ПРИМЕНЕНИЕ ЭПОТИЛОНОВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА Российский патент 2004 года по МПК A61K31/425 A61P35/00 

Краткое изложение сущности изобретения

Изобретение относится к лечению пролиферативной болезни, прежде всего к определенным схемам лечения с использованием эпотилона, прежде всего эпотилона В; предпочтительно опухоли желудочно-кишечного тракта, более предпочтительно (1) опухоли ободочной кишки и/или прямой кишки (колоректальная опухоль), прежде всего если она не поддается лечению с использованием (по крайней мере, одного) противоракового агента из класса таксана, в частности TAXOL® (паклитаксел в виде препаративной формы, предназначенной для клинического применения), и/или по крайней мере одному типу стандартного лечения другим химиотерапевтическим агентом, прежде всего 5-флуорацилом; (2) опухоли мочеполовой системы, более предпочтительно опухоли предстательной железы, включая первичные и метастатические опухоли, прежде всего опухоли, не поддающейся лечению гормонами ("рак предстательной железы, не поддающийся лечению гормонами"), и/или лечению другими стандартными химиотерапевтическими агентами; (3) эпидермоидной опухоли, более предпочтительно эпидермоидной опухоли головы и шеи, наиболее предпочтительно опухоли рта; (4) рака легкого, более предпочтительно немелкоклеточного рака легкого, прежде всего любой из таких опухолей, которые не поддаются лечению одним или несколькими химиотерапевтическими агентами (прежде всего вследствие множественной устойчивости к лекарствам), прежде всего к лечению с использованием противораковых агентов из класса таксана, в частности TAXOL®; или (5) опухоли молочной железы, более предпочтительно опухоли, которая обладает множественной устойчивостью к лекарствам, прежде всего к лечению с использованием противораковых агентов из класса таксана, в частности TAXOL®; изобретение также прежде всего относится к лечению обладающей множественной устойчивостью к лекарствам опухоли легкого (предпочтительно мелкоклеточной опухоли), обладающей множественной устойчивостью к лекарствам опухоли молочной железы или обладающей множественной устойчивостью к лекарствам эпидермоидной опухоли, или в более широком смысле изобретение относится к схеме лечения, предназначенной для лечения вышеуказанной или (в более широком смысле) любой другой опухоли, главным образом невосприимчивой к одному или нескольким химиотерапевтических агентам, прежде всего обладающей множественной устойчивостью к лекарствам и/или невосприимчивой к TAXOL®, таких как меланома, рак яичника, рак панкреатической железы, нейробластома, рак головы и шеи, или рак мочевого пузыря, или в более широком смысле рак почки, мозга или желудка; предусматривающему введение эпотилона, прежде всего эпотилона В в качестве цитотоксического агента; под понятие "лечение" также подпадает (I) способ лечения (лечение) указанной болезни, предусматривающий введение, по крайней мере однократное введение терапевтически эффективного количества указанного цитотоксического агента (предпочтительно эпотилона, прежде всего эпотилона В, в каждом случае предпочтительно в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем) теплокровному животному, прежде всего нуждающемуся в таком лечении; (II) применение указанного цитотоксического агента для лечения пролиферативной болезни; (III) применение указанного цитотоксического агента для изготовления фармацевтической композиции, предназначенной для лечения указанной пролиферативной болезни (включая смешение указанного цитотоксичного агента с фармацевтически приемлемым носителем); (IV) фармацевтическая композиция, содержащая дозу указанного цитотоксического агента, необходимую для лечения указанной пролиферативной болезни. В предпочтительном варианте осуществления изобретение относится к лечению пациентов (людей) или групп пациентов в том случае, когда другие способы лечения, прежде всего стандартная обработка химиотерапевтическими средствами, прежде всего 5-флуорацилом, или терапия с использованием противораковых агентов из класса таксана, таких как TAXOL®, оказалась неэффективной. Изобретение также относится к эпотилону, прежде всего к эпотилону В, предназначенному для лечения пролиферативной болезни, прежде всего болезни, не поддающейся к лечению стандартными терапевтическими средствами.

Предпосылки создания изобретения

Рак является главной нерешенной до сих пор медицинской проблемой. Первоочередным лечением болезни часто является лечение путем хирургического вмешательства, лечение с помощью облучения или сочетание этих способов, однако часто болезнь возобновляется (появляются метастазы). Химиотерапевтические обработки для большинства видов рака не приводят к излечению, а только замедляют развитие болезни. Как правило, опухоли и их метастазы становятся нечувствительными к химиотерапии, это явление известно под названием развитие множественной устойчивости к лекарствам. Во многих случаях опухоли с самого начала присуща устойчивость к определенным классам химиотерапевтических агентов [см. DeVita V.T., Principles of Cancer Management: Chemotherapy. B: Cancer. Principles and Practice of Oncology. DeVita V.T. и др. (ред.), 5-е изд., Lippincot-Raven, Philadelphia, New York, стр. 333-347, (1977); или Cleton F.J., Chemotherapy: general aspects. B: Oxford Textbook of Oncology; Peckham M. и др., Oxford University Press, Oxford, New York, Tokyo, том. 1, стр. 445-453 (1995)]. Это имеет место, например, в случае опухоли легкого, прежде всего, мелкоклеточной карциномы легкого, или также эпидермоидных опухолей, таких как эпидермоидные опухоли головы и шеи, прежде всего рта, или также опухолей молочной железы. Другими механизмами, обуславливающими то, что опухоли не излечиваются (не поддаются лечению), могут быть, например, наличие мутаций тубулина или механизмов, опосредуемых глутатионом.

Рак кишки, прежде всего колоректальный рак, представляет собой особый случай нерешенных медицинских проблем лечения рака. Первоочередным лечением болезни часто является лечение путем хирургического вмешательства, лечение с помощью облучения или сочетание этих способов, однако часто болезнь возобновляется (появляются метастазы). Основные химиотерапевтические обработки при рецидиве колоректального рака включают применение 5-флуорацила. Однако в лучшем случае такое лечение обеспечивает лишь замедление развития болезни, так как опухоли обычно становятся невосприимчивыми к лечению. Химиотерапия на этой стадии развития устойчивости болезни включает применение других классических цитотоксических агентов, однако все они считаются недостаточно эффективными [см. Cohen и др., Cancer of the colon. B: Cancer. Principles and Practice of Oncology; DeVita и др. (ред.), 5-е издание, Lippincott Raven, Philadelphia, New York, стр. 1144-1197, 1997; или Rowinsky, Ann. Rev. Med. 353-374 (1997)]. Также и для рака мочеполовой системы, прежде всего рака предстательной железы, представляющего собой еще одну нерешенную медицинскую проблему, первоочередное лечение, как отмечалось выше для колоректального рака, сталкивается с аналогичными проблемами. Основное химиотерапевтическое лечение при рецидиве рака предстательной железы включает применение антиандрогенов и рецидив часто является зависимым от андрогена. Однако такое лечение обеспечивает только замедление развития болезни, поскольку опухоли почти всегда становятся невосприимчивыми к антиандрогенам в течение периода времени от 6 месяцев до 2 лет (опухоли предстательной железы, не поддающиеся лечению гормонами). Химиотерапия болезней на этой стадии развития устойчивости к антиандрогенам включает применение митоксантрона или других классических противораковых цитотоксических агентов, однако все они считаются недостаточно эффективными [см. Oesterling и др., Cancer of the prostate. B: Cancer. Principles and Practice of Oncology; DeVita и др. (ред.), 5-е издание, Lippincott Raven, Philadelphia, New York, стр. 1322-1386, 1997; Sternberg, Cancers of the genitourinary tract. B: Cavalii и др. (ред.). Textbook of Medical Oncology; или Roth B.J., Semin. Oncol. (6 дополн. 14), 49-55 (1996)].

Среди цитотоксичных агентов, предназначенных для лечения опухолей, очень важным соединением является TAXOL®, стабилизирующий микротрубки агент, пользующийся большим спросом на рынке [см. Rowinsky E.K., The development and clinical utility of the taxane class of antimicrotubule chemotherapy agents; Ann. Rev. Med. 353-374 (1997)].

Однако TAXOL® имеет много недостатков. Прежде всего серьезную проблему представляет собой его плохая растворимость в воде. Оказывается необходимым вводить TAXOL® в виде композиции с Cremophor EL® (полиэтоксилированное касторовое масло; фирма BASF, Ludwigshafen, Германия), которое обладает серьезными побочными действиями, вызывая среди прочего аллергические реакции, которые, как сообщалось, в одном случае даже привели к смерти пациента. Более того, известно, что некоторые типы опухолей являются невосприимчивыми к обработке TAXOL® даже в том случае, если лекарство вводят в качестве начальной (интенсивной) терапии, или у опухолей развивается устойчивость к TAXOL® после нескольких циклов применения.

Хотя таксан, являющийся представителем класса противораковых противомикротубулярных агентов, был назван "вероятно наиболее важным вкладом в арсенал химиотерапевтических средств борьбы с раком в течение последних нескольких десятилетий" [см. Rowinsky E.K., Ann. Rev. Med. 48, 353-374 (1997)] и несмотря на коммерческий успех TAXOL®, имеются ограничения для эффективного применения TAXOL®. Лечение с помощью TAXOL® связано с возникновением целого ряда существенных побочных эффектов и некоторые важные классы твердых опухолей, а именно опухоли ободочной кишки и предстательной железы слабо поддаются действию этого соединения (см. Rowinsky E.K., в упомянутом месте). В частности, считается, что при применении в качестве индивидуально TAXOL® обладает слабой клинической активностью в отношении колоректального рака, рака почки, предстательной железы, панкреатической железы, желудка и головного мозга [см. Rowinsky E.K., в упомянутом месте; Bitton R.J. и др., Drug Saf. 196-208 (1995); или Arbuck S.G. и др., J. Natl. Cancer Inst. Monogr. 11-24 (1993)]. Например, эффективность TAXOL® может быть серьезно ограничена механизмами приобретенной устойчивости к лекарству, опосредованных различными механизмами, такими как сверхэкспрессия фосфогликопротеинов, действующих как насосы, откачивающие лекарства.

Таким образом, существует необходимость в нахождении соединений и разработке соответствующих схем приема лекарственных средств с использованием этих соединений, расширяющих арсенал средств для лечения рака, прежде всего применительно к большинству случаев, когда лечение таксанами и другими соединениями, обладающими противораковой активностью, не обеспечивает выживание в течение продолжительного периода.

Эпотилоны, прежде всего эпотилоны А и В представляют собой новый класс стабилизирующих микротрубки цитотоксических агентов (см. у Gerth К. и др., J. Antibiot. 560-563 (1966); или у Hoefle и др. DE 4138042), описываются формулой:

где R обозначает атом водорода (эпотилон А) или метил (эпотилон В).

Эти соединения обладают следующими преимуществами:

(I) они обладают лучшей растворимостью в воде, чем TAXOL®, и вследствие этого более пригодны для включения в композицию; и

(II) имеются данные о том, что в опытах с использованием культур клеток они также обладают активностью в отношении пролиферации клеток, которые в результате активности связанного с Р-гликопротеином "откачивающего насоса" стали обладать множественной устойчивостью к лекарствам, проявляя устойчивость к обработке другими химиотерапевтическими агентами, например TAXOL® [см. у Bollag D.M. и др., "Epotilones, a new class of tubule-stabilizing agents with a Taxol-like mechanism of action". Cancer Research 2325-2333 (1995); и у Bollag D.M., Exp. Opin. Invest. Drugs 867-873 (1997)]; и

(III) установлено, что несмотря на то, что они, по-видимому, имеют одинаковую мишень, т.е. стерически проксимальный сайт связывания на микротрубке, эпотилоны обладают более высокой активностью в отношении устойчивой к действию TAXOL® линии клеток карциномы яичника с модифицированным β-тубулином [см. у Kowalski R.J. и др., J. Biol. Chem. 272(4), 2534-2541 (1997)].

С другой стороны, они являются высокотоксическими и поэтому считалось, что их применение для лечения рака in vivo практически невозможно [см., например, PNAS 9642-9647 (1998)]. При создании изобретения неожиданно было установлено, что на самом деле могут быть найдены схемы приема лекарственных средств, которые позволяют, с одной стороны, осуществлять лечение опухолей с помощью эпотилонов, прежде всего эпотилона В; и с другой стороны, проводить лечение определенных групп пациентов, которые являются невосприимчивыми к другим видам лечения вследствие множественной устойчивости к лекарствам, таким как таксаны, например TAXOL®, не поддаются лечению вследствие развития множественной устойчивости к лекарствам и/или какого-либо другого механизма.

Задачей настоящего изобретения прежде всего является разработка схем эффективного лечения in vivo с использованием эпотилонов, предпочтительно эпотилона А или прежде всего эпотилона В, позволяющих осуществлять лечение болезней, связанных с опухолью, например меланомы, рака яичника, рака панкреатической железы, нейробластомы, рака головы и шеи, рака мочевого пузыря, почки, головного мозга, желудка или предпочтительно колоректального рака, рака предстательной железы, молочной железы, легкого (прежде всего немелкоклеточного рака легкого) или эпидермоидов, например эпидермоидного рака головы и шеи, прежде всего рта.

Хотя в целом схема лечения позволяет осуществлять лечение различных типов опухолей уже в форме основного лечения, изобретение предпочтительно относится к лечению опухолей, которые, как это предполагается или установлено, не поддаются лечению другими химиотерапевтическими агентами, например стандартному лечению одним или несколькими другими химиотерапевтическими агентами, прежде всего флуорацилом и/или таксаном, например лечению с использованием TAXOL®.

При создании изобретения неожиданно было установлено, что пролиферация даже таких клеток опухоли и опухолей, которые не поддаются стандартному лечению другими химиотерапевтическими агентами, например, 5-флуорацилом; и/или лечению соединением из класса таксанов, наиболее предпочтительно TAXOL®, прежде всего таких опухолей, как колоректальная опухоль, прежде всего такая, которая также не поддается стандартному лечению, например, с помощью 3-флуорацила; или опухоль легкого, прежде всего немелкоклеточный рак легкого; эпидермоидная опухоль, более предпочтительно эпидермоидная опухоль головы и шеи, такая, как опухоль рта; или опухоль молочной железы; и/или их метастазы, может быть уменьшена или приостановлена, так что даже возможны регресс или исчезновение опухоли.

Подробное описание предпочтительных объектов изобретения

Настоящее изобретение предпочтительно касается следующего объекта, являющегося частью изобретения:

Если в описании употребляется понятие "лечение пролиферативной болезни" или опухоли, рака или т.п., то подразумевается

а) способ лечения (то же, что и лечение) пролиферативной болезни, включающий стадию введения (по крайней мере в виде однократной обработки) эпотилона, предпочтительно эпотилона А и/или В, прежде всего эпотилона В, (предпочтительно в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем) теплокровному животному, прежде всего человеку, нуждающемуся в таком лечении, в такой дозе, которая позволяет осуществлять лечение болезни (то же, что и терапевтически эффективное количество), предпочтительно в дозе (в количестве), указанной (м) выше и ниже в настоящем описании в качестве предпочтительной (го);

б) применение эпотилона, предпочтительно эпотилона А и/или В, прежде всего эпотилона В для лечения пролиферативной болезни, или эпотилона, прежде всего эпотилона В, для применения при лечении болезни (прежде всего у человека);

в) применение эпотилона, предпочтительно эпотилона А и/или В, прежде всего эпотилона В, для приготовления фармацевтической композиции, предназначенной для лечения пролиферативной болезни; и/или

г) фармацевтическая композиция, включающая дозу эпотилона, предпочтительно эпотилона А и/или В, прежде всего эпотилона В, пригодную для лечения пролиферативной болезни; или любая комбинация объектов изобретения, указанных в разделах а), б), в) и г), допустимая для патентования в стране, в которой подается данная заявка;

д) способ применения эпотилона для приготовления фармацевтической композиции, предназначенной для лечения пролиферативной болезни, предусматривающий смешение эпотилона с фармацевтически приемлемым носителем. В тех случаях, когда вместо понятия "пролиферативная болезнь" употребляется понятие болезнь, связанная с опухолью, или конкретная опухоль (например, опухоль ободочной кишки, карцинома ободочной кишки или рак ободочной кишки; или опухоль предстательной железы, карцинома предстательной железы или рак предстательной железы), то следует понимать, что оно относится ко всем объектам, перечисленным в разделах а)-д), это означает, что в соответствии с патентуемым объектом изобретения в разделах а)-д) вместо понятия "пролиферативная болезнь" может быть записана соответствующая болезнь, связанная с опухолью; предпочтительно любое лечение согласно а)-д) относится к лечению людей.

Первый объект настоящего изобретения относится к лечению пролиферативной болезни, которая не поддается лечению одним или несколькими другими химиотерапевтическими агентами, при котором эпотилон, предпочтительно эпотилон А и/или В, прежде всего эпотилон В, вводят теплокровному животному, прежде всего человеку, предпочтительно человеку, нуждающемуся в таком лечении, прежде всего в терапевтически эффективном количестве.

Второй объект настоящего изобретения относится к схеме лечения in vivo пролиферативной болезни, прежде всего рака, который не поддается лечению одним или несколькими другими химиотерапевтическими агентами, прежде всего из класса таксана, такими как TAXOL®, и/или 5-флуорацилом, согласно которому эпотилон, предпочтительно эпотилон А и/или В, прежде всего эпотилон В, вводят теплокровному животному, прежде всего человеку, в дозе, находящейся в диапазоне приблизительно от 1 до приблизительно 100%, предпочтительно приблизительно от 25 до приблизительно 100% (однократное введение) от максимальной переносимой дозы (МПД); и одну или несколько (предпочтительно от двух до семи) дополнительных доз, каждая из которых предпочтительно находится в указанном выше диапазоне доз, вводят в течение одного или нескольких дополнительного (ых) цикла(ов) обработки, прежде всего с интервалом между циклами обработки, составляющим одну неделю или более одной недели после предыдущей обработки, более предпочтительно через приблизительно 1 - приблизительно б недель, наиболее предпочтительно через приблизительно 1 - приблизительно 3 недели после предыдущего цикла обработки соответственно. В целом такая схема лечения, при которой высокую дозу вводят в течение двух или большего количества циклов обработки с перерывами в течение одной-шести, предпочтительно в течение одной-трех недель между введениями, является более предпочтительным по сравнению с более частыми обработками меньшими дозами, прежде всего потому, что это позволяет уменьшить частоту и продолжительность госпитализации и потому, что такой режим вызывает более сильные противоопухолевые воздействия и обладает меньшей токсичностью по сравнению с более частыми обработками и более сильной противоопухолевой эффективностью по сравнению с менее частыми обработками.

Предпочтительно дозу эпотилона В, предназначенную для введения людям, вычисляют согласно формуле (I)

где N (выше и ниже в настоящем описании представляет собой целое (например, 1, 2 или 3) или дробное число (например, 1,5 или 2,3)) обозначает число недель между обработками (предпочтительно число, находящееся в диапазоне от приблизительно 1 до приблизительно 6 (это соответствует интервалу от приблизительно 1 до приблизительно 6 недель), прежде всего от приблизительно 1 до приблизительно 3 (это соответствует предпочтительному интервалу от приблизительно 1 до приблизительно 3 недель) и у равно 6 или предпочтительно 5, более предпочтительно 4.

Более предпочтительно дозу для обработки вычисляют согласно формуле II

еще более предпочтительно дозу для обработки вычисляют согласно формуле III

и наболее предпочтительно дозу для обработки вычисляют согласно формуле IV

где в каждой из формул II-IV N имеет значение, указанное для формулы I. Для доз, рассчитанных согласно любой из формул I-IV, должно соблюдаться следующее условие: доза для однократного введения, даже если расчет дает более высокое значение, не должна превышать приблизительно 18 мг/м². Предпочтительно для еженедельной обработки применяют дозу от приблизительно 0,1 до приблизительно 6 мг/м², предпочтительно от приблизительно 0,1 до приблизительно 5 мг/м², более предпочтительно от приблизительно 0,1 до приблизительно 3 мг/м², еще более предпочтительно от 0,1 до 1,7 мг/м² и наиболее предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 1 мг/м²; для трехнедельного режима обработки (обработка через каждые три недели или на каждой третьей неделе) применяют дозу от приблизительно 0,3 до приблизительно 18 мг/м², предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 15 мг/м², более предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 12 мг/м², еще более предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 7,5 мг/м², еще более предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 5 мг/м² и наиболее предпочтительно от приблизительно 1,0 до приблизительно 3,0 мг/м². Эту дозу предпочтительно вводят человеку внутривенно (в.в.) в течение 2-180 мин, предпочтительно в течение 2-120 мин, более предпочтительно в течение периода времени от приблизительно 5 до приблизительно 30 мин, наиболее предпочтительно в течение периода времени от приблизительно 10 до приблизительно 30 мин, например в течение приблизительно 30 мин.

Предпочтительно особенно в случае еженедельной обработки для того, чтобы дать возможность достаточного восстановления после предыдущей обработки, например после 3, 4, 6, 8 или большего количества циклов обработки, следует устраивать периоды отдыха продолжительностью более чем одна неделя, более предпочтительно в течение 2-10 недель, еще более предпочтительно в течение 3-6 недель в зависимости от состояния пациента.

Третий объект изобретения касается схемы лечения in vivo пролиферативной болезни, прежде всего такой, которая не поддается лечению одним или несколькими другими химиотерапевтическими агентами, согласно которому эпотилон, предпочтительно эпотилон А и/или В, прежде всего эпотилон В вводят еженедельно теплокровному животному, прежде всего человеку, в дозе, составляющей менее 80%, более предпочтительно менее 50% от максимальной переносимой дозы (МПД).

Четвертый объект изобретения касается лечения in vivo пролиферативной болезни, прежде всего такой, которая не поддается лечению одним или несколькими другими химиотерапевтическими агентами, прежде всего 5-флуорацилом или стабилизирующим микротрубки агентом из класса таксана, прежде всего TAXOL®, например обладающей множественной устойчивостью к лекарствам опухоли, согласно которому теплокровному животному, прежде всего человеку вводят эпотилон, прежде всего эпотилон В.

Пятый объект изобретения касается лечения in vivo пролиферативной болезни, прежде всего такой, которая не поддается лечению одним или несколькими другими химиотерапевтическими агентами, путем совместного введения (а) эпотилона, предпочтительно эпотилона А и/или эпотилона В, прежде всего эпотилона В, в сочетании с (б) другим противоопухолевым химиотерапевтическим агентом, предпочтительно режим совместного лечения является таким, что компоненты (а) и (б) вводят теплокровному животному, прежде всего человеку (прежде всего нуждающемуся в таком лечении) в комбинации в таких количествах, которые в сумме являются терапевтически эффективными в отношении пролиферативной болезни, предпочтительно такой, которая поддается лечению путем введения эпотилона, более предпочтительно эпотилона А и/или эпотилона В, прежде всего эпотилона В; предпочтительно такое введение осуществляют человеку, который страдает от опухоли, которая не поддается лечению другими химиотерапевтическими агентами, например прежде всего лечению 5-флуорацилом или прежде всего противораковыми агентами из класса таксана, такими как TAXOL®.

В этой связи изобретение также относится к комбинированной композиции, включающей компоненты (а) и (б), как они определены в последнем абзаце.

Изобретение также относится к предназначенному для лечения пролиферативной болезни продукту, который включает компонент (а) и компонент (б), как они определены выше во втором от данного абзаце, в сочетании с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями или без них, представляющему собой комбинированную композицию, предназначенную для одновременного или поэтапного введения теплокровному животному, прежде всего человеку, в течение достаточно непродолжительного периода времени для того, чтобы действующие вещества, представляющие собой как компонент (а), так и компонент (б), могли совместно усилить антипролиферативную активность (прежде всего в отношении пролиферирующих клеток) в организме теплокровного животного.

Общие понятия, использованные выше и ниже в настоящем описании, если не указано иное, имеют следующие значения:

Пролиферативная болезнь представляет собой главным образом связанное с опухолью заболевание (или рак) (и/или любые метастазы), вне зависимости от того, где расположены опухоль или метастазы, более предпочтительно опухоль, выбранную из группы, включающей рак молочной железы, рак мочеполовой системы, рак легкого, рак желудочно-кишечной системы, эпидермоидный рак, меланому, рак яичника, рак панкреатической железы, нейробластому, рак головы и шеи (если используется это понятие, то оно означает рак головы и/или шеи, при этом подразумевается не только рак головы и шеи, но также и рак головы или шеи) или рак мочевого пузыря, или в более широком смысле рак почки, головного мозга или желудка; более предпочтительно (I) опухоль, выбранную из группы, включающей опухоль молочной железы; эпидермоидную опухоль, прежде всего эпидермоидную опухоль и головы и шеи, предпочтительно рта; и опухоль легкого, прежде всего немелкоклеточную опухоль легкого; или из группы, включающей опухоль желудочно-кишечной системы, прежде всего колоректальную опухоль; и опухоль мочеполовой системы, прежде всего опухоль предстательной железы (прежде всего опухоль предстательной железы, не поддающуюся лечению гормонами); или (II) (более предпочтительно) пролиферативную болезнь, не поддающуюся лечению другими химиотерапевтическими агентами, прежде всего соответствующую опухоль (и/или любые метастазы), более предпочтительно опухоль, выбранную из группы, включающей опухоли, не поддающиеся стандартному лечению другим(и) химиотерапевтическим(и) агентом (ами), прежде всего с помощью 5-флуорацила и/или (предпочтительно) стабилизирующего микротрубки агента из класса таксана, наиболее предпочтительно TAXOL®, еще более предпочтительно опухоль, выбранную из группы, включающей опухоли желудочно-кишечной системы, например колоректальной системы (прежде всего не поддающиеся стандартному лечению, например, с помощью 5-флуорацила и/или TAXOL®); и мочеполовой системы, например предстательной железы (и/или ее метастазов, прежде всего ее метастазов); наиболее предпочтительно опухоль желудочно-кишечной системы, прежде всего колоректальный рак; или (III) опухоль, которая не поддается лечению другими химиотерапевтическими агентами вследствие развития множественной устойчивости к лекарствам, прежде всего не поддающейся лечению с помощью стабилизирующих микротрубки агентов из класса таксана, предпочтительно TAXOL®, наиболее предпочтительно устойчивую ко многим лекарствам, прежде всего к TAXOL®, опухоль легкого (прежде всего немелкоклеточную опухоль легкого), устойчивую ко многим лекарствам опухоль молочной железы, или устойчивую ко многим лекарствам эпидермоидную опухоль, предпочтительно эпидермоидную опухоль головы и шеи, наиболее предпочтительно опухоль рта.

В более широком смысле изобретение относится к пролиферативной болезни, которая может быть выбрана из таких гиперпролиферативных состояний, как гиперплазия, фиброз (прежде всего фиброз легкого, но также и другие типы фиброза, такие как фиброз почки), ангиогенез, псориаз, атеросклероз и пролиферация гладкомышечной ткани в кровеносных сосудах, такая как ангиопластия, вызываемая стенозом или рестенозом.

Если выше и ниже в настоящем описании упоминается опухоль, болезнь, связанная с опухолью, карцинома или рак, то при этом подразумеваются и метастазы в исходном органе или ткани, и/или в любом другом месте по отдельности или сочетании вне зависимости от того, где расположены опухоль и/или метастазы.

Понятие "не поддающаяся лечению" означает, что при соответствующей пролиферативной болезни (прежде всего в случае опухоли и/или любых ее метастазов) в случае лечения (по крайней мере одним) химиотерапевтическим агентом, отличным от эпотилона, после обработки таким агентом не наблюдается никакой антипролиферативной реакции или она проявляется лишь в незначительной степени (не наблюдается ингибирования роста опухоли, или оно происходит лишь в незначительной степени), это означает, что опухоль у теплокровного животного, прежде всего у человека, совсем не может быть излечена или результаты оказываются неудовлетворительными при использовании других (предпочтительно стандартных) химиотерапевтических агентов (предпочтительно таких, которые указаны выше, прежде всего 5-флуорацила (прежде всего в случае колоректального рака, например рака ободочной кишки), антиандрогенов или предпочтительно митоксантрона (прежде всего в случае рака предстательной железы), или антиэстрогенов, таких как летрозол (предпочтительно в случае рака молочной железы); или предпочтительно химиотерапевтических агентов из класса таксана, например, таких как TAXOTERE® или TAXOL®; например, рост опухоли не прекращается, лишь слабо замедляется или не наблюдается его регресса. Если в настоящем описании упоминается лечение не поддающихся лечению опухолей и т.п., то следует понимать, что это относится не только к опухоли (ям), в отношении которых применение одного или нескольких химиотерапевтических агентов оказалось безуспешным при лечении пациента, но и к опухоли(ям), для которой(ых) тот факт, что она(и) не поддается (ются) лечению, выявлен другими средствами, например с помощью биопсии и культивирования в присутствии химиотерапевтических агентов.

Если выше и ниже в настоящем описании используется понятие "не поддающаяся лечению с помощью TAXOL®", то следует понимать, что это понятие относится не только к конечному продукту, но так же и к паклитакселу, действующему веществу TAXOL®. "Не поддающаяся лечению гормонами" или "не поддающаяся гормонам" в случае опухоли мочеполовой системы, прежде всего опухоли предстательной железы, означает, что она не поддается лечению с помощью антиандрогенов.

TAXOL® предпочтительно обозначает конечный продукт, содержащий паклитаксел, но в широком смысле это название также включает паклитаксел сам по себе, входящий в состав любой другой композиции на основе паклитаксела в сочетании с одним или несколькими носителем (ями).

Предпочтительно понятие "не поддающаяся лечению" означает, что с использованием стандартной дозы получают, например, путем измерений in vivo или in vitro уменьшение роста опухоли, составляющее менее 50% (т.е. величина Т/С% равна или превышает 50%), по сравнению с контролем без использования химиотерапевтических агентов.

Связанное с опухолью заболевание, устойчивое к действию многих лекарств, представляет собой заболевание, в отношении которого обнаружена устойчивость к одному или нескольким химиотерапевтическим агентам, включая представителей класса таксана, прежде всего TAXOL®, или представителей класса антрациклина, прежде всего ADRIAMYCIN®. В основе этой устойчивости лежит экспорт, обусловленный действием насоса, зависящего от энергии (прежде всего от АТФ), расположенного на поверхности клеток соответствующей опухоли, прежде всего связанного с представителем семейства Р-гликопротеина, прежде всего самого Р-гликопротеина (P-gp). В настоящем изобретении подразумевается, что и другие механизмы сами по себе или в сочетании с указанным выше механизмом могут приводить к тому, что опухоль становится не поддающейся лечению химиотерапевтическими агентами, отличными от эпотилона. К возникновению такой устойчивости могут приводить, например, изменения в мишени лекарства (в рассматриваемом случае прежде всего в микротрубках), изменения внутриклеточного метаболизма, которые могут инактивировать соединение или изменения физиологии клетки, которые могут облегчать выключение или нейтрализацию механизма действия лекарства.

В контексте настоящего описания понятие "другой химиотерапевтический агент" или "стандартный химиотерапевтический агент" обозначает прежде всего любой химиотерапевтический агент, отличный от эпотилона; предпочтительно такой, который указан во введении, прежде всего 5-флуорацил (прежде всего в случае колоректального рака, например рака ободочной кишки), антиандроген или митоксантрон (прежде всего в случае рака предстательной железы), или антиэстроген, такой как летрозол (прежде всего в случае рака молочной железы); прежде всего понятие относится к 5-флуорацилу или (более предпочтительно) к стабилизирующим микротрубки агентам из класса таксана, таким как предпочтительно TAXOTERE® или более предпочтительно TAXOL®. "Стандартная обработка другими химиотерапевтическими агентами", "другая химиотерапевтическая обработка" или "стандартная химиотерапия" относятся к обработке по крайней мере одним таким "другим" или "стандартным химиотерапевтическим агентом".

Понятие эпотилон обозначает любой эпотилон или прозводное эпотилона. Предпочтительно понятие "эпотилон" означает эпотилон А, эпотилон В, любое производное эпотилона, описанное в WO 98/25929 (включенной в настоящее описание в виде ссылки), или любую их смесь; более предпочтительно оно обозначает эпотилон А и/или эпотилон В и наиболее предпочтительно оно относится к эпотилону В.

Во всех случаях, упомянутых выше и ниже в настоящем описании, введение может осуществляться орально, однако с точки зрения достижения лучшей и лучше контролируемой биологической доступности более предпочтительно осуществлять его парентерально, прежде всего внутривенно, например путем инфузии или инъекции. Далее, если употребляется понятие "инфузия", то оно предпочтительно означает внутривенную инфузию, являющуюся наиболее предпочтительным путем введения.

Далее основой для иллюстрации являются данные, относящиеся к взрослым пациентам. Однако считается само собой разумеющимся, что настоящее изобретение также относится к лечению пролиферативных болезней в педиатрии. Для этого дозы должны быть скорректированы согласно стандартным методам и с учетом возраста, состояния и других индивидуальных особенностей пациента.

Максимальную переносимую дозу (МПД) определяют согласно стандартным методам; предпочтительно для теплокровных животных МТД в случае орального или внутривенного введения определяют как дозу для однократного введения, при которой не наступает смерть и потеря веса тела составляет менее 40, предпочтительно менее 25% у обработанной теплокровной особи животного (это понятие в данном случае в основном относится к животному; для людей см. ниже).

МПД может варьироваться в зависимости от группы пациентов, что может определяться типом опухоли, возрастом, полом, стадией развития опухоли и т.п. Если для животных наиболее предпочтительный путь определения МПД может быть аналогичен тому, который описан в приведенных ниже примерах, для людей МПД обычно определяют, начиная с однократного введения очень низкой дозы, например 1/10 LD₁₀ (т.е. дозы, вызывающей гибель 10% животных) для наиболее чувствительных видов животных, для которых проводились токсикологические исследования, например для эпотилонов (прежде всего для эпотилона В) такая доза находится в диапазоне от 0,1 до 25 мг/м², для эпотилона В предпочтительно в диапазоне от 0,1 до 2,5 мг/м², наиболее предпочтительно в диапазоне от 0,1 до 0,33 мг/м². Увеличение дозы для получения следующего уровня доз составляет 100% до тех пор, пока не будет обнаружена токсичность степени 2 согласно пересмотренным общим критериям токсичности Национального института рака США (US National Cancer Institute Revised Common Toxicity Criteria), в этом случае увеличение дозы составляет 67%. Повышение дозы для получения последующих уровней доз находится в диапазоне от 25 до 67%. Например, обычно обрабатывают трех пациентов одним уровнем доз и наблюдают в отношении проявления признаков острой токсичности в течение одного курса лечения до привлечения к участию в опыте других пациентов. Если ни у одного из трех пациентов не обнаружены признаки ОДТ (ограничивающей дозу токсичности), то следующую группу из трех пациентов обрабатывают следующей более высокой дозой. Если у двух или трех пациентов из группы обнаруживают признаки ОДТ, то еще трех пациентов обрабатывают следующей более низкой дозой до тех пор, пока шесть пациентов не будут обработаны одинаковой дозой. Если у одного из трех пациентов, обработанных дозой, обнаруживают признаки ОДТ, то еще трех пациентов обрабатывают дозой такого же уровня. Если среди этих шести пациентов имеется один случай ОДТ, то следующую группу обрабатывают более высокой дозой. В целом, если среди шести пациентов, обработанных одинаковой дозой, у двух или более выявлены признаки ОДТ, то считается, что МПД превышена, и трех следующих пациентов обрабатывают, как описано выше, следующей, более низкой дозой. За МПД принимают наиболее высокую дозу, для которой количество случаев ОДТ составляет менее 33%. Как правило, не допускается проведение последовательных курсов повышения доз для одного и того же пациента, т.е. повышение доз в организме одного пациента. В альтернативном варианте последовательные дозы могут быть определены с помощью модифицированных рядов Фибоначчи, в этом случае приращения дозы для получения дозы следующего уровня, превышающей исходную дозу, составляют 100, 67, 50 и 40%, а затем 33% для всех последующих уровней доз. Наконец, МПД может быть определена согласно методам, описанным у Simon R. и др., J. Nat. Cancer Inst. (15), стр. 1138-1147, 1997.

ОДТ обычно включает любую обусловленную лекарством смерть и большинство обусловленных лекарством токсичностей степеней 3 и 4, включая лихорадочную нейтропению (но не ограничена ими) (см. также общие критерии токсичности Национального института рака США, см. прежде всего примеры). Для человека предпочтительные дозы для лечения определяют по указанной выше формуле I, более предпочтительно по формуле II, наиболее предпочтительно по формуле III (при условии, что ни одна из однократных доз не превышает 18 мг/мм²).

Предпочтительно для еженедельной обработки применяют дозу от приблизительно 0,1 до приблизительно 6 мг/м², предпочтительно от приблизительно 0,1 до приблизительно 5 мг/м², более предпочтительно от приблизительно 0,1 до приблизительно 3 мг/м², еще более предпочтительно от 0,1 до приблизительно 1,7 мг/м² и наиболее предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 1 мг/м²; для трехнедельного режима обработки (обработка через каждые три недели или на каждой третьей неделе) применяют дозу от приблизительно 0,3 до приблизительно 18 мг/м², предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 15 мг/м², более предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 12 мг/м², еще более предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 7,5 мг/м², еще более предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 5 мг/м² и наиболее предпочтительно от приблизительно 1,0 до приблизительно 3,0 мг/м². Эту дозу предпочтительно вводят человеку внутривенно (в.в.) в течение 2-180 мин, предпочтительно в течение 2-120 мин, более предпочтительно в течение периода времени от приблизительно 5 до приблизительно 30 мин, наиболее предпочтительно в течение периода времени от приблизительно 10 до приблизительно 30 мин, например в течение приблизительно 30 мин.

При использовании результатов, полученных в опытах на животных, дозы, пригодные для людей (взрослых), могут быть грубо определены следующим образом:

Доза, составляющая 1 мг/кг для мыши, соответствует дозе, составляющей 3 мг/м² для человека.

Под достаточным восстановлением после предыдущей обработки применительно к теплокровным животным понимают прежде всего восстановление веса тела индивидуума, подвергавшегося лечению, до исходного уровня, определенного перед введением первой дозы, предпочтительно по крайней мере до 95% этого веса. Для человека восстановление после каждой предшествующей введенной дозы предпочтительно определяют как восстановление из любого состояния, характеризующегося токсичностью степени 3 или 4, включая, например, достижение уровня тромбоцитов, составляющего по крайней мере 100000/мм³, и уровня нейтрофилов, составляющего по крайней мере 1500 клеток/мм³ цельной крови.

Обработка может быть повторена, если после первой обработки не достигнуто нужного результата, до тех пор, пока не будет выявлено прогрессивное развитие опухоли или пока другие причины (например, состояние пациента) не потребуют прекратить лечение. Для человека обработку дозами, составляющими от приблизительно 25% до приблизительно 100% от МПД, предпочтительно повторяют каждые 1-10, прежде всего 2-10 недель, предпочтительно каждые 1-10 недель или каждые 3-6 недель, до тех пор, пока не будет обнаружено прогрессивное развитие болезни, недопустимый уровень токсичности, пока не будет проведено 1 или предпочтительно 2 цикла после достижения полной реакции, или если будет получен отказ пациента по какой-то причине.

Предпочтительно в случае еженедельной обработки человека эпотилоном доза находится в диапазоне от приблизительно 5 до приблизительно 60%, предпочтительно от приблизительно 10 до приблизительно 60%, например от приблизительно 5 до приблизительно 35% от МПД, прежде всего в диапазоне приблизительно от 30 до приблизительно 35% от МПД. Предпочтительно при обработке каждые три недели доза эпотилона В находится в диапазоне от приблизительно 5 до приблизительно 60%, предпочтительно от приблизительно 10 до приблизительно 60%, еще более предпочтительно от приблизительно 10 до приблизительно 45%, наиболее предпочтительно от приблизительно 30 до приблизительно 45% от МПД.

Наиболее предпочтительно обработку прекращают после 3-8, прежде всего 3-5 еженедельных введений, после чего следует период отдыха в течение 2-5, например, в течение 2 недель, перед возобновлением обработки, состоящей в однократном или опять еженедельном или проводимом каждые две недели введении. В частности, в случае еженедельной обработке эпотилоном В ее прекращают после 3-8 введений, после чего следует период отдыха в течение 2-4, например, 2 недель, перед возобновлением обработки путем еженедельного введения.

Введение компонента (а), представляющего собой эпотилон(ы) А и/или В, прежде всего В, предпочтительно осуществляют как описано выше, прежде всего с использованием указанных выше конкретных схем лечения.

Введение компонента (б) предпочтительно осуществляют в соответствии со схемой лечения, известной специалисту в данной области.

В первом предпочтительном варианте осуществления изобретения компонент (б) вводят до введения компонента (а), предпочтительно согласно схеме лечения, включающей одно или несколько введений компонента (б) до начала лечения компонентом (а), предпочтительно таким образом, чтобы лечение компонентом (б) заканчивалось по крайней мере за два, предпочтительно за 5-10, например, за приблизительно 5 дней до начала лечения компонентом (а), который после этого вводят один или несколько раз, предпочтительно один-пять, наиболее предпочтительно один или два раза.

В более предпочтительном варианте осуществления изобретения компонент (а) вводят согласно схеме лечения с 3-недельными интервалами до начала введения компонента (б), предпочтительно согласно схеме лечения, включающей одно введение компонента (а) до начала лечения компонентом (б), более предпочтительно такое лечение компонентом (а) заканчивается непосредственно перед началом лечения компонентом (б), который вводят после него.

Во втором более предпочтительном варианте осуществления изобретения компонент (а) вводят согласно еженедельной схеме лечения. С другой стороны, компонент (б) вводят согласно схеме лечения с 3-недельными интервалами, при этом каждое введение осуществляют сразу после завершения каждого третьего введения компонента (а).

В третьем более предпочтительном варианте осуществления изобретения компонент (а) вводят согласно еженедельной схеме лечения до начала лечения компонентом (б), предпочтительно согласно схеме лечения, включающей одно введение компонента (а) до начала лечения компонентом (б), более предпочтительно такое лечение компонентом (а) заканчивается непосредственно перед началом лечения компонентом (б), который вводят после него.

В контексте настоящего описания понятие "другой химиотерапевтический агент" означает прежде всего любой химиотерапевтический агент, который применяется или может применяться для лечения связанных с опухолью болезней, в том числе такие химиотерапевтические агенты, которые являются производными агентов из следующих классов:

(А) алкилирующие агенты, предпочтительно поперечно-сшитые химиотерапевтические агенты, предпочтительно бисалкилирующие агенты;

(Б) противораковые антибиотики, предпочтительно доксорубицин (ADRIAMYCIN®, RUBEX®);

(В) антиметаболиты;

(Г) растительные алкалоиды;

(Д) гормональные агенты и антагонисты;

(Е) модификаторы биологических реакций, предпочтительно лимфокины или интерфероны;

(Ж) ингибиторы протеинов, таких как тирозинкиназы и/или серин/треонинкиназы;

(З) антисмысловые олигонуклеотиды или олигонуклеотидные производные;

или

(И) разнообразные агенты или другие агенты с иным или с неизвестным механизмом действия.

Понятие "терапевтически эффективно при совместной терапии в отношении пролиферативной болезни, которая поддается лечению путем введения эпотилона А и/или эпотилона В, прежде всего эпотилона В" предпочтительно означает, что в случае указанной выше пролиферативной болезни, прежде всего болезни, связанной с опухолью, предпочтительно проявляется реакция, заключающаяся в уменьшении пролиферации, например, в уменьшении роста опухоли или даже (более предпочтительно) в регрессе опухоли, или (наиболее предпочтительно) в исчезновении опухоли ("полная реакция").

Предпочтительно понятие "количество, терапевтически эффективное при совместной терапии в отношении пролиферативной болезни, которая поддается лечению путем введения эпотилона А и/или эпотилона В, прежде всего эпотилона В" означает любое количество компонентов (а) и (б), входящих в композицию, которое при их совместном применении вызывает уменьшение пролиферации клеток, обусловливающих любую из указанных пролиферативных болезней, прежде всего клеток опухоли (включая метастазы) (прежде всего уменьшение роста опухоли) или предпочтительно даже вызывает регресс, более предпочтительно даже частичное или полное исчезновение таких клеток (прежде всего регресс опухоли, предпочтительно полную реакцию, означающую исчезновение опухоли(ей)). Это понятие включает не только сочетания любых компонентов (а) и (б), в которых дозы (а) и (б) являются эффективными в отношении пролиферации уже при применении каждого из компонентов по отдельности, но также и такие дозы любых таких компонентов, в которых применение компонентов по отдельности не оказывает действия или оказывает лишь слабое действие, однако при совместном применении вызывает выраженные антипролиферативные воздействия, т.е. уменьшает пролиферацию или предпочтительно вызывает регресс пролиферирующих клеток, или даже приводит к излечению от пролиферативной болезни. Кроме того, в настоящем описании понятие "комбинация" используется не только для обозначения фиксированных комбинаций компонентов, но также и любой комбинации компонентов (а) и (б), предназначенной для одновременного или последовательного применения в течение достаточно непродолжительного периода времени, такого, чтобы действующие вещества как компонента (а), так и компонента (б) могли взаимно усилить антипролиферативную активность, например, в организме пациента.

В контексте настоящего описания понятие "объединенная композиция, включающая компонент (а) и компонент (б)", означает любую комбинацию, представляющую собой набор элементов или отдельную объединенную композицию, включающую компоненты (а) и (б), в форме фармацевтического продукта, в котором предпочтительно присутствует фармацевтически приемлемый носитель. Предпочтительные носители приведены ниже в разделе "Фармацевтические композиции".

В контексте настоящего описания понятие "продукт, включающий компонент (а) и компонент (б)", предпочтительно означает продукт, включающий (а) по крайней мере одно соединение, выбранное из эпотилона А и (предпочительно) эпотилона В и

(б) по крайней мере один другой химиотерапевтический агент, в котором присутствует или может отсутствовать один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, в виде объединенной композиции, предназначенной для одновременного или последовательного применения, предпочтительно в течение достаточно непродолжительного периода времени, такого, чтобы действующие вещества как компонента (а), так и компонента (б) могли взаимно усилить антипролиферативную активность в отношении пролиферирующих клеток, прежде всего в организме пациента, для лечения пролиферативной болезни, которая поддается лечению такими действующими веществами, прежде всего "набор элементов", при этом подразумевается, что обладающие активностью компоненты (а) и (б), входящие в комбинацию, могут вводиться в нужных дозах независимо друг от друга или в различные моменты времени с использованием различных фиксированных комбинаций, различающихся количествами каждого из компонентов (а) и (б). Элементы, входящие в "набор элементов", могут вводиться одновременно или последовательно, т.е. в различные моменты времени и с одинаковыми или различными временными интервалами для каждого из элементов набора элементов, предпочтительно при условии, что временные интервалы выбирают таким образом, чтобы воздействие на пролиферативную болезнь при совместном применении элементов было более сильным, чем воздействие, которое может быть получено при применении только одного из компонентов (а) и (б) по отдельности или при применении их обоих таким образом, чтобы соединения действовали независимо друг от друга (например, с достаточно большими интервалами времени, позволяющими избежать влияния каждого из компонентов на другой компонент), это означает, что наблюдается более сильное ингибирование пролиферации или предпочтительно более сильный регресс или даже излечение от пролиферативной болезни по сравнению со случаем, когда в той же дозе вводят по отдельности только один из компонентов (а) и (б) или их вводят с достаточно большими интервалами времени, такими, что исключаются взаимные влияния компонентов (а) и (б). Это обозначается понятием "взаимно усилить антипролиферативную активность в отношении пролиферирующих клеток, прежде всего в организме пациента"; предпочтительно это понятие означает взаимное усиление действия компонентов (а) и (б), прежде всего синергизм и/или вызывание регресса пролиферирующих клеток вплоть до полного их разрушения и прежде всего выраженное синергетическое взаимодействие компонентов (а) и (б).

Понятие "пролиферирующие клетки" обозначает прежде всего патологически или аномально пролиферирующие клетки, такие как клетки опухоли и/или метастазов опухоли, прежде всего опухолей, перечисленных выше в качестве предпочтительных.

Предпочтительными являются комбинации, обладающие повышенной антипролиферативной активностью по сравнению с активностью каждого из компонентов по отдельности, прежде всего комбинации, обладающие синергетическим действием (синергетические комбинации) или комбинации, вызывающие регресс пролиферативных тканей и/или излечение от пролиферативной болезни.

Понятие "синергизм" означает действие, превышающее аддитивное, т.е. более сильное действие комбинации любого компонента (а) с любым компонентом (б), чем то, которое можно ожидать, если коэффициент уменьшения пролиферации получать только путем умножения коэффициента уменьшения пролиферации для любого компонента (а), взятого отдельно, или любого компонента (б), взятого отдельно, по сравнению с контролем без обработки, если каждый компонент (а) и (б) вне зависимости от того, применяются ли они по отдельности или в сочетании, вводят в той же дозе, что и в случае однократной обработки одним компонентом (это не означает, что доза компонента (а) должна быть идентичной дозе компонента (б), хотя это также может иметь место). Рассмотрим следующий теоретический пример, приведенный только с целью иллюстрации: если компонент (а) при его применении индивидуально вызывает уменьшение роста опухоли в два раза (коэффициент равен 2) по сравнению с ростом в контроле без какой-либо обработки, а компонент (б) при его применении индивидуально вызывает уменьшение роста опухоли, соответствующее коэффициенту 1,5, то аддитивное действие при совместном применении компонента (а) и компонента (б) приводило бы к 3-кратному уменьшению роста (умножение 2 на 1,5). В том случае, если было обнаружено более чем 3-кратное уменьшение пролиферации, то это свидетельствует о наличии синергетического действия. Наличие синергизма может быть установлено таким методом дробных произведений [Webb в: "Enzymes and Methabolic Inhibitors", том 1, стр. 66-73 и 488-512, Academic Press, New York] или в альтернативном варианте методом изоболограмм [см. ссылки в: Berenbaum Oharmacol. Rev. 99-141 (1984)] и/или методом расчета коэффициента синергизма комбинации (КС) [Chou и др., Trends Pharmacol. Sci. 450-454 (1983); или Chou и др. New Avenues in Developmental Cancer Chemotherapy; Bristol-Myers Symposium Series, K.R. Harrap и I.A. Connors (ред.), 37-64, New York, Academic Press (1987)].

Понятие "фармацевтически приемлемые носители" пояснено ниже при определении фармацевтических композиций.

В том случае, если в соответствующей молекуле присутствуют солеобразующие группы, то компонент (б) (другой(ие) химиотерапевтический(ие) агент(ы)) может также присутствовать в форме соли (ей) независимо от того, указано ли это специально выше или ниже в настоящем описании.

Обработку прекращают предпочтительно в случае возникновения одной из следующих ситуаций: происходит прогрессивное развитие болезни, например, согласно критерию реакции Юго-Западной онкологической группы (Southwest Oncology Group (SWOG)); обнаружен неприемлемый уровень токсичности (например, для пациента, исследователя или их обоих); было осуществлено 2 цикла обработки после обнаружения полной реакции, например, согласно критерию реакции Юго-Западной онкологической группы (Southwest Oncology Group (SWOG)); или был получен отказ пациента.

Соли компонентов представляют собой прежде всего кислотно-аддитивные соли, соли присоединения оснований или, если присутствуют несколько солеобразующих групп, необязательно также смешанные соли или внутренние соли. Соли прежде всего предстваляют собой фармацевтически приемлемые соли, например практически нетоксичные соли.

Такие соли могут образовывать, например, химиотерапевтические агенты, имеющие кислотную группу, например карбоксигруппу, фосфодиэфирную или фосфортиоатную группу, и эти соли представляют собой, например, соли присоединения пригодных оснований, таких как нетоксичные соли металлов из групп Ia, Ib, IIa и IIb Периодической системы элементов, прежде всего пригодные соли щелочных металлов, например соли лития, натрия или калия, или аммонийные соли, а также соли, образованные с органическими аминами, такими как незамещенные или замещенные гидроксильной группой моно-, ди- или триалкиламины, прежде всего моно-, ди- или три(низш.)алкиламины, или соли четвертичного аммония, например, соли, образованные с N-метил-N-этиламином, диэтиламином, триэтиламином, моно-, бис- или трис(2-гидрокси(низш.)алкил) аминами, такими, как моно-, бис- или трис(2-гидроксиэтил)амин, 2-гидрокси-трет-бутиламин или трис(гидроксиметил) метиламин, N,N-ди- (низш.)алкил-N- (гидрокси(низш.)алкил) аминами, такими, как N,N-диметил-N-(2-гидроксиэтил)амин или три(2-гидроксиэтил)амин, или N-метил-D-глюкамин, или соли четвертичного аммония, такие как соли тетрабутиламмония. Химиотерапевтические агенты, имеющие основную группу, например амино- или иминогруппу, могут образовывать кислотно-аддитивные соли, например, с неорганическими кислотами, например с галогенводородной кислотой, такой как соляная кислота, с серной кислотой или фосфорной кислотой, или с органическими карбоциклическими, сульфоновыми, сульфо- или фосфокислотами, или с N-замещенными сульфаминовыми кислотами, такими, как, например, уксусная кислота, пропионовая кислота, гликолевая кислота, янтарная кислота, малеиновая кислота, гидроксималеиновая кислота, метилмалеиновая кислота, фумаровая кислота, яблочная кислота, винная кислота, глюконовая кислота, лимонная кислота или бензойная кислота, а также с аминокислотами, например с α-аминокислотами, а также с метансульфоновой кислотой, этансульфоновой кислотой, 2-гидроксиэтансульфоновой кислотой, этан-1,2-дисульфоновой кислотой, бензолсульфоновой кислотой, 4-метилбензолсульфоновой кислотой, нафталин-2-сульфоновой кислотой, N-циклогексилсульфаминовой кислотой (с образованием цикламатов) или с другими кислотными органическими соединениями, такими как аскорбиновая кислота. Соединения, имеющие кислотные и основные группы, могут также образовывать внутренние соли. Если присутствует больше одной солеобразующей группы, то также возможно образование смешанных солей.

Если выше и ниже в настоящем описании используются понятия, включающие численные значения, то следует понимать, что они включают числа, представляющие собой верхний и нижний пределы. Например, понятие "от 1 до 3" означает диапазон "от 1 включительно до 3 включительно" и понятие "в диапазоне от 1 до 3" означает диапазон "от 1 включительно до 3 включительно". Все вышесказанное относится и к тому случаю, когда вместо чисел (например, 3) используются числительные (например, "три").

Если используется понятие "включающий", то оно предпочтительно может быть заменено понятием "состоящий практически из" или более предпочтительно "состоящий из".

Если понятие "приблизительно" используется применительно к числам, то оно предпочтительно обозначает соответствующее число ±15%, более предпочтительно число +5%, наиболее предпочтительно просто число без "приблизительно". Например, "приблизительно 100" обозначает "от 85 включительно до 115 включительно". Если понятие "приблизительно" используется применительно к диапазону чисел, например "от приблизительно 1 до приблизительно 3" или "в диапазоне от приблизительно одного до приблизительно трех", то предпочтительно это означает, что понятие "приблизительно", определенное в предыдущем предложении применительно к числам, применяют по отдельности к каждому числу, обозначающему начало и конец диапазона. Предпочтительно, если понятие "приблизительно" используется применительно к каким-либо численным значениям, то "приблизительно" может быть опущено.

Понятие "еженедельно" означает "приблизительно один раз в неделю" (это означает, что осуществляют более, чем одну обработку с интервалом между обработками, равным приблизительно одной неделе), в этом случае "приблизительно" предпочтительно означает ±1 день (т.е. "еженедельно" соответствует "каждые 6-8 дней"); более предпочтительно "еженедельно" означает "один раз каждые 7 дней".

Понятие "каждые 3 недели" или "каждые три недели" обозначает "приблизительно один раз каждые три недели" (это означает, что осуществляют более чем одну обработку с интервалом между обработками, равным приблизительно трем неделям), в этом случае "приблизительно" предпочтительно означает ±3 дня (т.е. "каждые 3 недели" соответствует "каждые 18-24 дня"); более предпочтительно "каждые 3 недели" означает "один раз каждые 21 день" (что эквивалентно понятию "каждую третью неделю").

Предпочтительные варианты осуществления изобретения

В описанных ниже предпочтительных вариантах осуществления изобретения общие определения при необходимости могут быть заменены более конкретными определениями, данными выше и ниже в настоящем описании.

(1) Настоящее изобретение прежде всего относится к лечению пролиферативной болезни, прежде всего рака, который не поддается лечению другими химиотерапевтическими агентами и/или противораковыми агентами из класса таксана, прежде всего таким, как TAXOL®, более предпочтительно одной из болезней, указанных выше или ниже в настоящем описании как предпочтительные, согласно которому эпотилон, предпочтительно эпотилон А или наиболее предпочтительно эпотилон В, вводят человеку более чем один раз, с интервалом от одной недели до трех недель в дозе, которую вычисляют по формуле (I)

где N (целое или дробное число) обозначает число недель между обработками (приблизительно от одной до приблизительно трех недель), т.е. N составляет от приблизительно 1 до приблизительно 3; более предпочтительно дозу для обработки вычисляют согласно формуле II

еще более предпочтительно дозу для обработки вычисляют согласно формуле III

и наиболее предпочтительно дозу для обработки вычисляют согласно формуле IV

где в каждой из формул II-IV N составляет от приблизительно 1 до приблизительно 3 (что соответствует интервалам от приблизительно 1 до приблизительно 3 недель между обработками);

при этом введение эпотилона, прежде всего эпотилона В предпочтительно осуществляют

(а) еженедельно человеку в дозе от приблизительно 0,1 до приблизительно 6 мг/м², предпочтительно от приблизительно 0,1 до приблизительно 5 мг/м², более предпочтительно от приблизительно 0,1 до приблизительно 3 мг/м², еще более предпочтительно от 0,1 до 1,7 мг/м² и наиболее предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 1 мг/м²; или

(б) каждые три недели человеку в дозе от приблизительно 0,3 до приблизительно 18 мг/м², предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 15 мг/м², более предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 12 мг/м², еще более предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 7,5 мг/м², еще более предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 5 мг/м² и наиболее предпочтительно от приблизительно 1,0 до приблизительно 3,0 мг/м²;

введение предпочтительно осуществляют внутривенным путем (в.в.) в течение 2-180 мин, предпочтительно в течение 2-120 мин, более предпочтительно в течение периода времени от приблизительно 5 до приблизительно 30 мин, наиболее предпочтительно в течение периода времени от приблизительно 10 до приблизительно 30 мин, например, в течение приблизительно 30 мин.

(2) Настоящее изобретение предпочтительно также относится к лечению болезни, связанной с опухолью, которая не поддается лечению другим химиотерапевтическим агентом, прежде всего выбранным из группы, включающей 5-флуорацил и предпочтительно стабилизирующий микротрубки агент из класса таксана, наиболее предпочтительно TAXOL®, при этом опухоль выбирают из группы, включающей опухоль желудочно-кишечного тракта, например колоректальную опухоль; опухоль почки; мочеполовой системы, например предстательной железы; опухоль панкреатической железы; и опухоль головного мозга (и/или любые их метастазы), наиболее предпочтительно опухоль желудочно-кишечного тракта, предпочтительно колоректальный рак, более предпочтительно рак желудочно-кишечного тракта, прежде всего колоректальный рак, который не поддается лечению противораковыми агентами из класса таксана, прежде всего такими как TAXOL®, или наиболее предпочтительно опухоль, которая не поддается лечению стандартными химиотерапевтическими методами, такими как обработка стандартным химиотерапевтическим агентом, прежде всего 5-флуорацилом; или опухоль мочеполовой системы, прежде всего рак предстательной железы, наиболее предпочтительно рак предстательной железы, не поддающийся лечению гормонами; согласно которому теплокровному животному, прежде всего человеку вводят эпотилон А и/или В, прежде всего эпотилон В.

(3) Настоящее изобретение предпочтительно также относится к лечению болезни, связанной с опухолью, прежде всего опухоли легкого, прежде всего немелкоклеточной карциномы легкого, прежде всего рака легкого, который не поддается лечению противораковыми агентами из класса таксана, прежде всего такими как TAXOL®; рака молочной железы, прежде всего обладающего множественной устойчивостью к лекарствам; или эпидермоидной опухоли, предпочтительно эпидермоидной опухоли головы и шеи, прежде всего рта, прежде всего в том случае, если последняя обладает множественной устойчивостью к лекарствам и/или устойчивостью к лечению противораковыми агентами из класса таксана, прежде всего такими как TAXOL®; согласно которому теплокровному животному, прежде всего человеку вводят эпотилон А и/или В, прежде всего эпотилон В.

(4) Настоящее изобретения также предпочтительно относится к схеме лечения in vivo болезни, связанной с опухолью, прежде всего (I) опухоли желудочно-кишечного тракта, наиболее предпочтительно опухоли ободочной кишки и/или прямой кишки (колоректальная опухоль); и/или (II) опухоли мочеполовой системы, прежде всего опухоли предстательной железы (предпочтительно опухоли предстательной железы, не поддающейся лечению гормонами); прежде всего в тех случаях, когда такая опухоль не поддается лечению другими химиотерапевтическими агентами, прежде всего из класса таксана, наиболее предпочтительно такими как TAXOL®, согласно которому эпотилон А и/или В, прежде всего эпотилон В вводят человеку однократно в дозе, находящейся в диапазоне приблизительно от 20 до приблизительно 100% от МПД; и при необходимости одну или несколько (предпочтительно от двух до семи) дополнительных доз, каждая из которых предпочтительно находится в диапазоне доз, указанном выше для первой дозы, вводят в течение дополнительноых циклов обработки, предпочтительно каждую дозу вводят после определенного промежутка времени, который позволяет обработанному пациенту в достаточной степени восстановиться после введения каждой предыдущей дозы, оставляющего предпочтительно более чем две недели после предыдущей обработки, более предпочтительно через 2-10 недель, наиболее предпочтительно через 3-6 недель после предыдущей обработки, прежде всего через три недели после этой обработки.

Более предпочтительно эпотилон В вводят человеку согласно вариантам осуществления (1)-(4) еженедельно в дозе от приблизительно 0,1 до приблизительно 6 мг/м², предпочтительно от приблизительно 0,1 до приблизительно 5 мг/м², более предпочтительно от приблизительно 0,1 до приблизительно 3 мг/м², еще более предпочтительно от 0,1 до 1,7 мг/м² и наиболее предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 1 мг/м²; или эпотилон В вводят один раз в три недели (каждые три недели) в дозе от приблизительно 0,3 до приблизительно 18 мг/м², предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 15 мг/м², более предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 12 мг/м², еще более предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 7,5 мг/м², еще более предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 5 мг/м² и наиболее предпочтительно от приблизительно 1,0 до приблизительно 3,0 мг/м². Эти дозы вводят человеку предпочтительно внутривенным путем (в.в.) в течение 2-180 мин, предпочтительно в течение 2-120 мин, более предпочтительно в течение периода времени от приблизительно 5 до приблизительно 30 мин, наиболее предпочтительно в течение периода времени от приблизительно 10 до приблизительно 30 мин, например в течение приблизительно 30 мин.

Более предпочтительно такую обработку повторяют каждые приблизительно 1 - приблизительно 3 недели до тех пор, пока не будет выявлено прогрессивное развитие болезни, не будет обнаружен неприемлемый уровень токсичности, не будет проведено 1 или предпочтительно 2 цикла обработки после достижения полной реакции или не получен отказ пациента по какой-либо причине.

(5) Настоящее изобретения также предпочтительно относится к схеме лечения in vivo болезни, связанной с опухолью, прежде всего (I) опухоли желудочно-кишечного тракта, наиболее предпочтительно опухоли ободочной кишки и/или прямой кишки (колоректальная опухоль); и/или (II) опухоли мочеполовой системы, прежде всего опухоли предстательной железы; прежде всего в тех случаях, когда такая опухоль не поддается лечению другими химиотерапевтическими агентами, прежде всего агентами из класса таксана, наиболее предпочтительно такими как TAXOL® (предпочтительно опухоли предстательной железы, которая не поддается лечению гормонами); согласно которому эпотилон А и/или В, прежде всего эпотилон В вводят теплокровному животному еженедельно в дозе, составляющей менее 80%, более предпочтительно менее 50% от максимальной переносимой дозы (МПД).

Предпочтительно в случае еженедельной обработки человека указанным (и) эпотилоном(ами) доза находится в диапазоне от приблизительно 1 до приблизительно 60%, предпочтительно от приблизительно 10 до приблизительно 60%, например от приблизительно 5 до приблизительно 35% от МПД, например, в диапазоне от приблизительно 30 до приблизительно 35% от МПД. Предпочтительно в случае применения эпотилона В при обработке каждые три недели доза находится в диапазоне от приблизительно 5 до приблизительно 60%, предпочтительно от приблизительно 10 до приблизительно 60%, еще более предпочтительно от приблизительно 10 до приблизительно 45%, наиболее предпочтительно от приблизительно 30 до приблизительно 45% от МПД. В отдельных случаях доза эпотилона В может составлять от приблизительно 2 до приблизительно 18 мг/м².

Наиболее предпочтительно обработку прекращают после 3-8, прежде всего 3-5 еженедельных введений, после чего следует период отдыха в течение 2-5, например, в течение 2 недель, перед возобновлением дальнейшей обработки. Предпочтительно и при необходимости в случае еженедельной обработки эпотилоном В ее прекращают после 3-8 введений, после чего следует период отдыха в течение 2-4, например 2 недель, перед возобновлением обработки путем еженедельного введения.

(6) Изобретения также предпочтительно относится к лечению in vivo болезни, связанной с опухолью, путем совместного введения (а) эпотилона А и/или эпотилона В, прежде всего эпотилона В, в комбинации с (б) другим химиотерапевтическим агентом, выбранным из группы, включающей:

(А) алкилирующие агенты, предпочтительно поперечно-сшитые химиотерапевтические агенты, предпочтительно бисалкилирующие агенты;

(Б) противораковые антибиотики, предпочтительно доксорубицин (ADRIAMYCIN®, RUBEX®);

(В) антиметаболиты;

(Г) растительные алкалоиды;

(Д) гормональные агенты и антагонисты;

(Е) модификаторы биологических реакций, предпочтительно лимфокины или интерфероны;

(Ж) ингибиторы протеинов, таких как тирозинкиназы и/или серин/треонинкиназы;

(З) антисмысловые олигонуклеотиды или олигонуклеотидные производные;

или

(И) разнообразные агенты или другие агенты с иным или с неизвестным механизмом действия;

при этом график совместной обработки выбирают таким образом, чтобы компонент (а) и компонент (б) применялись одновременно или последовательно в течение достаточно короткого периода времени, такого, чтобы действующие вещества как компонента (а), так и компонента (б), могли взаимно усилить антипролиферативную активность, например, в организме пациента.

(7) Изобретение также относится к предназначенному для лечения связанной с опухолью болезни продукту, включающему компонент (а) и компонент (б), как они определены в пункте (6), в котором присутствует или может отсутствовать один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, в виде объединенной композиции, предназначенной для одновременного или последовательного введения человеку, в течение достаточно короткого периода времени, такого, чтобы действующие вещества как компонента (а), так и компонента (б) могли взаимно усилить активность в отношении болезни, связанной с опухолью, прежде всего (I) опухоли желудочно-кишечного тракта, наиболее предпочтительно опухоли ободочной кишки и/или прямой кишки (колоректальная опухоль); и/или (II) опухоли мочеполовой системы, прежде всего опухоли предстательной железы; прежде всего в том случае, когда такая опухоль не поддается лечению другим химиотерапевтическим агентом, прежде всего агентом из класса таксана, наиболее предпочтительно таким как TAXOL®.

В вариантах осуществления, указанных в пунктах (1)-(7), или описанных ниже вариантах осуществления изобретения введение эпотилона, прежде всего эпотилона В предпочтительно осуществляют путем инфузии, прежде всего путем ввнутривенной инфузии.

Ниже перечислены некоторые наиболее предпочтительные варианты осуществления изобретения:

А1. Применение эпотилона, прежде всего эпотилона А и/или эпотилона В для лечения пролиферативной болезни, которая не поддается лечению другими химиотерапевтическими агентами; или применение эпотилона, прежде всего эпотилона В для приготовления фармацевтической композиции, предназначенной для лечения пролиферативной болезни, которая не поддается лечению другими химиотерапевтическими агентами.

А2. Применение по п.А1, где пролиферативная болезнь представляет собой болезнь, связанную с опухолью, которая не поддается лечению стабилизирующим микротрубки агентом из класса таксана, прежде всего таким как TAXOL®.

A3. Применение по любому из пп.А1-А2, где пролиферативная болезнь представляет собой колоректальную опухоль и/или ее метастазы.

А4. Применение по любому из пп.А1-А2, где пролиферативная болезнь представляет собой опухоль предстательной железы и/или ее метастазы; прежде всего опухоль предстательной железы, которая не поддается лечению гормонами.

Б1. Применение эпотилона для приготовления фармацевтической композиции, пригодной для введения однократной дозы эпотилона в диапазоне от приблизительно 1 до приблизительно 100% от максимальной переносимой дозы (МПД), установленной для теплокровного животного, указанному теплокровному животному с целью лечения пролиферативной болезни, которая не поддается лечению другими химиотерапевтическими агентами.

Б2. Применение по п.Б1, где эпотилон представляет собой эпотилон А и/или эпотилон В, предпочтительно эпотилон В.

Б3. Применение по любому из пп.Б1-Б2, где доза находится в диапазоне от 25 до 100% от максимальной переносимой дозы и теплокровное животное представляет собой человека.

Б4. Применение по любому из пп.Б1-Б3, где стандартная доза эпотилона В для взрослого человека при обработке один раз в три недели находится в диапазоне от приблизительно 0,3 до приблизительно 18, предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 12, более предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 7,5, наиболее предпочтительно от приблизительно 1 до приблизительно 3 мг/м²; или при еженедельной обработке находится в диапазоне от приблизительно 0,1 до приблизительно 6, предпочтительно от приблизительно 0,1 до приблизительно 5, более предпочтительно от приблизительно 0,1 до приблизительно 3, наиболее предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 1 мг/м².

Б5. Применение по любому из пп.Б1-Б4, где дозу выбирают таким образом, чтобы после промежутка времени, необходимого для достаточного восстановления подвергнутого обработке индивидуума, после введения предыдущей дозы могла быть введена следующая доза.

Б6. Применение по любому из пп.Б1-Б5, где пролиферативная болезнь представляет собой опухоль.

Б7. Применение по любому из пп.Б1-Б6, где пролиферативная болезнь представляет собой колоректальную опухоль и/или ее метастазы.

Б8. Применение по любому из пп.Б1-Б6, где пролиферативная болезнь представляет собой опухоль предстательной железы и/или ее метастазы.

Б9. Применение по любому из пп.Б1-Б8, где опухоль представляет собой опухоль, не поддающуюся лечению стабилизирующим микротрубки агентом из класса таксана, прежде всего такого как TAXOL®.

В1. Применение эпотилона, предпочтительно эпотилона А и/или В, прежде всего эпотилона В для приготовления фармацевтической композиции, пригодной для введения эпотилона один раз в неделю, где доза составляет 80% от МПД или менее, предпочтительно 50% от МПД или менее.

Г1. Применение эпотилона, предпочтительно эпотилона А и/или В, прежде всего эпотилона В для приготовления фармацевтической композиции, пригодной для совместного введения (а) эпотилона, предпочтительно эпотилона А и/или В, прежде всего эпотилона В, в сочетании с (б) другим противоопухолевым химиотерапевтическим агентом теплокровному животному, которое страдает от пролиферативной болезни, которая не поддается лечению другими химиотерапевтическими агентами, прежде всего колоректальной опухоли или опухоли предстательной железы и/или ее метастазов.

Д1. Фармацевтическая композиция, предназначенная для лечения у человека пролиферативной болезни, предпочтительно болезни, связанной с опухолью, прежде всего из числа тех, которые отмечены выше и ниже в настоящем описании как предпочтительные, где композиция включает эпотилон, прежде всего эпотилон В, в дозе, находящейся в диапазоне от 1 до 100%, предпочтительно от 25 до 100% от максимальной переносимой дозы (МПД), и фармацевтически приемлемый носитель.

Е1. Объединенная композиция, включающая (а) эпотилон А или предпочтительно эпотилон В и (б) один или несколько других противоопухолевых агентов и фармацевтически приемлемый носитель.

Ж1. Продукт, включающий в качестве компонента (а) эпотилон А и/или В, предпочтительно эпотилон В, и в качестве компонента (б) другой противоопухолевый агент, содержащий или несодержащий один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, в форме объединенной композиции, предназначенной для одновременного или последовательного введения теплокровному животному, предпочтительно человеку, в течение достаточно короткого периода времени, такого, чтобы действующие вещества как компонента (а), так и компонента (б) могли взаимно усилить противоопухолевую активность в организме теплокровного животного, предназначенную для лечения пролиферативной болезни.

Наиболее предпочтительно изобретение относится к лечению следующих типов опухолей/рака с использованием эпотилона В:

(I) опухоль желудочно-кишечного тракта, прежде всего колоректальная опухоль, которая не поддается лечению представителями противораковых агентов из класса таксана, в частности, таким как TAXOL®, или более предпочтительно лечению с использованием стандартных химиотерапевтических агентов, прежде всего таких, как 5-флуорацил и/или TAXOL®;

(II) опухоль мочеполовой системы, прежде всего опухоль предстательной железы, включая первичные и прежде всего метастатические опухоли; более предпочтительно те, которые не поддаются лечению гормонами;

(III) эпидермоидная опухоль, более предпочтительно эпидермоидная опухоль головы и шеи, наиболее предпочтительно эпидермоидная опухоль рта, прежде всего опухоль, которая не поддается лечению другими химиотерапевтическими агентами, прежде всего вследствие множественной устойчивости к лекарствам, прежде всего лечению представителями противораковых агентов из класса таксана, в частности, таким как TAXOL®;

(IV) опухоль легкого, прежде всего немелкоклеточный рак легкого, который не поддается лечению другими химиотерапевтическими агентами, прежде всего (в основном) вследствие множественной устойчивости к лекарствам, прежде всего лечению представителями противораковых агентов из класса таксана, в частности таким как TAXOL®; и/или

(V) опухоль молочной железы, прежде всего опухоль молочной железы, которая является устойчивой ко многим лекарствам, более предпочтительно опухоль, которая не поддается лечению представителями противораковых агентов из класса таксана, в частности таким как TAXOL®.

Предпочтительно изобретение относится к лечению любого из вышеперечисленных в (I)-(V) типов опухолей, наиболее предпочтительно опухолей, указанных в (I), (II), (IV) и (V).

Более предпочтительно изобретение относится к лечению любых типов опухолей, перечисленных выше в (I)-(V), предпочтительно любой из них, путем ввнутривенной инфузии эпотилона В в течение 2-120 мин, предпочтительно в течение периода времени от приблизительно 5 до приблизительно 30 мин, более предпочтительно в течение периода времени от приблизительно 10 до приблизительно 30 мин, наиболее предпочтительно в течение приблизительно 30 мин;

причем введение повторяют через каждые одну-три недели, предпочтительно каждую одну неделю (еженедельно) или через каждые три недели;

при этом дозу эпотилона В предпочтительно рассчитывают по формуле I

где N (целое или дробное число) обозначает число недель между обработками, составляющее от приблизительно 1 до приблизительно 3 недель, это означает, что N находится в диапазоне от приблизительно 1 до приблизительно 3; и у равно 6, предпочтительно 5, более предпочтительно 4.

Более предпочтительно дозу для обработки вычисляют согласно формуле II

еще предпочтительно согласно формуле III

и наиболее предпочтительно согласно формуле IV

где в каждой из формул II-IV N составляет от приблизительно 1 до приблизительно 3 (что соответствует интервалам от приблизительно 1 до приблизительно 3 недель между обработками).

Более предпочтительно в случае еженедельной обработки доза составляет от приблизительно 0,1 до приблизительно 6 мг/м², предпочтительно от приблизительно 0,1 до приблизительно 5 мг/м², более предпочтительно от приблизительно 0,1 до приблизительно 3 мг/м, еще более предпочтительно от 0,1 до 1,7 мг/м² и наиболее предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 1 мг/м²; или в случае обработки один раз в три недели составляет от приблизительно 0,3 до приблизительно 18 мг/м², предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 15 мг/м², более предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 12 мг/м², еще более предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 7,5 мг/м², еще более предпочтительно от приблизительно 0,3 до приблизительно 5 мг/м² и наиболее предпочтительно от приблизительно 1,0 до приблизительно 3,0 мг/м².

Более предпочтительно могут требоваться периоды отдыха продолжительностью более одной недели, более предпочтительно от двух до десяти недель, еще более предпочтительно от трех до шести недель (прежде всего в случае еженедельных обработок), после предыдущей обработки, проведенной в зависимости от состояния пациента, например, в течение 3, 4, 6, 8 или более циклов, для восстановления в достаточной степени после предыдущей обработки.

Наиболее предпочтительными также являются условия обработки и композиции, аналогичные описанным в примерах.

Фармацевтические композиции

Настоящее изобретение также относится к применению эпотилона А и/или В, прежде всего эпотилона А или предпочтительно эпотилона В, для приготовления фармацевтической композиции, предназначенной для лечения связанной с опухолью болезни, как она определена выше в настоящем описании; или к фармацевтической композиции, предназначенной для лечения связанной с опухолью болезни, содержащей эпотилон А и/или В, прежде всего эпотилон А, или предпочтительно эпотилон В, и фармацевтически приемлемый носитель.

Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, включающим эпотилон А и/или эпотилон В, предпочтительно эпотилон В, предназначенным для лечения пролиферативной болезни, особенно связанной с опухолью болезни, как она определена выше в настоящем описании, и к приготовлению фармацевтических композиций, предназначенных для такого лечения.

Эпотилон А и/или В могут применяться, например, для приготовления фармацевтических композиций, которые включают эффективное количество действующего вещества в сочетании или в смеси с достаточным количеством неорганических или органических твердых или жидких фармацевтически приемлемых носителей.

Изобретение также относится к фармацевтической композиции, пригодной для введения теплокровному животному, прежде всего человеку, с целью лечения пролиферативной болезни, как она определена выше в настоящем описании, включающей такое количество эпотилона А и/или В, прежде всего эпотилона В, которое является эффективным для лечения этой пролиферативной болезни, вместе с по крайней мере одним фармацевтичеки приемлемым носителем.

Фармацевтические композиции по изобретению представляют собой композиции для энтерального, например назального, ректального или орального, или предпочтительно парентерального, например внутримышечного или внутривенного введения теплокровному животному (человеку или животному), включающие эффективную дозу обладающего фармакологической активностью действующего вещества индивидуально или вместе с достаточным количеством фармацевтически приемлемого носителя. Доза действующего вещества зависит от вида теплокровного животного, веса тела, возраста и индивидуального состояния, индивидуальных фармакокинетических параметров, болезни, подлежащей лечению, и пути введения; предпочтительно доза представляет собой одну из предпочтительных доз, как они определены выше, и она должна быть соответствующим образом скорректирована, если предполагается лечение детей.

Фармацевтические композиции включают от приблизительно 0,00002 до приблизительно 95%, прежде всего (например, в случае готовых для применения растворов для инфузии) от 0,0001 до 0,02% или (например, в случае концентратов для инфузии) от приблизительно 0,1% до приблизительно 95%, предпочтительно от приблизительно 20% до приблизительно 90% действующего вещества (в каждом случае в мас.%). Фармацевтические композиции по изобретению могут находиться в виде стандартных дозируемых форм, таких как ампулы, пузырьки, суппозитории, драже, таблетки или капсулы.

Предпочтительно дозу выбирают таким образом, чтобы было возможно осуществлять схемы лечения, основанные на указанной выше МПД для однократного или многократного введения с целью лечения болезни, связанной с опухолью.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению приготавливают хорошо известным способом, например с помощью общепринятых методов растворения, лиофилизации, смешения, гранулирования или конфекции (сборки).

Предпочтительно применяют растворы действующего вещества, а также суспензии, и прежде всего изотонические водные растворы или суспензии, при этом можно, например, в случае лиофилизированных композиций, которые включают действующее вещество индивидуально или в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем, например маннитом, приготавливать такие растворы или суспензии перед применением. Фармацевтические композиции могут быть стерильными и/или могут включать эксципиенты, например консерванты, стабилизаторы, смачивающие агенты и/или эмульгаторы, солюбилизаторы, соли для регулирования осмотического давления и/или буферы, и они могут быть приготовлены хорошо известным способом, например, с помощью общепринятых методов растворения или лиофилизации. Такие растворы или суспензии могут включать вещества, повышающие вязкость, такие как карбоксиметилцеллюлоза натрия, карбоксиметилцеллюлоза, декстран, поливинилпирролидон или желатин.

Суспензии в масле включают в качестве масляного компонента растительные, синтетические или полу синтетические масла, обычно применяемые для целей инъекции. Прежде всего следует отметить жидкие эфиры жирных кислот, включающие в качестве кислотного компонента жирную кислоту с длинной цепью, имеющую от 8 до 22, предпочтительно от 12 до 22 атомов углерода, например лауриновую кислоту, тридециловую кислоту, миристиновую кислоту, пентадециловую кислоту, пальмитиновую кислоту, маргариновую кислоту, стеариновую кислоту, арахидоновую кислоту, бегеновую кислоту, или соответствующие ненасыщенные кислоты, например олеиновую кислоту, элаидиновую кислоту, эруковую кислоту, брассидиновую кислоту или линолевую кислоту, при необходимости добавки в виде антиоксидантов, например витамин Е, β-каротин или 3,5-ди-трет-бутил-4-гидрокситолуол. Спиртовой компонент этих эфиров жирных кислот предпочтительно имеет максимум 6 атомов углерода и представляет собой моно- или полигидроксиспирт, например моно-, ди- или тригидроксиспирт, например метанол, этанол, пропанол, бутанол или пентанол, или их изомеры, но предпочтительно гликоль и глицерин. В частности, в качестве примеров можно отметить следующие эфиры жирных кислот: этилолеат, изопропилмиристат, изопропилпальмитат, "Labrafil M2375" (полиоксиэтиленглицеринтриолеат, Gattefosse, Париж), "Miglyol 812" (триглицерид насыщенных жирных кислот, имеющих длину цепи 8-12 атомов углерода, Huls AG, Германия), и прежде всего растительные масла, такие как хлопковое масло, миндальное масло, оливковое масло, касторовое масло, кунжутное масло, соевое масло и особенно арахисовое масло.

Композиции для инъекции или инфузии приготавливают согласно обычным методам в стерильных условиях; это же относится к заполнению композициями ампул или пузырьков и к запечатыванию контейнеров.

Предпочтительной является композиция для инфузии, которая содержит эпотилон А и/или эпотилон В, прежде всего эпотилон В, и фармацевтически приемлемый органический растворитель.

В композиции не требуется применять поверхностно-активное вещество. Поеврхностно-активные вещества, такие как Cremophor, могут вызывать аллергические реакции и они также могут выщелачивать пластификаторы из стандартных контейнеров, туб и т.д. сделанных из ПВХ. Поэтому при их использовании необходимо применять специальные устройства для инфузии, например нитроглицериновые тубы и несодержащие пластиков контейнеры, такие как стеклянные тубы и т.д.

Фармацевтически приемлемый органический растворитель, применяемый в композиции по изобретению, может быть выбран из любых таких растворителей, которые известны специалистам в данной области. Растворитель предпочтительно выбирают из спирта, например абсолютного этанола, или смесей этанол/вода, более предпочтительно из 70%-ного этанола, полиэтиленгликоля 300, полиэтиленгликоля 400, полипропиленгликоля или N-метилпирролидона, предпочтительно из полипропиленгликоля или 70%-ного этанола или наиболее предпочтительно он представляет собой полиэтиленгликоль 300.

Эпотилоны предпочтительно могут присутствовать в композиции в концентрации от приблизительно 0,1 до приблизительно 100 мг/мл, более предпочтительно приблизительно от 1 до приблизительно 100 мг/мл, еще более предпочтительно приблизительно от 1 до приблизительно 10 мг/мл (прежде всего в концентратах для инфузии).

Эпотилон А и эпотилон В могут применяться в виде чистых соединений или в виде смеси эпотилона А и В. Благодаря своей более высокой противоопухолевой активности эпотилон В может применяться в композиции в более низкой концентрации, чем эпотилон А. При использовании в чистой форме предпочтительно применять концентрацию эпотилона А, составляющую от 5 до 100 мг/мл, предпочтительно от 10 до 50 мг/мл, в то время как при использовании в чистой форме эпотилон В предпочтительно применяют в концентрации от 0,1 до 10, более предпочтительно от 1 до 10, еще более предпочтительно от 1 до 2 мг/мл (эти числа относятся прежде всего к концентрату для инфузии, который перед обработкой должен быть соответствующим образом разбавлен, см. ниже).

Композиции этого типа удобно хранить в пузырьках или ампулах. Как правило, пузырьки или ампулы изготавливают из стекла, например из боросиликатного или натриево-кальциевого стекла. Пузырьки или ампулы могут иметь любой объем, который обычно используется в данной области, предпочтительно они имеют размер, достаточный для включения 0,5-5 мл композиции. Композиции сохраняют стабильность при хранении в течение периода времени до 12-24 месяцев при температуре, составляющей по крайней мере 2-8°С.

Перед введением эпотилона пациенту композиции должны быть разбавлены водной средой, пригодной для внутривенного введения.

Предпочтительно раствор для инфузии должен иметь такое же или практически такое же осмотическое давление, что и у общей воды организма. Поэтому водная среда предпочтительно содержит агент для поддержания изотоничности, который придает раствору для инфузии такое же или практически такое же осмотическое давление, что и у общей воды организма.

Агент для поддержания изотоничности может быть выбран из любых известных в данной области таких агентов, например, таких как маннит, декстроза, глюкоза или хлорид натрия. Предпочтительно агент для поддержания изотоничности представляет собой глюкозу или хлорид натрия. Агенты для поддержания изотоничности могут применяться в количествах, которые придают раствору для инфузии такое же или практически такое же осмотическое давление, что и у общей воды организма. Точные необходимые количества могут быть определены с помощью обычного эксперимента и они зависят от состава раствора для инфузии и от типа агента для поддержания изотоничности. При выборе конкретного агента для поддержания изотоничности необходимо принимать во внимание характеристики действующего вещества.

Концентрация агента для поддержания изотоничности в водной среде зависит от типа конкретного примененного агента. Когда применяют глюкозу, то ее концентрация предпочтительно находится в диапазоне от 1 до 5 мас.%/об., более предпочтительно составляет 5 мас.%/об. Когда агент для поддержания изотоничности представляет собой хлорид натрия, то он предпочтительно применяется в количествах до 1 мас.%/об, предпочтительно примерно 0,9 мас.%/об.

Композиция для инфузии может быть разбавлена водной средой. Количество водной среды, применяемой в качестве разбавителя, выбирают в зависимости от требуемой концентрации эпотилона в растворе для инфузии. Раствор для инфузии предпочтительно получают смешением вышеуказанного концентрата для инфузии, находящегося в пузырьке или ампуле, с водной средой, доводя с помощью водной среды объем до 20-200 мл, предпочтительно до 50-100 мл.

Растворы для инфузии могут содержать другие эксципиенты, которые обычно используют в композициях для внутривенного введения. Эксципиенты включают антиоксиданты.

Для защиты действующего вещества от окислительного разложения могут применяться антиоксиданты. Антиоксиданты могут быть выбраны из антиоксидантов, известных специалистам в данной области и пригодных для внутривенных композиций. Количество антиоксиданта может быть определено с помощью обычного эксперимента. В качестве альтернативы применению антиоксидантов или в дополнение к ним антиокислительное действие может быть получено путем предотвращения контакта кислорода (воздуха) с раствором для инфузии. Как правило, это может быть осуществлено просто путем продувки контейнера, содержащего раствор для инфузии, инертным газом, например азотом.

Растворы для инфузии могут быть получены смешением композиции, заключенной в ампулу или пузырек, с водной средой, например с 5 мас.%/об. раствором глюкозы в воде для инъекций (ВДИ) в соответствующем контейнере, например в баллоне или сосуде для инфузии.

Приготовленный раствор для инфузии предпочтительно используют сразу или в течение короткого промежутка времени после приготовления, например, в течение 6 ч.

Контейнеры для хранения растворов для инфузии могут быть выбраны из любых обычных контейнеров, материалы которых не вступают в реакцию с раствором для инфузии. В том числе могут применяться стеклянные контейнеры, изготовленные из указанных выше типов стекла, хотя может быть предпочтительным использовать пластиковые контейнеры, например пластиковые баллоны для инфузии.

Пластиковые контейнеры прежде всего могут представлять собой контейнеры из термопластичных полимеров. Пластмассы могут дополнительно включать такие добавки, как, например, пластификаторы, наполнители, антиоксиданты, антистатики и другие добавки, известные в данной области.

Пластики, пригодные согласно настоящему изобретению, должны быть устойчивы к повышенным температурам, необходимым для тепловой стерилизации. Предпочтительными пластиковыми баллонами для инфузии являются баллоны, сделанные из таких известных специалистам в данной области пластмасс, как ПВХ.

Могут применяться контейнеры, имеющие широкий диапазон размеров. При выборе размера контейнера прежде всего следует учитывать растворимость эпотилона в водой среде, простоту его приготовления и при необходимости способность контейнера к хранению.

Предпочтительно использовать контейнеры, которые могут вмещать приблизительно от 250 до 1000 мл раствора для инфузии, более предпочтительно от приблизительно 50 до приблизительно 120 мл.

Растворы для инфузии действуют таким же образом, как и растворы для инфузии взаимодействующего с микротрубками агента паклитаксела, и они обладают ценными свойствами при лечении состояний, для которых может применяться паклитаксел. Для определенных типов опухоли эпотилоны обладают более сильными благоприятными действиями по сравнению с паклитакселом.

Дозируемые формы, как правило, вводят внутривенно в дозе до 100 мг/м² для эпотилона А и до приблизительно 18 мг/м² для эпотилона В. Точные необходимые дозы и продолжительность введения зависят от серьезности состояния и скорости введения, предпочтительно они соответствуют указанным выше. В том случае, если доза может быть введена внутривенным путем, то полученная доза и концентрация в крови могут быть точно определены с помощью известных методов in vivo и in vitro.

Фармацевтические композиции для орального введения могут быть получены объединением действующего вещества с твердыми носителями, при желании путем гранулирования образовавшейся смеси и последующей обработки смеси, при желании или при необходимости после добавления соответствующих эксципиентов, с получением таблеток, ядер драже или капсул. Также возможно включать их в пластиковые носители, которые дают возможность действующему веществу диффундировать или высвобождаться в заданных количествах.

Пригодными фармацевтически приемлемыми носителями являются прежде всего наполнители, такие как сахара, например лактоза, сахароза, маннит или сорбит, препараты на основе целлюлозы и/или фосфаты кальция, например трикальций фосфат или бикарбонат кальция, и связующие вещества, такие как крахмальные пасты на основе, например, кукурузного, пшеничного, рисового или картофельного крахмала, желатин, трагакант, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза натрия и/или поливинилпирролидон; и/или при необходимости разрыхлители, такие как указанные выше крахмалы, а также карбоксиметиловый крахмал, сшитые поливинилпирролидоны, агар, альгиновая кислота или ее соль, такая как альгинат натрия. Эксципиенты прежде всего представляют собой улучшающие текучесть агенты и замасливатели, например, такие как кремниевая кислота, тальк, стеариновая кислота или ее соли, такие как стеарат магния или кальция, и/или полиэтиленгликоль. На ядра драже при необходимости наносят соответствующие необязательно устойчивые к действию желудочных соков покрытия, среди прочего с помощью концентрированных растворов сахаров, которые могут включать гумммиарабик, тальк, поливинилпирролидон, полиэтиленгликоль и/или диоксид титана, или с помощью растворов для покрытия в приемлемых органических растворителях, или с целью получения устойчивых к действию желудочных соков покрытий с помощью растворов приемлемых препаратов целлюлозы, таких как фталат этилцеллюлозы или фталат гидроксипропилметилцеллюлозы. Капсулы представляют собой заполненные сухим веществом капсулы, состоящие из желатина, и капсулы с мягким покрытием, приготовленные из желатина и пластификатора, такого как глицерин или сорбит. Заполненные сухим веществом капсулы могут содержать действующее вещество в форме гранул, например, с наполнителями, такими как лактоза, связующими веществами, такими как крахмалы, и/или с замасливателями, такими как тальк или стеарат магния, и при необходимости со стабилизаторами. В капсулах с мягким покрытием действующее вещество предпочтительно растворено или суспендировано в пригодных маслянистых эксципиентах, таких как жирные масла, парафиновое масло или жидкие полиэтиленгликоли, также могут быть добавлены стабилизаторы и/или антибактериальные агенты. В таблетки или в покрытия драже, или в покрытия капсул могут быть добавлены красители или пигменты, например, для целей идентификации или обозначения разных доз действующего вещества.

В случае комбинации с другим химиотерапевтическим агентом приготавливают, как описано выше, определенную композицию, включающую два или более указанных выше компонентов (а) и (б), или две или более отдельных композиций (например, набор элементов), или используют поступающие в продажу в виде стандартных композиций, известных специалисту в данной области, другой(ие) химиотерапевтический(ие) агент(ы).

Примеры:

Приведенные ниже примеры даны с целью иллюстрации настоящего изобретения и не направлены на ограничение его объема. Прежде всего следует понимать, что указанные в настоящем описании линии клеток не ограничивают объема изобретения, поскольку они являются лишь характерными представителями и могут быть заменены другими линиями клеток и клетками опухоли, характерными представителями которых они являются.

Получение растворов соединений

Приготавливали маточный раствор эпотилона В в ДМСО с концентрацией 10 мг/мл и хранили при -20°С. Аликвотные количества разбавляли водными растворами с получением конечной концентрации ДМСО 5 об.%, Tween 80 (моноолеат полиоксиэтиленсорбитана; фирма ICI Americas, Inc.) 0,05 об.% и 95 об.% физиологического раствора (0,9 об.% NaCl).

Клетки и условия культивирования клеток

Использовали линию клеток колоректальной аденокарциномы человека НСТ-15 (АТСС CCL 225), полученную из Американской коллекции типовых культур (American Type Culture Collection, Rockville, MD, США), и клетки культивировали in vitro согласно рекомендациям поставщика. НСТ-15 представляет собой линию клеток, сходных с эпителиальными (Cancer Res. 39: 1020-1025 [1979]), которая обладает множественной устойчивостью к лекарствам вследствие сверхэкспрессии Р-гликопротеина (P-gp, gpl70, MDR-1; Anticancer Res. 1309-1312 [1991]; J. Biol. Chem. 18031-18040 [1089]; Int. J. Cancer, 696-703 [1991]) и обусловленными глютатионом механизмами устойчивости (Int. J. Cancer, 49: 688-695 [1991]).

Линия клеток Colo 205 представляет собой линию клеток карциномы ободочной кишки человека (АТСС №CCL 222; см. также Cancer Res. 1345-1355 [1978]), которую выделяли из асцитической жидкости пациента, также характеризуется морфологией, сходной с морфологией эпителиальных клеток, и обычно рассматривается как чувствительная к лекарствам.

Для создания подкожной и ортотопной моделей на мышах использовали независимую от андрогена линию клеток рака предстательной железы человека. Линию клеток метастатической карциномы предстательной железы человека РС-3М получали от доктора I.J. Fidler (MD Anderson Cancer Center, Houston, TX, США) и ее культивировали в среде Хама F12K, дополненной 7 об.% фетальной бычьей сывороткой (ФБС). Линию клеток РС-3М получали путем выделения из метастазов печени, вызванных у лишенных волосяного покрова мышей после внутриселезеночной инъекции клеток линии РС-3М [АТСС CRL 1435; Американская коллекция типовых культур, Rockville, MD, США)] и они могли расти в среде Игла MEM, дополненной 10%-ной фетальной бычьей сывороткой, пируватом натрия, заменимыми аминокислотами, L-глутамином, раствором витаминов двукратной крепости (фирма Gibco Laboratories, Long Island, N.Y.) и пенициллином-стрептомицином (фирма Flow Laboratories, Rockville, MD). Линия клеток РС-3М является нечувствительной к гормонам (т.е. она растет в отсутствие андрогенов). Линия клеток РС-3 является негативной в отношении рецептора андрогена, как предположительно и выведенная линия клеток РС-3М. Линию клеток РС-3 получали от АТСС (АТСС CRL 1435) и она соответствовала IV стадии аденокарциномы предстательной железы, выделенной у 62-летнего мужчины кавказской национальности; клетки обладают низкой активностью в отношении кислой фосфатазы и тестостерон-5-а-редуктазы. Клетки являются почти триплоидными с модальным числом хромосом 62. С помощью анализа методом Q-бэндинга не обнаружено нормальных Y-хромосом.

Линия клеток аденокарциномы легкого человека А549 (АТСС CCL 185; выделена в виде культуры эксплантата из ткани карциномы легкого у 58-летнего мужчины кавказской национальности) имеет морфологию эпителия и с использованием цитидин-дифосфохолинового пути может синтезировать лецитин, имеющий большой процент десатурированных жирных кислот; во всех метафазах обнаружена субтелоцентрическая маркерная хромосома, включающая хромосому 6 и длинное плечо хромосомы 1. Линия клеток карциномы молочной железы человека ZR-75-1 (АТСС CRL 1500; выделена из злокачественного асцитического выпота у 63-летней женщины кавказской национальности, страдающей инфильтрирующей карциномой протоков); имеет происхождение из эпителия молочной железы; клетки имеют рецепторы эстрогена и других стероидных гормонов и имеют гипертриплоидное число хромосом.

Линию клеток эпидермальной (ротовая полость) карциномы человека КВ-8511 (линия клеток, сверхэкспрессирующих P-gp, выведенная из линии клеток эпидермоидной (ротовая полость) карциномы KB-31), получали от доктора R.M. Baker, Roswell Park Memorial Institute (Buffalo, N.Y., США) (см. описание у Akiyama и др., Somat. Cell. Mol. Genetics 117-126 (1985) и у Fojo А. и др., Cancer Res. 3002-3007 (1985)) и ее культивировали согласно описанному в литературе методу (Меуег Т. и др., Int. J. Cancer 851-856 (1989)). Линию клеток КВ-8511, так же как и КВ-31 выводили из линии клеток KB (АТСС), эти клетки представляют собой клетки эпидермальной карциномы человека; клетки линии KB-31 могут быть выращены в виде монослоя с использованием модифицированной по методу Дульбекко среды Игла (D-MEM), содержащей 10%-ную фетальную телячью сыворотку (ФТС) (фирма М.А. Bioproducts), L-глутамин (фирма Flow), пенициллин (50 ед./мл) и стрептомицин (50 мкг/мл (фирма Flow)); затем они растут с периодом удвоения 22 ч и их относительная эффективность посева составляет приблизительно 60%. Линия клеток KB-8511 представляет собой линию клеток, выведенную из линии клеток КВ-31 с использованием циклов обработки колхицином; эти клетки характеризуются приблизительно в 40 раз большей относительной устойчивостью в отношении колхицина, чем клетки линии КВ-31; они могут расти в тех же условиях, что и клетки линии КВ-31.

Более подробные характеристики линий клеток можно найти в каталоге АТСС и процитированных там ссылках или в других ссылках, процитированных выше.

В соответствии с Будапештским договором в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ, Mascheroder Weg lb, D-38124, Braunschweig, Германия) 20 февраля 1998 г. депонированы следующие линии клеток, упомянутые выше, под соответствующими приведенными ниже регистрационными номерами: РС-3М: DSM ACC2338; А-549: DSM ACC2337; КВ-8511: DSM ACC2342.

Кроме того, в соответствии с Будапештским договором в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ, Mascheroder Weg 1b, D-38124, Braunschweig, Германия) 1 декабря 1998 г. депонированы следующие линии клеток, упомянутые выше, под соответствующими приведенными ниже регистрационными номерами: ZR-75-1: DSM ACC2376; НСТ-15: АСС2377.

Ниже описаны общие методы, которые применяли в проведенных опытах. Если указаны конкретные условия, то они имеют большую силу по сравнению с общими описаниями, приведенными в следующих параграфах:

Анализы aнтипpoлифepaтивнoй активности:

Анализы антипролиферативной активности проводили согласно описанным в литературе методам (Int. J.Cancer 43, 851-856 (1989)). Вкратце метод состоял в следующем. Клетки высевали с плотностью 1,5·10 клеток/лунку в 96-луночные титрационные микропланшеты и инкубировали в течение ночи. В день 1 добавляли соединения в виде серийных разведении. Затем планшеты инкубировали еще в течение 2-5 дней до тех пор, пока не происходило по крайней мере один раз удвоение количества клеток (в зависимости от линии клеток), после чего клетки фиксировали 3,3 об.% глутаральдегидом, промывали водой и окрашивали 0,05 об.% метиленовым синим. После промывки краситель элюировали с помощью 3 об.% НСl и измеряли оптическую плотность при 665 нм с помощью прибора типа SpectraMax 340 (фирма Bucherer, Basel, Швейцария). Значения IC₅₀ определяли с помощью компьютеризованной системы (пакет программ SoftPro, фирма Bucherer, Basel, Швейцария) с использованием формулы (ОП_тест-ОП_исходн)/(ОП_{контроль}-ОП_исходн)·100. Величина IC₅₀ представляет собой концентрацию лекарства, вызывающую 50%-ную гибель клеток в лунке по сравнению с контрольными культурами (100%) после окончания периода инкубации.

Анализ in vivo противоопухолевой активности в отношении подкожно трансплантированных опухолей

Самок или самцов мышей линии BALB/c nu/nu (лишенных волосяного покрова) содержали в стерильных условиях (10-12 мышей на клетку типа III) со свободным доступом к пище и воде. Вес мышей составлял 20-25 г ко времени имплантации опухоли. Опухоли создавали путем подкожной инъекции клеток (минимум 2·10⁶ клеток в 100 мкл ЗФР или среды) мышам-носителям (хозяевам) (4-8 мышей для одной линии клеток). Образовавшиеся опухоли серийно пересаживали с помощью как минимум трех последовательных трансплантаций до начала обработки. Фрагменты опухоли (приблизительно по 25 мг) подкожно имплантировали в левый бок животных с помощью троакаровой иглы размера 13, при этом мышей подвергали анестезии фореном (фирма Abbott, Швецария).

Рост опухоли и вес тела оценивали один или два раза в неделю. Все обработки осуществляли ввнутривенным путем (в.в.) и их начинали, когда средний объем опухоли достигал приблизительно 100-250 мм³ в зависимости от типа опухоли. Объемы опухоли определяли с использованием формулы (L·D·π)/6 (см. Cancer Chemother. Pharmacol. 24: 148-154, [1989]). При обработке эпотилоном В варьировали дозу и частоту введений. Агенты, выбранные в качестве эталонов, вводили согласно ранее установленным оптимальным схемам введения лекарств. Кроме того, для целей представления изменений объемов опухоли в течение периода обработки противоопухолевую активность выражали в виде Т/С% (среднее увеличение объемов опухоли у обработанных животных, поделенное на среднее увеличение объемов опухоли у контрольных животных, умноженное на 100). Регресс опухоли (%) представляли в виде отношения наименьшего среднего объема опухоли к среднему объему опухоли при начале обработки согласно формуле: регресс (%)=(1-V_кон/V_нач)·100 (V_кон обозначает средний конечный объем опухоли, V_нач представляет собой средний объем опухоли при начале лечения). Всех животных, у которых опухоль достигала размера, превышающего приблизительно 1,5-2,5 см³, умерщвляли. Подробности эксперимента приведены ниже.

Анализ in vivo противоопухолевой активности в отношении ортотопно инъецированных клеток

Клетки карциномы предстательной железы человека линии РС-3М (1·10⁶ клеток на 20 мкл забуференного фосфатом физиологического раствора) вводили каждому животному путем инъекции в левый желудочек предстательной железы (n=6-9 особей/группу) согласно методу, описанному в литературе (см. Stephenson и др., J.Natl. Cancer Inst. 954-957 (1992)). Обработку начинали на 14-й день после инъекции клеток. Измерения, сделанные в этот момент времени, показывали, что средний размер опухоли составлял ~20 мг. Эпотилон В вводили либо один, либо два раза в неделю. Мышей умерщвляли через 42 дня после инокуляции опухоли, после чего тщательно выделяли предстательные железы, отсекали от соединительной ткани и взвешивали. Мезенгиальные лимфатические узлы исследовали в отношении присутствия метастазов, отсекали от соединительной ткани и взвешивали.

Вес опухоли и вес тела оценивали один или два раза в неделю. Все обработки осуществляли ввнутривенным путем (в.в.) и их начинали через 14 дней после инъекции. При обработке эпотилоном В варьировали дозу и частоту введений. Противоопухолевую активность выражали в виде Т/С% (средний вес опухоли у обработанных животных, деленный на средний вес опухоли у контрольных животных, умноженный на 100).

Статистический анализ

Основная стратегия статистического анализа направлена на использование тестов с применением множественных сравнений для выявления статистической достоверности различий между различными обработанными группами и различий в пределах группы (например, по сравнению с началом обработки) с целью определения того, вызывает ли лечение стабильный регресс болезни или опухоли. Поскольку объемы подкожных опухолей не подчиняются закону нормального распределения, то различия в объемах подкожных опухолей между группами с различной обработкой определяли с помощью однонаправленного дисперсионного анализа (ANOVA) упорядоченных данных (критерий суммы рангов) с использованием непараметрического критерия Kruskal-Wallis и статистическую достоверность различий между обработанными группами и контрольными группами определяли с использованием критерия Даннетта. Парные сравнения между всеми группами проводили согласно методу Стьюдента-Ньюмена-Кеулза (СНК). Веса органов не всегда распределены по нормальному закону и их анализировали либо с помощью непараметрических критериев (как описано выше), либо их преобразовывали к нормальному виду (log [вес органа]) и анализировали с помощью однонаправленного метода дисперсионного анализа, а затем с использованием критерия Даннетта (сравнение с контролями) или критерия Tukey (сравнения между группами). При статистическом анализе приращений (Δ) объемов опухолей применяли однонаправленный метод дисперсионного анализа упорядоченных данных с использованием критерия Kruskal-Wallis, сравнение обработанных групп с обработанными носителем контролями проводили с использованием критерия Даннетта. Различия в весах тела между обработанными группами и обработанными носителем контролями анализировали с помощью парных t-критериев. Для определения достоверности различий в смертности между группами использовали идеальный критерий Фишера. Для всех критериев уровень значимости был принят равным р<0,05, однако необходимо отметить, что для таких малых размеров образцов никогда не был достигнут требуемый уровень достоверности 0,8. Для ортотопной модели использовали идеальный критерий Фишера для того, чтобы определить, различаются ли относительные количества мышей, имеющих метастазы, в обработанных группах и в контролях. Все статистические вычисления проводили с использованием программы SigmaStat 2.0 (фирма Jandel Scientific).

Материалы

Эпотилон В, выделенный из культур миксобактерии Soranium cellulosum, получали от департамента биофармацевтической продукции и развития (Biopharmaceuticals Production and Development Department) фирмы Novartis Pharma, Basel, Швейцария. TAXOL® (композиция на основе паклитаксела, предназначенная для клинических целей) получали от фирмы Bristol Myers Squibb (США), паклитаксел от фирмы Calbiochem (США), а 5-флуорацил (Fluo-uracil®) от фирмы Roche (Швейцария). Клеточные культуры получали от фирмы Integra BioSciences (Wallisellen, Швейцария). Жидкие среды, фетальную бычью сыворотку (ФБС) и добавки для сред получали от фирмы Gibco/BRL (Basel, Швейцария). Мышей линии BALB/c nu/nu (лишенных волосяного покрова) получали от фирмы Bomholtgaard (Копенгаген, Дания) или получали из вивария фирмы Novartis (Sisseln, Швейцария). Обычных мышей линии BALB/c получали от фирмы Iffa Credo (Франция) или из вивария фирмы Novartis (Sisseln, Швейцария).

Определение максимальной переносимой дозы (МПД)

Для определения МПД самок мышей линии BALB/c, лишенных волосяного покрова, или BALB/c (полученных из вивария фирмы Novartis, Sisseln, Швейцария) однократно обрабатывали эпотилоном В путем внутривенной инъекции (n=3 для группы, обработанной одной дозой). Дозу увеличивали (2, 4, 6, 8, 10 и 12 мг/кг) и мышей исследовали в отношении возникновения выраженных токсических действий в течение 10 дней после обработки лекарством.

Пример 1: Определение максимальной переносимой доза (МПД)

Результаты опытов по определению максимальной переносимой дозы (МПД) представлены в таблице 1 и 2.

Эпотилон В вводили путем однократной в.в. инъекции в виде болюса в дозе 2, 4, 6, 8, 10 или 12 мг/кг. Ежедневно оценивали выживаемость и вес тела мышей. Изменения (Δ) веса тела определяли путем сравнения последнего измеренного веса тела с весом тела перед обработкой.

Эпотилон В вводили путем однократной в.в. инъекции в виде болюса в дозе 2, 4, 6, 8, 10 или 12 мг/кг. Ежедневно оценивали выживаемость и вес тела мышей. Изменения (Δ) веса тела определяли путем сравнения последнего измеренного веса тела с весом тела перед обработкой.

Результаты этих экспериментов позволили установить, что для нормальных мышей величина МПД составляла приблизительно 4 мг/кг, тогда как для мышей, лишенных волосяного покрова, величина МПД составляла приблизительно 6 мг/кг.

Пример 2: Токсичность эпотилона В (сравнительное исследование токсичности при внутривенном введении мышам в течение двух недель)

Для оценки субхронической токсичности эпотилона В при внутривенном введении проводили исследование токсичности без GLP при внутривенном введении в течение двух недель не имеющим опухоли нормальным самкам мышей линии BALB/c, включающее анализ смертности, клинических симптомов, веса тела, количества поглощенной пищи, гематологический анализ, клинический биохимический анализ, анализ мочи и веса органов, а также макро- и микроскопические исследования. Исследование прододили для двух различных режимов доз эпотилона В, составляющих 3 и 10 мг/кг соответственно, которые вводили в день 1 и день 8 (8 животных в группе).

Половину животных умерщвляли в день 15 (основная группа) и проводили аутопсию. Вторую половину (восстановительная группа) после введения второй дозы выдерживали в течение восстановительного периода, составлявшего 5 недель, после чего умерщвляли и в день 43 проводили аутопсию. Однако все животные в восстановительной группе, обработанные дозой 10 мг/кг, должны были быть умерщвлены преждевременно в день 19 вследствие плохого общего состояния организма.

Не было зарегистрировано смертных случаев в течение всего периода обработки для всех уровней доз (дни 1-14), а в восстановительной группе, обработанной дозой 3 мг/кг, все животные выжили до конца эксперимента. В течение первой и второй недель наблюдали потерю веса тела у всех животных в группе, обработанной дозой 10 мг/кг, тогда как при обработке дозой 3 мг/кг потеря веса тела становилась заметной только на второй неделе. Увеличение веса тела в течение востановительного периода у обработанных и контрольных животных оказалось сходным.

Оба уровня доз эпотилона В индуцировали уменьшение количества лейкоцитов, прежде всего нейтрофилов и лимфоцитов, у всех обработанных животных (день 15), однако это действие оказалось более выраженным для дозы 10 мг/кг. Кроме того, при обработке обоими уровнями доз у отдельных животных наблюдалось слабое увеличение количеств базофилов, а также уменьшение уровней моноцитов. Небольшое уменьшение значений параметров эритроцитов, сопровождавшееся увеличением ретикулоцитов и тромбоцитов, отмечалось только для дозы 10 мг/кг. После окончания восстановительного периода (день 43) гематологические параметры приходили в норму у двух из четырех животных в группе, обработанной дозой 3 мг/кг, в то время как два других еще имели пониженные количества лейкоцитов.

В клиническом химическом профиле обработанных животных наблюдали лишь незначительные изменения, которые не могли быть однозначно соотнесены с обработкой эпотилоном В.

Обработка эпотилоном В для обоих уровней доз приводила к выраженным изменениям веса тимуса, селезенки и матки (день 15). Кроме того, наблюдали небольшие уменьшения веса печени. (Вес органа определяли для надпочечников, печени, тимуса, селезенки, головного мозга, яичников, почек, матки и сердца). При обработке дозой 3 мг/кг вес органов после восстановительного периода (день 43) оказался сопоставимым с весом органов контрольных животных, что свидетельствовало о полном восстановлении. (У умерщвленных животных, обработанных дозой 10 мг/кг, не проводили оценку веса органов).

Микроскопическое исследование после гистологической обработки выделенных тканей у животных, умерщвленных в день 15, позволило выявить среднюю или выраженную атрофию тимуса при обработке дозами 3 и 10 мг/кг соответственно. Кроме того, при обработке дозой 10 мг/кг наблюдали минимальную лимфоидную атрофию в селезенке, от минимальной до слабой миелоидную гипоплазию в костном мозге грудинной кости и минимально повышенный гемопоэз в селезенке. При обработке дозой 3 мг/кг наблюдали эритроидную и миелоидную атрофию от минимальной до слабой в костном мозге грудинной кости. Для обоих уровней доз отмечали минимальный некроз одиночных клеток в слизистой оболочке кишки (толстая и тонкая кишка), однако некроз оказался более выраженным для дозы 10 мг/кг.

У животных из восстановительных групп для обоих уровней доз наблюдали слабую миелоидную гиперплазию и/или атрофию костного мозга. В случае обработки дозой 10 мг/кг в селезенке обнаруживали также слабую лимфоидную атрофию, а также гемосидероз от слабого до среднего. Для дозы 10 мг/кг не оказалось возможным выделить ткань тимуса для микроскопических исследований, это свидетельствовало о том, что у этих мышей также могла иметь место атрофия тимуса. У животных из восстановительной группы, обработанных дозой 3 мг/кг, в день 43 не обнаруживали никаких гистологических изменений в тимусе.

В заключение следует отметить, что эпотилон В в дозе 3 мг/кг (вводимой в день 1 и день 8) переносился без смертных случаев в течение всего периода наблюдения, составлявшего 43 дня, тогда как животных, обработанных дозой 10 мг/кг, оказалось необходимым умертвить в день 19 вследствие плохого состояния здоровья. В течение периода обработки для обоих уровней доз происходила потеря веса тела. Гематологический анализ выявил в обеих группах у отдельных мышей пониженные уровни лейкоцитов, нейтрофилов и лимфоцитов, а также повышенные уровни базофилов и пониженные уровни моноцитов. Кроме того, для обоих уровней доз выявили признаки анемии. Не обнаружено влияния на клинический химический профиль. Только после окончания периода обработки (день 15) дозами 3 и 10 мг/кг наблюдали атрофию тимуса от слабой до средней, а для дозы 10 мг/кг также минимальную лимфоидную атрофию в селезенке. Кроме того, для дозы 10 мг/кг оказалось возможным выявить миелоидную гипоплазию в костном мозге и повышенный гемопоэз в селезенке. Для дозы 3 мг/кг проявлялась слабая эритроидная и миелоидная атрофия костного мозга. Для доз 3 и 10 мг/кг некроз отдельных клеток в слизистой оболочке кишки обнаруживали только после окончания периода обработки.

Выводы

Наиболее важные выводы на основе данных, обобщенных в примерах 1 и 2, касающиеся токсикологических характеристик эпотилона В, могут быть обобщены следующим образом:

Величины МПД при в.в. введении однократной дозы эпотилона В для нормальных и лишенных волосяного покрова мышей основной линии BALB/c равны 4 и 6 мг/кг соответственно. Таким образом, лишенные волосяного покрова мыши оказались менее чувствительными к токсическим действиям соединения по сравнению с нормальными мышами.

Для нормальных мышей две дозы по 3 мг/кг, вводимые с интервалом в одну неделю, переносились довольно хорошо и не вызывали гибели вплоть до дня 43 после введения первой дозы. Уровень дозы 10 мг/кг при том же самом режиме доз приводил к смерти (или к необходимости умерщвления) всех обработанных животных.

Пример 3: Активность in vitro эпотилонов в отношении линий клеток

Для некоторых линий клеток рака человека удалось выявить выраженную антипролиферативную активность эпотилона В; результаты этих экспериментов обобщены в таблице 3. В целом эпотилон В обладает более высокой активностью, чем паклитаксел, прежде всего в отношении клеток рака, обладающих фенотипом множественной устойчивости к лекарствам (MDR) (например, таких как RD-8511, НСТ-15).

Сравнение значений IC₅₀ [нМ] при ингибировании роста линий клеток карциномы человека при использовании эпотилона В и паклитаксела (экспозиция в течение 5 дней, приведены средние значения±СКО, n=3).

Значения в скобках характеризуют относительную устойчивость, т.е, IС₅₀ (устойчивой линии)/IC₅₀ (родительской линии).

Пример 4: Противоопухолевая активность эпотилонов в отношении линии опухолевых клеток НСТ-15 колоректальной аденокарциномы человека

В качестве основного показателя активности противоопухолевых агентов при их применении индивидуально или в сочетании использовали объемы опухоли, а в качестве показателя переносимости лечения определяли изменения веса тела.

Как можно видеть из таблицы 4, однократная доза 4 мг/кг эпотилона В способна вызвать регресс опухоли (р<0,05 при сравнении с контролями; критерий Даннетта) у устойчивых к лекарствам сверхэкспрессирующих P-gp клеток опухолей ободочной кишки линии НСТ-15 (фиг.1 и таблица 1). Эта активность выраженно превосходит действие, вызываемое пятикратным введением TAXOL® в дозе 20 мг/кг или двукратным введением 5-флуорацила в дозе 75 мг/кг (р<0,05 при сравнении с эпотилоном В; критерий SNK). Опухоли линии НСТ-15 устойчивы как к TAXOL®, так и к 5-флуорацилу, это выражалось в том, что для этих лекарств получали конечные значения Т/С, составляющие 50 и 88% соответственно (в обоих случаях р>0,05 при сравнении с контролями; критерий Даннетта). Обработка эпотилоном В оказалась хорошо переносимой, это выражалось в том, что вес тела оставался постоянным в течение обработки; у мышей, обработанных носителем, наблюдали прибавление веса. При обработке эпотилоном В не наблюдали случаев гибели. В отличие от этого при обработке с использованием TAXOL® зафиксировали несколько случаев гибели (1/8 [12,5%] случаев гибели), при обработке 5-флуорацилом выявили больший уровень летальных исходов (4/8 [50%] случаев гибели); однако вследствие малочисленности групп обработки не было достигнуто статистической достоверности результатов (р>0,05 при сравнении с контролями; идеальный критерий Фишера). Мыши, выжившие после обработки, характеризовались стабильным весом тела.

Эти результаты свидетельствуют о том, что эпотилон В обладает выраженным противоопухолевым действием в отношении опухолей линии НСТ-15, устойчивой к TAXOL® и 5-флуорацилу, а также хорошо переносится в исследованной дозе 4 мг/кг.

Фрагменты опухоли весом приблизительно 25 мг имплантировали в левый бок каждой из самок лишенных волосяного покрова мышей (n=8 в группе). Обработки начинали в день 14 после трансплантации опухоли. Эпотилон В вводили в день 14 путем однократной в.в. инъекции в дозе 4 мг/кг. 5-Флуорацил вводили в день 14 и день 21 путем в.в. инъекции в дозе 75 мг/кг. TAXOL® вводили путем в.в. инъекции в дозе 20 мг/кг/день каждый второй день в течение 5 циклов обработки (дни 14, 16, 18, 20 и 22). Противоопухолевую активность выражали в виде Т/С% (среднее увеличение объемов опухоли у обработанных животных, деленное на среднее увеличение объемов опухоли у контрольных животных, умноженное на 100). Регресс опухоли (%) характеризовали путем сравнения конечного среднего объема опухоли со средним объемом в начале обработки. Приращение (Δ) объема опухоли представляет собой объем опухоли в последний день обработки минус объем опухоли в первый день обработки. Статистический анализ приращений Δ объемов опухоли проводили с использованием критерия Даннетта путем сравнения обработанных групп с контролями. Статистические анализы изменений веса тела проводили с использованием парных t-критериев путем сравнения веса тел перед обработкой с соответствующими величинами, полученными после окончания обработки; вес мышей при начале обработки составлял ~20-25 г. Сокращение "н.д." обозначает "статистически недостоверно". Данные представляют собой средние значения ± СКО, полученные для животных, выживших после окончания эксперимента.

Пример 5: Сравнение противоопухолевой активности эпотилона В и TAXOL® в отношении эпидермоидной карциномы линии КВ-8511 человека, подкожно трансплантированной самкам лишенных волосяного покрова мышей линии BALB/c

Как видно из данных, представленных в таблице 5, различные режимы доз эпотилона В позволяли ингибировать рост устойчивых к действию TAXOL® опухолей линии KB-8511 у лишенных волосяного покрова мышей. Однократное введение 4 мг/кг эпотилона В вызывало кратковременный регресс (-51% в день 25 после трансплантации; р<0,05 при сравнении с контролями, обработанными носителем, критерий Даннетта), однако опухоли начинали расти снова, в результате чего в день 40 после обработки конечная величина Т/С составляла 24% (р<0,05 при сравнении с контролями, обработанными носителем, критерий Даннетта). Такое однократное введение эпотилона В хорошо переносилось, при этом сохранялся стабильный вес тела и не происходило гибели животных.

Еженедельное внутривенное введение эпотилона В приводило к ингибированию роста опухоли в зависимости от дозы: доза 4 мг/кг вызывала 98%-ный регресс (р<0,05 при сравнении с контролями, обработанными носителем, критерий Даннетта); доза 2 мг/кг вызывала кратковременный 44%-ный регресс и давала конечную величину Т/С, равную 14% (для обеих характеристик р<0,05 при сравнении с контролями, обработанными носителем, критерий Даннетта); доза 1 мг/кг давала конечную величину Т/С, равную 81% (р<0,05 при сравнении с контролями, обработанными носителем, критерий Даннетта). TAXOL® не обладал активностью в отношении опухолей линии КВ-8511 (Т/С составляло 132%, р<0,05 при сравнении с контролями, обработанными носителем, критерий Даннетта). После окончания эксперимента у 5 из 8 мышей, обработанных дозой эпотилона В 4 мг/кг/неделю и у 1 из 8 мышей, обработанных дозой 2 мг/кг/неделю, опухоли не были обнаружены. Хотя при еженедельной обработке дозой 4 мг/кг отмечалась тенденция к уменьшению веса тела (-5±7%), однако она не была статистически достоверной. Во всех контрольных группах, обработанных носителем, и во всех группах, обработанных эпотилоном В в дозах 2 и 1 мг/кг/неделю и обработанных TAXOL®, наблюдалось увеличение веса тела, при этом не отмечалось случаев гибели, что свидетельствовало о хорошей переносимости обработок.

Эти результаты свидетельствуют о том, что эпотилон В обладает активностью в отношении экспериментально вызванных эпидермоидных опухолей, устойчивых к действию TAXOL®.

Фрагменты опухоли весом приблизительно 25 мг имплантировали в левый бок каждой из самок лишенных волосяного покрова мышей (n=8 в группе). Обработки начинали в день 13 после трансплантации опухоли. Эпотилон В вводили в день 13 путем однократной в. в. инъекции в дозе 4 мг/кг или один раз в неделю путем в.в. инъекции в дозах 4, 2 или 1 мг/кг (в дни 13, 21 и 27). TAXOL® вводили путем в.в. инъекции в дозе 20 мг/кг/день каждый второй день в течение 5 циклов обработки (дни 13, 15, 17, 19 и 21). Противоопухолевую активность выражали в виде Т/С% (среднее увеличение объемов опухоли у обработанных животных, деленное на среднее увеличение объемов опухоли у контрольных животных, умноженное на 100). Регресс опухоли (%) характеризовали путем сравнения конечного среднего объема опухоли со средним объемом в начале обработки. Изменения (Δ) объемов опухоли представляют собой объем опухоли в последний день обработки минус объем опухоли в первый день обработки. Статистический анализ изменений Δ объемов опухоли проводили с использованием критерия Даннетта путем сравнения обработанных групп с контролями. Статистические анализы изменений веса тела проводили с использованием парных t-критериев путем сравнения весов тела перед обработкой с соответствующими величинами, полученными после окончания обработки; вес мышей при начале обработки составлял ~20-25 г. Сокращение "н.д." обозначает "статистически недостоверно". Данные представляют собой средние значения ±СКО, полученные для животных, выживших после окончания эксперимента.

Результаты эксперимента показали, что в то время, как TAXOL® оказался неэффективным, обработка эпотилоном В продемонстрировала наличие выраженной противоопухолевой активности; при использовании дозы 4 мг/кг даже мог быть достигнут регресс.

Пример 6: Противоопухолевая активность эпотилонов в отношении ортотопно инъецированных клеток опухоли предстательной железы линии РС-3М

Результаты, характеризующие активность эпотилона В в отношении опухолей линии РС-3М, первоначально вырастающей в предстательной железе, а затем образующей метастазы в мезенгиальных лимфатических узлах, представлены в таблице 6.

В этой экспериментальной модели рака предстательной железы клетки линии РС-3М первоначально росли в предстательной железе, а затем образовывали метастазы в мезенгиальных лимфатических узлах. Для оценки противоопухолевой активности обработок использовали измерения веса органов.

