КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПСОРИАЗА Российский патент 2004 года по МПК A61K35/50 A61P17/06 

Область техники.

Настоящее изобретение относится к области медицины человека и к дерматологии, в частности к композиции, полученной из плаценты человека, и обладающей активностью в регулировании скорости регенерации кожи, и поэтому применимой при лечении псориаза, а также настоящее изобретение относится к способу получения указанной композиции.

Предшествующий уровень техники.

Псориаз представляет собой уже давно выявленное заболевание. Его классифицировали как лепру греков и, как представляется, он существовал в Мексике до ее завоевания (Daune, M.; FSCHS, P.P. La Recherche (1980), 11:116-1066; International Journal of Dermatology. Vol.36, No.4, April 1977). Это заболевание поражает представителей всех рас на всех широтах и оно может проявляться в семье в течение нескольких поколений (Int. Journal of Dermatology. Vol.36, No.4, April 1977; Lerner, A.B. et al. Invest. Dermatol. 1975, 20(2):299-314, 1953).

Начало заболевания часто связано с поверхностными повреждениями кожи в виде ожогов и царапин. Способствовать возникновению или обострению псориаза могут другие факторы, подобные низкой влажности, инфекциям, стрессу или лекарственным препаратам.

Под влиянием ангиогенного фактора физическая травма может привести к изменению сосудистого компонента, процессов развития клеток эпидермиса и гомеостаза нейтрофилов и к так называемой тканевой псориатической реакции (Moroni P. et al. Derm. Beruf. Umwelt. 35 (5), p. 163-164, 1988).

Сообщалось, что неблагоприятное воздействие на псориаз оказывают климатические факторы, такие, как холод. В некоторых проведенных исследованиях частота псориаза была выше в Африке, где климат сухой и влажность низкая (Faber E.N. et al. Natural Epidemiology. History and genetic psoriasis. Second Ed., рage 231. Edit. Marcel Depper. New York, 1991).

Очень хорошо известно, что стресс может вызвать вспышку или обострение псориаза, хотя точный механизм этого неизвестен. Однако это могут объяснить исследования, основанные на психонейроиммунологии (Moroni, P., et al. Derm. Beruf. Umwelt, 35 (5) раg. 163-164, 1988).

В результате специализированного лечения поражения могут исчезнуть, но, почти наверняка, будут рецидивы и существуют тенденции к тому, что эффективность лечения при каждом его курсе утрачивается (Lerner А.В. et al. Invest. Dermatol. 1953, 20 (2): 299-314, 1953. Roenigk H.H.Jr. et al. Arch. Dermatol. 113(12): 1667-1670, 1977. Frappazz A. et al. Env. J. Dermatol. 1993, 3: р. 351-354. Mozzanica N. et al. Acta. Dermatol. Venerol. 1994, 186: р. 171-172. Ortonne J.P.New Dermatol. 1994, 13: р. 746-751. Panizonni R. Schweizerische Rundshau fur Medizin Praxis. 1995, 84: р. 649-653. Kirsner R.S. Am.Fam.Phys. 1995, 52: p. 237-240).

Из предшествующего уровня техники известно применение разнообразных препаратов для лечения псориаза, подобных пекам в вазелине или спиртовым растворам.

С прошлого века применяется антиалин и он играет важную роль в лечении данного заболевания, но его применение связано с неудобством ввиду того, что он вызывает раздражение кожи.

В 1925 г. было введено ультрафиолетовое облучение, которое продолжает применяться отдельно или в комбинации с другими лекарственными препаратами, но оно оказывает свои неблагоприятные побочные эффекты.

С давних времен применяются также псоралены, несмотря на их доказанное токсическое действие.

Кортикостероиды, применяемые местно, в целом были полезными в отдельных случаях, но тенденция к эффекту “рикошета” ограничивает их применение.

Недавно, хотя и с незначительным успехом, начали применять ретиноиды, некоторые антиметаболиты, подобные метотрексату, тиогуамину, и другие.

С III века из Китая поступали сообщения о применении плаценты в качестве биологического стимулятора.

Начиная с 1945 г. советский исследователь Филатов разработал и создал способ выделения веществ, обладающих свойствами, способствующими заживлению, начиная с тканей животных и растений, консервируемых в холоде, в отношении которых он применял гистотерапию. Плацента занимает важное место в гистотерапии (Филатов В. - М.: Медицина Медгиз, СССР, 1945).

В 1963 г. Орешкин на основании исследований, проведенных на 300 пациентах с кожными поражениями, пришел к выводу, что под влиянием гистотерапии излечение может наступить в 25% случаев, а более или менее очевидное улучшение можно получить в 38,5% случаев (Орешкин Е. Материалы научной конференции, посвященной 30-летию метода гистотерапии В. Филатова. - Киев, 12, 1963).

