СПОСОБ ЗАЩИТЫ РАСТЕНИЙ Российский патент 2004 года по МПК C12N15/82 A01N65/00 

Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть)

Изобретение предназначено для защиты растений от поражения патогенами. Устойчивость к болезням у растений синергетически повышается, если обрабатывать обычным бактерицидом иммуномодулированные растения, т.е. растения с активированной СПУ (системной приобретенной устойчивостью). Иммуномодуляция, в свою очередь, может достигаться обработкой растений химическим индуктором СПУ, с помощью программы избирательной селекции, основанной на отборе конститутивной экспрессии генов СПУ и/или устойчивого к болезням фенотипа, или трансформацией растений одним или несколькими генами СПУ. 29 з.п. ф-лы, 40 табл., 3 ил.

1. Способ защиты растения от поражения патогенами путем синергетического повышения устойчивости к болезням, включающий следующие стадии: (а) получение иммуномодулированного растения, имеющего первый уровень устойчивости к болезням, причем иммуномодулированное растение является (а1) мутантным растением, несущим ген конститутивного иммунитета (cim), (а2) мутантным растением, имеющим повреждение, напоминающее болезнь, или (а3) растением, полученным путем рекомбинантной экспрессии в растении гена системной приобретенной устойчивости (СПУ), (б) обработку иммуномодулированного растения по меньшей мере одним бактерицидом, который обусловливает второй уровень устойчивости к болезням, (в) при этом обработка бактерицидом иммуномодулированного растения обусловливает синергетически повышенный третий уровень устойчивости к болезням, который выше суммы первого и второго уровней устойчивости к болезням.2. Способ по п.1, где указанное cim-мутантное растение выбирают из популяции растений согласно следующим стадиям: (а) проводят оценку экспрессии генов СПУ в незараженных растениях, которые являются фенотипически нормальными, что обозначает отсутствие у незараженных растений фенотипа, напоминающего повреждение болезнью, и (б) проводят отбор незараженных растений, которые конститутивно экспрессируют гены СПУ в отсутствии вирусной, бактериальной или грибковой инфекции.3. Способ по п.1, где мутантное растение, имеющее повреждение, напоминающее болезнь, выбирают из популяции растений согласно следующим стадиям: (а) проводят оценку экспрессии генов СПУ в незараженных растениях, которые имеют фенотип, напоминающий повреждение болезнью, и (б) проводят отбор незараженных растений, которые конститутивно экспрессируют гены СПУ в отсутствии вирусной, бактериальной или грибковой инфекции.4. Способ по п.1, где ген СПУ представляет собой функционально активную форму гена NIM1, кодирующую протеин NIM1, участвующий в пути трансдукции сигнала, что приводит к системной приобретенной устойчивости у растений.5. Способ по п.4, где протеин NIM1 включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2.6. Способ по п.4, где ген NIM1 включает кодирующую последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.7. Способ по п.1, где ген СПУ кодирует измененную форму протеина NIM1, который обеспечивает конститутивную экспрессию СПУ гена в трансгенных растениях.8. Способ по п.7, где измененная форма протеина NIM1 имеет остатки аланина вместо остатков серина в положениях 55 и 59 аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2.9. Способ по п.8, где измененная форма протеина NIM1 включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 8.10. Способ по п.9, где кодирующая молекула ДНК включает нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NО: 7.11. Способ по п.7, где измененная форма протеина NIM1 имеет N-концевое укорочение аминокислотной последовательности, соответствующее примерно аминокислотам в положениях 1-125 SEQ ID NO: 2.12. Способ по п.11, где измененная форма протеина NIM1 включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 10.13. Способ по п.11, где кодирующая молекула ДНК включает нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 9.14. Способ по п.7, где измененная форма протеина NIM1 имеет С-концевое укорочение аминокислотной последовательности, соответствующее примерно аминокислотам в положениях 522-593 SEQ ID NO: 2.15. Способ по п.14, где измененная форма протеина NIM1 включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 12.16. Способ по п.14, где кодирующая молекула ДНК включает нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 11.17. Способ по п.7, где измененная форма протеина NIM1 имеет N-концевое укорочение аминокислотной последовательности, соответствующее примерно аминокислотам в положениях 1-125 SEQ ID NO: 2, и С-концевое укорочение аминокислотной последовательности, соответствующее примерно аминокислотам в положениях 522-593 SEQ ID NO: 2.18. Способ по п.17, где измененная форма протеина NIM1 включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 14.19. Способ по п.17, где кодирующая молекула ДНК включает нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 13.20. Способ по п.7, где измененная форма протеина NIM1 в основном состоит из анкириновых мотивов, соответствующих примерно аминокислотам в положениях 103-362 SEQ ID NO: 2.21. Способ по п.20, где измененная форма протеина NIM1 включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 16.22. Способ по п.21, где измененная форма протеина NIM1 включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 15.23. Способ по любому из пп.6, 10, 13, 16, 19 и 22, где молекула ДНК гибридизуется с кодирующей последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 1, 7, 9, 11, 13 или 15 при следующих условиях: гибридизация в 1%-ном БСА; 520 мМ NaPО₄, pH 7,2; 7%-ной натриевой соли лаурилсульфата; 1мМ ЭДТК; 250 мМ хлориде натрия при 55°С в течение 18-24 ч и промывка в 6-кратном растворе хлорида и цитрата натрия (ХЦН) в течение 15 мин (3-кратная промывка), в 3-кратном ХЦН в течение 15 мин (1-кратная промывка) при 55°С.24. Способ по любому из пп.1-23, где бактерицид представляет собой фунгицид, выбранный из группы:

4-[3-(4-хлорфенил)-3-(3,4-диметоксифенил)акрилоил]морфолин (“диметоморф”);

5-метил-1,2,4-триазол[3,4-b][1,3]бензотиазол(“трициклазол”);

3-аллилокси-1,2-бензотиазол-1,1-диоксид(“пробоназол”);

α-[2-(4-хлорфенил)этил]-а-(1,1-диметилэтил)-1Н-1,2,4-триазол-1-этанол(“тебуконазол”);

1-[[3-(2-хлорфенил)-2-(4-фторфенил)оксиран-2-ил]метил]-1Н-1,2,4-триазол(“эпоксиконазол”);

μ-(4-хлорфенил)-μ-(1-циклопропилэтил)-1Н-1,24-триазол-1-этанол(“ципроконазол”);

5-(4-хлорбензил)-2,2-диметил-1-(1Н-1,2,4-триазол-1-илметил)циклопентанол(“метконазол”);

2-(2,4-дихлорфенил)-3-(1Н-1,2,4-триазол-1-ил)пропил-1,1,2,2-тетрафторэтиловый эфир (“тетраконазол”);

метил-(Е)-2-{2-[6-(2-цианфенокси)пиримидин-4-илокси]фенил]-3-метоксиакрилат (“ICI A 5504”, “азоксистробин”);

метил-(Е)-2-метоксиимино-2-[α-(орто-толилокси)-орто-толил]ацетат(“BAS 490F”, “крезоксимметил”);

2-(2-феноксифенил)-(Е)-2-метоксиимино-N-метилацетамид;

[2-(2,5-диметилфеноксиметил)фенил]-(Е)-2-метоксимино-N-метилацетамид;

(1R,3S/1S,3R-2,2-дихлор-Н-[(R)-1-(4-хлорфенил)этил]-1-этил-3-метилциклопропанкарбоксамид (“KTU 3616”);

комплекс этилен-бис-дитиокарбаматов марганца и цинка (“манкоцеб”);

1-[2-(2,4-дихлорфенил)-4-пропил-1,3-диоксолан-2-илметил]-1Н-1,2,4-триазол (“пропиконазол”);

1-[2-[2-хлор-4-(4-хлорфенокси)фенил]-4-метил-1,3-диоксолан-2-илметил}-1Н-1,2,4-триазол (“дифеноконазол”);

1-[2-(2,4-дихлорфенил)пентил]-1Н-1,2,4-триазол (“пенконазол”);

