ВИРУСВАКЦИНА ПРОТИВ ПАРАГРИППА-3 КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Российский патент 2003 года по МПК A61K39/155 C12N7/00 

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при изготовлении средств специфической профилактики парагриппа-3 (ПГ-3) крупного рогатого скота (КРС).

ПГ-3 (транспортная лихорадка КРС, параинфлюэнца-3) - остро протекающая контагиозная вирусная болезнь, главным образом телят, характеризующаяся поражением органов дыхания, но наиболее характерной является латентная форма парагриппозной инфекции. Часто осложняет течение других болезней, в сочетании с пастереллами обуславливают тяжелые формы респираторных инфекций у телят. ПГ-3 распространен повсеместно, практически во всех странах мира. Серологические исследования, проведенные в различных странах мира и в нашей стране, показали, что антитела к вирусу ПГ-3 обнаруживаются у 85-97% обследованных животных. Указанная инфекция возникает у КРС как в виде моноинфекции, так в виде смешанных вирусных и вирусно-бактериальных инфекций, которые наносят значительный экономический ущерб из-за гибели и выбраковки животных, снижения продуктивности и нарушения воспроизводства.

Для специфической профилактики ПГ-3 применяют живые и инактивированные вакцины. Живые вакцины против ПГ-3 используют как монопрепараты или в составе ассоциированных вакцин [1].

Известна вирусвакцина против ПГ-3 КРС, содержащая вируссодержащую жидкость из аттенуированного штамма VR-ATCC-739 вируса ПГ-3 и среду высушивания в эффективном соотношении [2].

Наиболее близкой предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является вирусвакцина "Паравак" против ПГ-3 КРС, содержащая вируссодержащую жидкость из аттенуированного штамма МВА [1] 77 14 гомологичного вируса и среду высушивания в эффективном соотношении [3].

Основные недостатки известных вирусвакцин против ПГ-3 КРС заключаются в том, что они могут вызывать повышенную реактогенность, иммуносупрессию, а иногда и гибель до 2% животных при вакцинации в зависимости от условий окружающей среды и наличия коинфекций, аборты у коров в связи с проявлением остаточной вирулентности. Кроме того, имеющийся у вакцинируемых животных колостральный иммунитет может нейтрализовать эффект первичной вакцинации. Вирусвакцины могут легко инактивироваться различными химическими веществами и температурным воздействием.

В задачу создания настоящего изобретения входило расширение арсенала средств специфической профилактики ПГ-3 КРС на основе новых штаммов вируса ПГ-3 КРС, обладающих высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью и стабильностью. Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в расширении арсенала средств специфической профилактики ПГ-3 КРС.

Указанный технический результат достигнут созданием вирусвакцины против ПГ-3 КРС, охарактеризованной следующей совокупностью признаков:
1. Вирусвакцина против ПГ-3 КРС.

2. Вируссодержащая жидкость из аттенуированного штамма гомологичного вируса.

3. Из аттенуированных штаммов штамм "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 КРС.

4. Штамм "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 КРС в эффективном количестве.

5. Штамм "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 КРС с инфекционной активностью не ниже 5,0 lg ТЦД₅₀/см³.

6. Среда высушивания.

7. Вируссодержащая жидкость из аттенуированного штамма "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 КРС и среда высушивания взяты в соотношении, мас.%:
Вируссодержащая жидкость - 65-75
Среда высушивания - До 100
Предлагаемое изобретение включает следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые испрашивается правовая охрана:
1. Вирусвакцина против ПГ-3 КРС.

2. Вируссодержащая жидкость из аттенуированного штамма "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 КРС.

3. Штамм "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 КРС в эффективном количестве.

4. Среда высушивания.

Предлагаемое изобретение характеризуется также другими признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования:
1. Штамм "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 КРС с инфекционной активностью не ниже 5,0 lg ТЦД₅₀/см³.

2. Вируссодержащая жидкость из аттенуированного штамма "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 КРС и среда высушивания взяты в соотношении, мас.%:
Вируссодержащая жидкость - 65-75
Среда высушивания - До 100
Признаками изобретения, характеризующими предлагаемую вирусвакцину и совпадающими с признаками прототипа, в том числе родовое понятие, отражающее назначение, являются:
1. Вирусвакцина против ПГ-3 КРС.

2. Вируссодержащая жидкость из аттенуированного штамма гомологичного вируса.

3. Среда высушивания.

По сравнению с вирусвакциной-прототипом существенным отличительным признаком предлагаемой вакцины является то, что из аттенуированных штаммов она содержит штамм "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 КРС в эффективном количестве.

Предлагаемое изобретение характеризуется также другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования:
1. Штамм "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 КРС с инфекционной активностью не ниже 5,0 lg ТЦД₅₀/см³.

2. Вируссодержащая жидкость из аттенуированного штамма "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 КРС и среда высушивания взяты в соотношении, мас.%:
Вируссодержащая жидкость - 65-75
Среда высушивания - До 100
Предлагаемая вирусвакцина расширяет арсенал высокоиммуногенных, ареактогенных и безвредных средств специфической профилактики ПГ-3 КРС.

Достижение технического результата от использования предлагаемой вирусвакцины объясняется тем, что она содержит новый аттенуированный штамм "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 КРС, обладающего высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью и стабильностью.

Исходный вирус для получения штамма "ВГНКИ-4" выделен из легких 2-3-месячных телят с респираторной патологией.

Производственный штамм "ВГНКИ-4" получен путем адаптации к перевиваемой культуре клеток почек теленка "Таурус-1" [4].

Полученный штамм депонирован в Коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ) 30.09.99 г. под регистрационным наименованием "ВГНКИ-4" ДЕП.

Экспериментально подтверждена возможность его использования для изготовления средств специфической профилактики ПГ-3 КРС. Штамм "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 обеспечивает получение эффективных живых и инактивированных вакцин, создающих защиту восприимчивых животных против указанного возбудителя заболевания.

Штамм "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические свойства
Штамм "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 относится к семейству Paramyxoviridae, роду Parainfluenza, подтипу Parainfluenza virus 3 и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ПГ-3: полиморфной слегка овальной формы, размер вириона варьирует от 150 до 250 нм. Вирион состоит из оболочки и внутреннего компонента, который представлен рибонуклеопротеидной спиралью. Коэффициент седиментации - 1000 S в градиенте сахарозы.

Вирус ПГ-3 штамма "ВГНКИ-4" имеет 7 структурных белков:
1) фосфопротеины (Р, мол. м. 83 кД);
2) ГА - нейраминидазный гликопротеин (HN, мол. м. 69 кД);
3) главный нуклеокапсидный протеин (NP, мол. м. 66 кД);
4) гликопротеин (F, мол. м. 55 кД);
5) матричный белок (М, мол. м. 38 кД);
6) белок L-полимераза (мол. м. 180 кД);
7) клеточный активный белок А (мол. м. 43 кД).

Антигенные свойства
Штамм "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 агглютинирует эритроциты морской свинки, кролика, свиньи, коровы, мыши, овцы, козы, человека, белой мыши. Клетки, инфицированные вирусом ПГ-3 из штамма "ВГНКИ-4", сорбируют эритроциты морской свинки, КРС, овцы, кролика и белой мыши. При вакцинации вирус индуцирует образование специфических антител на 8-14 сутки после прививки, антитела достигают пика к 16-28 дню и сохраняются до одного года.

Продолжительность и напряженность поствакцинального иммунитета обеспечивается преимущественно IgG и секреторными IgA, выработка которых стимулируется активным вакцинальным процессом. Привитые телята с титром гуморальных антител 6,3-10,3 лог₂ устойчивы к заражению вирусом ПГ-3. Полевые изоляты вируса ПГ-3 имеют близкое антигенное родство с вирусом ПГ-3 штамма "ВГНКИ-4".

Биотехнологические характеристики
Штамм "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 проявляет высокую биологическую антигенную и иммуногенную активность как в нативном виде, так и после инактивации, соответствует полевым изолятам. Штамм "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 предназначен для использования в качестве сырья для приготовления живых и инактивированных вакцин против ПГ-3 КРС. Этот вирус репродуцируется в культурах клеток ПЭК, ПТ, МДВК, ВНК-21, ПС и накапливается в титрах 5,0-7,5 lg ТЦД₅₀/см³. Штамм "ВГНКИ-4" является стабильным и безвредным.

Устойчивость к внешним факторам
Вирус ПГ-3 штамма "ВГНКИ-4" быстро разрушается под действием высокой температуры. Возбудитель чувствителен к хлороформу, эфиру, формалину, детергентам.

Исходя из полученных данных, можно утверждать, что штамм "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 по антигенному и иммунологическому спектрам является оригинальным, в таксономическом отношении новым, ранее неизвестным вариантом вируса ПГ-3.

Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации, и выявление источников, содержащих сведения об аналогах предлагаемого изобретения, позволил установить, что заявитель не обнаружил источники, характеризующиеся признаками, тождественными (идентичными) всем существенным признакам предлагаемого изобретения. Определение из перечня выявленных аналогов прототипа как наиболее близкого по совокупности признаков позволило установить совокупность существенных по отношению к усматриваемому заявителем техническому результату отличительных признаков предлагаемой вирусвакцины, изложенных в независимом пункте формулы.

Следовательно, заявляемое решение соответствует условию патентоспособности "новизна".

Для проверки соответствия предлагаемого решения условию патентоспособности "изобретательский уровень" проведен дополнительный поиск известных решений для выявления признаков, включенных в отличительную часть независимого пункта формулы. Результаты поиска показали, что предлагаемое решение не вытекает для специалиста явным образом из известного уровня техники, изложенного в соответствующем разделе описания (не выявлены решения, имеющие признаки, совпадающие с отличительными признаками предлагаемого изобретения), а также не выявлено влияния предусматриваемых существенными признаками предлагаемого изобретения преобразований для достижения технического результата.

Следовательно, предлагаемая вирусвакцина соответствует условию патентоспособности "изобретательский уровень".

Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его исполнения, которые не ограничивают объем изобретения.

Пример 1.

Для изготовления вирусвакцины против ПГ-3 из штамма "ВГНКИ-4" используют как перевиваемую монослойную культуру клеток ВНК-21, так и перевиваемую монослойную культуру клеток ВНК-21, адаптированную к суспензионному культивированию. При суспензионном культивировании в качестве поддерживающей среды используют раствор Эрла или раствор Хенкса без сыворотки с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при рН 6,7-7,2. Культуру клеток заражают вирусом из расчета 0,5-1,0 ТЦД₅₀/клетка. Культивирование вируса ведут при температуре 36-37^oС в течение 24-32 часов до появления ЦПД на 80 - 90%. После замораживания и оттаивания вируссодержащую жидкость сливают в емкость и отбирают пробы для контроля стерильности и биологической активности вируссодержащего материала. Для составления серии вакцины используют только стерильные вируссодержащие жидкости, прошедшие контроль на МПА, МПБ и тиогликолевой среде. Одновременно берут пробы (1-2 см³) для определения титра вируса до их лиофилизации. Биологическая активность вируссодержащего материала должна быть не ниже 6,5-7,0 lg ТЦД₅₀/см³. В полученный вируссодержащий материал вносят необходимое количество среды высушивания, в состав которой входят сахароза, гидролизат лактальбумина (ГЛА) и желатоза, смесь тщательно перемешивают, при необходимости доводят рН 6,7-7,2. Смесь разливают в стерильные флаконы (ампулы) по 2-4 см³ и подвергают лиофильному высушиванию с последующей укупоркой.

Сухая вирусвакцина против ПГ-3 из штамма "ВГНКИ-4" представляет собой мелкопористую массу светло-желтого или светло-розового цвета. Вакцину растворяют в физиологическом растворе и после этого она имеет вид слегка опалесцирующей жидкости розового цвета.

Полученная вирусвакцина против ПГ-3 имеет оптимальный компонентный состав, мас.%:
Вируссодержащая жидкость из аттенуированного штамма "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 - 65-75
Среда высушивания - До 100
Вирусвакцину из штамма "ВГНКИ-4" применяют в неблагополучных хозяйствах для профилактики ПГ-3 КРС. Вакцинации подлежат клинически здоровые животные при хороших условиях содержания и кормления. Телят вакцинируют перед переводом их из родильного отделения в телятники. Вакцину вводят внутримышечно в области крупа или средней трети шеи двукратно с интервалом 14-21 день в объеме 1 см³. Прививная доза вакцины должна составлять не менее 10^5,0 ТЦД₅₀ вируса ПГ-3. В организме привитых животных вакцина индуцирует образование гуморального и клеточного иммунитета. Иммунитет формируется через 2 недели после начала вакцинации, после повторной вакцинации иммунитет длится не менее 6 месяцев. Применение вирусвакцины из штамма "ВГНКИ-4" позволяет существенно снизить уровень респираторной патологии в стадах КРС.

Пример 2.

Серию вирусвакцины против ПГ-3 из штамма "ВГНКИ-4", изготовленную так, как описано в примере 1, подвергают контролю на стерильность, инфекционную активность и антигенную активность.

Проверка стерильности.

Контролю на отсутствие бактериального и грибкового загрязнения подвергают среднюю пробу вакцины из пяти флаконов. Испытание проводят в соответствии с ГОСТ 28085-89. Вакцина признана стерильной.

Определение инфекционной активности.

Для этого содержимое 4 флаконов вакцина растворяют в 5 см³ ГЛА каждый, объединяют и делают из них десятикратные разведения. Для этого в 8 пробирок вносят по 9 см³ ГЛА. В первую пробирку добавляют 1 см³ используемого компонента вакцины и после тщательного перемешивания другой пипеткой переносят 1 см³ в следующую пробирку. Всего делают 8 разведений. Каждое разведение вакцины инокулируют по 1 см³ в 4 пенициллиновых флакона с выросшим монослоем культуры клеток. В качестве контроля оставляют незараженными 4 пенициллиновых флакона с монослоем. Флаконы с зараженными и контрольными культурами клеток помещают в термостат при 37^oС на 7 суток, ежедневно просматривая их под микроскопом на наличие ЦПД. С появлением ЦПД в пробирочных культурах ставят реакцию гемадсорбцин. Для этого в пенициллиновые флаконы с учтенным ЦПД вносят нестерильно 2-3 капли 1% взвеси эритроцитов морской свинки, флаконы встряхивают и ставят в термостат при 37^oС на 15-20 минут, после чего флаконы просматривают под микроскопом. Положительной считается реакция гемадсорбции в том случае, если не менее половины клеток монослоя покрыты эритроцитами, а в контроле отсутствует гемадсорбция: эритроциты проплывают в поле зрения. Через 5-7 суток независимо от появления ЦПД в пробирках, на которых титровали вакцину, во всех оставшихся разведениях ставят реакцию гемадсорбции. В пробирках, где полностью поражен монослой, эта реакция может отсутствовать, а может проявиться агглютинация эритроцитов. Культуры, в которых ЦПД наблюдается хотя бы в виде отдельных очагов, считаются положительными. Титр вакцины рассчитывают по методу Рида и Менча. Титр вакцины составляет 10^6,0 ТЦД₅₀/см³ по ЦПД и 10^6,0 по гемадсорбции.

Определение безвредности.