Механизм терапевтического действия биогенных стимуляторов при псориазе игнорировался. Makarov и Romani указывали, что под влиянием биогенных стимуляторов интенсифицируется образование кортикоидов в надпочечниках и, используя теорию, основанную на экспериментальных исследованиях на подушечках лап крыс, они продемонстрировали, что эти стимуляторы также обладают противовоспалительным действием и поэтому способны вести себя таким же образом, как эти гормоны (Makarov and Romani. Сотр. Rend. Soc. Biol. 1951, 1966:4-626).

Терапевтические средства для лечения этого заболевания варьировались в соответствии с локализацией поражений, их тяжестью, длительностью, предшествующими способами лечения и возрастом пациента.

Из многих источников получения лекарственных препаратов для борьбы с псориазом плацентарная гистотерапия является одной из самых эффективных и в то же время наименее известной.

Описание изобретения.

Настоящее изобретение относится к экстракту, полученному из плаценты человека, который включается в водорастворимый гель и который состоит из лекарственного препарата, имеющего доказанную эффективность для лечения псориаза.

Хотя предпочтительным путем введения этих стимуляторов является парентеральный путь, в настоящем изобретении предоставляется местное применение этого водорастворимого геля, который содержит упомянутое активное действующее вещество.

Поэтому настоящее изобретение относится к водорастворимому гелю, который содержит в качестве активного действующего вещества смесь ненасыщенных и полиненасыщенных жирных кислот, полученных из плаценты человека, и который вмешивается в регуляцию скорости регенерации эпидермиса после его всасывания через кожу из участка нанесения, чем объясняется его антипсориатическое действие.

Для получения активного действующего вещества, которое может применяться при лечении псориаза, проводятся следующие операции: начиная с замороженных плацент, предварительно промытых для их отделения от амниотической оболочки и пупочного канатика, отделяют их котиледоны, которые снова промывают большим количеством воды; массу котиледонов измельчают для получения частиц диаметром приблизительно 12 мм; твердое вещество снова промывают посредством перемешивания в воде, а затем фильтруют через сетчатый фильтр и снова измельчают до тех пор, пока диаметр частиц не достигнет размера 2-6 мм; полученную массу перемешивают в течение 1-3 ч с 1-4 объемами спирта на массу котиледонов, пропуская их затем через сетчатый фильтр; полученную в результате жидкость выпаривают в роторном испарителе и вновь растворяют в смеси хлороформа и метанола в пропорции 4:2, оставляя еще на 24 ч в условиях смачивания; полученный продукт центрифугируют при 2000 об/мин, надосадочную жидкость выпаривают в роторном испарителе до сухости и ее, наконец, повторно растворяют в этаноле в пропорции 1:1.

Для получения композиции данного активного действующего вещества в виде водорастворимого геля от 25,5 до 55,8 г полученного экстракта плаценты человека растворяют в водорастворимом наполнителе, состоящем из 35-50 г очищенной воды, 0,10-0,30 г метилпарабена и 0,01-0,05 г пропилпарабена, кислоты, к которым перед добавлением активного действующего вещества в условиях перемешивания добавляют 2-5 г карбоксиметилцеллюлозы и 5-20 г глицерина.

Был определен состав экстракта плаценты человека РЕ-100 и обнаружено, что он в основном состоит из ненасыщенных жирных кислот, таких, как пальмитолеиновая и олеиновая кислоты, и полиненасыщенных жирных кислот, таких как линолевая, арахиноидная и эйкозитиеновая кислоты.

Эти полиненасыщенные жирные кислоты тесно связаны с лечением заболевания, подавляя избыточную продукцию клеток эпидермиса. Их переносимость подвергнутыми лечению пациентами свидетельствует о возможности широкого применения композиции для целевого использования, поскольку до настоящего времени нет ни одного сообщения о другом продукте, который излечивает псориаз при такой же безвредности, как у композиции настоящего изобретения.

В соответствии с клиническими отчетами, полученными от пациентов, у композиции отсутствуют не только местные, но также и симптоматические вредные вторичные эффекты.

Для определения эффективности медикаментозного лечения были проведены открытые нерандомизированные исследования, в которых в качестве лечения пациентов, страдающих псориазом, применяли водорастворимый гель, полученный из плацентарных экстрактов. Гистотерапевтический плацентарный центр контролировал одно из таких испытаний, в котором производилась оценка состояния в общей сложности 400 пациентов.