цис-4-[3-(4-трет-бутилфенил)-2-метилпропил]-2,6-диметилморфолин (“фенпропиморф”);

1-[3-(4-трет-бутилфенил)-2-метилпропил]пиперидин (“фенпропидин”);

4-циклопропил-6-метил-N-фенил-2-пиримидинамин (“ципродинил”);

метиловый эфир (RS)-N-(2,6-диметилфенил)-N-(метоксиацетил) аланина (“металаксил”);

метиловый эфир (R)-N-(2,6-диметилфенил)-N-(метоксиацетил) аланина (“R-металаксил”);

1,2,5,6-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2,1-ij]]хинолин-4-он(“пирофилон”);

кислый этиловый эфир фосфоновой кислоты (“фосэтил”).

4-[3-(4-хлорфенил)-3-(3,4-диметоксифенил)акрилоил] морфолин (“диметоморф”);

5-метил-1,2,4-триазол[3,4-в][1,3] бензотиазол (“трициклазол”);

3-аллилокси-1,2-бензотиазол-1,1-диоксид (“пробоназол”);

α-[2-(4-хлорфенил)этил]-α-(1,1-диметилэтил)-1Н-1,2,4-триазол-1-этанол (“тебуконазол”);

1-[[3-(2-хлорфенил)-2-(4-фторфенил)оксиран-2-ил]метил]-1Н-1,2,4-триазол (“эпоксиконазол”);

μ-(4-хлорфенил)-μ-(1-циклопропилэтил)-1Н-1,24-триазол-1-этанол (“ципроконазол”);

5-(4-хлорбензил)-2,2-диметил-1-(1Н-1,2,4-триазол-1-илметил) циклопентанол (“метконазол”);

2-(2,4-дихлорфенил)-3-(1Н-1,2,4-триазол-1-ил)пропил-1,1,2,2-тетрафторэтиловый эфир (“тетраконазол”);

метил-(Е)-2-[2-[6-(2-цианфенокси)пиримидин-4-илокси]фенил}-3-метоксиакрилат (“ICI A 5504”, “азоксистробин”);

метил-(Е)-2-метоксиимино-2-[α-(орто-толилокси)-орто-толил]ацетат(“ВАS 490F”, “крезоксимметил”);

2-(2-феноксифенил)-(Е)-2-метоксиимино-N-метилацетамид;

[2-(2,5-диметилфеноксиметил)фенил]-(Е)-2-метоксимино-N-метилацетамид;

(1R,3S/1S,3R)-2,2-дихлор-N-[(R)-1-(4-хлорфенил)этил]-1-этил-3-метилциклопропанкарбоксамид (“KTU 3616”);

комплекс этилен-бис-дитиокарбаматов марганца и цинка (“манкоцеб”);

1-[2-(2,4-дихлорфенил)-4-пропил-1,3-диоксолан-2-илметил]-1H-1,2,4-триазол (“пропиконазол”);

1-{2-[2-хлор-4-(4-хлорфенокси)фенил]-4-метил-1,3-диоксолан-2-илметил}-1Н-1,2,4-триазол (“дифеноконазол”);

1-[2-(2,4-дихлорфенил)пентил]-1Н-1,2,4-триазол (“пенконазол”);

цис-4-[3-(4-трет-бутилфенил)-2-метилпропил]-2,6-диметилморфолин (“фенпропиморф”);

1-[3-(4-трет-бутилфенил)-2-метилпропил]пиперидин (“фенпропидин”);

4-циклопропил-6-метил-N-фенил-2-пиримидинамин (“ципродинил”);

метиловый эфир (RS)-N-(2,6-диметилфенил)-N-(метоксиацетил)аланина (“металаксил”);

метиловый эфир (R)-N-(2,6-диметилфенил)-N-(метоксиацетил)аланина (“R-металаксил”);

1,2,5,6-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2,1-ij)]хинолин-4-он (“пирофилон”);

кислый этиловый эфир фосфоновой кислоты (“фосэтил”), а второй бактерицид представляет собой либо производное бензотиадиазола, либо производное изоникотиноновой кислоты, либо производное салициловой кислоты.

Приоритет по пунктам: