Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности к получению культуральной вирусвакцины против ньюкаслской болезни из штамма "М - ВНИИВВиМ".
Профилактику ньюкаслской болезни (НБ) проводят путем вакцинации кур препаратами, изготовленными из лентогенных штаммов - Ла Сота, Бор-74 ВГНКИ (В.Н.Сюрин и др. Вирусные болезни животных, 1998 г. М.: ВНИИТИБП, с.214-232) и мезогенных штаммов парамиксовируса 1 - "Н", ГАМ-61 (В.И.Смоленский. "Средства и методы специфической профилактики болезней птиц вирусной этиологии". Док. дисс. 1999 г.). Эти штаммы при различных способах введения вызывают образование вирусспецифических антител (более 3 log 2) и защищают не менее 80% птицы от заболевания.
Вакцины из лентогенных штаммов обладают хорошей иммуногеностью, не реактогенны, вакцинацию можно проводить различными методами, но формируется иммунитет через 2-3 недели после иммунизации.
Отличительной особенностью вакцин из мезогенных штаммов является то, что они высокоиммуногенны, создают невосприимчивость через 48-220 часов и защищают птицу и течение года, но обладают реактогенностью.
Вирусным сырьем для изготовления вакцин из лентогенных и мезогенных штаммов является экстраэмбриональная жидкость зараженных развивающихся куриных эмбрионов (РКЭ). Для получения вакцин необходимо использовать только СПФ эмбрионы, которые в несколько раз дороже обычных, а их производство в России не налажено.
Наиболее близким прототипом изобретения является эмбриональная вакцина против ньюкаслской болезни из мезогенного штамма Paramyxovirus "ГАМ-61 ВГНКИ", которую применяют для профилактики однократно интраназально, энтерально, внутримышечно или аэрозольно в эффективных дозах. Сохранность цыплят яичной породы после применения этой вакцины составила в среднем 99,3%, а для цыплят-бройлеров - 83,0%. Сделана попытка адаптации этого штамма на культурах клеток для изготовления культуральной вакцины. Установлено, что штамм "ГАМ-61 ВГНКИ" не вызывает цитопатического действия в первичных и перевиваемых культурах клеток ПТ-80, ФЭК, ФЭУ и не пригоден для накопления с целью изготовления вакцины (П. №2055890 - прототип).
Целью изобретения является культуральная вирусвакцина из мезогенного штамма "М-ВНИИВВиМ" Paramyxovirus 1 серотипа (ньюкаслская болезнь), выращенного на культуре клеток ВНК-21/13, обладающая высокой иммуногенностью.
Используемый штамм не патогенен для цыплят, но инокуляция 20% суспензии селезенки от павших цыплят в разведении 1/1000 вызывала гибель куриных эмбрионов через 60-84 часа. Штамм был идентифицирован как мезогенный. Инфекционный титр его составил 8,5-9,0 lg ЭЛД50/см3, а гемагглютинирующий титр - 1:256-1:512 (8,0-9,0 log2).
После первых 4 пассажей вируса в клетках ВНК-21/13 наблюдалось четко выраженное цитопатическое действие. Вирус накапливается в титрах 7,0-7,75 lg ТЦД50/см3, а гемагглютинирующий титр увеличился с 1:4 в первом пассаже до 1:32 в четвертом пасаже. Начиная с пятого пассажа, накопление вируса в клетках ВНК-21/13 стабилизировалось и составляло 7,0-7,75 lg ТЦД50/см3, а гемагглютинирующий титр - 1:16-1:32. Культивирование штамма в КК ВНК-21/13 на протяжении 15 пассажей не привело к изменению его характеристик (Патент №2192464).
Для получения вакцинного препарата подобрана питательная и поддерживающая среды и отработан режим роллерного культивирования вируса, определен состав защитной среды и режим лиофильной сушки, определены дозы, способы вакцинации птицы и иммуногенность вакцины.
Пример 1. Для получения вакцины в качестве посевного вируса ньюкаслской болезни используют мезогенный штамм "М-ВНИИВВиМ", полученный на уровне 5-15 пассажей с инфекционным титром - 7,0-7,75 lg ТЦД50/см3, гемагглютинирующим титром - 1:16-1:32.
Культуру клеток ВНК-21/13 выращивают в матрасах или роллерным методом культивирования с использованием ростовой среды Игла (MEM) при 36-38°С. Ростовая среда содержала 10% сыворотки КРС, а поддерживающая - 1%. Множественность заражения составляет 0,1-10 ТЦД50/кл. При наступлении 80% ЦПД инфицированную культуру в матрасах замораживают и хранят при -40°С. Роллерное культивирование продолжается в течение 3-4 суток.
В качестве стабилизирующей среды используют защитную среду на основе пептона, которую готовили согласно технологическому регламенту "Среда защитная (СПЛФ - жидкая)", утв. ГУВ Госагропрома СССР 10.11.88 г и контролируют согласно ТУ 10-19.45-88 "Среда защитная для вирусных вакцин (СПЛФ - жидкая)".