К концу двух лет лечения с использованием препарата изобретения в 78% случаев наблюдался удовлетворительный результат лечения пациентов в течение данной стадии.

Другое клиническое исследование проводилось в стационаре у 26 пациентов с диагностированным псориазом. При оценке лечения у 84,6% пациентов наблюдалось полное излечение поражений, что свидетельствует об удовлетворительных результатах этого испытания.

В 1990 г. на Кубу начали приезжать дети, пораженные в результате ядерной катастрофы, произошедшей в Чернобыле в бывшем СССР. Среди этих детей многие страдали псориазом. 56 пациентов из них, которые были устойчивы к другим медикаментозным препаратам, были включены в исследование. По данным литературы, в целом, трудно проводить испытания в случаях семейных поражений. Эти пациенты проходили трехмесячное лечение и в конце лечения клиническое улучшение было достигнуто более чем у 90% этих пациентов.

Аналогичным образом продукт изобретения применялся у 100 пациентов с псориазом, лечившихся в другой больнице. В конце периода испытания длительностью 6 лет ремиссия заболевания была достигнута в 78% случаев без регистрации вторичных или симптоматических реакций и без рецидива в 50% данных случаев.

Пример 1.

Описание способа получения экстракта РЕ-100.

Размороженные плаценты очищают удалением пупочного канатика и амниотической оболочки, оставляя только котиледоны, которые промывают большим количеством воды. Массу котиледонов измельчают в мельнице до тех пор, пока частицы не достигнут размера 8-12 мм в диаметре.

Твердое вещество смещается в область реакторов посредством вращающегося резервуара и реактор емкостью 1600 л загружается добавлением в него 2-4 объемов сырой воды. Производят его перемешивание в течение 2-8 мин и фильтруют с использованием сетчатого фильтра, затем измельчают для достижения размера частиц 2-6 мм в диаметре. После этого твердое вещество взвешивают, и реактор емкостью 1600 л загружают спиртом (1-4 объемов спирта на 1 кг массы котиледонов). Смесь перемешивают в течение 1-3 ч, а затем пропускают ее через сетчатый фильтр. Полученную в результате жидкость выпаривают в роторном испарителе и повторно растворяют ее в смеси хлороформа-метанола в пропорции 4:2, сохраняя ее в состоянии смачивания в течение 24 ч. После этого ее центрифугируют при 2000 об/мин и надосадочную жидкость выпаривают в роторном испарителе до сухости и повторно растворяют в этаноле в пропорции 1:1, получая таким образом активное действующее вещество, которое называется плацентарным экстрактом-100 (РЕ-100).

После подтверждения соответствия РЕ-100 требованиям контрольных химических, биологических и микробиологических лабораторий, он поступает в производство водорастворимого геля.

Пример 2.

Получение водорастворимого геля, который содержит экстракт плаценты человека.

Реактор Olsa загружают очищенной водой, предназначенной для производства, создавая вакуум 1·10⁵ Па.

Метил- и пропилпарабен нагревают до их растворения перемешиванием. Карбоксиметилцеллюлозу смешивают с глицерином в течение 1-3 ч до начала процесса для достижения правильного отмучивания. При охлаждении раствора до 30-60°С карбоксиметилцеллюлозу вводят в глицерин, продолжая постоянное перемешивание, затем осторожным перемешиванием вводят РЕ-100 до получения геля однородного вида и берут образцы для контроля процесса. После проверки технологического процесса берут несколько образцов для проведения химических, биологических и микробиологических контрольных исследований и определения таким образом качества произведенной партии.

Пример 3.

Применение геля экстракта плаценты человека, используемого местно при лечении псориаза.

Водорастворимый гель, полученный в примере 2, использовали в качестве лекарственного средства для местного применения у 100 пациентов с псориазом, обслуживаемых дерматологической службой главного госпиталя "Calixto Garcia" Гаваны.

Этот гель наносили местно пальцами на очаги псориатического поражения, не втирая, а нанося его в виде тонкого слоя.

Нанесение геля проводили с интервалом 8 ч и одна из таких аппликаций должна была сопровождаться предшествующим и последующим воздействием инфракрасного света в течение 30 мин.

В конце испытания, продолжавшегося в течение 2 лет, ремиссия заболевания была достигнута в 78% случаев, а у 50% этих пациентов не было также рецидивов заболевания.

Пример результатов, достигнутых у лиц, получавших лечение композицией настоящего изобретения, показан на фиг.1.

Пример 4.

Исследования раздражения кожи.

Тест состоял в ежедневном нанесении на кожу крыс Sprague Dawley антипсориатического геля в течение 90 д с целью оценки факторов риска и/или выгод лечения данным веществом.