Содержимое 4 флаконов вакцины, растворенное так, как описано в разделе "Определение инфекционной активности", объединяют и вводят внутримышечно в объеме 1 см³ 10 морским свинкам. За свинками ведут наблюдение в течение 14 суток. Вакцина считается безвредной, если она не вызвала видимых патологических изменений в месте инъекций и изменений общего состояния животных.

Определение антигенной активности.

Определение антигенной активности вакцины проводят на морских свинках, на которых испытывали препарат. Животных ревакцинируют на 14-21 день и через 14 суток после ревакцинации обескровливают. Антигенную активность вакцины определяют по уровню антител к вирусу ПГ-3 в реакции торможения гемагглютинации (РТГА). От морских свинок берут стерильно по 10-15 см³ крови, пробы ставят в термостат при 37^oС на 1 час, обводят стеклянной палочкой и оставляют на 4-8^oС на 24 часа. Отстоявшуюся сыворотку сливают в стерильные пенициллиновые флаконы и для освобождения от неспецифических ингибиторов гемагглютинации инактивируют при 56^oС в водяной бане в течение 30 минут, затем обрабатывают каолином, для чего к 1 см³ сыворотки добавляют 1 см³ 25% каолина, выдерживают 30 минут при комнатной температуре и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 30 мин. Отбирают надосадочную жидкость и обрабатывают эритроцитами морской свинки, избавляясь от неспецифических агглютининов. Для этого к 1 см³ обработанной каолином сыворотки добавляют 1 см³ 5% суспензии морской свинки, инкубируют 1 час при 4^oC и центрифугируют 10 мин. при 1000 об/мин. Надосадочную жидкость используют как сыворотку в разведении 1:4. Проведение РТГА включает следующие этапы:
- определение рабочей дозы гемагглютинирующего антигена;
- постановка основного опыта.

На первом этапе титруется вирусный гемагглютинирующий антиген ПГ-3 в реакции гемаглютинации микрометодом. Используя круглодонный планшет, в каждую лунку вносят 0,025 см³ растворителя. Затем в первую лунку первого ряда вносят 0,025 см³ гемагглютинирующего антигена ПГ-3 и готовят последовательные двойные разведения. Для этого после трехкратного пипетирования из первой луночки 0,025 см³ переносят во вторую лунку, из второй в третью и т.д. Из последней 0,025 см³ удаляют в дезраствор, затем во все луночки вносят по 0,025 см³ 0,5% суспензии эритроцитов. При этом обязательным является контроль на возможность спонтанной агглютинации, для чего взвесь эритроцитов капают в луночки с раствором, не содержащим антигена. Планшет накрывают крышкой, осторожно встряхивают и оставляют при комнатной температуре на 60 мин. Учет результатов реакции проводят через час после добавления суспензии эритроцитов. За агглютинирующий титр вируса принимают наибольшее его разведения, которое вызывает агглютинацию эритроцитов не менее чем на 2+ (1 гемагглютинирующая единица - 1ГАЕ). Для основного опыта используются 4ГАЕ. Если 1ГАЕ установлена при разведении вируса 1: 180, то при подготовке рабочей дозы (4ГАЕ) вирус разводят 1:40 (или через одну луночку влево от 1ГАЕ).

Для постановки основного опыта готовят двукратные разведения сывороток с 1:8 до 1:2048. Для этого во все луночки планшета наливают по 0,025 см³ растворителя. Затем в первые луночки вносят по 0,025 см³ исследуемых сывороток в разведении 1:4 трехкратного пипетирования переносят последовательно из первых луночек во вторые и т.д. по 0,025 см³ вирусного гемагглютинина, содержащего 4ГАЕ. Наряду с испытуемыми сыворотками реакцию ставят со специфической и отрицательной контрольными сыворотками из диагностикума. После встряхивания и контакта в течение 60 мин при комнатной температуре добавляют 0,025 см³ 0,5% суспензии эритроцитов морской свинки, встряхивают и ставят в холодильник на +4^oС. Реакцию учитывают через 1-1,5 часа. Основанием для проведения учета результатов считается полное оседание эритроцитов. Вакцина обладает антигенной активностью, если у двукратно вакцинированных морских свинок обнаружены антитела с титрами 1:64 к вирусу ПГ-3. Результаты исследований представлены в таблице.

