакции проводят на спектрофотометре, последовательно определяя показатели оптической плотности контрольной и всех опытных проб, рассчитывают индекс чувствительности для каждого препарата и при индексе, равном или превышающем 1,3, прогнозируют эффективную иммунотерапию, а для лечения выбирают препарат с максимальным индексом чувствительности.