ПРОИЗВОДНЫЕ БОРРЕЛИДИНА И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ИХ ОСНОВЕ Российский патент 2005 года по МПК C07D313/00 C07D405/12 A61K31/335 A61P35/00 

Данное изобретение относится к новым производным боррелидина, точнее к производным боррелидина, полученным в результате превращения карбоксильной группы, находящейся на циклопентановом кольце боррелидина. Кроме того, изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим такие соединения, и к применению данных соединений для получения фармацевтических композиций.

Новые соединения согласно данному изобретению проявляют ценную биологическую активность: они обладают значительным ингибирующим действием в отношении ангиогенеза, а также антиметастатическим действием.

Известно, что ангиогенез представляет собой явление, при котором в организме образуются кровеносные сосуды и образуется новая сосудистая система. Ангиогенез имеет самые разные формы, в зависимости от роста и функции эндотелиальных клеток, но в любом случае он может рассматриваться как определенный вид последовательных реакций. Ангиогенез имеет место в нормальных физиологических условиях как, например, часть процессов развития и репродукции в зародыше, плоде, плаценте, матке и аналогичных органах. Однако, оно может являться и частью патологического процесса, который сопровождает заживление мелких ран, инфекцию, а также рост опухоли, и способствует, таким образом, образованию метастазов опухоли.

Из опубликованных в литературе результатов клинических наблюдений давно известно, что большая часть пациентов с раковыми опухолями умирает в результате развития метастазов. Эта ситуация была улучшена в последние годы за счет применения лучевой терапии и химиотерапии, но достигнутые результаты никоим образом не являются обнадеживающими.

Благодаря данным, полученным при изучении патологических признаков злокачественных заболеваний, в последние годы получило развитие новое направление разработки противоопухолевых лекарственных средств. Это новое направление состоит в том, что разработка новых активных средств теперь направлена, помимо изыскания активных средств, ингибирующих рост тканей опухолей, также и на другие патобиологические явления (иммортализация, метастазы, апоптоз, ангиогенез), ответственные за поддержание злокачественного характера опухоли. Среди указанных явлений особого внимания заслуживает реваскуляризация (образование новых кровеносных сосудов), которая гарантирует непрерывное снабжение кровью растущие опухоли, поскольку при его отсутствии клетки опухоли гибнут. Согласно заключениям, сделанным из биологических исследований опухолей, развитие злокачественных заболеваний может рассматриваться как функция ангиогенеза, и переход предракового периода в инвазивный период и дальнейшая индукция перехода популяции опухолевых клеток из состояния покоя к пролиферации могут быть тесно связаны с образованием кровеносных сосудов.

Таким образом, в настоящее время поиск новых противоопухолевых лекарственных средств направлен на теоретическую разработку и синтез молекул для новых сайтов действия, с помощью которых лечение рака может быть произведено более эффективно, чем прежде.

Среди таких новых молекул приоритет отдается группе антиангиогенных средств, которые посредством ингибирования образования новых сосудов и, следовательно, образования метастазов могут открыть новый этап в терапии опухолевых заболеваний.

Известны некоторые соединения, проявляющие ингибирующее действие в отношении ангиогенеза. Примерами таких соединений, но не ограничиваясь только ими, являются следующие: ангиостатические стероиды [Folkman, J. et al., Science 221, 719 (1993)], подобные кортизону, который ингибирует функцию эндотелиальных клеток; медроксипрогестеронацетат, который ингибирует продуцирование плазминоген-активатора эндотелиальными клетками [Nicosia, R.F. and Ottinetti A., Lab. Invest. 63, 115 (1990)]; фумагиллин, который ингибирует образование канальцев [Ingber, D. et al., Nature 348, 555 (1990)]; полисахаридсульфат (SD-4152), который ингибирует миграцию и размножение эндотелиальных клеток; и ретиноевая кислота, ответственная за дифференциацию и трансформацию эндотелиальных клеток [Tsutomu Oikawa, Kekkan to Naihi 2, 470 (1992)]. Однако в клинической практике данные вещества не проявили себя в качестве ингибиторов ангиогенеза: одни из них вследствие сильного побочного эффекта, другие вследствие недостаточного целевого эффекта.

