СПОСОБ ПОДГОТОВКИ КОСТНЫХ ОБРАЗЦОВ К МОРФОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ Российский патент 2004 года по МПК G01N33/48 G01N1/28 

Изобретение относится к медицине, а именно - к морфологии, может быть использовано для морфологической диагностики патологии костной ткани.

Известны две основные группы методов декальцинации - бескислотные и кислотные [4, 5, 7, 8, 9]. Кислотный метод декальцинации [2, 3] заключается в подготовке материала к декальцинации и декальцинации. Подготовка к декальцинации заключается 1) в фиксации костных образцов в 15-20%-ом растворе формалина не больше 48 ч; 2) в промывке костных образцов проточной водопроводной водой в течение 24 ч; 3) в их дегидратациии в растворах спиртов 50%, 70%, 96%, 70%, 50%, в течение суток в растворе спирта каждой концентрации.

Декальцинация:

1) соблюдая правила декальцинации, костные образцы помещают в 5-7,5% раствор азотной кислоты на основе дистиллированной воды на 10-12 суток; 2) затем костные образцы помещают в 5%-ый раствор серно-кислого натрия или лития на 24 ч для устранения набухания; 3) костные образцы промывают в проточной водопроводной воде в течение 1-2 суток; 4) проводят заливку в целлоидин или парафин или резку на замораживающем микротоме.

Недостатками данного метода декальцинации являются: продолжительность сроков декальцинации (10-12 суток). продолжительность сроков промывания костных образцов в проточной воде (2-3 суток), что способствуют насыщению их жидкостью, снижает качество окраски срезов и четкость проявления структур костной ткани.

Задачей предполагаемого изобретения является сокращение сроков декальцинации, повышение пластичности костных образцов и сохранение структуры костной ткани.

Поставленную задачу осуществляют за счет того, что декальцинацию костных образцов проводят в течение 7-8 суток в 5%-ом растворе азотной кислоты на основе 5%-го раствора формалина, после чего их в течение 2 ч промывают проточной водопроводной водой и на 12 ч погружают в 5%-ый раствор серно-кислого лития, затем в течение 20-30 мин снова промывают проточной водой и подвергают дегидратации в спиртах возрастающих концентраций.

Способ осуществляют следующим образом.

Костные образцы размером 1,0×1,0 см (трупный материал) фиксируют в 7-8%-ом растворе формалина в течение 2-х суток. Затем их промывают проточной водопроводной водой в течение 20-30 мин и погружают в 5%-ый раствор азотной кислоты на основе 5%-ого раствора формалина [1, 6].

Раствор кислоты на основе формалина меняют ежедневно. Декальцинация продолжается 7-8 дней, для определения ее завершения используют прокалывание образцов препаровальной иглой, пробный надрез и их сжимание. Затем костные образцы промывают проточной водопроводной водой в течение 2 ч и погружают на 12 ч в 5%-ый раствор серно-кислого лития для устранения их набухания.

Далее после промывания проточной водой в течение 20-30 мин, костные образцы подвергают дегидратации в спиртах возрастающих концентраций (50%, 70%, 90%, 96%, абсолютный спирт, спирт - эфирная смесь). В каждом растворе образцы выдерживают в течение суток. Затем следует их заливка в целлоидин.

Достичь полной декальцинации позволяет раствор азотной кислоты, приготовленный на основе 5%-ого раствора формалина, который обладает эффектом деминерализации. Повышению пластичности костных образцов способствуют сокращение сроков нахождения их в растворе серно-кислого лития, их дегидратация только перед заливкой и заливка в целлоидин, который по своим свойствам (пластичности) близок к декальцинированным костным образцам. Оценить полноту декальцинации и пластичность костных образцов можно только при приготовлении срезов. При этом отсутствует хруст и получают полные, ровные срезы. Сохранность структуры костной ткани можно оценить только после окраски срезов (по Шморлю) и гистоморфометрии. На изучаемых препаратах определяются слои кости, остеонные структуры, клетки.

Предлагаемый способ позволяет сократить продолжительность декальцинации на 5-7 суток, достигнуть полной декальцинации, увеличить пластичность костных образцов, сохранить структуру костной ткани.

Список литературы

1. Валенсон Б.А. Метод ускоренной декальцинации в кислотно-формалиносолевом растворе. Архив патол. 1950, т.XII, N.5, c.93. 2. Волкова О.В., Елецкий Ю.К. Основы гистологии с гистологической техникой. - М.: Медицина, 1971, с.271. 3. Елисеев В.Г. Основы гистологической техники. - М.: Медицина, 1967, с.209. 4. Клевезаль Г.А. Регистрирующие структуры млекопитающих в зоологических исследованиях. - М.: Наука, 1988, с.285. 5. Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. - М.: Мир, 1969, с.645. 6. Меркулов Г.А. Курс гистологической техники. - Л.: Медицина, 1969, с.424. 7. Миньков С.А. К вопросу декальцинации зубов и фрагментов челюстей. Бюлл. Вост.-Сибирск. научн. центра СО РАМН. - Иркутск, 1993, вып.3-4, с.150-154. 8. Никоноров С.Г., Козлова Т.А. Декальцинация костной ткани в возрастающих концентрациях соли трилона Б. Архив анат., гистол. и эмбриол. 1986, т.XCL, N.1, с.78-80. 9. Саркисов Д.С., Перов Ю.Л. Микроскопическая техника. Руководство для врачей и лаборантов. - М.: Медицина.

Изобретение относится к медицине, а именно - к морфологии, может быть использовано для морфологической диагностики патологии костной ткани. Сущность способа: после фиксации костных образцов в растворе формалина осуществляют их декальцинацию в течение 7-8 суток в 5%-ном растворе азотной кислоты на основе 5%-ого раствора формалина, после чего костные образцы в течение 2 ч промывают проточной водопроводной водой и на 12 ч погружают в 5%-ый раствор серно-кислого лития, затем в течение 20-30 мин снова промывают проточной водой и подвергают дегидратации в спиртах возрастающих концентраций. Предлагаемый способ сокращает время обработки костных образцов, полученные блоки отличаются большей пластичностью, что позволяет получить качественные гистологические срезы, которые характеризуются сохранением всех структур костной ткани.

Способ подготовки костных образцов к морфологической диагностике, включающий фиксацию костных образцов в растворе формалина, промывку их водой, декальцинацию 5%-ным раствором азотной кислоты, выдерживание в 5%-ном растворе серно-кислого натрия с последующей промывкой водой, отличающийся тем, что декальцинацию проводят в течение 7-8 суток в 5%-ном растворе азотной кислоты на основе 5%-ного раствора формалина, после чего в течение 2 ч образцы промывают проточной водопроводной водой и на 12 ч погружают в 5%-ный раствор серно-кислого лития, затем в течение 20-30 мин их снова промывают проточной водой и подвергают дегидратации в спиртах возрастающих концентраций.