В таблице 6 представлены данные о развитии вызванного экспериментальным путем рака, начиная с дня 14 после инъекции клеток (начало обработки), когда еще не наблюдалось заболевания лимфатических узлов, до дня 42 после инъекции клеток, когда предстательная железа и мезентерические лимфатические узлы резко увеличивали свой вес. Все режимы введения эпотилона В оказались высокоэффективными (во всех случаях р<0,05 при сравнении с контролями, обработанными носителем, критерий Даннетта для подвергнутых логарифмическому преобразованию данных) в отношении уменьшения веса предстательной железы и предупреждения развития метастазов опухоли в мезентерических лимфатических узлах. Противоопухолевые действия всех обработок действующими веществами оказались эквивалентными (р>0,05: критерий Dunn). В каждой из обработанных эпотилоном В групп только у одного животного были обнаружены метастазы, тогда как они были обнаружены у всех контрольных животных, обработанных носителем (р<0,05; идеальный критерий Фишера), это свидетельствует о том, что обработка эпотилоном В существенно уменьшала образование обнаруживаемых метастазов.

Обработки эпотилоном В оказались не очень хорошо переносимыми в высоких дозах. В то время как в случае однократного введения дозы 6 мг/кг или двух введений доз по 4 мг/кг можно было обнаружить лишь тенденцию к уменьшению веса тела, то в случае однократного введения дозы 8 мг/кг или еженедельного введения 5 мг/кг происходило значительное уменьшение веса тела (таблица 6). По-видимому, обработки способствовали выживаемости мышей, имеющих опухоль; однако, вероятно, вследствие небольших количеств животных в каждой из обработанных групп статистически достоверные результаты получали только для режима обработки дозой 6 мг/кг (однократно) (р=0,029, идеальный критерий Фишера для конечных количеств выживших животных).

Результаты исследований с использованием этой модели свидетельствуют о высокой противоопухолевой активности эпотилона В как в отношении уменьшения первичных опухолей, так и в отношении предупреждения развития метастазов. Однако для некоторых режимов обработки эпотилон В оказался плохо переносимым.

Результаты проведенного исследования показали, что эпотилон В обладает активностью в отношении карциномы предстательной железы человека как in vitro, так и in vivo (см. пример 3). Эпотилон В также обладает способностью уменьшать рост первичной опухоли и сильно ингибировать образование обнаруживаемых метастазов в ортотопной модели рака предстательной железы. Кроме того, он также может способствовать выживанию мышей, имеющих опухоль, однако это требует дополнительного экспериментального изучения. Наряду с выраженной противоопухолевой активностью обработки эпотилоном В для исследованных схем приема лекарственных средств вызывали значительные потери веса. Однако причины этой плохой переносимости неизвестны.

Следует особо отметить активность эпотилона В, проявленную в ортотопной модели опухоли РС-3М. Ортотопные модели создают путем имплантации опухоли в ткани, в которых развивается первичная опухоль у человека, и в отличие от моделей, основанных на подкожном введении, в этом случае часто возникают метастазы. Поэтому тот факт, что эпотилон В подавляет рост первичной опухоли в предстательной железе и ингибирует образование и/или рост метастазов в мезентерических лимфатических узлах, свидетельствует о значительной активности эпотилона В.

В целом благодаря выраженной противоопухолевой активности, продемонстрированной в экспериментах на моделях рака предстательной железы, которые считаются относительно устойчивыми к химиотерапии (Br.J.Cancer 75. 1593-1600 (1997)), эпотилон В, по-видимому, является перспективным агентом для лечения рака предстательной железы.

1·10⁶ Клеток линии РС-3М в 20 мкл ЗФР инъецировали в левый желудочек предстательной железы каждого из самцов лишенных волосяного покрова мышей (n=9 в группе). Обработки начинали в день 14 после инъекции клеток опухоли. Эпотилон В вводили путем в.в. инъекции однократно в дозе 6 или 8 мг/кг, или один раз в неделю в дозе 4 или 5 мг/кг. Противоопухолевую активность выражали в виде Т/С% (средний вес опухоли у обработанных животных, деленный на средний вес опухоли у контрольных животных, умноженный на 100). Изменения веса тела оценивали только у животных, выживших до конца эксперимента (день 42). Статистические анализы изменений (Δ) веса тела проводили с использованием парных t-критериев путем сравнения весов тела перед обработкой с соответствующими величинами, полученными после окончания обработки; вес мышей при начале обработки составлял ~20-25 г. Сокращение "н.д." обозначает "статистически недостоверно".

Пример 7: Активность эпотилона В в отношении немелкоклеточной карциномы легкого А549 человека

3-10 Миллионов клеток имплантировали подкожно в правую аксиллярную (боковую) область не имеющим тимуса мышам, полученным в результате аутбридинга (nu/nu), и выращивали до тех пор, пока объем опухоли не достигал приблизительно 100 мм³. Эпотилон В растворяли в 1%-ном ДМСО в 5%-ном растворе глюкозы в дистиллированной воде (D5W) и вводили в.в. либо только однократно, либо один раз в неделю, либо 3 раза в неделю, либо 5 раз в неделю. Для положительных контролей использовали клинические композиции на основе TAXOL®, разбавленные в 6 раз D5W, которые вводили в.в. 3 раза в неделю.

Противоопухолевую активность выражали в виде Т/С% (сравнивая изменения (Δ) объемов опухоли в обработанной группе и контрольной группе, обработанной носителем) после окончания эксперимента. Регресс оценивали по формуле: -(Т/Т₀-1)·100%, где Т обозначает объем опухоли в обработанной группе в конце эксперимента, a t₀ - объем опухоли в начале эксперимента. Статистическую достоверность оценивали с использованием одностороннего t-критерия Стьюдента.

Результаты: в таблице 7 обобщены результаты исследований для опухолей линии А549. При однократном введении в дозе 6 мг/кг эпотилон В вызывал значительное ингибирование опухоли (Т/С=41%), при этом токсичность не была выявлена. Доза 4 мг/кг, вводимая один раз в неделю (4 мг/неделю), вызывала остановку роста опухоли (Т/С=7%), но при этом приводила к 13%-ной потере веса тела. Для сравнения при использовании дозы 1,5 мг/кг, вводимой 3 раза в неделю (4,5 мг/неделю), всех животных пришлось подвергнуть эвтаназии в первую же неделю эксперимента вследствие обнаруженной токсичности. Дозы по 0,5 мг/кг, вводимые 5 раз в неделю (2,5 мг/неделю), вызывали ингибирование опухоли, идентичное ингибированию для режима однократного введения (Т/С=41%), однако, по-видимому, вследствие накопления токсичности происходило 23%-ная потеря веса. TAXOL®, вводимый 3 раза в неделю в дозе 20 мг/кг, не приводил к ингибированию роста опухоли, но вызывал 16%-ную потерю веса тела, при этом смертность составляла 1 случай на 8 мышей.

Обработки начинали в день 16 после имплантации (10 миллионов клеток/особь). Эпотилон вводили в.в. однократно в дозе 6 мг/кг (день 16), один раз в неделю в дозе 4 мг/кг (дни 16, 23 и 30), три раза в неделю в дозе 1,5 мг/кг (дни 16, 18, 21, 23, 25, 28, 30, 32 и 35) или пять раз в неделю в дозе 0,5 мг/кг (дни 16-18, 21-25, 28-32 и 35-36). TAXOL® вводили в.в. три раза в неделю в количестве 20 мг/кг, разделенном на дозы по 10 мг/кг, которые вводили с интервалом 1 ч (дни 16, 18, 21, 23, 25, 28, 30, 32 и 35). Носитель в качестве контроля (1%-ный ДМСО/D5W) вводили в.в. три раза в неделю (дни 16, 18, 21, 23, 25, 28, 30, 32 и 35). Все окончательные данные регистрировали в день 37. Одна звездочка обозначает р<0,05, а двойная звездочка обозначает р<0,01, величины р получены с использованием одностороннего t-критерия Стьюдента. "н.о." обозначает "не определяли" (животных подвергали эвтаназии, поскольку была обнаружена токсичность соединения).

Пример 8: Сравнение противоопухолевой активности эпотилона В и TAXOL® в отношении немелкоклеточных опухолей легкого линии А549 у мышей, лишенных волосяного покрова

Для модели с использованием ксенотрансплантата опухоли человека применяли описанные выше материалы и методы. 10 Миллионов клеток (линии А549) имплантировали подкожно в правую аксиллярную (боковую) область не имеющим тимуса мышам, полученным в результате аутбридинга (nu/nu), и выращивали до тех пор, пока объем опухоли не достигал приблизительно 100 мм³. Эпотилон В растворяли в 1%-ном ДМСО в 5%-ном растворе глюкозы в дистиллированной воде (D5W) и вводили в.в. один раз в неделю в течение 3 недель. Для положительных контролей использовали клинические композиции на основе TAXOL®, разбавленные в 4 раза D5W, которые вводили в.в. 3 раза в неделю в течение 3 недель в виде разделенных доз (2×10 мг/кг) с интервалом в 1 ч.

Противоопухолевую активность выражали в виде Т/С% (сравнивая изменения (Δ) объемов опухоли в обработанной группе и контрольной группе, обработанной носителем) в конце эксперимента. Регресс оценивали по формуле: -(Т/Т₀-1)·100%, где Т обозначает объем опухоли в обработанной группе в конце эксперимента, а Т₀ - объем опухоли в начале эксперимента. Измерения продолжали еще в течение 2 недель после завершения регулярных 3-недельных экспериментов для оценки обратимости вызванной лекарством потери веса тела и сохранения противоопухолевых воздействий. Статистическую достоверность оценивали с использованием одностороннего t-критерия Стьюдента, критериев Даннетта или Dunn.

Результаты: в таблице 8 обобщены результаты стандартных 3-недельных экспериментов, полученные для опухолей линии А549. Введение эпотилона В один раз в неделю вызывало статистически достоверное ингибирование роста опухоли в зависимости от дозы, рост опухоли прекращался при использовании максимальных концентраций лекарства. При введении в дозах 3,5 и 3 мг/кг эпотилон вызывал заметное ингибирование роста опухоли (Т/С=15 и 23% соответственно). Обе дозы вызывали заметную, но обратимую (см. таблицу 8) потерю веса тела, составлявшую приблизительно 15%. Дозы по 2 и 1 мг/кг давали величины Т/С, равные 43 и 74%, которые являлись статистически достоверными, при использовании дозы в 2 мг/кг не происходило изменения веса тела, а при использовании дозы 1 мг/кг наблюдался нормальный прирост веса тела. TAXOL® при введении 3 раза в неделю в виде разделенных доз (2·10 мг/кг) не вызывал ингибирования роста опухоли, но приводил к 19%-ной потере веса тела.

Обработки начинали в день 13 после имплантации (10 миллионов клеток/особь). Эпотилон В вводили в.в. один раз в неделю в течение 3 недель (дни 13, 20 и 27) в дозах 1, 2, 3 и 3,5 мг/кг. TAXOL® вводили в.в. три раза в неделю в течение 3 недель (дни 14, 17, 19, 21, 24, 26, 28, 31 и 33) в количестве 20 мг/кг в виде разделенных доз по 10 мг/кг с интервалом 1 ч. Окончательные данные регистрировали в день 34. Одна звездочка обозначает величину р<0,05, полученную с использованием одностороннего t-критерия Стьюдента, а двойная звездочка обозначает величину р<0,05, полученную с использованием критерия Даннетта или Данна.

Измерения проводили в течение еще 2 недель после завершения регулярных 3-недельных экспериментов и окончательные данные, полученные через 5 недель, обобщены в таблице 9. Противоопухолевое действие оставалось без изменения, в то время как вес тела животных восстанавливался. Величины Т/С для уровней доз эпотилона В, равных 3,5, 3, 2 и 1 мг/кг, составляли 12, 16, 49 и 72% соответственно, и во всех группах наблюдали нормальный прирост веса. TAXOL® оставался неэффективным и у животных наблюдали лишь 2%-ный прирост веса.

Измерения для условий эксперимента, описанных в таблице 1, продолжали еще в течение двух недель. Окончательные данные регистрировали в день 48. Одна звездочка обозначает величину р<0,05, полученную с использованием одностороннего t-критерия Стьюдента, а двойная звездочка обозначает величину р<0,05, полученную с использованием критерия Даннетта или Данна.

Пример 9: Противоопухолевое действие эпотилона В в отношении опухолей молочной железы линии ZR-75-1

В таблице 10 приведены результаты эксперимента, в котором сравнивали действие TAXOL® и эпотилона В на линию клеток ZR-75-1 рака молочной железы. Методы, использованные для этой модели опухоли, описаны выше.

Результаты позволяют сделать вывод (на основе противоопухолевой эффективности) о том, что наилучший режим доз представляет собой еженедельное введение 4 мг/кг. Однако для всех доз наблюдались случаи гибели животных, которые свидетельствовали о том, что опухоль линии ZR-75-1 в отличие от других типов опухоли может влиять на общее состояние здоровья мышей.

Фрагменты опухоли весом приблизительно 25 мг имплантировали в левый бок каждой из самок лишенных волосяного покрова мышей (n=6 в группе); в противоположный бок подкожно вводили пеллетированный эстроген. Обработки начинали в день 19 после трансплантации. Эпотилон В вводили путем в.в. инъекции в дозе 1, 2 или 4 мг/кг, либо один раз в неделю (дни 19, 26 и 33), либо каждую вторую неделю (дни 19 и 33). Представленные данные получены для животных, выживших к 47 дню, последнему дню наблюдения. Противоопухолевую активность выражали в виде Т/С% (среднее увеличение объемов опухолей у обработанных животных, деленное на среднее увеличение объемов опухолей у контрольных животных, умноженное на 100). Регресс опухоли (%) оценивали путем сравнения конечного среднего объема опухоли со средним объемом опухоли в начале эксперимента. Изменения (Δ) объема опухоли представляют собой объем опухоли в последний день обработки минус объем опухоли в первый день обработки.

Пример 10: Сравнение противоопухолевого действия эпотилона В и 5-флуорацила в отношении подкожно трансплантированных опухолей ободочной кишки Colo 205

В таблице 11 представлены данные о действии эпотилона В в отношении подкожно трансплантированных опухолей линии Colo 205, а также о действии 5-флуорацила. В отличие от обработки линии клеток опухоли НСТ-15, где стандартная обработка 5-флуорацилом или обработка с помощью TAXOL® являлись неэффективными, в данном случае оказалось, что обработка 5-флуорацилом еще являлась эффективной, хотя и менее эффективной, чем обработка эпотилоном В.

Наряду с результатами, приведенными в примере 4, свидетельствующими о том, что клетки линии РСТ-15 не реагируют (не поддаются воздействию) ни на TAXOL®, ни на стандартную применительно к раку ободочной кишки обработку 5-флуорацилом, эти данные показывают, что эпотилон В действительно может применяться для лечения опухолей, которые не поддаются известным стандартным методам лечения. С другой стороны, он также является более эффективным в тех случаях, когда оказывают действие и стандартные обработки. В качестве предпочтительной схемы введения лекарства может быть предложена схема, предусматривающая введение 4 мг/кг каждые 2 недели (регресс опухоли, нет случаев гибели животных). Такая обработка даже является более предпочтительной по сравнению с обработкой 5-флуорацилом, при которой не обнаруживали регресса, но из 7 животных выживали только 4.

Фрагменты опухоли весом приблизительно 25 мг имплантировали в левый бок каждой из самок лишенных волосяного покрова мышей (n=7 в группе); в противоположный бок подкожно вводили пеллетированный эстроген. Обработки начинали в день 14 после трансплантации. Эпотилон В вводили путем в.в. инъекции в дозе 4 мг/кг, либо однократно, либо один раз в неделю (дни 14, 21 и 28), либо каждую вторую неделю (дни 14 и 28). 5-Флуорацил вводили в.в. в дозе 75 мг/кг в дни 14, 21, 28. Представленные данные получены для животных, выживших к 32 дню (четвертый день после последней обработки). Противоопухолевую активность выражали в виде Т/С% (среднее увеличение объемов опухолей у обработанных животных, деленное на среднее увеличение объемов опухолей у контрольных животных, умноженное на 100). Регресс опухоли (%) оценивали путем сравнения конечного среднего объема опухоли со средним объемом опухоли в начале эксперимента. Изменения (Δ) объема опухоли представляют собой объем опухоли в последний день обработки минус объем опухоли в первый день обработки.

Пример 11: Фаза 1 исследования по определению дозы эпотилона В, применяемого индивидуально путем введения один раз в неделю взрослым пациентам, имеющим развитые плотные опухоли

Количество центров 2

Цели

Основная: определение характеристик профилей безопасности, включая как острую, так и кумулятивную токсичность, и определение максимальной переносимой дозы эпотилона В, применяемого индивидуально путем внутривенной инфузии один раз в неделю взрослым пациентам, имеющим развитые плотные опухоли, не поддающиеся стандартной системной терапии, или для которых не существует стандартной системной терапии.

Дополнительная:

1. Определение фармакокинетических характеристик эпотилона В, применяемого индивидуально путем внутривенной инфузии один раз в неделю этой группе пациентов; полученные данные могут быть использованы в совокупности с фармакодинамическими данными (например, с гематологическими параметрами) для выявления корелляций фармакокинетических/фармакодинамических параметров (ФК/ФД), которые требуются для оценки безопасности и эффективности;

2. Получение предварительных доказательств противоопухолевой активности эпотилона В, применяемого индивидуально путем внутривенной инфузии один раз в неделю указанной группе пациентов.

3. Нахождение корелляций между уровнями лекарства в опухоли у взрослых пациентов, имеющих развитые плотные опухоли, которым вводят эпотилон В индивидуально путем внутривенной инфузии один раз в неделю, и уровнями, эффективность применения которых установлена на доклинических моделях.

4. Получение информации о фармакогенетике опухолей с использованием образцов биопсии опухолей, пригодных и доступных до и после терапевтического вмешательства, для того, чтобы идентифицировать гены, кореллирующие с эффективностью и реакцией; это может быть установлено либо с помощью генетического анализа экспрессии отдельного гена (например, уровня экспрессии протеинов р53, Мар4 и mdr1), либо с помощью технологии генных чипов.

Описание опыта

Опыт представлял собой открытое исследование с использованием возрастающих доз, предназначенное для определения безопасности, фармакокинетических и фармакодинамических характеристик эпотилона В, вводимого путем внутривенной инфузии один раз в неделю взрослым пациентам, имеющим плотные опухоли, не поддающиеся стандартной системной терапии, или для которых не существует стандартной системной терапии.

Период лечения включал до 24 доз, вводимых еженедельно. Лечение пациентов, у которых обнаруживали неприемлемый уровень токсичности или прогрессивное развитие болезни, прекращали до завершения опыта. Пациенты, у которых достигалась полная или частичная реакция, или пациенты, у которых состояние болезни стабилизировалось после введения 24 доз, продолжали дальнейшее лечение согласно протоколу продления по решению врача-исследователя и после разрешения спонсора. Отдельные пациенты подвергались дополнительным циклам лечения до тех пор, пока не обнаруживали прогрессивное развитие болезни или неприемлемый уровень токсичности.

Для определения МПД применяли стандартный протокол фазы 1 с включением в группу 3-6 пациентов. Увеличение дозы осуществляли согласно модифицированной схеме Фибоначчи и оно основывалось на уровнях токсичности, выявленных для первых 4 еженедельных доз для каждой группы пациентов. Начальная доза составляла 0,1 мг/м², последующие дозы были следующими: 0,2, 0,3, 0,5, 0,7 и 0,9 мг/м².

В качестве предварительной величины МПД принимали дозу, непосредственно предшествующую дозе, для которой по крайней мере у двух из 3-6 пациентов выявляли ограничивающую дозу токсичность (ОДТ). Затем в группу, обрабатываемую МПД, включали дополнительных пациентов, доводя общее число до 12, с целью подтверждения величины МПД на основе дальнейших оценок безопасности, фармакокинетических и фармакодинамических профилей эпотилона В.

Все уровни токсичности оценивали согласно пересмотренным Общим Критериям Токсичности Национального института рака США. В протоколе определяли величину ОДТ; однако, как правило, природа ОДТ такова, что она считается неприемлемой даже в случае неизлечимых плотных опухолей.

Пациенты

Критерии включения

Для включения в группу для исследования требовалось выполнение следующих условий:

1. Возраст пациентов мужского или женского пола ≥ 18 лет.

2. Установленное на основе гистологического анализа наличие плотной опухоли, не поддающейся стандартной системной терапии и еще одной дополнительной системной терапии, или для которой не существует стандартной системной терапии.

3. Наличие по крайней мере одного измеряемого, оцениваемого или неоцениваемого количественно признака болезни согласно критериям реакции плотной опухоли Юго-Восточной онкологической группы (SWOG), включая величину маркера опухоли, превышающую установленный нормальный верхний предел.

4. Женщины, способные иметь детей, должны иметь перед началом исследований отрицательную реакцию в тесте на беременность с использованием сыворотки β-HCG. Пациенты мужского и женского пола, способные иметь детей, должны дать согласие применять эффективные противозачаточные средства в течение периода исследований и в течение 3 месяцев после прекращения приема лекарства.