Первым эффективным в клинических испытаниях ингибитором ангиогенеза стал α -интерферон [Bronty-Boye, D. and Zetter, В.Е., Science 208, 516 (1980); Sidky, Y.A. and Borden, E.C., Cancer Res., 47, 5155 (1987)]. В настоящее время проводятся клинические испытания некоторых соединений, имеющих различную химическую структуру, проявляющих ингибирующее действие в отношении ангиогенеза; такими соединениями являются, например, производные фумагиллина, например, AGM-1470 [Kusaka, M. еt al., Biophys. Res. Comm. 174, 1070 (1991)]; 3-(2,4-диметил-пиррол-5-ил)индолин-2-он (SU-5416), патент США №5792783; 5-метилизоксазол-4-карбоксил-N-[4-(трифторметил)фенил]амид (лефлуномид, SU-101), патент США №5610173; 2(R)-изобутил-3(S)-дигидрокси-N-[2,2-диметил-1(S)-(N-метилкарбамоил)пропил]сукцинамид (маримастат); 3β -[{3-[(4-аминобутил)амино]пропил}амино]-5α -холестан-7,24-диол-24-гидросульфат (скваламин), патент США №5192756; ZD4190 - ингибитор фактора эндотелиального роста сосудов и т.д.

Ранее японскими авторами было описано, что известный боррелидин [химическое название: 2'-(7-циано-8,16-дигидрокси-9,11,13,15-тетраметил-18-оксооксациклооктадека-4,6-диен-2-ил)циклопентан-1'-карбоновая кислота], который является макролидным антибиотиком, включающим 18-членное кольцо [Keller-Schierlein, W., Experientia 22, 476 (1966); Helvetica Chim. Acta 50, 731 (1967); Anderson, B.F. et al., Aust. J. Chem. 42, 717 (1989)], обладает ингибирующим действием в отношении ангиогенеза вследствие способности индуцировать апоптоз клеток, образующих капиллярные канальцы [Wakabayashi, Т. et al., J. Antibiot. 50, 671 (1997)]. Кроме того, было доказано, что он эффективен в отношении клеточных линий WiDr рака толстой кишки человека и РС-3 рака простаты человека (опубликованные Заявки на патент Японии № 8-173167 и 9-227549).

Известно также, что боррелидин проявляет антибактериальное, антивирусное, гербицидное и инсектицидное действие и имеет среднее значение LD₅₀ (Glasby, J.S., Encyclopedia of Antibiotics, p. 145, J. Wiley (editor), 1979).

Из литературы известно и подтверждено исследованиями авторов данной заявки, что активность боррелидина направлена на два биологических явления, способствующих образованию опухоли: пролиферацию, с одной стороны, и образование капилляров эндотелиальными клетками, то есть ангиогенез, с другой стороны. Хотя имеется различие по чувствительности в отношении указанных двух клеточных функций (имеет место примерно пятикратное различие в пользу образования капилляров), такая селективность проявляется в еще меньшей степени, когда рассматривается ингибирование пролиферации клеток, направленное на другие виды клеток.

Данное изобретение относится к разделению двух видов биологического действия на клетки посредством модификации структуры боррелидина. Точнее, изобретение относится к получению новых производных боррелидина превращением карбоксильной группы, расположенной на циклопентановом кольце молекулы боррелидина, которые оказывают в значительной степени более сильное действие на образование капилляров с помощью эндотелиальных клеток, чем на клеточную пролиферацию. А именно, в соответствии с гипотезой авторов данного изобретения, в клинической практике необходимо ингибирующее ангиогенез действующее вещество, которое при этом пролиферацию клеток ингибирует только в более высоких дозах. (В данном описаниии подчеркивается, что селективность известных ингибиторов ангиогенеза преимущественно состоит в том, что они более выраженно ингибируют пролиферацию эндотелиальных клеток, чем деление других клеток организма.)

В результате проведенных исследований авторами данного изобретения неожиданно было установлено, что новые производные боррелидина общей формулы (I)

полностью удовлетворяют указанным выше требованиям.

Такое открытие является неожиданным для квалифицированного в данной области техники специалиста, поскольку в литературе описаны лишь несколько производных боррелидина, т.е. его сложный метиловый эфир и диацетат сложного метилового эфира были получены Anderson К. and Rickards R.W. [Nature 206, 269 (1965)], а также сложный бензиловый эфир и бис-О-(4-нитробензоил)производное сложного метилового эфира боррелидина были описаны Berqer J. еt аl. [Arch. Biochem. 22, 476 (1949), и при этом у указанных выше авторов нет никаких упоминаний о какой бы то ни было биологической активности данных соединений. С другой стороны, согласно литературным данным, ингибирующим действием в отношении ангиогенеза обладают только те производные боррелидина, в которых карбоксильная группа, расположенная на циклопентановом кольце, не является замещенной. Такие соединения описаны, например, в опубликованной заявке на патент Японии №09227549-А (Kokai), где приведены соединения, в которых нитрильная или карбоксильная группа в молекуле боррелидина присоединена к атому углерода в положении 7, и атом водорода или низшая алкильная группа присоединена к атому углерода в положении 9.

