СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ОСТРОГО ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ПАНКРЕАТИТА Российский патент 2003 года по МПК A61K39/395 A61P1/18 

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к гастроэнтэрологии, и может быть использовано для лечения острого панкреатита.

Известен способ лечения острого панкреатита 5-фторурацилом, направленным на угнетение синтеза панкреатических ферментов [1].

Недостатком этого способа является токсичность 5-фторурацила, к проявлениям которой относятся изменения белкового спектра сыворотки крови и ионов калия в эритроцитах, угнетении эритроцитарного, и нейтрофильного ростков костного мозга, дистрофические изменения слизистой тонкой кишки с последующими диспепсическими расстройствами, снижением секреторной и кислотообразующей функцией желудка.

Известен способ лечения острого панкреатита сандостатином [2].

Сандостатин в суточной дозе 300-600 мкг подавляет экзокринную функцию поджелудочной железы, обладая ингибирующим цитопротективным действием, угнетает синтез ферментов, вазоактивных пептидов и аминов.

Кроме существующих преимуществ применение сандостатина имеет следующие недостатки [3]:
- сандостатин повышает тонус и сократимость сфинктера Одди, в результате чего возникает задержка панкреатического секрета в протоковой системе, что усиливает гипертензионный синдром и способствует выходу активных ферментов в ткань поджелудочной железы и усиливает аутокаталитические процессы;
- сандостатин не оказывает существенного влияния на показатели ингибирующей системы крови: общую антитриптическую активность и уровень альфа-2-макроглобулина. В этих условиях альфа-2-макроглобулин, связанный с трипсином, сохраняет кининогеназную активность, тем самым снижается эффект нейтрализации активных ферментов, следовательно, не улучшается кровообращение в микроциркуляторном русле, что способствует прогрессированию патологического процесса;
- сандостатин является дорогостоящим препаратом, что делает его недоступным основной массе больных.

Наиболее близким из известных является способ лечения острого экспериментального панкреатита [4] путем трехкратного парентерального (внутрибрюшинного) введения препарата в виде комплекса антиоксидантных ферментов супероксиддисмутазы и каталазы в соотношении 1:2 мас.ч. через 3, 24, 48 ч после воспроизведения заболевания.

Недостатками этого способа является то, что ферментные антиоксиданты не могут оказывать прямого действия на внутриацинарную активность протеолитических ферментов, а значит и полностью предотвращать аутокаталитические процессы, являющиеся основой развития острого панкреатита.

Целью изобретения является повышение эффективности лечения острого панкреатита при однократном введении лекарственного препарата за счет подавления активности ферментов, а также возможности использования этого способа в широкой клинической практике.

Указанная цель достигается тем, что животным с острым экспериментальным панкреатитом, вызванным, например, раствором активного кристаллического трипсина, вводят парентерально сыворотки против яда гадюки обыкновенной через 6-9 мин с начала воспроизведения заболевания из расчета 75 (АЕ)/кг массы тела.

Сыворотка выпускается серийно и представляет собой содержащую специфические иммуноглобулины белковую фракцию сыворотки крови лошадей, гипериммунизированных ядом гадюки обыкновенной, очищенную и концентрированную методом пептического переваривания и солевого фракционирования [5].

Технический результат выражается в подавлении ферментативной активности поджелудочной железы, за счет чего происходит купирование патологического процесса и ведет к 100% выживаемости животных.

Способ осуществляется следующим образом.

Животным под общим эфирным наркозом производят срединную лапаротомию, в рану выводят двенадцатиперстную кишку и желудок. В ткань поджелудочной железы через иглу шприца вводят раствор активного кристаллического трипсина в дозе 25 мг/кг массы тела. В результате этого моделируется острый панкреатит в виде геморрагического пятна размером 0,5-0,8 см на фоне серозного отека и расширенных сосудов поджелудочной железы и геморрагическим выпотом (экссудатом) в брюшной полости 1,2-2 мл с амилазной активностью от 1300-2000 ЕД,
Через 6-9 мин с начала воспроизведения заболевания под париетальную брюшину передней брюшной стенки вводится специфическая сыворотка против яда гадюки обыкновенной из расчета 75 (АЕ)/кг массы тела. В течение 3-х часов ведут наблюдения за изменениями в поджелудочной железе и другими органами брюшной полости, после чего брюшная полость зашивается наглухо. Через 24 ч производится операция релапаротомия для изучения последствий проведенного лечения.

Пример 1. Для эксперимента (контрольный экземпляр) использована белая крыса линии "Вистар" весом 400 г, история болезни 106 от 30.10.2000 г. В 12.00 под общим эфирным наркозом была выполнена срединная лапаратомия. В рану выведена двенадцатиперстная кишка и желудок. В ткань поджелудочной железы через иглу шприца ввели активный кристаллический трипсин в дозе 25 мг/кг, растворенный в 1 мл дистиллированной воды (доза, смертельная в 100% случаях). Сразу же в ткани поджелудочной железы под брюшинным листком образовался бесцветный "ползучий" инфильтрат размером 1 см. Через 3 мин наступил равномерный отек поджелудочной железы (на участке, ограниченном подковой двенадцатиперстной кишки, большой кривизной желудка, внизу поперечно-ободочной кишкой). Через 6 мин по ходу расширенных сосудов звездчатого характера на фоне легкой гиперемии брюшинного листка появлялась геморрагическая имбибиция ткани поджелудочной железы в виде точечных и более крупных кровоизлияний с постепенной, в течение 1-1,5 мин, сплошной геморрагической имбибицией в виде гематомы до 1 см в месте инъекции раствора трипсина. Через 8 мин с момента начала опыта отек и геморрагическое пропитывание распространяется на брыжейку поперечно-ободочной кишки, что сопровождается ее парезом и изменением цвета стенки до синюшно-серого цвета.

В это же время наблюдаются аналогичные изменения слепой кишки. В 12.15 поджелудочная железа приобрела черный оттенок. Двенадцатиперстная кишка на протяжении 5-6 см темно-красного цвета с кровоизлияниями на серозной оболочке, печень становится фиолетово-темного цвета. С момента отека поджелудочной железы и ее геморрагического пропитывания появлялся выпот в брюшной полости серозно-геморрагического характера, который к 12.35 достигал максимального количества pH 7-8, амилазной активностью 1528 ЕД. В 13.00 поджелудочная железа и брыжейка поперечно-ободочной кишки приобретали вид черной пленки. К этому времени появлялись изменения некротического характера отдельных участков тонкого и толстого кишечника. Урежение дыхания отмечено в 13.10, редкое дыхание в 14.25, в 14.35 остановка дыхания и смерть.

Произведена биопсия органов брюшной полости. В плевральной полости выпота нет, венозный стаз сосудов передней стенки сердца, точечные кровоизлияния на верхушке левого легкого под плеврой.

Морфология: поджелудочная железа - отек, обширные кровоизлияния, разрушение структур ацинусов, в сосудах стазы, тромбы. Ткань железы пропитана кровью, много полей некрозов. Сохранившиеся ацинусы в состоянии гиперсекреции. Всего выполнено 12 экспериментов (контроль) по воспроизведению острого геморрагического панкреатита, индуцированного активным кристаллическим трипсином в дозе 25 мг/кг массы тела животного. Во всех случаях имелась однотипная картина изменений поджелудочной железы и других органов брюшной полости. Летальность в 100% случаях.

Пример 2. Для эксперимента использована белая крыса линии "Вистар" массой тела 350 г, история болезни 87 от 15.08.2000 г. Под общим эфирным наркозом в 11.00 выполнена срединная лапаратомия. В рану выведена двенадцатиперстная кишка и желудок. По ходу общего желчного протока в месте впадения его в двенадцатиперстную кишку шприцем в ткань поджелудочной железы введен раствор активного кристаллического трипсина (25 мг/кг веса). Сразу же в ткани поджелудочной железы образовался бесцветный (ползучий) инфильтрат 0,8 см. Через 3 мин с начала эксперимента (11.04) развился серозный равномерный отек поджелудочной железы, на фоне которого появилась легкая гиперемия и точечные кровоизлияния по ходу расширенных сосудов звездчатого характера. В 11.05 (через 4 мин после воспроизведения заболевания) введена специфическая сыворотка против яда гадюки обыкновенной из расчета 75 (АЕ)/кг массы тела под париетальную брюшину передней брюшной стенки.

В течение последующих 2 мин прогрессивно нарастала геморрагическая имбибиция (пропитывани ткани) поджелудочной железы и в 11.10 (через 9 мин после воспроизведения заболевания) сформировалась ярко-красная гематома размером до 1,5 см без четких контуров. Одновременно с возникновением геморрагической имбибиции (пропитывания) ткани поджелудочной железы появлялся геморрагический экссудат в брюшной полости и возникала гиперемия и отек стенки двенадцатиперстной кишки на участке до 2,5 см без четких границ в 11.09. Количество экссудата до 1,5 мл с щелочной реакцией (рН 7-8), амилазной активностью 220 ЕД. Через 11 мин после воспроизведения заболевания (11.12) появились точечные геморрагические кровоизлияния брыжейки толстой кишки с изменениями ее цвета на отдельных участках в виде гиперемированных пятен от 0,5-0,7 см. Гиперемия в виде отдельных пятен стенки тонкой кишки возникла в 11.14 (13 мин после воспроизведения заболевания) Изменение цвета печени до темно-вишневого оттенка наступило в 11.15 (через 14 мин после воспроизведения заболевания).

В течение трехчасового наблюдения состояние подопытного животного остается стабильным. Количество жидкости (экссудата) в брюшной полости без тенденции к увеличению, геморрагическое пропитывание поджелудочной железы становилось более ярким (красного цвета), но локального характера - до 0,8 см в диаметре. Увеличился гиперемированный участок двенадцатиперстной кишки до 3 см, но без признаков некроза. Гиперемированные участки толстой кишки и тонкой остаются не приобретая темный цвет (без перехода в некроз). Печень приобрела обычный цвет.

В 14.00 брюшная полость ушита наглухо и животное перенесено в клетку для дальнейшего наблюдения в обычном режиме (приема воды и пищи). Через 24 часа крыса живая, активная, принимала воду и пищу.

16.08.2000 г. операция релапаратомия, биопсия органов брюшной и плевральной полостей.

Под общим эфирным наркозом сняты швы с передней брюшной стенки и выполнена релапаротомия. Выпота в брюшной полости нет. При ревизии органов брюшной полости установлено, что в области поджелудочной железы в месте введения трипсина инфильтрат дисковидной формы с наличием фибрина и единичных точечных кровоизлияний. Остальная часть поджелудочной железы бледно-серого цвета, слегка инфильтрирована. Легкая отечность стенки двенадцатиперстной кишки без четких контуров. Других изменений со стороны органов брюшной полости не найдено. Произведена биопсия поджелудочной железы, печени, двенадцатиперстной кишки. В плевральной полости жидкости нет. В области верхушки левого легкого под висцеральной плеврой единичные точечные кровоизлияния. Биопсия легких. После эвтаназии путем углубления эфирного наркоза произведена биопсия сердца. Изменений в полостях сердца и мышце макроскопически не найдено.

Морфология: структура поджелудочной железы сохранена, имеются участки дистрофических изменений в паренхиме железы, островковая ткань без изменений, сосудистый компонент отсутствует, островковая ткань без изменений. Печень - отек ткани, признаки жировой дистрофии, некроза нет. Двенадцатиперстная кишка - структура ворсинок сохранена, умеренный отек.

Всего выполнено 12 экспериментов по воспроизведению острого геморрагического панкреатита, индуцированного активным кристаллическим трипсином в дозе 25 мг/кг массы тела животного. Лечение проводилось специфической сывороткой против яда гадюки обыкновенной в дозе 75 (АЕ)/кг, которая вводилась в сроки 1-5 мин с момента воспроизведения заболевания.

При введении специфической сыворотки независимо от сроков введения выживаемость животных в 100% случаях, при этом не во всех случаях в патологический процесс вовлекались все органы брюшной полости: печень, двенадцатиперстная кишка, тонкая и толстая.

Пример 3.

Для эксперимента использована белая крыса линии "Вистар", массой тела 420 г, история болезни 105 от 14.09.2000 г. Под общим эфирным наркозом в 13.00 выполнена срединная лапоратомия. В рану выведена двенадцатиперстная кишка и желудок и по ходу общего желчного протока в месте впадения его в двенадцатиперстную кишку шприцем введен раствор активного кристаллического трипсина в дозе 25 мг/кг массы тела животного, растворенного в 1 мл дистиллированной воды.

Сразу же в ткани поджелудочной железы образовался бесцветный ползучий инфильтрат размером 0,7 см. Через 6 мин (13.36) на фоне равномерного отека поджелудочной железы появилась гиперемия и геморрагическое пропитывание ткани поджелудочной железы, в начале в виде отдельных кровоизлияний с последующим в течение 1 мин образованием геморрагического пятна размером 0,6 см. После этого под париетальную брюшину передней брюшной стенки в 13.36 (через 6 мин с момента воспроизведения опыта) вводилась противоядная сыворотка в дозе 75(АЕ)/кг массы тела животного.