5. Балл (оценка) работоспособности согласно критериям Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ) ≤ 2.

6. Ожидаемая продолжительность жизни по крайней мере 3 месяца.

7. Письменное согласие, полученное до проведения какой-либо процедуры отбора.

Критерии исключения

Пациенты не допускались к участию в исследовании, если выполнялось хотя бы одно из следующих условий:

1. Пациенты женского пола, беременные или кормящие грудью. Постменопаузальные женщины должны не иметь месячных по крайней мере в течение 12 месяцев для подтверждения того, что они не могут иметь детей.

2. Пациент имел серьезную и/или неизлеченную клиническую болезнь (например, неконтролируемый диабет, застойную сердечную недостаточность, инфаркт миокарда, произошедший менее чем за 6 месяцев до начала эксперимента, хроническую почечную болезнь или неизлеченное инфекционное заболевание в острой форме).

3. Пациент имел выявленные метастазы в головном мозге.

4. Пациент имел острую или выявленную хроническую болезнь печени (например, хронический активный гепатит, цирроз).

5. Пациент имел установленный диагноз заражения вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ).

6. Пациент получал какой-либо агент, предназначенный для исследования, менее чем за 30 дней до начала эксперимента.

7. Пациент подвергался химиотерапевтическому лечению менее чем за 4 недели до начала эксперимента (6 недель для нитрозомочевин или миомицина С).

8. Пациент подвергался лечению с помощью облучения менее чем за 4 недели до начала эксперимента.

9. Пациент ранее подвергался радиотерапевтическому лечению, затрагивавшему ≥ 25% костного мозга.

10. Пациент подвергался обширному хирургическому вмешательству менее чем за 2 недели до начала эксперимента.

11. Имелись сведения о том, что пациент не соблюдал медицинских режимов.

12. Пациент имел нарушения функций печени, почек или гематологические нарушения, характеризующиеся следующими лабораторными параметрами:

уровень тромбоцитов <100·10⁹ /л;

абсолютный уровень нейтрофилов (ANC) <1,5·10⁹ /л;

уровень ALT в сыворотке (SGPT)>2,5× установленный нормальный верхний предел (IULN);

общий уровень билирубина в сыворотке >1,5× IULN;

уровень креатинина в сыворотке >1,5× IULN.

13. Пациент вылечился от другой первичной злокачественной болезни менее пяти лет назад или в случае немеланоматозного рака кожи и карциномы шейки матки in situ имел активную стадию болезни.

Размер выборки

Для проведения данного исследования требовалось приблизительно 40 пациентов

Обработки

Эпотилон В поставлялся в отдельных стеклянных пузырьках объемом 2 мл в виде прозрачного бесцветного концентрата для внутривенных инъекций с концентрацией 1 мг/мл. Для получения требуемой конечной концентрации лекарства для инъекций соединение растворяли в полиэтиленгликоле 300 (ПЭГ 300) и разбавляли 50-100 мл 0,9%-ного хлорида натрия для инъекций с чистотой, соответствующей USP. Его вводили каждые 7 дней в виде однократных внутривенных инфузий в течение 30 мин.

Начальный уровень доз составлял 0,1 мг/м². В качестве этой дозы принимали одну треть минимальной токсичной дозы (МТД), установленной для собак, которые представляли собой наиболее чувствительный вид животных, на которых исследовали действие эпотилона В. Как указано выше, увеличение доз проводили согласно модифицированной схеме Фибоначчи. В исследовании предусматривались задержка обработки, уменьшение доз или отказ от лечения пациентов, у которых возникали гематологические или иные симптомы токсичности, которые, как известно, могут быть обусловлены эпотилоном В. Лечение состояло в еженедельном введении максимум 24 доз, если у пациента не обнаруживалось прогрессивное развитие болезни или неприемлемая токсичность. После завершения введения 24 доз пациенты, у которых достигалась полная или частичная реакция, и пациенты, у которых болезнь стабилизировалась, могли продолжать дальнейшее лечение согласно протоколу продления по решению врача-исследователя и после согласия спонсора.

Безопасность

Показатели

Безопасность эпотилона В определяли на основе физического изучения и оценки витальных характеристик, результатов клинических лабораторных исследований, побочных действий и с учетом применения сопутствующих лекарственных средств. Побочные действия, вызываемые как лекарством, так и случайными факторами, оценивали с использованием пересмотренных Расширенных Общих Критериев Токсичности Национального института рака США.

Эффективность

Показатели

Хотя данная фаза 1 исследования не предназначалась для оценки эффективности, она продемонстрировала активность как функцию скорости реакции подвергавшейся лечению опухоли и продолжительности периода, когда отсутствовало ее прогрессивное развитие, и общей выживаемости.

Основные оценки опухоли включали оптимальное выявление всех измеряемых, оцениваемых и неоцениваемых характеристик болезни. Оценки включали физическое исследование и рентгенограмму грудной клетки и при необходимости компьютеризованную томограмму грудной клетки, живота и таза; сонограмму живота и таза; сцинтиграмму костей в сочетании с рентгенограммой костей и выявлением всех известных костных повреждений; и определение величин маркеров опухоли. Подробные исследования проводили каждые 6 недель и после прекращения обработки.

Объективный статус оценивали в клинических условиях с использованием руководства фирмы Novartis, основанного на критериях реакции SWOG. Все полные и частичные ракции должны были быть подтверждены путем второй оценки по крайней мере через четыре недели. Для каждого пациента вычисляли наилучшую реакцию опухоли с использованием критериев реакции SWOG.

Фармакокинетика

Для циклов 1 и 2 вычисляли и анализировали следующие фармакокинетические параметры: t_max, С_max, λ_z, t_1/2, AUC и R_AR_A представляет собой отношение AUCτ_цикл2/AUCτ_цикл1 и характеризует коэффициент накопления. Предварительная оценка пропорциональности дозы основана на AUC для последней дозы среди групп, обработанных различными дозами. Для получения показателя безопасности находили корреляции ФК/ФД с наблюдаемой токсичностью (например, гемопоэтической).

Фармакодинамика

До проведения терапии и после первого цикла терапии получали образцы биопсии опухолей, если это оказывалось возможным и доступным. Эти образцы биопсии подготавливали для анализа экспрессии их генов с помощью технологии генных чипов, затем отдельно анализировали в отношении статуса р53, экспрессии ДНК МАР4 (белок, ассоциированный с микротрубками) и экспрессии РНК mdr1.

Статистические методы

Выявляли пациентов с вызванными лечением клиническими побочными симптомами (особенно пациентов с проявлениями ограничивающей дозу токсичности) или с отклонениями (возникшими вновь или увеличившимися по сравнению с исходным уровнем) витальных признаков, установленными на основе лабораторных анализов или в результате физических исследований, и оценивали такие случаи количественно. Вычисляли коэффициент аномалий в группе. Определяли коэффициенты целевых реакций (включая как полные, так и частичные реакции) в группе. Для обобщения основных фармакокинетических параметров в группе использовали описательную статистику.

Пример 12: Фаза 1 исследования по определению дозы агента ЕРО906 (эпотилон В). применяемого индивидуально путем введения один раз каждые три недели взрослым пациентам, имеющим развитые плотные опухоли

Количество центров 2

Местоположения Глазго, Великобритания, Ньюкасл, Великобритания

Цели

Основная: определение характеристик профилей безопасности, включая как острую, так и кумулятивную токсичность, и определение максимальной переносимой дозы эпотилона В, применяемого индивидуально путем внутривенной инфузии один раз каждые три недели взрослым пациентам, имеющим развитые плотные опухоли, не поддающиеся стандартной системной терапии, или для которых не существует стандартной системной терапии.

Дополнительная:

1. Определение фармакокинетических характеристик эпотилона В, применяемого индивидуально путем внутривенной инфузии один раз каждые три недели этой группе пациентов; полученные данные могут быть использованы для выявления корреляций фармакокинетических/фармакодина-мических параметров (ФК/ФД), которые требуются для оценки безопасности и эффективности;

2. Получение предварительных доказательств противоопухолевой активности эпотилона В, применяемого индивидуально путем внутривенной инфузии один раз каждые три недели указанной группе пациентов.

3. Нахождение корреляций между уровнями лекарства в опухоли у взрослых пациентов, имеющих развитые плотные опухоли, которым вводят эпотилон В индивидуально путем внутривенной инфузии один раз каждые три недели, и уровнями, эффективность применения которых установлена на доклинических моделях.

4. Получение информации об опухолях с использованием образцов биопсии опухолей, пригодных и поддающихся анализу до и после терапевтического вмешательства, для того, чтобы идентифицировать биологические факторы, коррелирующие с эффективностью и реакцией.

Описание опыта

Опыт представлял собой открытое исследование с использованием возрастающих доз, предназначенное для определения безопасности, фармакокинетических и фармакодинамических характеристик эпотилона В, вводимого путем внутривенной инфузии один раз каждые три недели взрослым пациентам, имеющим плотные опухоли, не поддающиеся стандартной системной терапии, или для которых не существует стандартной системной терапии.

Период лечения включал до шести 21-дневных циклов. Лечение пациентов, у которых обнаруживали неприемлемый уровень токсичности или прогрессивное развитие болезни, прекращали до завершения опыта. Пациенты, у которых достигалась полная или частичная реакция, или пациенты, у которых состояние болезни стабилизировалось после окончания шести циклов, продолжали дальнейшее лечение согласно протоколу продления по решению врача-исследователя и после разрешения спонсора. Отдельные пациенты подвергались дополнительным циклам обработки до тех пор, пока не обнаруживали прогрессивное развитие болезни или неприемлемый уровень токсичности.

При отсутствии ограничивающей дозу токсичности (ОДТ) повышение дозы осуществляли следующим образом:

1. Первое повышение дозы: увеличение дозы на 100% (до тех пор, пока в первой группе не выявляли токсичность степени 2, в этом случае увеличение дозы составляло 25-67%).

2. Повышение дозы при переходе от первой группы ко второй группе после 100%-ного увеличения дозы: увеличение дозы на 67% до тех пор, пока не выявляли токсичность степени 2.

3. Последние повышения дозы после выявления токсичности степени 2: увеличения дозы на 25-67% по договоренности, достигаемой между исследователями и спонсором.

Повышение дозы основывалось на уровнях токсичности, полученных в первом цикле исследований для каждой группы пациентов. В качестве предварительной величины МПД принимали уровень доз, непосредственно предшествующий уровню, для которого по крайней мере у двух из 3-6 пациентов выявляли ограничивающую дозу токсичность (ОДТ). Затем в группу, обрабатываемую предварительной МПД, включали дополнительных пациентов, доводя общее число до 12, с целью подтверждения величины МПД на основе дальнейших оценок безопасности, фармакокинетических и фармакодинамических профилей эпотилона В.

Повышение дозы для одного и того же пациента не допускалось.

Все уровни токсичности оценивали согласно Пересмотренным Критериям Токсичности Национального института рака США. В протоколе определяли величину ОДТ; однако, как правило, величина ОДТ такова, что она считается неприемлемой даже в случае неизлечимых плотных опухолей.

Пациенты

Критерии включения

Для включения в группу для исследования требовалось удовлетворить следующим критериям:

1. Возраст пациентов мужского или женского пола ≥ 18 лет.

2. Установленное на основе гистологического анализа наличие плотной опухоли, не поддающейся стандартной системной терапии, и еще одной дополнительной системной терапии, или для которой не существует стандартной системной терапии.

3. Наличие по крайней мере одного измеримого, оцениваемого или неоцениваемого признака болезни, определяемого согласно критериям реакции плотной опухоли Юго-Восточной онкологической группы (SWOG), включающего величину маркера опухоли, превышающую установленный нормальный верхний предел.

4. Женщины, способные иметь детей, должны иметь перед началом исследований отрицательную реакцию в тесте на беременность с использованием сыворотки P-HCG. Пациенты мужского и женского пола, способные иметь детей, должны дать согласие применять эффективные противозачаточные средства в течение периода исследований и в течение 3 месяцев после прекращения приема лекарства.

5. Балл работоспособности согласно критериям Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ) ≤ 2.

6. Ожидаемая продолжительность жизни по крайней мере 3 месяца.

7. Письменное согласие, полученное до проведения какой-либо процедуры отбора.

Критерии исключения

Пациенты не допускались к участию в исследовании, если выполнялось хотя бы одно из следующих условий:

1. Пациенты женского пола, беременные или кормящие грудью. Постменопаузальные женщины должны не иметь месячных по крайней мере в течение 12 месяцев для подтверждения того, что они не могут иметь детей.

2. Пациент имел серьезную и/или неизлеченную клиническую болезнь (например, неконтролируемый диабет, застойную сердечную недостаточность, инфаркт миокарда, произошедший менее, чем за 6 месяцев до начала эксперимента, хроническую почечную болезнь или неизлеченное инфекционное заболевание в острой форме).

3. Установлено, что пациент имел метастазы в головном мозге.

4. Пациент имел острую или выявленную хроническую болезнь печени (например, хронический активный гепатит, цирроз).

5. Пациент имел установленный диагноз заражения вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ).

6. Пациент получал какой-либо агент, предназначенный для исследования, менее чем за 30 дней до начала эксперимента.

7. Пациент подвергался химиотерапевтическому лечению менее чем за 4 недели до начала эксперимента (6 недель для нитрозомочевин или миомицина С).

8. Пациент подвергался лечению с помощью облучения менее чем за 4 недели до начала эксперимента.

9. Пациент ранее подвергался радиотерапевтическому лечению, затрагивавшему ≥ 25% костного мозга.

10. Пациент подвергался обширному хирургическому вмешательству менее чем за 2 недели до начала эксперимента.

11. Имелись сведения о том, что пациент не соблюдал медицинских режимов.

12. Пациент имел нарушения функций печени, почек или гематологические нарушения, характеризующиеся следующими лабораторными параметрами:

уровень тромбоцитов <100·10⁹ /л;

абсолютный уровень нейтрофилов (ANC)<1,5·10⁹/л;

уровень ALT (SGPT) или ASR (SGOT) в сыворотке >2,5× установленный нормальный верхний предел (IULN) (>5× IULN для пациентами с метастазами в печени);

общий уровень билирубина в сыворотке >1,5× IULN;

уровень креатинина в сыворотке >1,5× IULN.

13. Пациент вылечился от другой первичной злокачественной болезни менее пяти лет назад или в случае немеланоматозного рака кожи и карциномы шейки матки in situ имел активную стадию болезни.

Размер выборки

Для проведения данного исследования требовалось приблизительно 40 пациентов.

Обработки

Эпотилон В поставлялся в отдельных стеклянных пузырьках объемом 2 мл в виде прозрачного бесцветного концентрата для внутривенных инъекций с концентрацией 1 мг/мл. Для получения требуемой конечной концентрации лекарства для инъекций соединение растворяли в полиэтиленгликоле 300 (ПЭГ 300) и разбавляли 50 или 100 мл 0,9%-ного хлорида натрия для инъекций с чистотой, соответствующей USP. Его вводили каждые 21 день в течение шести циклов в виде однократных внутривенных инфузий продолжительностью 30 мин.

Начальный уровень доз составлял 0,3 мг/м². В качестве этой дозы принимали одну треть минимальной токсичной дозы (МТД), установленной для собак, представлявших собой наиболее чувствительный вид животных, на которых исследовали действие эпотилона В. Поскольку при использовании меньшей из 2 доз, которую вводили собакам в GLP-токсикологическом исследовании, а именно дозы 0,1 мг/кг с однократным повторением через 3 недели, не наблюдалось случаев гибели, то величину МТД принимали равной приблизительно 0,05 мг/кг. Используя коэффициент, равный 20, для пересчета дозы для собак, измеряемой в мг/кг, в дозу для людей, измеряемую в мг/м², получали величину начальной дозы по следующей формуле: 1/3·0,05 мг/кг·20 кг/м²=0,3 мг/м².

Повышение доз осуществляли согласно описанной выше схеме.

В исследовании предусматривались задержки обработки, уменьшение доз или отказ от лечения пациентов, у которых возникали гематологические или иные симптомы токсичности, которые, как известно, могут быть обусловлены эпотилоном В. Лечение проводили максимум в течение 6 циклов, если у пациента не обнаруживалось прогрессивное развитие болезни или неприемлемая токсичность. После завершения 6 циклов пациенты, у которых достигался полная или частичная реакция, и пациенты, у которых болезнь стабилизировалась, могли продолжать дальнейшее лечение согласно протоколу продления по решению врача-исследователя и после согласия спонсора.

Показатели безопасности

Безопасность эпотилона В определяли на основе физического изучения и оценки витальных характеристик, результатов клинических лабораторных исследований, побочных действий и с учетом применения сопутствующих лекарственных средств. Побочные действия, вызываемые как лекарством, так и случайными факторами, оценивали с использованием пересмотренных Общих Критериев Токсичности Национального института рака США.

Показатели эффективности

Хотя данная фаза 1 исследования не предназначалась для оценки эффективности, она продемонстрировала активность как функцию скорости реакции подвергавшейся лечению опухоли и продолжительности периода, когда отсутствовало ее прогрессивное развитие, и общей выживаемости. Основные оценки опухоли включали оптимальное выявление всех измеряемых, оцениваемых и неоцениваемых количественно характеристик болезни. Оценки включали физическое исследование и рентгенограмму грудной клетки и при необходимости компьютеризованную томограмму грудной клетки, живота и таза; сонограмму живота и таза; сцинтиграмму костей в сочетании с рентгенограммой костей и выявлением всех известных костных повреждений; и определение величин маркеров опухоли. Подробные исследования проводили через каждые два цикла и после прекращения обработки.

Объективный статус оценивали в клинических условиях с использованием руководства фирмы Novartis, основанного на критериях реакции SWOG. Все полные и частичные реакции должны были быть подтверждены путем второй оценки по крайней мере через четыре недели. Для каждого пациента вычисляли наилучшую реакцию опухоли с использованием критериев реакции SWOG.

Фармакокинетика

Для циклов 1 и 2 вычисляли и анализировали следующие фармакокинетические параметры: t_max, С_max, λ_z, t_1/2, AUC и R_A. R_A представляет собой отношение AUCτ_цикл2/AUCτ_цикл1 и характеризует коэффициент накопления. Предварительная оценка пропорциональности дозы основана на AUC для последней дозы среди групп, обработанных различными дозами. Для получения показателя безопасности находили корреляции ФК/ФД с наблюдаемой токсичностью (например, гемопоэтической).

Фармакодинамика

Для идентификации биологических факторов, коррелирующих с эффективностью и реакцией, до проведения терапии и после первого цикла терапии получали образцы биопсии опухолей, если это оказывалось возможным и доступным.

Статистические методы

Выявляли пациентов с вызванными лечением клиническими побочными симптомами (особенно пациентов с ограничивающей доз токсичностью) или с отклонениями (возникшими вновь или увеличившимися по сравнению с исходным уровнем) витальных признаков, установленными на основе лабораторных анализов или в результате физических исследований, и оценивали такие случаи количественно. Вычисляли коэффициент аномалий в группе. Определяли коэффициенты целевых реакций (включая как полные, так и частичные реакции) в группе. Для обобщения основных фармакокинетических параметров в группе использовали описательную статистику.

Обсуждение результатов:

В целом результаты, представленные в примерах, свидетельствуют о том, что лечение с использованием эпотилона В эффективно:

а) в отношении опухоли, не поддающейся стандартному лечению, например опухоли ободочной кишки, не поддающейся лечению 5-флуорацилом, или не поддающейся лечению с использованием TAXOL®;

б) также в отношении опухоли, не поддающейся лечению с использованием TAXOL®, например рака легких, прежде всего немелкоклеточного рака легких, и/или эпидермоидных опухолей, прежде всего опухолей шейки матки;

в) также в отношении ортотопных опухолей и образования метастазов, например, в опухолях предстательной железы;

г) также в отношении рака молочной железы, где анализы in vitro (пример 3) показали более высокую активность эпотилона В по сравнению с активностью TAXOL®.

Предпочтительные схемы введения лекарства находятся в области от еженедельной обработки дозами от приблизительно 1/3 до 2/3 от МПД до однократной обработки дозой вплоть до МПД, при этом наилучшая схема лечения соответствует введению лекарства от одного раза в неделю до одного раза в три недели.

Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии, и касается лечения рака различной локализации. Для этого вводят эпотилон В с интервалом от одной до шести недель, при этом однократную дозу в мг/м² рассчитывают по формуле: (0,1-Y)·N, где Y=6, а N - количество недель между введением. Способ обеспечивает высокое противоопухолевое действие при хорошей переносимости препарата. 28 з.п. ф-лы, 11 табл.

1. Способ лечения опухолевых заболеваний, включающий введение эпотилона В, отличающийся тем, что эпотилон В вводят с интервалом от одной до шести недель в дозе, которую рассчитывают для людей по формуле

однократная доза (мг/м²)=(от 0,1 до y)×N,

где Y=6;

N - количество недель между введением.

однократная доза (мг/м²)=(от 0,1 до 2,5)×N,

где N имеет вышеуказанное значение.