Исходя из изложенного выше, данное изобретение относится к соединениям общей формулы (I), где R представляет группу общей формулы -COOR¹, -CONR²R³, -CONR⁴CONR⁴R⁵ или -CH²OR⁶, где

R¹ представляет С_2-6-алкильную группу; C_1-6-алкильную группу, замещенную гидроксильной, амино-, ди(С_1-4-алкил)аминогруппой или 5-8-членной насыщенной азотсодержащей гетероциклической группой (которая может включать, помимо атома азота, атом кислорода или один или два дополнительных атома азота) или 5- или 6-членной азотсодержащей ароматической гетероциклической группой (которая может содержать, помимо атома азота, атом кислорода или один или два дополнительных атома азота); или С_1-6-циклоалкильную группу;

R² и R³ являются одинаковыми или различными и независимо представляют атом водорода или С_1-6-алкильную группу, которая необязательно может быть замещенной атомом галогена, гидроксильной, аминогруппой, С_2-5-алкоксикарбонильной, ди(C_1-4-алкил) аминогруппой или 5-8-членной насыщенной азотсодержащей гетероциклической группой (которая может включать, помимо атома азота, атом кислорода или один или два дополнительных атома азота) или 5- или 6-членной ароматической гомоциклической группой или ароматической гетероциклической группой, содержащей атом кислорода и/или азота; 5- или 6-членную циклоалкильную или гетероарильную группу;

R⁴ и R⁵ являются одинаковыми или различными и независимо представляют атом водорода, C_1-6-алкильную группу, С_3-6-циклоалкильнуго группу или необязательно замещенную фенильную группу;

R⁶ представляет атом водорода, C_1-6-алкильную, С_3-6-циклоалкильную или С_2-6-алифатическую ацильную группу, которая может быть необязательно замещенной атомом галогена, амино-, ди(C_1-6-алкил)амино- или необязательно замещенной фенильной группой; необязательно замещенную карбамоильную группу, необязательно замещенную бензоильную группу или C_1-4-алкилсульфонильную группу

и их таутомерам, сольватам, их смесям и кислотно-аддитивным солям всех указанных соединений.

Следует отметить, что на графическом изображении общей формулы (I) знаки (R) и (S) обозначают абсолютную конфигурацию соответствующих атомов углерода.

В перечисленных значениях заместителей соединений общей формулы (I) определение “алкильная группа” относится к группам как с прямой, так и с разветвленной цепью. Такими группами являются, например, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, изопентил, неопентил, трет-пентил, 1-этилпропил, гексил и изогексил.

Циклоалкильная группа может быть циклопропильной, циклопентильной или циклогексильной группой.

Атом галогена может быть атомом хлора или брома.

В значениях R¹, R² и R³ 5-8-членная насыщенная азотсодержащая гетероциклическая группа может, например, представлять собой, но не ограничиваясь перечисленным, 1-пирролидинил, 1-пиперидинил, гексагидро-1Н-азепин-1-ил, октагидроазоцин-1-ил, пиперазинил и морфолинил.

В значениях R² и R³ С_2-5 алкоксикарбонильная группа может, например, представлять собой (вместе с алкильной группой, при которой она является заместителем), но не ограничиваясь перечисленным, карбометоксиметил, карбо-трет-бутилоксиметил, карбометоксиэтил и карбометоксипропил.

В значениях R² и R³ 5- или 6-членная ароматическая гомоциклическая группа может, например, представлять собой, но не ограничиваясь перечисленным, фенил или замещенный фенил.

В значениях R¹, R² и R³ определения “5- или 6-членная ароматическая гетероциклическая группа, содержащая кислород и/или азот” и “гетероарильная группа”, соответственно, относятся, например, но не ограничиваясь перечисленным, к следующим группам: фурил, пирролил, оксазолил, изоксазолил, имидазолил, пиразолил, 1,2,3-оксадиазолил, 1,2,4-оксадиазолил, 1,3,4-оксадиазолил, 1,2,3-триазолил, 1,2,4-триазолил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил, 1,3,5-триазинил, 2-пиридил, 3-пиридил и 4-пиридил.