Пример 3.

Проведены испытания предлагаемой вирусвакцины против ПГ-3 КРС, полученной так, как описано в примере 1, и содержащей, мас.%:
Вируссодержащая жидкость из аттенуированного штамма "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 КРС с биологической активностью 6,5 lg ТЦД₅₀/см³ - 65,0
Среда высушивания - До 100
Эффективность полученной вирусвакцины проверена на 300 головах телят 20-30-дневного возраста в ЗАО "Запрудновское" Кстовского района Нижегородской области.

Эффективность сухой вирусвакцины из штамма "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 КРС, изготовленной так, как описано в примере 1, проверена на 300 головах телят 20-30-дневного возраста в ЗАО "Запрудновское" Кстовского района Нижегородской области.

До вакцинации в хозяйстве отмечался падеж среди телят 1-3-месячного возраста со следующей клинической картиной: угнетение, ухудшение аппетита, серозные или серозно-гнойные истечения из носа, пневмонии. При патологоанатомическом вскрытии павших телят отмечали следующие изменения: острые катаральные и катарально-гнойные абсцедирующие пневмонии, увеличение и отечность подчелюстных, предлопаточных, средостенных лимфоузлов, дистрофию сердца. Вакцину вводили животным внутримышечно в области крупа или средней трети шеи двукратно с интервалом 14-21 день в объеме 1 см³. После вакцинации отмечали более сглаженную клиническую картину, которая проявлялась в отсутствии угнетения, ухудшения аппетита, катарально-гнойных истечений из носа. Падеж телят в хозяйстве сократился с начала применения вакцины с 32% до 11%. Таким образом, вакцина против ПГ-3 КРС из штамма "ВГНКИ-4" является безвредной и способствует профилактике данного заболевания.

Пример 4.

Проведены испытания предлагаемой вирусвакцины против ПГ-3 КРС, изготовленной так, как описано в примере 1, и содержащей, мас.%:
Вируссодержащая жидкость из аттенуированного штамма "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 КРС с биологической активностью 7,0 lg ТЦД₅₀/см³ - 70,0
Среда высушивания - До 100
Эффективность полученной вирусвакцины проверена на 1184 головах телят в ООО "Родина" и колхозе "Новый путь" Шахунского района Нижегородской области. Вакцину применяли так, как описано в примере 1. Применение вакцины позволило резко снизить заболеваемость респираторными болезнями и гибель телят. Все это свидетельствует, что испытанная вакцина против ПГ-3 КРС из штамма "ВГНКИ-4" является безвредным и иммуногенным препаратом, позволяющим эффективно профилактировать болезнь.

Пример 5.

Проведены испытания предлагаемой вирусвакцины против ПГ-3 КРС, изготовленной так, как описано в примере 1, и содержащей, мас.%:
Вируссодержащая жидкость из аттенуированного штамма "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 КРС с биологической активностью 8,0 lg ТЦД₅₀/см³ - 70,0
Среда высушивания - До 100
Эффективность полученной вирусвакцины проверена на 1662 головах телят в хозяйствах Уренского района Нижегородской области. Вакцину применяли так, как описано в примере 1. Наблюдение за привитыми телятами показали, что испытуемая вакцина является безвредным препаратом, позволившим ликвидировать респираторные болезни молодняка и снизить его гибель в 2-3 раза.

Пример 6.

