СЕРЕБРЯНАЯ СОЛЬ 4-ТОЛУИДИДА 6-НИТРО-2-ИМИНОКУМАРИН-3- КАРБОНОВОЙ КИСЛОТЫ, ОБЛАДАЮЩАЯ ПРОТИВОМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2005 года по МПК C07D311/66 A61K31/352 A61P31/00 

Изобретение относится к новым биологически активным соединениям класса кумаринов, конкретно, к серебряной соли 4-толуидида 6-нитро-2-иминокумарин-3-карбоновой кислоты формулы (I)

проявляющей противомикробную активность. Ближайшим аналогом по структуре соединения I является 2,4-ксилидид 2-ацетилиминокумарин-3-карбоновой кислоты (Пат. RU №2193559 С1. Опубл. 27.11.2002. Бюл. №33) формулы

обладающий антикоагулянтной активностью. В качестве эталона сравнения взяты антимикробные препараты - диоксидин (Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Новая волна, 2000, Т.2, с.298-299) и флуконазол (там же с.361-362), широко применяемые в лечебной практике.

Целью изобретения является изыскание новых производных кумаринового ряда, обладающих противомикробной активностью.

Поставленная цель достигается серебряной солью 4-толуидида 6-нитро-2-иминокумарин-3-карбоновой кислоты (II), которую получают взаимодействием 5-нитросалицилового альдегида с 4-толуидидом циануксусной кислоты, образовавшийся при этом 4-толуидид 6-нитро-2-иминокумарин-3-карбоновой кислоты (II), обрабатывают эквивалентным количеством серебра нитрата.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. 4-Толуидид 6-нитро-2-иминокумарин-3-карбоновой кислоты (II). Смесь 1,67 г (0,01 моль) 5-нитросалицилового альдегида, 1,74 г (0,01 моль) 4-толуидида циануксусной кислоты, 5 капель пиперидина кипятят в 15 мл этанола в течение 1 ч. Выпавший после охлаждения реакционной массы осадок отделяют, промывают эфиром, кристаллизуют из диоксана. Получают 2,98 г (92,3%) II. Т. пл. 235-237°С. Найдено, %: С 63,4; Н 4,3; N 13,2. С₁₇Н₁₃N₃O₄. Вычислено, %: С 63,1; Н 4,0; N 13,0.

Пример 2. Серебряная соль 4-толуидида 6-нитро-2-иминокумарин-3-карбоновой кислоты (I). Растворяют 0,32 г (0,001 моль) 4-толуидида 6-нитро-2-иминокумарин-3-карбоновой кислоты в 80 мл смеси изопропанол - диоксан (2:1) при слабом нагревании. К теплому раствору при непрерывном перемешивании реакционной смеси прибавляют 0,17 г (0,001 моль) серебра нитрата в минимальном количестве воды. Выделившийся осадок отфильтровывают, промывают спиртом на фильтре и высушивают при комнатной температуре. Получают 0,25 г (58%) соединения I. Т. пл.>300°С. Найдено, %: С 47,8; Н 3,1; N 10,0. C₁₇H₁₂N₃O₄Ag. Вычислено, %: С 47,4; Н 2,8; N 9,8.

Строение соединений I и II подтверждено данными ИК, ПМР спектроскопии. В ИК-спектрах соединения I имеются полосы при 1670 см^-1 (СО), 3310 см^-1 (CONH). В спектрах ПМР соединения I присутствуют: синглет при 2,30 м.д. (3НСН₃), мультиплет с центром при 7,60 м.д. (Н ароматического кольца).

В ИК-спектре II наблюдаются полосы при 1670 см^-1 (СО), 3330 см^-1 (=NH), 3420 см^-1 (NH).

Заявленное соединение было исследовано на наличие у него противомикробной активности.

