Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть)н
Изобретение относится к области иммунобиотехнологии и может найти применение в медицине. Изобретение касается способа получения рецептора для человеческого антигена, который является низкоиммуногенным или неиммуногенным у людей, включающий в себя стадии, на которых отбирают комбинацию функционально перегруппированных VH и VL цепей иммуноглобулина, где по меньшей мере указанная VH цепь получена из по существу непримированных зрелых человеческих В-лимфоцитов или из по существу анергических человеческих В клеток, а указанная VL цепь получена из природной популяции человеческих В клеток, причем указанные цепи экспрессируются с рекомбинантного вектора и для отбора используют in vitro дисплей-систему для связывания с человеческим антигеном. Описаны также рецепторы, которые являются низкоиммуногенными или неиммуногенными у людей и направлены на человеческие антигены, причем указанные рецепторы можно получить с помощью способа по изобретению. Рецепторы предпочтительно представляют собой антитела или их фрагменты, либо иммуноконъюгаты, содержащие VH/VL цепи указанного антитела. В частности, описываются рецепторы, направленные на человеческие опухолевые антигены, предпочтительно на человеческий опухолевый антиген 17-1 А, также известный как ЕрСАМ, EGP или GA 733-2. Создан набор, полезный для осуществления способа по изобретению, и фармацевтическая композиция, способная конъюгировать антигены в человеческом организме, содержащие вышеупомянутые рецепторы. 5 с. и 21 з.п. ф-лы, 55 ил., 3 табл.
1. Способ получения рецептора для человеческого антигена, который низкоиммуногенен или неиммуногенен у людей, включающий стадию отбора комбинации функционально перегруппированных VH и VL цепей иммуноглобулина, отличающийся тем, что по меньшей мере VH цепь получают из непримированных зрелых человеческих В-лимфоцитов, а VL цепь - из природного репертуара человеческих В клеток, причем указанные цепи экспрессируются с рекомбинантного вектора, используя для отбора дисплей-систему in vitro для связывания с человеческим антигеном.2. Способ по п.1, отличающийся тем, что рецептор для человеческого антигена представляет собой иммуноглобулин или его фрагмент.3. Способ по п.2, отличающийся тем, что фрагмент иммуноглобулина представляет собой Fv-фрагмент.4. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что человеческий антиген представляет собой человеческий опухолевый антиген.5. Способ по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что человеческий опухолевый антиген представляет собой человеческий 17-1А антиген.6. Способ по любому из пп.1-5, отличающийся тем, что дисплей-система in vitro представляет собой фаговую дисплей-систему.7. Способ по любому из пп.1-6, отличающийся тем, что VH и возможно VL цепи иммуноглобулина получают из репертуара человеческого IgD.8. Способ по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что указанная комбинация перегруппированных цепей экспрессируется с одной или более различных библиотек.9. Способ по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что VH цепь имеет одну из двух аминокислотных последовательностей, описанных в SEQ ID No 143 (аминокислотные положения со 108 по 234) и SEQ ID No 145 (аминокислотные положения со 139 по 251), и/или VI цепь имеет одну из двух аминокислотных последовательностей, описанных в SEQ ID No 141 (аминокислотные положения с 1 по 107) и SEQ ID No 147 (аминокислотные положения со 125 по 231).10. Способ по любому из пп.1-9, отличающийся тем, что отбор включает (1) связывание дисплей-носителя, экспрессирующего рецептор антигена (а) на иммобилизованном антигене-мишени или его фрагментах, (б) на возможно меченых клетках, экспрессирующих антиген-мишень или его фрагменты, или (в) с растворимым, предпочтительно меченым антигеном-мишенью или его фрагментами, (2) отмывку неспецифически связывающегося дисплей-носителя (а и б) и последующую элюцию специфически связывающегося дисплей-носителя или (3) позитивное обогащение дисплей-носителя, связанного с антигеном-мишенью (б и в), из раствора антигена-мишени или из суспензий клеток, экспрессирующих антиген-мишень, выделенные дисплей-носители, включающие рецепторы антигена, при