СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ХАРАКТЕРА ТЕЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОГО КЕРАТИТА Российский патент 2005 года по МПК G01N33/535 G01N33/68 

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и может быть использовано в качестве метода прогнозирования характера течения при бактериальном кератите.

Бактериальные кератиты являются одной из частых причин резкого снижения зрения, слепоты и гибели глаза. В связи с этим прогнозирование возникновения осложненного течения заболевания уже в начале заболевания окажет большую помощь для назначения адекватного лечения с первых дней.

Известны факторы, способствующие возникновению бактериальных кератитов: микротравма роговицы с последующим присоединением гнойной инфекции, мягкие контактные линзы, хронический конъюнктивит, гнойный дактриоцистит, нерациональное применение антибиотиков и кортикостероидов (Михель В.Д., Горгиладзе Т.У. Применение эктерицида в сочетании с импульсным электромагнитным полем при лечении бактериальных кератитов // Офтальмологический журнал, 1993, №3 с.163-165; Марчук Ю.Ф. Глазные инфекции // Русский медицинский журнал, - 1999, т.7, №1, - с.16-19).

Однако эти факторы были использованы лишь для определения причин возникновения язвы роговицы, не учитывая возможной связи этих данных для прогнозирования дальнейшего заболевания: благоприятного (эпителизация язвы) или осложненного течения (абсцесс роговицы, перфорация роговицы, эндофтальмит, панофтальмит).

Известны способы диагностики тяжелого неблагоприятного течения бактериальных кератитов по иммунологическим показателям крови на основании иммунодефицита по Т- и В-системам иммунитета (Сильченко Т.С., Сакович В.Н., Иммунореактивность при гнойных кератитах. // Офтальмологический журнал, 1990, N 7, с.408-411).

Однако недостатком этого метода диагностики является констатация изменений лишь системных иммунологических показателей без отражения состояния местной резистентности, а именно в слезной жидкости. Следует заметить, что изменения системного иммунитета могут одновременно быть и при других сопутствующих заболеваниях.

Наиболее близким к заявленному способу и выбранным в качестве прототипа является способ прогнозирования эффективности лечения бактериальных кератитов в зависимости от размера язвы и применения кортикостероидов, в котором доказывается, что размеры дефекта роговицы (4,4±2,4 мм) и изначальное применение кортикостероидов являются прогностическими факторами неэффективности лечения (см. R.Y.Kim., К.L.Cooper, L.D.Kelly “Прогностические факторы эффективности лечения язвенных бактериальных кератитов”, 1996).

К причинам, препятствующим достижению указанного ниже технического результата, относятся недостаточная информативность и точность этого метода для диагностики и прогноза характера течения заболевания.

Задачей настоящего изобретения является прогнозирование формы течения бактериальных кератитов: благоприятного с купированием инфекции, очищением и эпителизацией язвенного фокуса и осложненного течения заболевания при активации гнойной инфекции.

Техническим результатом изобретения является определение соотношения иммунологических показателей слезной жидкости, характерных для благоприятного и осложненного течения бактериальных кератитов.

Поставленная задача решается путем исследования слезной жидкости, где, согласно изобретению, определяют содержание интерлейкина 8 (IL-8) и содержание интерлейкина 1 бета (1β), рассчитывают прогностический коэффициент (ПК) путем деления первого показателя на второй по формуле

и по величине ПК ниже 10,0 прогнозируют благоприятное течение, а выше 10,0 - осложненное течение.

Проведенные исследования по патентной и научно-технической информации показали, что предлагаемый способ прогнозирования не известен и не следует явным образом из изученного уровня техники, то есть соответствует критериям “новизна” и “изобретательский уровень”.

Способ осуществляется следующим образом:

Определение интрлейкинов в слезной жидкости проводится методом иммуноферментного анализа с помощью тест-систем “Цитокин” (С.-Петербург). Эти тест-системы основаны на “сендвич”-методе твердофазного иммуноферментного анализа с применением пероксидазы хрена в качестве индикаторного фермента.