В значениях R⁶ определение “С_2-6-алифатическая ацильная группа” относится, например, к ацетильной, пропионильной, бутаноильной, изобутаноильной, втор-бутаноильной, трет-бутаноильной, н-капроильной или изокапроильной группе. Термин “C_1-4-алкилсульфонильная группа” относится, например, к метансульфонильной или этансульфонильной группе. Кроме того, термин “необязательно замещенная карбамоильная группа” относится к карбамоилу, C_1-6-алкилкарбамоилу, С_3-6-циклоалкилкарбамоилу или карбамоилу, замещенному C_2-6-алифатической ацильной группой, которая необязательно может быть замещена атомом галогена и может представлять собой, например, хлорацетилкарбамоил.

Термин “соли”, образованные соединениями общей формулы (I), следует относить к солям, образованным с физиологически приемлемыми неорганическими и органическими кислотами. Такими кислотами, приемлемыми для образования солей, являются, например, хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, фосфорная кислота или серная кислота. В качестве органических кислот могут использоваться, например, муравьиная кислота, уксусная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, янтарная кислота, молочная кислота, лимонная кислота или метансульфоновая кислота.

Преимущественная группа соединений общей формулы (I) в соответствии с данным изобретением включает соединения общей формулы (I), в которых R представляет группу общей формулы –CONR²R³, где R² и R³ представляют атом водорода или один из R² и R³ представляет атом водорода, а другой представляет C_1-6-алкил, замещенный 5- или 6-членной ароматической гетероциклической группой, содержащей атом азота.

Для получения соединений общей формулы (I) могут использоваться реакции этерификации, амидирования и восстановления, которые в основном известны из литературы, например монографии Synthetic Organic Chemistry (Wagner, R.B. and Zook, H.D., Wiley, New York, 1956).

Соединения общей формулы (I) могут быть получены при использовании указанных выше методик, например, в соответствии со следующими способами:

a) взаимодействие хлорангидрида кислоты, образованного из боррелидина с подходящим спиртом или амином,

b) прямая этерификация или амидирование боррелидина в присутствии карбодиимида и основания,

c) переэтерификация сложного эфира, образованного из боррелидина, с подходящим спиртом,

d) взаимодействие сложного метилового эфира боррелидина с подходящим амином,

e) образование активного сложного эфира из боррелидина, например, с N-гидроксибензтриазолом, последующее взаимодействие с подходящим спиртом или амином,

f) образование смешанного ангидрида из боррелидина, например, с эфиром хлормуравьиной кислоты, последующее взаимодействие с подходящим амином,

g) восстановление смешанного ангидрида, образованного из боррелидина с гидридом металла, до спирта,

h) алкилирование и ацилирование, соответственно, спирта, полученного из боррелидина.

Авторами данного изобретения установлено, что новые сложноэфирные производные боррелидина согласно данному изобретению наиболее предпочтительно могут быть получены взаимодействием активного производного, образованного из боррелидина и N-гидроксибензтриазола в присутствии карбодиимида, с подходящим спиртом.

Реакция проводится в инертных растворителях, наиболее предпочтительно в тетрагидрофуране. В данном способе дициклогексилкарбодиимид (DCC) используется в качестве карбодиимида, а диметиламинопиридин (DMAP) используется в качестве основания. Уместно использовать избыток 10 молей спиртового компонента. Реакцию осуществляют при температуре в интервале от 0° С до 50° С, предпочтительно при 20° С при перемешивании в течение 1-8 часов, предпочтительно в течение 3 часов.

Амидные производные боррелидина предпочтительно могут быть получены, например, из производных смешанных ангидриднов, образованных с эфиром хлормуравьиной кислоты. Реакцию можно проводить в инертных растворителях, не содержащих воды, таких как, например, тетрагидрофуран, дихлорметан, четыреххлористый углерод. В качестве связывающих кислоту агентов могут использоваться триэтиламин, пиридин и диметиламинопиридин. Может использоваться 1-10 молей связывающего амина. Реакцию проводят при перемешивании при температуре в интервале от -20° С до +20° С в течение 1-8 часов. В наиболее предпочтительном способе данного изобретения производное смешанного ангидрида образуется в тетрагидрофуране, не содержащем воды, при -20° С, в присутствии триэтиламина, с изобутилхлорформиатом, затем проводят реакцию с 5 молями амина в течение 3 часов.

Спиртовое производное боррелидина наиболее предпочтительно может быть получено из подходящего производного смешанного ангидридна боррелидина восстановлением, осуществляемым с водным комплексным гидридом металла, предпочтительно боргидридом натрия, в тетрагидрофуране при -20° С.

Алкилирование и ацилирование, соответственно, спиртового производного боррелидина может проводиться способом, хорошо известным как таковой в данной области техники.

