СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ НЕРВНЫХ СТРУКТУР В ЗУБОЧЕЛЮСТНОЙ СИСТЕМЕ Российский патент 2017 года по МПК G01N33/48 G01N1/30 

Изобретение относится к области медицины, в частности к стоматологии, и может быть использовано в нейростоматологии для выявления нервных структур в зубочелюстной системе на нейрогистологическом уровне.

В распоряжении нейроморфологов имеется широкий выбор методик для выявления нервных структур в тканях [Рассказова Е.И. Методы импрегнации нейроплазмы разных периферических нервных волокон и окончаний / Е.И. Рассказова // Вопросы психиатрии. В кн. Научные работы института психиатрии. М., Медицина, - 1956. - С. 349-353].

Однако использование рекомендуемых прописей и условий на практике нередко не позволяют получить желаемого результата. Не является исключением выявление нервных компонентов в костных образованиях челюстно-лицевой области. Неполное выявление компонентов нервного аппарата частично объясняется биохимической индивидуальностью органов и тканей [Рассказова Е.И. Методы импрегнации нейроплазмы разных периферических нервных волокон и окончаний / Е.И. Рассказова // Вопросы психиатрии. В кн. Научные работы института психиатрии. М., Медицина, - 1956. - С. 349-353].

Одним из отрицательных моментов выявления нервных элементов в костной ткани является декальцинация во время фиксации изучаемых объектов и сам способ фиксации в конечном счете сводит на нет выявление нервных структур в зубах и челюстях из-за аутолиза их кислотами [Жаботинский Ю.М. Нормальная и патологическая морфология нейрона. Л.: Медицина, 1965. - 328 с.]. Декальцинации должна предшествовать хорошая, основательная фиксация. Для этих целей существуют различные смеси на основе формалина - жидкости Гели, Гейденгайна, Штиве, Флеминга, Делоне (1936), Шафера (1902), Эбнера и ряда других, в которых в качестве декальцинации используют различные кислоты, диапазон концентрации которых весьма вариабелен. Используют: трихлоруксусную, пикриновую, азотную, серную кислоты и их смеси в разных объемных сочетаниях. При этом многие авторы, предлагавшие свои методики, единодушны во мнении, что соляная и азотная кислоты как таковые для декальцинации не пригодны, так как полностью растворяют основные структурные компоненты костной ткани [Рассказова Е.И. Методы импрегнации нейроплазмы разных периферических нервных волокон и окончаний / Е.И. Рассказова // Вопросы психиатрии. В кн. Научные работы института психиатрии. М., Медицина, - 1956. - С.349-353].

Наиболее оптимальным вариантом для декальцинации является муравьиная кислота, которая особо рекомендуется для декальцинации зубов, так как она слабо влияет на окрашиваемость (Мураяма, 1937; Ричмен, Гельфанд и Хилл. 1946) [Пирс Э. Гистохимия. Теоретическая и прикладная. М., 1962; Лойд З., Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов. Лабораторные методы. М., «Мир», - 1982].

Однако эти методики дают в основном положительные результаты на предмет окраски структур костной ткани различными общегистологическими способами. Так, наиболее оптимальной окраской срезов декальцинированных зубов является метод Шморля: срезы окрашивают в течение 10-12 мин раствором тионина, затем споласкивают водой и переносят в концентрированный водный раствор пикриновой кислоты на 1,5-2 мин. Снова споласкивают в дистиллированной воде, затем дифференцируют в 70% спирте до прекращения отделения из срезов красителя (обычно 5-10 мин), обезвоживают в 96% спирте, карбол-ксилоле и монтируют на предметном стекле с заключением в бальзам. В результате окрашиваются одонтобласты с отростками и дентинные трубочки. [Р.П. Самусев / Основы клинической морфологии зубов // Самусев Р.П., Дмитриенко С.В., Краюшкин А.И. - М.: ООО «Издательский дом «Оникс 21 век»: ООО «Мир и Образование», 2002. - 268 с. (С. 30)].

В качестве же метода выявления нервных образований данный способ фиксации мало пригоден из-за высокой концентрации входящих в состав фиксирующих жидкостей кислот, которые растворяют миелированные и немиелированные компоненты нервных элементов. Так, согласно методике Мираяма (1937) необходимо применять концентрированную муравьиную кислоту, разбавляя в равном количестве 70° спирта, а по методу Ричмена, Гельфанда и Хила (1946) используют 100 мл муравьиной и 80 мл соляной кислоты на 1 литр дистиллированной воды [Пирс Э. Гистохимия. Теоретическая и прикладная. М., 1962; Лойд З., Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов. Лабораторные методы. М., «Мир», - 1982].

Данные методики пригодны только для общегистологической окраски, но не для выявления нервных структур из-за побочного действия соляной кислоты.

Согласно методике деКастро, в качестве фиксации и декальцинации используется азотная кислота [К.Г. Таюшев Руководство по лабораторной нейрогистологической технике / Таюшев К.Г. - СПб, 2005. - С. 68]. По данной методике приводится:

1. Фиксация и одновременная декальцинация: абсолютный этанол - 50 мл, хлоралгидрат - 5,0 г, дистиллированная вода 50 мл, азотная кислота - 2-4 мл (в зависимости от плотности костной ткани от 4 до 10 суток). Если ткань очень плотная, количество азотной кислоты можно увеличить от 4 до 7 мл, окончание фиксации определяется по цвету объекта: он становится полупрозрачным, молочным.

2. Промывание в проточной воде - 1 сут.

3. 96% этанол - 50 мл, аммиак - 1 сут.

4. 1,5% раствор нитрата серебра (можно прибавить пиридина по 1 капле на 1 мл раствора) - 7-10 сут. В термостате при температуре 37°С.

5. Восстановление: пирогаллол - 1 мл, нейтральный формалин - 10 мл, дистиллированная вода - 90 мл на сут.

6. Быстрое проведение через спирты, проводка и заливка в целлоидин.

7. Приготовление срезов и гистологических препаратов.

Однако данным способом затруднительно выявление в полном объеме нервных структур в костной ткани челюстей, особенно в зубах.

Техническим результатом изобретения является определение оптимальной концентрации декальцинирующе-фиксирующей смеси для более полного выявления структуры нервного аппарата в зубочелюстной системе человека и животных.

Технический результат достигается составом и концентрацией фиксирующей смеси на основе муравьиной кислоты и хлоралгидрата, и концентрацией азотнокислого серебра.

Предлагаемый способ заключается в следующем.

Объект зубной или челюстной ткани фиксируют в течение 3-5 суток в смеси следующего состава: концентрированная муравьиная кислота - 3,5 мл, хлоралгидрат - 3,5 г, 96% этиловый спирт - 50 мл, дистиллированная вода - 100 мл. Смесь меняют в течение суток 2-3 раза.

Далее объект промывают в водопроводной воде - 24 часа и помещают в смесь следующего состава: 50 мл 96° спирта с аммиаком (50 мл спирта и 5-6 капель аммиачного спирта) на 30-60 мин в зависимости от величины объекта.

Затем объект промывают в дистиллированной воде 20-30 минут и осуществляют импрегнацию в 5% растворе нитрата серебра в термостате при температуре 37° в течение 5-7 суток, пока кусочки не приобретут светло-коричневый оттенок.

После термостата объект промывают в дистиллированной воде 10 минут с последующим восстановлением в течении 24 часов в смеси состава: пирогалловая кислота - 1 гр, формалин - 10 мл, дистиллированная вода - 90 мл.

Далее проводят промывку дистиллированной водой 10-15 минут и традиционную проводку через спирты, ксилол, заливку в целлоидин, резку на микротоме и бальзамирование.

Применение в качестве декальцинирующего компонента муравьиной кислоты в составе фиксирующей смеси на фоне хлоралгидрата явилось новым решением, способствующим упрощению порядка проводки исследуемого объекта через нейрохимические реактивы, повышению качества получаемых нейрогистологических препаратов, определенных сегментов зубочелюстной системы на светооптическом уровне.

Изобретение относится к области медицины и касается способа выявления нервных структур в зубочелюстной системе. Сущность способа заключается в том, что проводят фиксацию объекта в течение 3-5 суток в растворе, содержащем концентрированную муравьиную кислоту - 3,5 мл, хлоралгидрат - 3,5 г, дистиллированную воду - 100 мл, причем 2-3 раза в сутки проводят замену фиксирующего раствора. Далее отмытый исследуемый объект, в зависимости от его величины, помещают в смесь спирта с аммиаком на 30-60 минут с дальнейшим промыванием в дистиллированной воде 20-30 минут. Импрегнацию проводят в термостате 5-7 суток в 5% растворе нитрата серебра до приобретения объектом светло-коричневого оттенка, промывая его в дистиллированной воде 10 минут перед восстановлением и 10-15 минут перед проводкой, заливкой, резкой и бальзамированием. Использование способа позволяет с высокой точностью выявлять неравные структуры в зубочелюстной системе.

Способ выявления нервных структур в зубочелюстной системе, включающий фиксацию исследуемого объекта с промывкой сутки в проточной воде, помещение его в смесь этанола с аммиаком, отличающийся тем, что фиксацию объекта проводят 3-5 суток в растворе, содержащем концентрированную муравьиную кислоту - 3,5 мл, хлоралгидрат - 3,5 г, дистиллированную воду - 100 мл, причем 2-3 раза в сутки проводят замену фиксирующего раствора и отмытый исследуемый объект, в зависимости от его величины, помещают в смесь спирта с аммиаком на 30-60 минут с дальнейшим промыванием в дистиллированной воде 20-30 минут, а импрегнацию проводят в термостате 5-7 суток в 5% растворе нитрата серебра до приобретения объектом светло-коричневого оттенка, промывая его в дистиллированной воде 10 минут перед восстановлением и 10-15 минут перед проводкой, заливкой, резкой и бальзамированием.