СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ СОЛИТАРНОГО ЭХИНОКОККОЗА ПЕЧЕНИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Российский патент 2004 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к медицине, а именно хирургии, может быть использовано для изучения патогенеза, морфогенеза эхинококкоза и скрининга противоэхинококковых средств.

По данным литературы существуют два варианта воспроизведения эхинококкоза у экспериментальных животных. Первичное заражение, идентичное естественному, производят путем введения яиц эхинококка в желудочно-кишечный тракт животных (Лукашенко Н.П. Альвеококкоз. М., 1975). Более распространен вариант вторичного воспроизведения эхинококкоза, заключающийся во введении зародышевых элементов внутрибрюшинно (Lubinsky G.A. - Canad J Zool - 1960, vol. 38 - p. 1177-1185) непосредственно в паренхиму печени или в сосуды, приносящие кровь к органу (Рузаков В.А., Павлов В.В., Коваленко Ф.П. Медицинская паразитология - 1987, 5 - с. 17-19; Коваленко Ф.П., Баллад Н.Е., Джабаров В. И. Способ моделирования лаврального альвеококкоза. А.С. 991485. СССР. Бюл. Открытия. Изобретения. 1983. 3, с. 2).

Известен еще вариант моделирования эхинококкоза путем имплантации дочерних пузырей в формированную вокруг инородного тела фиброзную полость печени (Омаров М. М., в кн. Вопросы диагностики и хирургического лечения эхинококкоза. 1979, - с. 131-134; Омаров М.М. Дисс. к.м.н., Баку, 1987, с. 67-85). Способ заключается в следующем: экспериментальных животных (собак, овец) оперируют дважды. При первой операции в печень имплантируют надувной резиновый баллон, вокруг которого постепенно формируется фиброзная капсула. Через 40 дней при повторной операции баллон извлекается и в печени обнаруживается моделированная фиброзная полость, в которую опускают с соблюдением асептики соответствующего размера живой дочерний пузырь эхинококка. Для дальнейших исследований животных оперируют третий раз.

Вышеуказанные аналоги имеют следующие недостатки.

Для первичного заряжения экспериментальных животных эхинококкозом необходимо постоянно иметь зараженных дефинитивных хозяев паразита. Эти животные ввиду опасности распространения инвазии должны содержаться в специальных условиях и методика опасна для экспериментатора. Попытки моделирования инвазии, характерной для человека, чаще были безуспешными (Yamashita J., Ohbayashi M., Doi R., Jap. J. vet. pes. - 1963. - vol.11. - P.55-60).

При моделировании эхинококкоза путем введения личиночных форм паразита непосредственно в паренхиму органа или в сосуды, приносящие кровь к органу, возникает множественное, а не очаговое поражение печени. Частички инвазивного материала должны быть достаточно малыми, чтобы они не вызывали обструкцию крупных сосудов и инфарктов органа (Лукашенко Н.П. Альвеококкоз. M., 1975; Ohnishi Kenji J. Parasit. - 1984. - vol. 70. P. 987-988).

Методика с имплантацией дочерних пузырей эхинококка в фиброзную полость, сформированную вокруг инородного тела в печень, не моделирует патогенез развития эхинококкоза, трудоемка и не удобна для воспроизведения.

Характеристика прототипа.

Наиболее близкий нашему изобретению является способ, предложенный Мирходжаевым И. А. , Абдуллаходжаевым М.С., Исрапиловым Р.И. (Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 1998, том 125, 4, с. 477-480).

Описание прототипа.

Кроликам массой 2200-3100 г под калипсоловым наркозом (0,2 мл/100 г), производят верхнесрединную лапаротомию. Предварительно в линию разреза вводят пенициллин (5000 ед. в 0,5% растворе новокаина).

В толщу паренхимы печени между правой и левой долями притупленной иглой с внутренним диаметром 0,5 мм вводят 1,5-2,0 мл инвазивной эхинококковой жидкости, разведенной физиологическим раствором так, чтобы в инокуляте было 100-200 живых протосколексов и сколексов.

Место пункции заклеивали медицинским клеем МК-2, МК-6 или засыпают гемостатической губкой. Затем в эту зону имплантируют 1-2 живые дочерние эхинококковые кисты, после чего между правой и левыми долями печени накладывают провизорные кетгутовые швы с последующим послойным ушиванием раны наглухо.

Предложенным способом воспроизводится эхинококкоз печени и развитие ее сопровождается реактивными и структурными сдвигами в паренхиме печени.

Критика прототипа.