Вируссодержащий препарат смешивают с защитной средой в соотношении 1:1, разливают в ампулы по 1 см3 и проводят сушку на сублимационном аппарате ТГ-50,5, предварительно заморозив смесь до температуры минус 50°С. Температурный режим сушки изменяется во времени, а вакуум остается в пределах 80-100 мм рт. столба. Общее время сушки составляет 34-37 часов, а влажность готового продукта 2-3%.
Контроль стерильности культуральной вакцины проводили на бактериальных средах: МПА, МПБ, Сабуро и тиогликолевом агаре. Рост бактериальной и грибковой микрофлоры в течение 10 дней не выявлен.
Проверку безвредности культуральной вакцины против ньюкаслской болезни проводили путем вакцинации 10 цыплят интраназально в обьеме 0,1 см исходной вируссодержащей жидкости. Клинических признаков заболевания в течение 10 дней наблюдения не отмечено.
Лиофилизированый препарат применяют для вакцинации цыплят. Способы вакцинации - внутримышечный - однократно в объеме 0,5 см3 в разведении 1:500 или интраназальный - однократно в объеме 0,1 см3 в разведении 1:100 по общепринятой методике. Прирост титра антигемагглютининов составляет не менее 3,0 log2 на 7 день после вакцинации.
Иммуногенные свойства культуральной вакцины против НБ из штамма “М-ВНИИВВ и М” приведены в таблице.
В опытах использованы цыплята яичного и мясного направления.
Из представленных результатов видно, что вакцина из штамма М-ВНИИВВиМ обеспечивает защиту цыплят к заражению вирулентным штаммом "Т-53" вируса ньюкаслской болезни в 93,3-100% случаев, а эмбриональная вакцина из мезогенного штамма ГАМ-61 ВГНКИ при аналогичных иммунизирующих дозах обеспечивает защиту цыплят - в 83,3-100% случаев.
Проверена сохранность лиофилизированной культуральной вакцины против ньюкаслской болезни. Хранение вакцины в течение 18 месяцев практически не снизило ее активность. Внутримышечная вакцинация цыплят дала положительный результат.
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
АССОЦИИРОВАННАЯ КУЛЬТУРАЛЬНАЯ СУХАЯ ВИРУСВАКЦИНА ПРОТИВ НЬЮКАСЛСКОЙ БОЛЕЗНИ И ОСПЫ ПТИЦ | 2005 |
|
RU2295357C1 |
ШТАММ ВИРУСА НЬЮКАСЛСКОЙ БОЛЕЗНИ ПТИЦ PSEVDOPESTIS AVIUM, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ | 2000 |
|
RU2192464C2 |
ВИРУСВАКЦИНА ПРОТИВ ПАРАГРИППА-3 КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА | 2001 |
|
RU2212897C2 |
ШТАММ ВИРУСА ПАРАГРИППА-3 КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИННЫХ И ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ | 2004 |
|
RU2279473C1 |
ШТАММ "СИНЛАК" ВИРУСА PESTIS SUUM ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ | 2001 |
|
RU2180237C1 |
МАРКИРОВАННАЯ ВИРУСВАКЦИНА ПРОТИВ БОЛЕЗНИ АУЕСКИ | 2003 |
|
RU2242247C2 |
ВИРУСВАКЦИНА ПРОТИВ КЛАССИЧЕСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ | 2001 |
|
RU2182495C1 |
ВИРУСВАКЦИНА АССОЦИИРОВАННАЯ ПРОТИВ ОСПЫ ОВЕЦ И ОСПЫ КОЗ КУЛЬТУРАЛЬНАЯ СУХАЯ | 2009 |
|
RU2403064C1 |
ВАКЦИНА ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ ПТИЦ | 1998 |
|
RU2127604C1 |
ВИРУС-ВАКЦИНА ПРОТИВ ОСПЫ КОЗ КУЛЬТУРАЛЬНАЯ СУХАЯ | 2008 |
|
RU2396977C1 |
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии. Вакцина содержит суспензию мезогенного штамма “М-ВНИИВВиМ” вируса ньюкаслской болезни, выращенного в перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13, а его титр достигает 7,0-7,75 lg ТЦД50/мл и защитную среду при соотношении 1:1. Вакцина безвредна, обладает высокой иммуногенностью. 1 табл.
Культуральная вирусвакцина против ньюкаслской болезни, включающая вируссодержащий материал и защитную среду, отличающаяся тем, что в качестве вируссодержащего материала содержит суспензию мезогенного штамма “М-ВНИИВВиМ” вируса ньюкаслской болезни, выращенного на культуре клеток ВНК-21/13, и защитную среду при соотношении 1:1.
СЮРИН В.Н | |||
и др | |||
Вирусные болезни животных | |||
- М.: ВНИИТИБП, 1998, с.214-232 | |||
RU 2055890 C1, 10.03.1996. |
Авторы
Даты
2004-09-20—Публикация
2003-01-15—Подача