СПОСОБ ИНТРАОПЕРАЦИОННОЙ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ АНТИПАРАЗИТАРНОЙ ОБРАБОТКИ ПРИ ЭХИНОКОККЭКТОМИИ Российский патент 2004 года по МПК G01N33/50 

Изобретение относится к медицине, ветеринарии и может быть использовано в хирургическом лечении эхинококкоза в эксперименте и клинике.

По литературным данным при эхинококкэктомии интраоперационно эффективность обезвреживания зародышевых элементов оценивают путем микроскопирования содержимого эхинококковой кисты, а также смывов из фиброзной полости до и после антипаразитарной обработки [Гилевич М.Ю. “Выбор метода обработки полости фиброзной капсулы при эхинококкэктомии”. Журнал “Хирургия”, 1984, 4, 74; Хохлов Н.Ф. “О химической обработке стенок остаточной полости фиброзной капсулы при эхинококкэктомии”. Журнал “Экспериментальная хирургия и анестезиология”, 1966, 4, 47-49; Лукашенко Н.П., Коваленко Ф.П., Колосова М.О. “Влияние некоторых химических соединений на свободные и заключенные в пузырьках сколексы”. Журнал “Медицинская паразитология”, 1977, 1, 86-95; Коваленко Ф.П., Разаков Ш.А. и др. “Экспериментальная разработка и клинические испытания нового метода хирургического лечения гидатидозного эхинококкоза”, Эхинококкозы: методы исследований, лечения, профилактики. М.: 1990, 123-128].

Перечисленные способы основаны на определении жизнеспособности протосколексов. Критериями жизнеспособности считаются их двигательная активность в теплом физиологическом растворе при 37-40°С, количество известковых телец, состояние морфологической структуры паренхимы, короны кручьев и тегумента.

Показателями гибели протосколексов служат: отсутствие подвижности после их отмывания теплым физиологическим раствором, уменьшение количества или исчезновение известковых телец и появление деструктивных изменений разной степени выраженности (сглаженность структуры паренхимы, деформация короны кручьев или их отпадение, набухание, отслоение и нарушение целостности тегумента, выход жидкого содержимого из паренхимы протосколексов наружу через дефекты тегумента, способность окрашиваться).

Изменения тонкой структуры протосколексов выявляют и методом просвечивающей электронной микроскопии [Леонов Ф.В. Функциональная морфология однокамерного эхинококкоза человека, его взаимодействие с тканями легких, печени, изменения при ультразвуковом и лазерном воздействии: Дисс.канд.мед.наук - Ташкент, 1990].

Эффективность антипаразитарной обработки исследуют также постановкой биологической пробы, основанной на имплантации в брюшную полость лабораторным животным зародышевых элементов до и после их антипаразитарной обработки [Астафьев Б.А. Экспериментальные модели паразитов в биологии и медицине. М.: 1989, - 281; Коваленко Ф.П., Кротов А.И. Экспериментальная терапия эхинококкоза. Сообщение 1. Лабораторная модель эхинококкоза и влияние на развитие лавроцист Echinococcus granulosus сарколизинокридина, левамизола и мебендозола. Журнал “Медицинская паразитология”, 1976, №5, с.546-551; Meymarian E., et al. Hostparasite relasion ships in echinococcosis: X. Laboratory evalution of chemical scolicides as adjuncts to hydatid surgery / Ann. of Surgery. - 1963, vol.158, р.211-215].

Вышеуказанные аналоги имеют следующие недостатки.

Изменения, возникающие у протосколексов, неспецифичны, невозможно оценить их необратимость, трудно различимы и расцениваются субъективно в зависимости от подготовки исполнителя.

Способ с постановкой биологической пробы для экспресс-диагностики не пригоден в связи с очень медленным ростом эхинококковых кист у подопытных животных.

Способ просвечивающей электронной микроскопии трудоемкий и многим клиникам недоступен.

Характеристика прототипа.

Наиболее близким способом к нашему изобретению является способ, предложенный Коваленко Ф.П., Расуловым С.М., Хакбердиевым П.С. и др. “Способ определения жизнеспособных протосколексов эхинококка в пробе in vitro - авторское свидетельство №1635961. Бюл. №11 от 1991 г. Этот способ взят нами в качестве прототипа.

Описание прототипа: на предметное стекло помещают две капли взвеси исследуемых протосколексов в физиологическом растворе. Первая капля контрольная, вторая тестируемая. С помощью фильтровальной бумаги из второй капли удаляют физиологический раствор и наносят на протосколексы 1 каплю глицерина. Обе капли покрывают покровным стеклом и тотчас подвергают микроскопии при малом увеличении микроскопа. У живых протосколексов под влиянием глицерина наблюдается контрактура тела. При этом протосколексы уменьшаются в размере 1,5-2 раза по сравнению с контролем, утрачивают округлую форму, приобретают неправильные очертания, паренхима тела протосколексов просветляется, известковые тельца становятся невидимыми. По внешнему виду протосколексы напоминают кристаллы. Указанные изменения наступают через 1-2 секунды и наблюдаются в течение 30-40 минут после добавления глицерина. У погибших протосколексов при добавлении глицерина указанные изменения при сравнении с контролем не наблюдаются.

Критика прототипа.

Большинство хирургов для интраоперационной антипаразитарной обработки при эхинококкэктомии применяют 80%-ный глицерин. Использовать глицерин интраоперационно в качестве антипаразитарного средства и тестирующего агента нельзя, так как контрактура протосколексов не сохраняется более 20 минут.