Предложенный метод не позволяет моделировать солитарный гидатидозный эхинококкоз печени и не вполне моделирует соответствующую патологию человека. Возникающее при этом обсеменение эхинококком как брюшной полости, так и самой печени делают модель непригодной для использования в изучении степени воздействия антипаразитарного агента на ткань печени и другие органы.

Цель предлагаемого в качестве изобретения способа: разработать способ моделирования солитарного эхинококкоза печени для изучения реакции ткани печени, для скрининга противоэхинококковых препаратов.

Сущность изобретения: беспородным белым крысам массой 150-250 г под эфирным наркозом производят верхнесрединную лапаротомию. Предварительно в линию разреза вводили пенициллин 2000 ед на 0,5% растворе новокаина).

Берут живую дочернюю эхинококковую кисту размером не более чем 2•2 см (интраоперационный материал) и двумя узловыми швами фиксируют ее на капсуле печени. Атравматичной не рассасывающейся ниткой накладывают на капсулу печени два кисетных шва со сведением всех пяти долек печени, между которыми помещают эхинококковую кисту. При необходимости накладывали на края еще 2-3 узловых шва, создавая герметичность образовавшейся полости.

Для подтверждения развития эхинококкоза и изучения динамики структурных изменений в ткани печени используют гистологические (окраска гематоксилин-эозин по Ван-Гизону) и гистохимические методы (реакции Брашке и Шика) исследования.

На 30-е сутки при аутопсии в печени между дольками обнаружены нагноившаяся эхинококковая киста, размерами до 1,5 см с содержимым мутного характера. Вокруг плотная фиброзная капсула, цвет и консистенция печени не изменена, на брюшине и на других органах эхинококковых пузырей не обнаружено.

При гистологическом исследовании внутри лейкоцитарный вал, снаружи лимфогистиоцитарный инфильтрат с фибринозным некрозом соединительной ткани. Печеночные клетки при этом находятся в состоянии глубокой вакуольной и гиалиново-капельной дистрофии с фокальным некрозом клеток.

Предлагаемый способ воспроизводит одиночную эхинококковую кисту у экспериментальных животных в фазе поздних посмертных изменений (по М.Ю.Гилевич).

Пример конкретного использования.

Способ, предложенный в качестве изобретения, применен для изучения проницаемости фиброзной капсулы для противоэхинококковых средств контактного действия и изучения их токсического влияния на организм.

Нелинейной белой крысе, массой 230 грамм под эфирным наркозом произвели верхнесрединную лапаротомию. Предварительно в линию разреза вводили пенициллин 2000 ед. на 0,5% растворе новокаина). Предварительно интраоперационно брали живую дочернюю эхинококковую кисту размером 1,5•1,3 см и двумя узловыми швами фиксируют ее на капсуле печени, так, чтобы не повредить целостность кисты. Атравматичной нерассасывающейся ниткой свели все пять долек печени наложением двух кисетных швов, между которыми поместили эхинококковую кисту.

На 30-е сутки эксперимента произвели лапаротомию под эфирным наркозом. При этом на месте моделирования обнаружилось жидкостное образование с плотной капсулой. Пунктировали и эвакуировали 3-4 мл мутной жидкости. При гистологическом исследовании препарата печени со сформированным кистозным образованием обнаружены изменения, характерные для фиброзной капсулы эхинококковой кисты.

Полезность изобретения.

Предлагаемый способ в отличие от известных позволяет моделировать одиночную эхинококковую кисту печени, удобный для изучения проницаемости фиброзной капсулы для противоэхинококковых средств. При этом моделирование эхинококкоза производится без обсеменения брюшной полости и ткани печени. Способ прост в исполнении, не требует больших материальных затрат.

Литература
Способ, предложенный Мирходжаевым И.А., Абдуллаходжаевым М.С., Исрапиловым Р.И. (Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 1998, том 125, 4, с. 477-480) - прототип.

Изобретение относится к медицине, а именно к моделированию, и может быть применимо для моделирования солитарного эхинококкоза печени в эксперименте. Имплантируют дочернюю эхинококковую кисту в полость, которая формируется сведением двумя кисетными швами всех пяти долей печени белых крыс. Способ позволяет исключить структурные и реактивные сдвиги в паренхиме печени, повысить точность воспроизведения эхинококкоза печени.

Способ моделирования солитарного эхинококкоза печени в эксперименте, заключающийся в имплантации дочерней эхинококковой кисты в полость, которая формируется сведением двумя кисетными швами всех пяти долей печени белых крыс.