СПОСОБ ИНДИВИДУАЛЬНОГО ПОДБОРА ИММУНОАКТИВНЫХ ПРЕПАРАТОВ ПРИ ЛЕЧЕНИИ ИНФЕКЦИОННО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Российский патент 2013 года по МПК G01N33/52 

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической иммунологии, и может быть использовано при лечении инфекционно-воспалительных заболеваний.

Известен способ подбора иммунокорректора и прогнозирования эффективности иммунотерапии при урогенитальных инфекциях, включающий проведение индуцированного НСТ-теста, в котором используют иммунотропные средства [6]. Учет реакции осуществляют на спектрофотометре, последовательно определяя показатели оптической плотности контрольной и всех опытных проб. Рассчитывают индекс чувствительности для каждого препарата, и при индексе, равном или превышающем 1,3, прогнозируют эффективную иммунотерапию, а для лечения выбирают препарат с максимальным индексом чувствительности. Известный способ имеет следующие недостатки: способ является весьма трудоемким (выделение лейкоцитарной взвеси, постановка спонтанного и индуцированного НСТ-теста); для учета результатов НСТ-теста используют спектрофотометр, однако этот метод регистрации обладает низкой чувствительностью и имеет большую ошибку в учете результата за счет преданалитического этапа.

Известен способ хемилюминесцентной оценки чувствительности к интерферону у больных раком почки, в котором при исследовании крови in vitro о чувствительности к интерферону судят по отклонению индекса чувствительности (ИЧ) от 1,0 [3]. ИЧ представляет собой отношение индекса активации нейтрофильных гранулоцитов при воздействии интерферона к индексу активации нейтрофильных гранулоцитов без интерферона, ИЧ выше 1,0 свидетельствует о чувствительности к определенной дозе интерферона, а ИЧ меньше или равный 1,0 - об отсутствии чувствительности к интерферону. Известный способ обеспечивает эффективность интерферонотерапии у больных раком почки, однако существенным недостатком способа является то, что помимо интерферона другие иммуноактивные препараты не рассматривались.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому способу является способ индивидуального подбора иммунокоррегирующих препаратов у больных папилломатозом гортани [4], включающий забор периферической крови, получение лейкоцитарной суспензии, инкубирование суспензии клеток с иммунокоррегирующими препаратами в течение 60 мин при 37°С, запись кривых люминол-зависимой хемилюминесцентной реакции (ХЛ) и расчет индекса стимуляции препарата по соотношению интенсивности ХЛ в пробе с препаратом к интенсивности ХЛ в контрольной пробе. Препаратом выбора считают иммунокоррегирующий препарат, индекс стимуляции которого выше 1,1. Известный способ не обеспечивает достаточную точность, так как: при осуществлении способа выделяют лейкоцитарную взвесь, что влияет на физиологическое состояние клеток и, соответственно, снижает точность результата определения; в качестве хемилюминесцентного индикатора используется люминол, который вступает в хемилюминесцентную реакцию с широким спектром активных молекул [1], что может привести к появлению дополнительной хемилюминесценции, не связанной непосредственно с лейкоцитами, и снизить точность результата определения. Кроме того, недостатком известного способа является то, что способ реализован только для больных папилломатозом гортани.

Технический результат от реализации предложенного способа:

- упрощение способа за счет отмены трудоемкой операции по получению лейкоцитарной суспензии;

- малый объем отбираемой крови для реализации способа, что позволяет осуществлять забор крови из пальца пациента;

- повышение точности и объективности результата определения за счет отсутствия этапа пробоподготовки с фракционированием клеток и использования люцигенина в качестве хемилюминесцентного индикатора, не вступающего в хемилюминесцентную реакцию с широким спектром активных молекул;

- возможность индивидуального подбора иммуноактивных препаратов при лечении широкого спектра инфекционно-воспалительных заболеваний;

- возможность прогнозирования эффективности иммунотерапии, что позволяет исключить применение неэффективных иммуноактивных препаратов.

Задачей изобретения является создание достоверного способа индивидуального подбора иммуноактивных препаратов и прогноза эффективности иммунотерапии.