Для определения 1L-1β берем планшеты и в первые два вертикальных ряда ячеек вносим по 100 мкл стандартов исследуемого цитокина: А - 0 пг/мл, В - 50 пг/мл, С - 250 пг/мл, D - 500 пг/мл, Е - 1000 пг/мл, Г - 2000 пг/мл. В остальные ячейки вносим по 100 мкл образцов. Образцы и стандарты вносим в рекомендуемые буферы. Планшет инкубируем в течение 1,5 часов при 18-20°C. После инкубации раствор из ячеек удаляем с помощью пипетки. Затем ячейки трижды промываем внесением 300 мкл промывочного раствора в каждую из них. Вторые МКАТ, меченные биотином, вносим по 100 мкл и инкубируем в течение 1,5 часов при непрерывном встряхивании при 18°C.После инкубации раствор из ячеек удаляем с помощью пипетки. Ячейки трижды промываем внесением 300 мкл промывочного раствора в каждую из них. Конъюгат стрептавидина с пероксидазой хрена, разбавленный 1:100 буфером, вносим по 100 мкл во все ячейки планшета и инкубируем при 18°C при непрерывном встряхивании. После инкубации раствор из ячеек удаляем с помощью пипетки. После этого проводим этапы отмывки и окраски.

Для определения 1L-8 первые антитела, разведенные посадочным буфером 1:5000, в количестве 50 мкл иммобилизуем на внутренних поверхностях ячеек гибких планшетов для ИФА.

После иммобилизации антител раствор удаляем и ячейки дважды промываем. В каждую лунку вносим по 100 мкл блокирующего раствора. Планшет инкубируем 1 час при комнатной температуре и непрерывном встряхивании. В первые два горизонтальных ряда ячеек вносим по 50 мкл стандартов: А1В1 - 0 пг/мл 1L-8, А2В2 - 35 пг/мл, А3В3 - 75 пг/мл, А4В4 - 150 пг/мл, А5В5 - 300 пг/мл, А6В6 - 600 пг/мл, А7В7 - 1,2 нг/мл, А8В8 - 2,5 нг/мл, А9В9 - 5 нг/мл 1L-8. В остальные ячейки вносим по 50 мкл образцов. После инкубации раствор из ячеек удаляем и дважды промываем. Вторые антитела к 1L-8 в разведении 1:500 вносят по 50 млк и инкубируем образцы с ними в течение 1 часа при непрерывном встряхивании. Третьи антитела разводятся 1:50 и вносим по 50 мкл в лунку. Инкубируем планшет 1 час при комнатной температуре при непрерывном встряхивании. После этого проводят этапы отмывки и окраски.

Приведенные клинические исследования позволили выделить 2 формы течения бактериальных кератитов:

1. благоприятное с купированием инфекции, успокоением глазного яблока, очищением дна язвы и эпителизацией язвы;

2. неблагоприятное с дальнейшей активацией инфекции, низкой регенерационой способностью роговицы, что приводит к резкому ухудшению зрения и даже слепоте.

У каждого больного были определены прогностические коэффициенты, диапазон которых составил от 8,0 до 16,6. С помощью статистического анализа и корреляционной связи выявлена зависимость формы течения бактериального кератита от величины прогностического коэффициента.

Так, ПК1 от 8,3±0,2 до 9,6±0,3 свидетельствует о благоприятном течении и дает возможность прогнозировать 1 форму течения гнойной язвы роговицы.

ПК2 от 10,2±0,2 до 16,2±0,4 свидетельствует об осложненном течении, т.е. указывает на 2-ю форму заболевания.

Приводим подробные клинические примеры для каждой формы течения ГЯР.