необходимости размножают репликацией и подвергают дальнейшему отбору in vitro соответствии со стадиями (1)-(3).11. Способ по любому из пп.1-10, отличающийся тем, что перед стадией отбора VH или VL цепь отбирают по способности связывания с антигеном вместе с заместительной V цепью.12. Способ по п.11, отличающийся тем, что заместительная V цепь представляет собой мышиную VH или VL цепь.13. Способ по любому из пп.1-12, отличающийся тем, что отбор, подходящей комбинации VH и VL цепей осуществляют путем тестирования одной и той же VH или VL цепи в комбинации со множеством различных VL или VH цепей на способность связывания с человеческим антигеном.14. Способ по любому из пп.1-13, отличающийся тем, что после отбора дополнительно получают человеческие VH или VL цепи или соответствующие кодирующие их нуклеиновые кислоты и сливают эти цепи с теми же или другими VH или VL цепями, либо с константными областями тяжелой (СН) или легкой (CL) цепей иммуноглобулина или с их участками, либо с неиммуноглобулиновыми цепями и соответствующими нуклеиновыми кислотами соответственно, и/или после отбора дополнительно получают человеческие VH и VL цепи и физически соединяют эти цепи с небелковыми фармацевтическими средствами и/или другими биологически активными молекулами.15. Способ по п.14, отличающийся тем, что константные области СН и CL цепей получены из человеческого IgGI или IgGS.16. Рецептор для человеческого антигена, который является низкоиммуногенным или неиммуногенным у людей, содержащий комбинацию функционально перегруппированных VH и VL цепей, где по меньшей мере указанная VH цепь получена из непримированных зрелых человеческих В-лимфоцитов, а указанная VL цепь получена из природного репертуара человеческих B клеток.17. Рецептор для человеческого антигена по п.16, отличающийся тем, что он получен способом по любому из пп.1-15.18. Рецептор для человеческого антигена по п.16 или 17, отличающийся тем, что этот рецептор представляет собой антитело или его фрагмент.19. Рецептор для человеческого антигена по любому из пп.16-18, отличающийся тем, что этот рецептор является специфичным для человеческого опухолевого антигена.20. Рецептор для человеческого антигена по любому из пп.16-19, отличающийся тем, что этот рецептор является специфичным для нативного человеческого 17-1А антигена.21. Рецептор для человеческого антигена по п.20, отличающийся тем, что VH цепь имеет одну из двух аминокислотных последовательностей, описанных SEQ ID No 143 (аминокислотные положения со 108 по 234) и SEQ ID No 145 (аминокислотные положения со 139 по 251), и/или VL цепь имеет одну из двух аминокислотных последовательностей, описанных SEQ ID No 141 (аминокислотные положения с 1 по 107) и SEQ ID No 147 (аминокислотные положения со 125 по 231).22. Набор для отбора рецептора для человеческого антигена, содержащий комбинацию функционально перегруппированных VH и VL цепей иммуноглобулина, отличающийся тем, что по меньшей мере одна из VH и VL цепей получена из непримированных зрелых человеческих В-лимфоцитов, причем указанные цепи экспрессируются с рекомбинантных векторов in vitro дисплей-системы.23. Рецептор для человеческого антигена, распознающий эпитоп внеклеточного домена нативного человеческого 17-1А антигена, отличающийся тем, что содержит человеческую VH цепь и человеческую VL цепь, которые были функционально перегруппированы.24. Рецептор по п.23, отличающийся тем, что указанный эпитоп содержит аминокислотную последовательность по меньшей мере одного из пептидов №8, 11, 13, 14, 59, 60, 77 и 79, как определено в таблице 3.25. Рецептор по п.24, отличающийся тем, что VH цепь имеет одну из двух аминокислотных последовательностей, описанных в SEQ ID No 143 (аминокислотные положения со 108 по 234) и SEQ ID No 145 (аминокислотные положения со 139 по 251), и/или VL цепь имеет одну из двух аминокислотных последовательностей, описанных в SEQ ID No 141 (аминокислотные положения с 1 по 107) и SEQ ID No 147 (аминокислотные положения со 125 по 231).26. Фармацевтическая композиция, способная конъюгировать антигены в человеческом организме, содержащая рецептор по любому из пп.16-21 и/или рецептор для человеческого антигена по любому из пп.23-25 и фармацевтически приемлемый носитель.