Задача достигается тем, что способ индивидуального подбора иммуноактивных препаратов при лечении инфекционно-воспалительных заболеваний включает хемилюминесцентное исследование цельной гепаринизированной крови с использованием люцигенина в качестве хемилюминесцентного индикатора, запись кривых спонтанной и модифицированной иммуноактивными препаратами люцигенин-зависимой хемилюминесцентной реакции с последующим расчетом коэффициента иммуноактивной модификации (КИМ) по формуле

где

Sмод. - площадь под кривой хемилюминесценции, модифицированной иммуноактивными препаратами (относительные единицы);

Sсп. - площадь под кривой спонтанной хемилюминесценции (относительные единицы). Для проведения иммунотерапии выбирают препарат с максимальной величиной КИМ. При величине КИМ, равной или выше 25%, прогнозируют эффективную иммунотерапию, а при величине КИМ ниже 25% - неэффективную иммунотерапию.

Известно, что хемилюминесцентный индикатор люцигенин, в отличие от люминола, вступает в хемилюминесцентную реакцию только с супероксид-анионом, продукция которого осуществляется НАДФН-оксидазной системой [1]. Клетками крови, которые производят подобные высокоэнергетические молекулы, являются только нейтрофильные гранулоциты [5]. Нейтрофильные гранулоциты обладают высокой реактивностью, они способны быстро функционально перестраиваться в ответ на воздействие агентов различной природы. Кроме того, после активации нейтрофильные гранулоциты сами становятся мощными эффекторами каскадных реакций, определяя развитие воспаления и проявление цитотоксической активности данной клеточной популяции [2, 5]. Помимо этого, нейтрофильные гранулоциты несут на своей поверхности специфические рецепторы к различным веществам, что делает возможным оценивать влияние иммуноактивных препаратов на эти клетки в экспериментах in vitro.

Способ осуществляется следующим образом.

Выполняют забор цельной крови из вены или пальца пациента. По 25 мкл цельной крови пациента, стабилизированной гепарином, добавляют в контрольную и опытные пробирки. Количество опытных пробирок определяется количеством тестируемых иммуноактивных препаратов. В контрольную пробирку добавляют 425 мкл раствора Хенкса. В опытные пробирки добавляют 375 мкл раствора Хенкса и по 50 мкл иммуноактивных препаратов в концентрации, соответствующей содержанию их в крови при парентеральном введении. Запуск хемилюминесцентной реакции осуществляют 50 мкл люцигенина (динитрат 10,10'-диметил-9,9'-биакридиния) в концентрации 50 мкг/мл. Хемилюминесцентный анализ выполняют с помощью хемилюминесцентного анализатора, например «CL3606», в течение 90 мин. Регистрацию результатов и управление хемилюминесцентным анализатором осуществляют через компьютер. После получения кривых хемилюминесценции определяют площадь под кривой спонтанной хемилюминесценции (Sсп.) в контрольной пробе и площадь под кривой модифицированной хемилюминесценции (Sмод.) в пробах с иммуноактивными препаратами. Затем рассчитывают КИМ по процентному соотношению разности площадей под кривой хемилюминесценции, модифицированной исследуемым иммуноактивным препаратом (Sмод.), и кривой спонтанной хемилюминесценции (Sсп.) к площади под кривой спонтанной хемилюминесценции.

При величине КИМ, равной или выше 25%, прогнозируют эффективную иммунотерапию, а при величине КИМ ниже 25% - неэффективную иммунотерапию. Для иммунотерапии выбирают препарат с максимальной величиной КИМ.

Пример 1. Больная М., 56 лет (амбулаторная карта №67). Клинический диагноз: рецидивирующий фурункулез. В течение трех лет фурункулы на руках, туловище. Неоднократно лечилась (антибактериальная терапия, местное лечение). При проведении иммунологических исследований выявлен Т-лимфоцитоз без нарушения распределения между субпопуляциями Т-лимфоцитов, снижение фагоцитарной активности клеток.

До начала лечения проведен подбор иммуноактивного препарата in vitro (тималин, ронколейкин, галавит, деринат, реальдерон, миелопид, пирогенал), согласно заявляемому способу. Наибольшая величина КИМ выявлена при тестировании галавита: 37,5% (выше 25%). Прогноз - эффективная иммунотерапия данным препаратом.