Пример 1. Больная Б., 59 лет (И.Б. N 011585/925 за 2001 г.) поступила в клинику Центра травмы и неотложных состояний органа зрения на 3-ий день после заболевания с диагнозом: Бактериальный кератит левого глаза. В анамнезе - во время прогулки по улице во время сильного ветра попала соринка в левый глаз. Не лечилась. При поступлении: левый глаз - выраженная светобоязнь, слезотечение, обильное слизистое отделяемое на роговице, парацентрально к 5 час расположен инфильтрат в диаметре 2×3 мм в средних слоях, края ровные, в центре сероватый налет. Правый глаз спокоен. Острота зрения: на правом глазу - 1,0, на левом глазу - 0,005 не корригирует. Сразу же назначено консервативное лечение. Иммунологические показатели слезной жидкости, взятые в первый день поступления: OK IL-8=1320 пг/мл; OK IL-1β=162 пг/мл; ПК=8,15. Данное значение ПК свидетельствовало о возможности благоприятного течения. Прогноз подтвердился. После проведенного лечения глаз успокоился, дно язвы очистилось, произошла эпителизация поверхности язвы на 19 день, однако осталось нежное пятно в парацентральной области роговицы. Зрение левого глаза 0,1 с кор - 2,0° 0,5.

Пример 2. Больной С., 52 лет (И.Б. N 001534/124 за 2001) поступил в клинику Центра травмы и неотложных состояний органа зрения на 5-й день после заболевания с диагнозом: Бактериальный кератит левого глаза.

Из анамнеза - причина заболевания не определена. При поступлении: левый глаз раздражен, выраженная смешанная инфекция, светобоязнь, слезотечение, на роговице - язва в парацентральной области книзу в диаметре 3×4 мм, в средних слоях края язвы ровные, дно покрыто налетом серовато-белого цвета. Рефлекс розовый. Острота зрения правого глаза 1,0, левого глаза - 0,005 не кор. Назначено консервативное лечение. Иммунологические показатели в первый день поступления: ОК 1L-8=2630 пг/мл; ОК 1L-1β=172 пг/мл; ПК=15,3.

В данном случае подтвердился прогноз осложненного течения бактериального кератита. Несмотря на интенсивную терапию, на 8 день появилась резкая активация инфекции и гнойное расплавление роговицы, в связи с чем в экстренном порядке было произведено оперативное лечение - сквозная кератопластика.

Заявляемым способом обследовано 38 пациентов, при этом у 3 из них иммунологические показатели слезы не соответствовали форме ожидаемого течения. Это составило 7,9%. Следовательно, прогноз формы течения язвы роговицы на основании показателей концентрации IL-8 и IL-1β слезы в начале заболевания может быть определен с точностью 92,1%.

Таким образом, использование предлагаемого способа прогнозирования течения бактериального кератита дает возможность уже в первые дни заболевания предсказывать форму течения заболевания для назначения дифференцированного, патогенетически обоснованного лечения и своевременного выполнения операции кератопластики. Данный способ может быть применен в любой больнице, где есть иммунологическая лаборатория, поэтому он является доступным, а следовательно, “практически применимым”.

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для прогнозирования характера течения бактериального кератита. В слезной жидкости определяют содержание интерлейкина 8 (IL-8) и содержание интерлейкина 1 бета (IL-1β). Рассчитывают прогностический коэффициент (ПК) путем деления первого показателя на второй по формуле . При величине ПК ниже 10,0 прогнозируют благоприятное течение, а выше 10,0 - неблагоприятное течение заболевания. Способ позволяет повысить точность прогнозирования характера течения бактериального кератита.

Способ прогнозирования характера течения бактериального кератита путем исследования слезной жидкости, отличающийся тем, что определяют содержание интерлейкина 8 (IL-8) и содержание интерлейкина 1 бета (IL-1β) и рассчитывают прогностический коэффициент (ПК) путем деления первого показателя на второй по формуле

и по величине ПК ниже 10,0 прогнозируют благоприятное течение, а выше 10,0 - неблагоприятное течение заболевания.