В брюшной полости появлялся геморрагический выпот количеством до 2 мл к 13.38 (через 8 мин с момента воспроизведения опыта). При исследовании индикатором установлена щелочная реакция экссудата (рН 7-8), амилазной активностью 128 ЕД.

Одновременно с появлением геморрагической имбибиции в 13.36 поджелудочной железы появлялась легкая гиперемия и отек двенадцатиперстной кишки на протяжении 2,5 см. К 13.30 печень стала более темной окраски (темно-вишневая, с фиолетовым оттенком). К этому времени появились гиперимированные участки тонкой кишки и толстой.

При трехчасовом наблюдении за животным выпот в брюшной полости не нарастал. Отек и геморрагическая имбибиция поджелудочной железы локализовалась до 0,8 см, оставаясь ярко-красного цвета, не приобретая темной окраски (без перехода в некроз). Отек и гиперемия двенадцатиперстной кишки стабилизировался в пределах 3-4 см без признаков некроза. Печень приобрела нормальную окраску. Участки гиперемии толстой и тонкой кишки без тенденций к увеличению, без признаков некроза.

Общее состояние подопытного животного оставалось стабильным, в 16.30 брюшная полость ушита наглухо. Животное перенесено в клетку с обычным режимом приема воды и пищи.

Через 24 часа, 15.09.2000 г. в 13.00 выполнена операция релапаротомии, ревизия и биопсия органов брюшной и плевральной полостей. Под общим эфирным наркозом сняты швы с передней брюшной стенки и выполнена релапаратомия. Выпота в брюшной полости нет. При ревизии органов брюшной полости установлено, что в области поджелудочной железы имеется дисковидной формы инфильтрат в размере до 1 см, рыхлой консистенции, с единичными кровоизлияниями. Двенадцатиперстная кишка слегка отечна на ограниченном участке до 2 см. Других изменений со стороны органов брюшной полости не найдено. Произведена биопсия поджелудочной железы, печени и стенки двенадцатиперстной кишки.

В плевральной полости жидкости нет. В области верхушки левого легкого, под висцеральной плеврой, точечные кровоизлияния. Других изменений не найдено. Эвтаназия путем углубления эфирного наркоза. Биопсия сердца.

Морфология: поджелудочная железа - структура сохранена, некроза нет, сосудистый компонент отсутствует, имеются участки дистрофических изменений паренхимы, островковая ткань сохранена. Печень - умеренный отек, некроза нет. Двенадцатиперстная кишка - строение ворсинок сохранено, отек.

Всего выполнено 12 экспериментов по воспроизведению острого геморрагического панкреатита, индуцированного активным кристаллическим трипсином в дозе 25 мг/кг массы тела животного. Лечение проводилось специфической сывороткой против яда гадюки обыкновенной в дозе 75 (АЕ)/кг, которая вводилась в сроки от 6-9 мин. При этом развивалась четкая картина геморрагического панкреатита с вовлечением в патологический процесс других органов брюшной полости, но без явления развития некроза. Во всех случаях через 24.00 патологический процесс купировался, выживаемость животных составила 100%.

Пример 4.

Для эксперимента использована белая крыса линии "Вистар", масса тела 320 г, история болезни 88, от 15.08.2000 г.

Под общим эфирным наркозом в 11.15 выполнена срединная лапаротомия. В рану выведена двенадцатиперстная кишка и желудок. По ходу общего желчного протока в месте впадения его в двенадцатиперстную кишку шприцем в ткань поджелудочной железы введен раствор активного кристаллического трипсина (25 мг/кг массы тела животного). Сразу же в ткани поджелудочной железы образовался бесцветный ползучий инфильтрат диаметром 0,8 см. Через 2 мин (11 ч 17 мин) наступил равномерный серозный отек поджелудочной железы. Еще через 5 мин (11 ч 22 мин) на фоне легкой гиперемии поджелудочной железы и отека ее появились точечные кровоизлияния с последующей геморрагической имбибицией в виде гематомы на участке до 1,5 см в месте введения трипсина (в 11 ч 23 мин). Одновременно с началом геморрагической имбибиции поджелудочной железы возникала гиперемия и отек поджелудочной железы на ограниченном участке до 2,5 см с постепенным прогрессивным увеличением в дистальном направлении. При этом наблюдалось изменение цвета стенки кишки от ярко-красного до черного (некроза) в первые 20 мин с начала опыта (в 11 ч 35 мин).

