СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ В КРОВИ Российский патент 2004 года по МПК G01N33/84 

Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к медицине, биологии и сельскому хозяйству, а именно для количественного определения эритроцитов в крови человека, животных и беспозвоночных.

Сущность изобретения
Задачами изобретения являются определение количества эритроцитов в гемолизированной крови и увеличение времени ее хранения со времени взятия.

В настоящее время подсчет эритроцитов производят в камере Горяева и автоматических гематологических анализаторах, где время хранения исследуемой крови ограничено от нескольких минут до 2-х часов со времени ее взятия. (Справочник по клиническим лабораторным методам исследования под редакцией проф. Е. А. Кост. М.: Медицина, 1975, с.22-23. Обеспечение качества лабораторных исследований. Преаналитический этап. Справочное пособие под редакцией В.В. Меньшикова. М., 1999, с.50-51).

После 2-х часов хранения эритроциты крови начинают разрушаться, т.е. происходит гемолиз эритроцитов и их количественный подсчет становится невозможным.

Сущность способа
Взятую для исследования кровь гемолизируют 1,25% водным раствором тритона •100 (далее - тритон) в разведении 1:10. Полный гемолиз эритроцитов наступает через 3-5 секунд после внесения крови в раствор. В такой гемолизированной крови содержание ионов калия прямо пропорционально количеству эритроцитов в ней до гемолиза. А количество ионов калия определяют на электролитном анализаторе потенциометрическим методом, специфичность которого определяет ионселективная мембрана, приготовленная из антибиотика валиномицина (Титов В.Н. Специфичное определение калия в сыворотке крови способом турбидиметрин. Лаборатория. Журнал для врачей, 2001, 1, с.8). Концентрация ионов калия в эритроцитах составляет 74-94 ммоль/л (Справочник медицинские лабораторные технологии, том 2, под редакцией А.И.Карпищенко, Санкт-Петербург "Интермедика", 1999, с.206. Энциклопедия клинических лабораторных тестов под редакцией Н. Тица, Издательство "Лабинформ". М., 1997, с.228). Содержание ионов калия в растворе после гемолиза эритроцитов в герметично закрытой пробирке устойчиво сохраняется в течение 10 суток при комнатной температуре и до 6 месяцев и более при минус 15^oС и ниже.

Применение предложенного способа дает следующие результаты:
1. Количество эритроцитов определяют в частично или полностью гемолизированной крови.

2. Гемолизированную раствором тритона кровь для исследования транспортируют на дальние расстояния, например из космоса на Землю, т.к. такая кровь может храниться до 6 месяцев и более.

3. Количество эритроцитов в гемолизированной тритоном крови определяют до 10 суток ее хранения при комнатной температуре.

4. Механические и термические повреждения эритроцитов не являются помехой для их количественного определения.

5. Гемолизированная тритоном кровь для определения количества эритроцитов хранится до 6 месяцев и более со времени взятия.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения
Приготовление раствора тритона - Х-100
Готовят необходимый объем 1,25% раствора тритона на дистиллированной воде, оставляют его на одни сутки до полного растворения тритона. Полученный раствор прозрачен и стабилен в течение 5-6 месяцев при хранении в посуде из темного стекла при комнатной температуре.

Ход количественного определения эритроцитов
В пробирку, содержащую 0,36 мл 1,25% водного раствора тритона, вносят 0,04 мл цельной крови (разведение в 10 раз), перемешивают осторожным переворачиванием пробирки 3-4 раза и определяют содержание ионов калия на ионселективном электролитном анализаторе. Единица измерения - ммоль/л.

Расчет количества эритроцитов в 1 литре цельной крови производят по формуле

где А - количество эритроцитов в 1-м литре цельной крови;
С_оп - содержание ионов калия в опытной пробе в ммоль/л;
С_ст - содержание ионов калия в стандартной пробе в ммоль/л;
Х - количество эритроцитов в 1-м литре крови стандартной пробы
Например: С_оп=3,5 ммоль/л, С_ст=3,7 моль/л, х=4,0•10¹²/л
Тогда

Линейность определения содержания ионов калия в опытных пробах сохраняется от 2,0 ммоль/л до 10,0 ммоль/л, что равносильно определению количества эритроцитов в цельной крови в диапазоне от 2,0•10¹²/л до 10,0•10¹²/л.

С использованием предложенного способа на ионселективном электролитном анализаторе Синхрон-3 фирмы Beckman(США) исследовано количество эритроцитов в периферической крови у 50 больных, подобранных методом случайной выборки. У тех же больных параллельно произведен подсчет эритроцитов в счетной камере Горяева. Все они находились на лечении в Якутской городской клинической больнице 1 с 1 апреля 2001 г. по 25 декабря 2001 г.

В таблице 1 приведен статистический анализ результатов исследований.

Вывод. Количество эритроцитов в крови, определенное предлагаемым способом, достоверно (p<0,01) не отличается от такового, определенного в счетной камере Горяева.

Устойчивость сохранения концентрации ионов калия в гемолизированной тритоном крови проверял в 15 опытных пробах, замороженных в морозильной камере бытового холодильника "Бирюса-22", где температура держалась в пределах минус 18-15^oС. Содержание ионов калия в пробах измерялось 3 раза с интервалом в 3 месяца, оттаивание их до исследования производилось при комнатной температуре. Пробы хранились в герметично закрытых пробирках. В таблице 2 приведен статистический анализ результатов исследований.

Вывод. Устойчивое сохранение количества ионов калия (p<0,01) при таких условиях дает возможность применять предложенный способ при тех же условиях, т.е. количественно определять эритроциты в гемолизированной крови до 6 месяцев со времени взятия.

Изобретение относится к области медицины, в частности к лабораторной диагностике. Способ обеспечивает устойчивое сохранение количества ионов калия за счет чего появляется возможность определять эритроциты в гемолизированной крови до шести месяцев от времени взятия крови на исследование. Взятую для исследования кровь гемолизируют 1,25%-ным водным раствором тритона Х-100 в разведении 1:10 соответственно, затем определяют в ней на ионоселективном анализаторе содержание ионов калия, а количество эритроцитов в одном литре цельной крови (А) проводят по формуле А=С_оп/С_ст•Х, где C_оп - содержание ионов калия в опытной пробе, ммоль/л, С_ст - содержание ионов калия в стандартной пробе, ммоль/л, Х - количество эритроцитов в 1 л крови стандартной пробы. 2 табл.

Способ количественного определения эритроцитов в одном литре цельной крови, отличающийся тем, что взятую для исследования кровь гемолизируют 1,25%-ным водным раствором тритона Х-100 в разведении 1:10 соответственно, затем определяют в ней на ионоселективном анализаторе содержание ионов калия, а количество эритроцитов в одном литре цельной крови (А) проводят по формуле А=Cоп/Сст·X, где Соп - содержание ионов калия в опытной пробе, ммоль/л; Сст - содержание ионов калия в стандартной пробе, ммоль/л; X - количество эритроцитов в 1 л крови стандартной пробы.