Проведены испытания предлагаемой вирусвакцины против ПГ-3 КРС, изготовленной так, как описано в примере 1, и содержащей, мас.%:
Вируссодержащая жидкость из аттенуированного штамма "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 КРС с биологической активностью 7,0 lg ТЦД₅₀/см³ - 70,0
Среда высушивания - До 100
Эффективность полученной вирусвакцины проверена в хозяйствах Шахунского района Нижегородской области на 1825 телятах 30-40-дневного возраста. До применения вакцины заболеваемость органов дыхания молодняка КРС возрастом 2-6 месяцев составляла 65-85%, а падеж 15-25%. Вакцину применяли так, как описано в примере 1. После вакцинации заболеваемость молодняка респираторными болезнями и гибель регистрировалась в единичных случаях.

Указанный препарат оказался безвредным, авирулентным и иммуногенным для телят.

Таким образом, приведенная выше информация свидетельствует о выполнении при использовании предлагаемого изобретения следующей совокупности условий:
- вирусвакцина против ПГ-3 КРС, воплощающая предлагаемое изобретение, предназначена для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии;
- для предлагаемого изобретения в том виде, как оно охарактеризовано в независимом пункте формулы изобретения, подтверждена возможность его осуществления с помощью описанных в заявке или известных до даты приоритета средств и методов;
- при использовании предлагаемой вирусвакцины против ПГ-3 КРС на основе штамма "ВГНКИ-4" достигается технический результат, предусмотренный задачей создания изобретения.

Следовательно, предлагаемое изобретение соответствует условию патентоспособности "промышленная применимость".

Источники информации
1. Инфекционные болезни животных. Справочник. Под ред. Д.Ф.Осидзе. - М.: Агропромиздат, 1987, 19-99.

2. Патент ФРГ 2323847, А 61 К 39/02, 1976.

3. Сюрин В. Н. и др. Вирусные болезни животных. - М.: ВНИТИБП, 1998, 242-251 (прототип).

4. Миронова Л. А., Преображенская Н.К. и др. Отечественные линии перевиваемых клеток почек теленка - субстрат для биотехнологии. Биотехнология, 1998, 5, 25-31.

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Вирусвакцина содержит вируссодержащую жидкость (ВЖ) из аттенуированного штамма "ВГНКИ-4" гомологичного вируса и среду высушивания (СВ) в эффективном соотношении. Штамм депонирован в коллекции ВГНКИ под регистрационным наименованием "ВГНКИ-4" ДЕП. Вирус репродуцируют как в монослойной, так и в суспензионной культуре клеток ВНК-21. Штамм используют с инфекционной активностью не ниже 6,0 Ig ТЦД₅₀/см³. Полученную ВЖ смешивают со СВ. Смесь разливают во флаконы по 2-4 см³ и подвергают лиофильному высушиванию. Вакцину применяют двукратно с интервалом 14-21 день в объеме 1 см³. Прививная доза вакцины не ниже 10^5,0 ТЦД₅₀ вируса ПГ-3. После повторной вакцинации иммунитет длится не менее 6 месяцев. 2 з.п. ф-лы, 1 табл.

1. Вирусвакцина против парагриппа-3 крупного рогатого скота, содержащая вируссодержащую жидкость из аттенуированного штамма гомологичного вируса и среду высушивания, отличающаяся тем, что из аттенуированных штаммов вакцина содержит штамм вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота, сем. Paramyxoviridae, род Parainfluenza, подтип Parainfluenza virus 3, коллекция ВГНКИ, регистрационное наименование "ВГНКИ-4" ДЕП, в эффективном количестве. 2. Вирусвакцина по п. 1, отличающаяся тем, что содержит аттенуированный штамм "ВГНКИ-4" с инфекционной активностью не ниже 5,0 Ig ТЦД₅₀/см³. 3. Вирусвакцина по любому из пп. 1 и 2, отличающаяся тем, что содержит вируссодержащую жидкость из аттенуированного штамма "ВГНКИ-4" гомологичного вируса и среду высушивания в соотношении, мас. %:
Вируссодержащая жидкость - 65-75
Среда высушивания - До 100