С начала появления геморрагической имбибиции поджелудочной железы (11 ч 22 мин) появлялся геморрагический экссудат с амилазной активностью 1800 ЕД. Количество экссудата в брюшной полости увеличивалось, общее количество составило 3 мл.

Через 10 мин (11 ч 25 мин) появлялись точечные кровоизлияния в брыжейке толстой кишки с изменениями ее цвета в виде отдельных фиолетово-красных пятен. В 11.25 (через 10 мин после воспроизведения заболевания) под париетальную брюшину передней брюшной стенки вводилась специфическая сыворотка против яда гадюки обыкновенной в дозе 75 (АЕ)/кг массы тела животного. Изменение цвета печени от темно-вишневого до темно-фиолетового наступало в первые 15 мин с момента начала опыта (11 ч 30 мин).

При дальнейшем наблюдении за экспериментальным животным было установлено, что изменения в поджелудочной железе, печени и двенадцатиперстной кишке прогрессивно нарастали в виде необратимых некротических процессов. Нарастала одышка с последующим развитием редкого дыхания и в 14 ч 10 мин наступила смерть.

Морфология: поджелудочная железа - обширные кровоизлияния, ткань железы пропитана кровью, много полей некроза. В сосудах - стазы, тромбы. Сохранившиеся ацинусы в состоянии гиперсекреции. Печень - отек, в сосудах - стаз, тромбы, участки некроза паренхимы. Двенадцатиперстная кишка - отек, некроз ворсинок. В плевральной полости небольшое количество жидкости, под висцеральной плеврой точечные кровоизлияния. Сердце - мышца сердца бледно-серого цвета, с наличием точечных кровоизлияний.

Всего выполнено 12 экспериментов по воспроизведению острого геморрагического панкреатита, индуцированного активным кристаллическим трипсином в дозе 25 мг/кг массы тела животного. Лечение проводилось специфической сывороткой против яда гадюки обыкновенной в дозе 75 (АЕ)/кг, которая вводилась в сроки от 10-15 мин с момента воспроизведения заболевания. Во всех случаях развивалась однотипная картина с вовлечением в патологический процесс органов брюшной полости с летальностью от 70-100% случаях.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Проведенные опыты показали, что применение специфической сыворотки против яда гадюки обыкновенной является высокоэффективным средством лечения острого панкреатита, приводящим к 100% выживаемости.

Оптимальным сроком введения противоядной сыворотки целесообразно считать сроки 6-9 мин с момента воспроизведения заболевания. При раннем введении специфической сыворотки выживаемость животных в 100% случаях, при этом не во всех случаях в патологический процесс вовлекались все органы брюшной полости: печень, двенадцатиперстная кишка, тонкая и толстая, при более позднем введении наблюдаются необратимые процессы, могущие привести к летальному исходу.

Доза 75 (АЕ)/кг считается оптимальной. При меньшей дозе наблюдается уменьшение процента выживаемости за счет прогрессирования патологического процесса. При дозе более 75 (АЕ)/кг эффект остается тот же (выживаемость 100%), но из-за высокой стоимости сыворотки увеличивать дозу нецелесообразно.

Источники информации
1. А.Б. Молитвословов и др. Современные принципы консервативного лечения острого панкреатита. // Хирургия. - 1994. - 6. - С. 38-41.

2. B. C. Савельев и др. Комплексное лечение больных панкреонекрозом. // Анналы хирургии. - 1999. - 1. - С. 18-22.

3. А.С. Логинов и др. Опыт применения сандостатина у больных хроническим панкреатитом. // Терапевтический архив. - 1995. - 7. - С. 60-62.

4. Способ лечения острого экспериментального панкреатита. Патент РФ 2043359, МПК А 61 К 38/43.

5. Инструкция по применению сыворотки против яда гадюки обыкновенной лошадиной, очищенной концентрированной жидкой.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной хирургии, и может быть использовано для лечения острого экспериментального панкреатита. Используют сыворотку против яда гадюки обыкновенной из расчета 75 АЕ/кг. Препарат вводят под париетальную брюшину передней стенки через 6-9 мин с начала воспроизведения заболевания. Способ позволяет подавить активность ферментов поджелудочной железы. Это повышает эффективность лечения заболевания.

Способ лечения острого экспериментального панкреатита путем парентерального введения лекарственного препарата, отличающийся тем, что в качестве лекарственного препарата вводят сыворотку против яда гадюки обыкновенной под париетальную брюшину передней брюшной стенки через 6-9 мин с начала воспроизведения заболевания из расчета 75 АЕ/кг массы тела.