Проведено лечение галавитом в рекомендованных общетерапевтических дозах. После проведенного лечения состояние больной улучшилось. Фурункулы отсутствовали. Дальнейшее наблюдение в динамике в течение 6 мес: рецидивы не отмечались.

Пример 2. Больная У., 21 год (амбулаторная карта №95). Клинический диагноз: вирусный гепатит С, генотип 1, хроническое течение. Хронический гепатит С выявлен при заборе крови на донорском пункте. В течение года лечилась без существенного эффекта. Были жалобы на слабость, недомогание. При биохимических исследованиях АЛТ 112-130-126 Ед/л, ACT 58-65-60 Ед/л. При проведении иммунологических исследований выявлен Т-лимфоцитопения за счет популяции Т-эффекторов, снижение фагоцитарной активности клеток.

До начала лечения проведен подбор иммуноактивного препарата in vitro (тималин, ронколейкин, галавит, деринат, реальдерон, миелопид, пирогенал), согласно заявляемому способу. Наибольшая величина КИМ выявлена при тестировании ронколейкина: 28,3% (выше 25%). Прогноз - эффективная иммунотерапия данным препаратом.

Проведено лечение ронколейкином в общетерапевтических дозах. После проведенного лечения состояние улучшилось. Стойкая клинико-лабораторная ремиссия в течение 6 месяцев. Жалоб нет. Дальнейшее наблюдение в динамике в течение 6 мес: рецидивы не отмечались, АЛТ 35-32 Ед/л, ACT 28-15 Ед/л.

Пример 3. Больной М., 60 лет (амбулаторная карта №66). Клинический диагноз: хронический двухсторонний гнойный гайморит. Жалобы на головные боли, усиливающиеся при наклоне вперед, заложенность носа, гнойные выделения из носа, снижение обоняния, субфибриллитет. Из анамнеза известно, что пациент страдает хроническим гайморитом более 7 лет. На протяжении этого времени периодически проводились курсы консервативного лечения (антибиотики, симптоматическая терапия). Последнее обострение началось 10 дней назад. По месту жительства проводилось лечение: антибиотики, санационные мероприятия, симптоматические средства. При проведении иммунологических исследований выявлена лейкопения, Т-лимфоцитопения без нарушения субпопуляционного состава Т-лимфоцитов.

До начала лечения проведен подбор иммуноактивного препарата in vitro (тималин, ронколейкин, галавит, деринат, реальдерон, миелопид, пирогенал), согласно заявляемому способу. Наибольшая величина КИМ выявлена при тестировании тималина: 12,1% (ниже 25%). Прогноз - неэффективная иммунотерапия данным препаратом.

Проведено лечение тималином в общетерапевтических дозах. После проведенного лечения состояние больного улучшилось: прошли головные боли, уменьшилось чувство тяжести в области лица, нормализовалась температура тела. Гнойных выделений нет. Больной выписан. Через 4 месяца у больного началось обострение: головные боли, гнойное отделяемое из носа, температура до 37,5°С.

Предложенный способ апробирован на 130 пациентах, обратившихся в клиническое отделение лаборатории молекулярно-клеточной физиологии и патологии НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН (г. Красноярск) с инфекционно-воспалительными заболеваниями (рецидивирующий фурункулез, хронический гайморит, вялотекущий рецидивирующий аднексит, хронический вирусный гепатит В и С, рецидивирующий герпес). Перед назначением иммунотерапии проводили оценку индивидуальной чувствительности к иммуноактивным препаратам методом люцигенинзависимой хемолюминисценции и делали прогноз эффективности терапии, согласно заявляемому способу. Использовали следующие иммуноактивные препараты: тималин, ронколейкин, галавит, глутоксим, деринат, милдронат, реальдерон, миелопид, пирогенал. Все обследуемые были разделены на 2 группы: 1-я группа - пациенты, получавшие иммуноактивный препарат, подобранный по заявляемому способу (72 человека); 2-я группа (58 больных) - пациенты, которым назначался иммуноактивный препарат традиционным способом без индивидуального подбора иммуноактивного препарата. Все пациенты в процессе лечения регулярно контролировались. Эффективность проводимого лечения оценивалась клинически. В первой группе эффективность лечения составила 100%, у всех пациентов была достигнута стойкая ремиссия в течение 6 месяцев (срок наблюдения за пациентами). Во второй группе в 24,1% случаях (14 пациентов) имело место обострение заболеваний.