На основании полученных результатов патологоанатомических исследований, в частности, сравнительной оценки массы тела и массы органов и их соотношения с абсолютной массой, а также морфологических изменений (макро- и микроскопических) сделан вывод, что кожа не реагирует на непосредственные воздействия, вызванные испытуемым веществом в использованной композиции, и что повторное ее нанесение на выбритую кожу безвредно.

Пример 5.

Исследование гистологических изменений, наблюдающихся в псориатических бляшках, обработанных водорастворимым гелем экстракта плаценты человека.

До и через 3 мес. после ежедневного местного лечения гелем экстракта плаценты человека проводили взятие биопсии у пациентов в различных областях тела, пораженных псориатическими бляшками, с целью выявления вызванных гистологических изменений.

В качестве показателя ремиссии расценивали величины в мкм высоты межсосочковых гребней эпидермиса и толщину ороговевшего слоя общего размера образца эпидермиса.

Фрагменты тканей обрабатывали не только в соответствии с классической методикой двойного окрашивания гематоксилином-эозином, но также азаном.

Цифровые данные подвергли статистическому анализу с помощью компьютерной программы с использованием критерия t-Стьюдента для сравнения средних величин.

Полученные результаты показали статистически значимое уменьшение соответствующих средних величин не только ороговевшего слоя, но также гребней в восьми из исследованных случаев, что статистически подтверждает эффективность лечения.

Только у двоих пациентов не было никакого улучшения, и наблюдалось соответствие между гистологическими данными и данными оценки их клинического состояния.

Пример 6.

Фармакологическая оценка различных антипсориатических препаратов с помощью экспериментальной модели.

Оценку антипсориатической активности веществ проводили в соответствии с экспериментальной моделью Spaerman and Jarret (Pharmacological assay for anti-psoriatic drugs. Br.J. Dermatology 92:581, 1975), которая предусматривает их местное нанесение на кожу мышиной линии.

Эти вещества должны значительно уменьшать количество эпидермиса в анатомической структуре кожи этих животных, если они обладают таким эффектом.

Для испытания использовали 35 самцов белых мышей с массой тела 20-25 г, разделенных на 7 групп по 5 животных в каждой группе, обозначенной А, В, С, D, Е, F и G.

Группу А не подвергали обработке никаким веществом и использовали в качестве контроля для обеспечения возможности сравнения с каждым из исследуемых веществ.

Остальные группы обрабатывали следующим образом:

группа В - мазь десонида;

группа С - мазь тегрина;

группа D - гель экстракта плаценты человека;

группа Е - мазь бетаметазона;

группа F - витамин А в масле;

группа G - мазь пеков.

Все вещества оператор наносил местно пальцами с надетыми на них резиновым напальчниками на хвосты мышей, начиная с участка, находящегося на 1 см от проксимального конца хвоста, покрывая по всей окружности участок хвоста длиной 2,5 см в дистальном направлении.

У всех групп длительность местной обработки составила 21 день, за исключением контрольной группы, которая не подвергалась никакой обработке.

По истечении этого срока животных умерщвляли для удаления отрезка кожи, который покрывает хвост на протяжении 3 см, и для проведения соответствующего гистологического исследования, для которого кожу рассекали в продольном направлении вдоль ее поверхности и немедленно растягивали.

Образцы ткани фиксировали в 70% этаноле и заливали в парафиновые блоки для получения сагиттальных срезов толщиной по 7 мкм и для последующей их окраски гематоксилином-эозином с использованием обычной методики.

Толщину эпидермиса образца измеряли оптическим микрометром. Проводили 10 измерений в 10 различных областях, случайно выбранных по каждой линии так, что для каждого вида обработки и для контроля было получено 50 измерений.

В соответствии с результатами, полученными в данном исследовании, можно доказать, что 4 вещества, обычно используемые при лечении псориаза (В, С, Е и G) статистически значимо уменьшают толщину эпидермиса на хвосте мышей относительно контрольной группы, не подвергнутой никакой обработке.

Доказано, что, напротив, витамин А, который иногда может использоваться при лечении псориаза, может оказывать вредное воздействие в том смысле, что он статистически значимо увеличивает толщину эпидермиса.

В целом можно также подтвердить, что гель экстракта плаценты, являющийся объектом настоящего изобретения, как и предшествующие вещества, значительно снижает толщину эпидермиса кожи мышей, что позволяет включить эту композицию в арсенал медикаментозных средств для лечения данного заболевания.

Результаты, полученные в данном исследовании, показаны на фиг.2.

Пример 7.

Оценка геля плаценты человека, обладающего антипсориатическим действием.