Определение бактериостатической активности проводили методом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде (Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М., 2000, с.264-273). Для всех исследуемых соединений были определены МПК в отношении фармакопейных штаммов: S.aureus АТСС 6538-Р, Е.coli ATCC 25922, С. albicans ATCC 885-653, Р. aeruginosa ATCC 9027. Посевы производили в мясопептонный бульон, рН 7,0 с различной концентрацией испытуемых соединений. Культуры выращивали в пробирках на скошенной агаризированной среде (мясопептонный агар). Для определения противомикробной активности использовалась 18-20-часовая культура. Для приготовления рабочей взвеси микробов производили смыв выросшей культуры изотоническим раствором хлорида натрия и устанавливали плотность микробной взвеси по стандарту мутности 5 единиц. Далее из полученной микробной взвеси (500 млн. м. т./мл) готовили рабочий раствор бактерий с концентрацией 5 млн. м. т./мл. Данную взвесь микробов вносили в количестве 0,1 мл в пробирки с серийными разведениями изучаемого препарата. Таким образом, микробная нагрузка при определении ПМА составила 250000 м. т./мл. Изучаемое соединение в количестве 0,05 г растворяли в 5 мл диметилформамида; 1 мл полученного разведения 1:100 соединяли с 4 мл мясопептонного бульона (1:500). Далее готовили ряд серийных разведений соединения с двукратно уменьшающейся концентрацией.

Учет результатов производили через 18-20 ч выдержки контрольных и опытных пробирок в термостате при температуре 37°С. Минимальную подавляющую концентрацию (МПК) устанавливали по отсутствию признаков роста микробов на питательной среде: последняя пробирка с задержкой роста (прозрачный бульон) соответствует МПК препарата в отношении данного штамма. Бактериостатический эффект исследуемых соединений сравнивали с действием диоксидина (Падейская Е.Н., Инф. и антимикроб, терап., 2001, №5, с.150-155). Противогрибковая активность сопоставлялась с действием флуконазола (Rex J.Y., Walsh Т.J., Sobel J.D. et all, Clin. Infect. Dis, 2000, V. 30, №4, р.662-678).

Острую токсичность (LD₅₀) заявленного соединения изучали на белых лабораторных мышах обоего пола массой 19-20 г. Исследуемое соединение вводили однократно в желудок в виде крахмальной слизи в объеме 1580, 2500, 3160 мг/кг соответственно, наблюдение за животными проводили в течение 10 суток. Статистическую обработку результатов проводили по Прозоровскому В.В. (Прозоровский В.В., Прозоровская М.П., Демченко В.М. Фармакол. и токсикол., 1978, №4, с.497-502).

Результаты исследований представлены в таблице.

Как видно из таблицы, соединение I превышает по активности диоксидин по отношению к S. aureus не менее чем в 250 раз, Е. coli - не менее чем в 7,8 раз, Р. aeruginosa - не менее чем в 250 раз. Соединение I также превышает по противогрибковой активности флуконазол по отношению к С. albicans не менее чем в 2,1 раза. Соединение I по классификации Измерова Н.Ф. (Измеров Н.Ф. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном введении, М.: Медицина, 1977, с.197) относится к классу умеренно токсичных веществ.

Таким образом, серебряная соль 4-толуидида 6-нитро-2-иминокумарин-3-карбоновой кислоты I проявляет выраженную противомикробную активность и является умеренно токсичной. Следовательно, заявленное соединение может найти применение в медицине в качестве противомикробного лекарственного средства.

 
 
Противомикробная активность и острая токсичность соединения I
ТаблицаСоединениеS.aureus, мкг/млЕ.coli, мкг/млР.aeruginosa, мкг/лС.albicans, мкг/млLD₅₀, мг/кгI0,250,50,57,82460±230диоксидин62,5-10003,9-62,5125-1000--флуконазол---16-32-

Изобретение относится к новым соединениям класса кумаринов, а именно к серебряной соли 4-толуидида 6-нитро-2-иминокумарин-3-карбоновой кислоты формулы I

которая обладает противомикробным действием и может быть использована в медицине. Технический результат - получение нового соединения, обладающего противомикробной активностью по отношению к S.aureus с МПК 0,25 мкг/мл, Е.coli - 0,5 мкг/мл, C.albicans - 7,8 мкг/мл при острой токсичности соединения ЛД₅₀ 2460±230 мг/кг. 1 табл.

Серебряная соль 4-толуидида 6-нитро-2-иминокумарин-3-карбоновой кислоты формулы I

обладающая противомикробной активностью.