Таким образом, заявляемый способ позволяет достоверно осуществить подбор эффективных иммуноактивных препаратов при лечении инфекционно-воспалительных заболеваний и может быть рекомендован для применения в клинической практике.

Источники информации

1. Владимиров Ю.А., Проскурина Е.В. Свободные радикалы и клеточная хемилюминесценция // Успехи биологической химии. - 2009. - Т.49. - С.341-388.

2. Дамбаева С.В., Мазуров Д.В., Голубева Н.М., Пинегин Б.В. Влияние некоторых иммуномодуляторов на функциональную активность фагоцитарных клеток периферической крови доноров // Иммунология. - 2000. - №6. - С.15-20.

3. Куртасова Л.М., Шкапова Е.А., Савченко А.А., Крыжановский А.И., Зуков Р.А., Рачкова Н.В. Способ оценки чувствительности к интерферону у больных раком почки // RU 2293988, опубл. 20.02.2007.

4. Матела И.И., Темнов А.А., Антонив Т.В., Темнова В.В. Способ индивидуального подбора иммунокоррегирующих // RU 2320991, опубл. 27.03.2008.

5. Тотолян А.А., Фрейдлин И.С. Клетки иммунной системы. - СПб.: Наука. - 2000. - 231 с.

6. Юцковская Я.А., Маркелова Е.В., Костюшко А.В. и др. Способ подбора иммунокорректора и прогнозирования эффективности иммунотерапии при урогенитальных инфекциях // RU 2216739, опубл. 20.11.2003.

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к клинической иммунологии, и описывает способ индивидуального подбора иммуноактивных препаратов при лечении инфекционно-воспалительных заболеваний, включающий регистрацию уровня хемилюминесцентной реакции в присутствии иммуноактивного препарата с последующим расчетом оценочного показателя, где для проведения хемилюминесцентного анализа используют цельную гепаринизированную кровь, в качестве хемилюминесцентного индикатора используют люцигенин, и после записи кривых спонтанной и модифицированной иммуноактивными препаратами люцигенин-зависимой хемилюминесцентной реакции рассчитывают коэффициент иммуноактивной модификации (КИМ) по формуле, и для проведения иммунотерапии выбирают препарат с максимальной величиной КИМ, при величине КИМ, равной или выше 25%, прогнозируют эффективную иммунотерапию, а при величине КИМ ниже 25% прогнозируют неэффективную иммунотерапию. Способ информативен, экономичен, позволяет достоверно осуществлять подбор эффективных иммуноактивных препаратов при лечении инфекционно-воспалительных заболеваний. 3 пр .

Способ индивидуального подбора иммуноактивных препаратов при лечении инфекционно-воспалительных заболеваний, включающий регистрацию уровня хемилюминесцентной реакции в присутствии иммуноактивного препарата с последующим расчетом оценочного показателя, отличающийся тем, что для проведения хемилюминесцентного анализа используют цельную гепаринизированную кровь, в качестве хемилюминесцентного индикатора используют люцигенин, и после записи кривых спонтанной и модифицированной иммуноактивными препаратами люцигенинзависимой хемилюминесцентной реакции рассчитывают коэффициент иммуноактивной модификации (КИМ) по формуле:

где Sмод - площадь под кривой люцигенинзависимой хемилюминесценции, модифицированной иммуноактивными препаратами (относительные единицы);
Sсп - площадь под кривой спонтанной хемилюминесценции (относительные единицы), и для проведения иммунотерапии выбирают препарат с максимальной величиной КИМ, при величине КИМ, равной или выше 25%, прогнозируют эффективную иммунотерапию, а при величине КИМ ниже 25% прогнозируют неэффективную иммунотерапию.