Применяют водорастворимый гель на основе карбоксиметилцеллюлозы, пропиленгликоля и дистиллированной воды, в которую добавляют спиртовой экстракт плаценты человека, для оценки его антипсориатического действия, используя его в качестве лекарственного препарата для местного применения у 26 пациентов, страдающих псориазом. В конце испытания, длившегося 2 года, ремиссия поражений кожи была достигнута у 22 пациентов (84,6%), выраженное улучшение у 3 пациентов (11,5%) и отсутствие изменений поражений отмечено у одного пациента (3,8%).

С другой стороны, было отмечено, что при использовании лекарственного препарата неблагоприятные реакции отсутствовали.

Пример 8.

Клинические и гистологические исследования группы детей Чернобыля, получавших лечение антипсориатическим гелем.

Композицию изобретения применяли с целью оценки антипсориатического действия геля при его использовании в качестве лекарственного препарата для местного применения у 56 пациентов с псориазом, пораженных этим заболеванием после чернобыльской ядерной катастрофы.

Результаты лечения оценивали у пациентов с псориазом в течение 3 мес. При завершении лечения антипсориатический гель продемонстрировал свою эффективность, причем клиническое и гистологическое улучшение было достигнуто более чем у 90% пациентов без сообщений о каких либо нежелательных побочных эффектах.

Пример 9.

Оценка применения композиции изобретения в клинике гистотерапевтического плацентарного центра.

Применяют водорастворимый гель на основе карбоксиметилцеллюлозы, пропиленгликоля и дистиллированной воды, в которую добавляют спиртовой экстракт плаценты человека с биостимулирующими свойствами, для оценки его антипсориатического действия, используя его в качестве лекарственного препарата для местного применения у 400 страдающих псориазом пациентов, посещавших службу дерматологии клиники, относящейся к гистотерапевтическому плацентарному центру.

Общей задачей было изучение терапевтической эффективности данного геля, полученного из плаценты человека, при его местном применении у пациентов с псориазом. Особая задача состояла в определении динамики клинического состояния получавших лечение пациентов и в выявлении возможных неблагоприятных реакций на применение продукта.

В конце исследования через 2 года ремиссия кожных поражений была достигнута у 78% пациентов, при использовании лекарственного препарата не было неблагоприятных реакций.

Краткое описание чертежей.

На фиг.1 представлена динамика широко распространенных псориатических поражений у пациента до начала лечения (А) и через 3 мес. после местного лечения гелем экстракта плаценты (В).

На фиг.2 показаны результаты, полученные при определении антипсориатической активности оцениваемых веществ в соответствии с экспериментальным протоколом Spaerman и Jarret.

Оценку веществ проводили у семи групп животных, обозначенных как группы А, В, С, D, Е, F и G, в соответствии с обработкой, которой они подвергались.

Группа А не подвергалась обработке никаким веществом (плацебо), а остальные группы обрабатывали следующим образом:

группа В - мазь десонида;

группа С - мазь тегрина;

группа D - гель экстракта плаценты человека;

группа Е - мазь бетаметазона;

группа F - витамин А в масле;

группа G - мазь пеков.

Изобретение относится к медицине, а именно к созданию новых лекарственных средств для лечения псориаза. Представлена композиция для местного применения для лечения псориаза, содержащая в качестве активного действующего вещества спиртовой экстракт, полученный из плаценты человека, состоящий в основном из ненасыщенных жирных кислот, таких, как пальмитолеиновая и олеиновая кислоты, и полиненасыщенных жирных кислот, таких, как линолевая, арахидоновая и эйкозатриеновая кислоты, и водорастворимый наполнитель. В частности, на каждые 100 г композиции может содержаться приблизительно 59 мл данного спиртового экстракта в водорастворимом наполнителе. Композиция представляет собой водорастворимый гель. Композиция обладает выраженным антипсориатическим действием при отсутствии нежелательных побочных реакций. 2 з.п. ф-лы, 2 ил.

1. Композиция для местного применения для лечения псориаза, содержащая в качестве активного действующего вещества спиртовой экстракт, полученный из плаценты человека, в основном состоящий из ненасыщенных жирных кислот, таких, как пальмитолеиновая и олеиновая кислоты, и полиненасыщенных жирных кислот, таких, как линолевая, арахидоновая и эйкозатриеновая кислоты, и водорастворимый наполнитель.2. Композиция по п.1, в которой на каждые 100 г композиции она содержит приблизительно 59 мл данного спиртового экстракта в водорастворимом наполнителе.3. Композиция по п.1 или 2, которая представляет собой водорастворимый гель.