СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЙ ЭНДОМЕТРИЯ Российский патент 2004 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к медицине и может быть применено для диагностики патологических состояний эндометрия.

Эндометрий является одной из наиболее динамичных тканей организма человека, для которого характерна постоянная и быстрая смена процессов пролиферации, дифференцировки и гибели клеток. Другой особенностью этой ткани является то, что как пролиферация, так и дифференцировка, заканчивающаяся гибелью клеток, строго разделены во времени по фазам менструального цикла. Все указанные процессы регулируются эстрогенами и прогестероном, которые непосредственно взаимодействуют с клетками эндометрия. Способом, позволяющим с высокой степенью точности поставить диагноз патологического процесса в эндометрии, является морфологическое исследование ткани слизистой оболочки матки. Применение гистохимических методов исследования эндометрия существенно дополнило представления о функционально-морфологической организации матки в условиях патологической пролиферации и опухолевого роста.

Гистохимическое исследование эндометрия при железистой и атипической гиперплазии не позволяет установить принципиальных отличий в содержании гликогена и активности ферментов по сравнению с нормальным эндометрием фазы пролиферации (Лукина Е.Л., Прянишников В.А. Арх. пат., 1978, №3, с.45-50). Как показали исследования, в цитоплазме клеток эпителия желез гликоген либо полностью отсутствовал, либо был представлен немногочисленными пылевидными гранулами, диффузно разбросанными по цитоплазме. Активность гликогенсинтетазы и фосфорилазы колеблется от низкой до умеренной. В то же время в клетках стромы, особенно рядом с железами, отмечается высокая активность глюкозо-6-фосфатазы, что указывает на интенсивный транспорт глюкозы в цитоплазму клеток железистого эпителия, которая, по-видимому, вместе с гликогеном является энергетическим материалом, обеспечивающим процессы клеточной пролиферации.

Характерным признаком клеток гиперплазированного эндометрия является высокая активность щелочной фосфатазы, которая локализуется преимущественно в апикальных отделах цитоплазмы. Однако следует подчеркнуть, что при атипической железистой гиперплазии в отличие от простой железистой гиперплазии встречаются отдельные железы, в которых щелочная фосфатаза практически отсутствует.

Анализ содержания гликогена позволил прийти к выводу, что по мере снижения дифференцировки происходит уменьшение количества гранул гликогена в клетках опухолей. Активность щелочной фосфатазы также уменьшается по мере снижения дифференцировки опухоли.

В опухоли можно выделить структуры, в клетках которых отмечаются гистохимические признаки, указывающие на существование эстрогенной стимуляции. Для этих структур характерны наличие высокой активности щелочной фосфатазы, мелких пылевидных гранул гликогена, высокой активности фосфорилазы, кислой фосфатазы, которая располагается преимущественно в базальных отделах клеток, а также высокие значения показателей пролиферации.

Другая группа структур опухолей эндометрия лишена признаков, характерных для воздействия эстрогенов: низкая активность или чаще всего полное отсутствие щелочной фосфатазы, отсутствие гликогена и ферментов, участвующих в его синтезе и распаде, а также снижение по сравнению с предыдущей структурой пролиферативной активности. Оба типа структур встречались как в высокодифференцированных, так и умеренно и низкодифференцированных аденокарциномах. (Бохман Я.В., Прянишников В.А., Чепик О.Ф. Комплексное лечение при гиперпластических процессах и раке эндометрия. М., Медицина, 1979 г.).

Известен способ диагностики патологических состояний эндометрия путем проведения иммунохимического анализа с антигенами, содержащимися в биологической жидкости, взятый нами в качестве прототипа. (Авторское свидетельство №1319354, 22.02.87 "Способ диагностики аденокарциномы эндометрия").

Недостатком прототипа является сложность получения антисывороток, которое включает выделение, очистку антигенов, иммунизацию кроликов, которая может продолжаться от 6 до 8 месяцев. Сама постановка включает в себя иммунодиффузионную реакцию в агаре с последующим окрашиванием преципитатов.

Техническим результатом изобретения является повышение точности диагностики, упрощение диагностической процедуры.

Это достигается за счет определения в аспирате из полости матки содержания общей и термостабильной щелочной фосфатазы и гликогена. При обнаружении общей щелочной фосфатазы более 80 Е/л, термостабильной - в любых количествах или гликогена в ранней эстрогеновой фазе в сочетании с результатами цитологического анализа диагностируют атипическую гиперплазию или рак эндометрия.

Способ осуществляется следующим образом.

Проводят забор аспирата из полости матки от женщин группы риска: наличие фибромиомы, ожирение, сахарный диабет, нарушение менструального цикла. Биохимические исследования проводятся на основе классических методов с использованием общепринятых коммерческих наборов.

Обработка материала: промывание заборника в 2-3 мл физиологического раствора или раствора Рингера. После центрифугирования (1,5 тыс./об) осадок направляется на цитологическое исследование, а надосадочная жидкость - на биохимическое исследование, которое заключается в определении активности щелочной и термостабильной фосфатазы (прогревание при +56°C 10 мин) и определение о-толуидиновым методом гликогена с предварительной обработкой амилазой (37°С - 10-20 мин). При обнаружении общей щелочной фосфатазы более 80 Е/л, темостабильной - в любых количествах или гликогена в ранней эстрогеновой фазе в сочетании с результатами цитологического анализа, которые могут быть отрицательными, рекомендуют углубленное обследование пациенток, включающее диагностическое выскабливание (гистологическое исследование).

Способ поясняется следующими примерами.

Пример 1

Больная Т., 55 лет, история болезни №1474/401. Биохимический анализ №868: реакция на термостабильную щелочную фосфатазу - не выявляется; общая активность щелочной фосфатазы в смыве - 380 Е/л. Цитологический анализ - отрицательный. В последующем, при гистологическом исследовании (диагностическое выскабливание), по рекомендации на основе наших анализов было обнаружено наличие рака эндометрия, что в итоге и совпало с нашими предварительными исследованиями, гистоанализ. №8983; умеренно дифференцированный рак эндометрия.

Пример 2

Больная К., 51 год, история болезни №2103/564. Биохимический анализ №877: реакция на ТЩФ отрицательная. Общая активность щелочной фосфатазы - 470 Е/л. Рекомендовано проведение углубленного обследования в качестве проведения гистоанализа (диагностическое выскабливание), который показал наличие высокодифференцированного рака эндометрия, что явилось подтверждением наших предварительных биохимических исследований. Гистопрепарат №11836-54; высокодифференцированный рак эндометрия.

Пример 3

Больная С., 40 лет, биохимический анализ №1763, реакция на ТЩФ - 60 U/1, общая активность щелочной фосфатазы - 320 Е/л, цитология - abs., биохимический анализ №1790: реакция на ТЩФ - 45-50 U/1., общая активность щелочной фосфатазы - 280 Е/л, цитология - abs., биохимический анализ №1820: реакция на ТЩФ - 30 U/1., общая активность щелочной фосфатазы - 120 Е/л., гликоген - 0,1-0,2%. Рекомендовано диагностическое выскабливание, которое показало высокодифференцированный рак эндометрия на фоне ЖГЭ, что явилось подтверждением наших предварительных биохимических результатов.

Способ позволяет увеличить точность диагностики до 90-92%. Забор материала возможен как в стационарных, так и в поликлинических условиях женских консультаций. Процедура относительно атравматична по сравнению с диагностическим выскабливанием.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для комплексной диагностики рака эндометрия. Для этого в аспиратах из полости матки определяют содержание общей щелочной фосфатазы и при ее уровне боле 80 Е/л в сочетании с результатами цитологического анализа диагностируют рак эндометрия. Способ позволяет повысить точность диагностики, снизить травматичность.

Способ ранней диагностики злокачественных образований эндометрия, включающий исследование биологической пробы, отличающийся тем, что в аспиратах из полости матки определяют содержание общей щелочной фосфатазы и при ее уровне более 80 Е/л в сочетании с результатами цитологического анализа диагностируют рак эндометрия.