При воздействии глицерина в ходе тестирования невозможно оценить обратимость изменений, возникающих у протосколексов в ходе антипаразитарной обработки.

Цель предлагаемого в качестве изобретения способа: повышение достоверности и упрощение интраоперационной экспресс-диагностики эффективности антипаразитарной обработки при эхинококкэктомии.

Сущность изобретения: во время операции после пункции эхинококковой кисты на первое предметное стекло с лункой вливают 1-2 капли взвеси протосколексов, не обработанных антипаразитарным средством, на второе стекло - 1-2 капли обработанных антипаразитарным средством протосколексов и промытых теплым физиологическим раствором, на третье стекло - протосколексы из центрофугата промывных вод из фиброзной полости. Затем добавляют на каждое стекло 2 капли дуоденального содержимого, взятого у больного не более чем за 2 часа до исследования, для моделирования биологической активности протосколексов in vitro. Все три пробы помещают в термостат при температуре 70°С на 3 минуты. После инкубации их просматривают под МБС (8×2,4). - при этом необработанные антипаразитарным средством сколексы 96,4%+/-1,0 выворачиваются и приобретают форму грибка, активно двигаются. При 10 мин фиксации протосколексов в растворе хлорида натрия 30% или в растворе глицерина 80% выворачивание сколексов не наблюдается. В третьей пробе при недостаточной фиксации или при применении фурациллина для антипаразитарной обработки выворачивание наступает до 10% протосколексов.

При наличии выворачивания сколексов в первой пробе и при отсутствии во второй и третьей такая антипаразитарная обработка признается эффективной. При наличии выворачивания протосколексов во второй или в третьей пробе антипаразитарная обработка неэффективна.

Для оценки жизнеспособности активизированных протосколексов нами поставлена биологическая проба на 18- беспородных крысах.

Результаты биологической пробы на беспородных крысах, зараженных внутрибрюшинно активизированными протосколексами, см. в таблице.

Как видно из таблицы, в контрольной группе при применении для заражения животных активизированных протосколексов в 90% случаев биопроба оказалась положительной.

Пример конкретного применения.

Больной С., 22 года, история болезни 5/739, поступил в клинику общей хирургии Дагмедакадемии 26.06.97 г. с жалобами на ноющие тупые боли в правом подреберье, не связанные с приемом пищи. При УЗИ в проекции 6-7 сегмента печени визуализируется жидкостное образование диаметром 8×10,5 см с плотной капсулой и негомогенным содержимым.

Реакция латекс - агглютинации и непрямой гемагглютинации положительные. Клинический диагноз - солитарный эхиноккоз печени в стадии ранних постсмертных изменений.

Под эндотрахеальным наркозом выполнена операция - полузакрытая эхинококкэктомия. После пункции эхинококковой кисты на первое предметное стекло с лункой нанесли 2 капли взвеси протосколексов, не обработанных антипаразитарным средством, полученных при пункции эхинококковой кисты. На второе стекло - 2 капли протосколексов, фиксированных 10 мин в растворе 30%-ного хлорида натрия, введенного в кисту эхинококка и отмытых физиологическим раствором. На третье стекло - 2 капли взвеси протосколексов, выделенных из смывов фиброзной полости печени. Затем добавили на каждое стекло по 2 капли дуоденального сока, взятого у больного за 2 часа до исследования. Все три пробы покрыты покровными стеклами и помещены в термостат при температуре 70°С на 3 мин. После инкубации сразу пробы микроскопировали (МБС 8×2,4). При этом в первой пробе 96,4% протосколексов вывернулись. Во второй и третьей пробе выворачивание протосколексов не наблюдалось. Антипаразитарная обработка признана эффективной.

С целью изучения отдаленных результатов 12.05.98 г. и 19.12.99 г. произведено УЗИ органов брюшной полости. В области операции и в органах брюшной полости рецидива не обнаружено. Жалоб нет. Состояние удовлетворительное.

Полезность изобретения: предлагаемый способ обеспечивает повышение достоверности и упрощение интраоперационной экспресс-оценки эффективности антипаразитарной обработки при эхинококкэктомии. Упрощение способа достигается тем, что он основан на хорошо различимом признаке - выворачивание жизнеспособных сколексов после воздействия дуоденального сока и инкубации при t 70°С в течение 3 минут, т.е. при моделировании биологической активности протосколексов in vitro. Повышение достоверности достигается тем, что на результаты тестирования не влияет степень подготовки оператора и учитывается обратимость изменений, возникших в ходе антипаразитарной обработки.

Изобретение относится к области медицины и ветеринарии, в частности к хирургии и паразитологии. Способ позволяет повысить достоверность и упростить интраоперационную экспресс-диагностику эффективности антипаразитарной обработки при эхинококкэктомии. Осуществляют тестирование протосколексов in vitro и микроскопию, при этом пробу обрабатывают дуоденальным соком, инкубируют при температуре 70°С в течение 3 минут и при отсутствии выворачивания протосколексов антипаразитарная обработка эхинококковых кист признается эффективной. 1 табл.

Способ интраоперационной экспресс-диагностики эффективности антипаразитарной обработки при эхинококкэктомии, включающий тестирование протосколексов in vitro и микроскопию, отличающийся тем, что пробу обрабатывают дуоденальным соком, инкубируют при температуре 70°С в течение 3 мин и при отсутствии выворачивания протосколексов антипаразитарная обработка эхинококковых кист признается эффективной.