Для квалифицированного в данной области техники специалиста очевидно, что если при получении соединений общей формулы (I) исходные вещества содержат некоторые заместители с реакционноспособной(ыми) группой(ами), не подлежащей(ими) превращению в данной реакции, то такая(ие) группа(ы) может быть защищена способом, известным в органической химии как таковым, и защитная(ые) группа(ы) удаляется(ются) после проведения данной реакции так, чтобы другие части молекулы не подверглись нежелательному превращению. Для защиты указанных групп могут использоваться защитные группы, обычно используемые для этой цели и хорошо известные в данной области. Такие защитные группы известны, например, из монографии Greene T.W. and Wuts P., “Protective Groups in Organic Synthesis” (John Wiley & Sons, New York, 1991).

Некоторые соединения общей формулы (I) согласно данному изобретению содержат основной атом N, который может использоваться при образовании солей. Такие основания общей формулы (I) можно подвергать превращению с получением (предпочтительно, фармацевтически приемлемых) кислотно-аддитивных солей известным путем, например растворением основания в подходящем органическом растворителе и добавлением подходящей кислоты или раствора кислоты в подходящем органическом растворителе. Полученную таким образом соль выделяют фильтрованием или выпариваем растворителя в вакууме и, если это необходимо, она может быть очищена известным способом, например, перекристаллизацией.

Как указано выше, соединения общей формулы (I) данного изобретения обладают ценной биологической активностью, а именно они проявляют значительный ингибирующий эффект в отношении ангиогенеза с преимущественным селективным действием.

Ингибирующее действие в отношении ангиогенеза соединений по настоящему изобретению определено измерением воздействия на пролиферацию и образование капилляров эндотелиальными клетками. Методы количественной оценки биологической активности описаны ниже.

Изучение влияния на клеточную пролиферацию

Эндотелиальные клетки ECV 304 (DSMZ No. АСС310) получали размножением in vitro в монослойной культуре в культуральной среде RPMI 1640 (SIGMA, США), содержащей 10% фетальную телячью сыворотку (Protein GMK, Godolio, Венгрия). Боррелидин и его новые производные общей формулы (I) данного изобретения добавляли в фазе экспоненциального роста культуры (exponential period of the culture) для получения различных конечных концентраций (0,1-100 мкг/мл). Рост культуры клеток исследовали в аппарате Fluoroscan Ascent FL на основании изменения количества ДНК, измеренного с помощью красителя Hoechst 33342.

Подобное ингибирующее действие боррелидина и соединений формулы (I) данного изобретения на пролиферацию эндотелиальных клеток можно было наблюдать и на культуре клеток, выделенной из пупочного канатика человека (HUVEC).

Изучение влияния на эндотелиальное образование капилляров

Гель базального мембранного белка, полученный из опухоли EHS мышей, который индуцирует образование капилляров, вводили в эндотелиальные клетки ECV 304. Обработку боррелидином и новыми производными боррелидина общей формулы (I) данного изобретения проводили по такой же методике, как описанная в опыте изучения клеточной пролиферации. Степень участия клеток в образовании капилляров определяли с помощью микроскопа и морфометрической программы, и полученные таким образом данные выражали в процентах относительно необработанного контроля.

Результаты

Доказано, что два описанных выше метода подходят для демонстрации того, что новые производные боррелидина согласно изобретению удовлетворяют требованиям селективного ингибирования образования капилляров. А именно, утверждается, что по сравнению с боррелидином ингибирующее действие новых производных общей формулы (I) на клеточную пролиферацию определенно снижается, в то время как ингибирующее действие на процесс формирования капилляров изменяется только в незначительно степени или не изменяется совсем. Показатель относительной селективности для каждого соединения определяли перемножением отношений концентраций действующих веществ, ингибирующих пролиферацию клеток на 50% и ингибирующих образование капилляров. (Отношения получали делением соответствующей концентрации ингибирования нового соединения данного изобретения на соответствующую концентрацию ингибирования боррелидина). Исходя из вычисленного таким образом показателя селективности, по сравнению с боррелидином соединение примера 1 ингибирует образование капилляров в 60 раз, соединение примера 3 в 37 раз, соединение примера 2 в 7,5 раз и соединение примера 4 в 6 раз лучше, чем клеточную пролиферацию.

Результаты количественного определения ингибирования образования капиллярных канальцев подтверждались методом “образования микрососудов” [Parish et al., Cancer Res. 59, 3433 (1999)]. Данный метод позволил изучить образование новых сосудов в культуре ткани, полученной из артерии плаценты человека. Было заявлено, что производные боррелидина данного изобретения значительно ингибируют размножение эндотелиальных клеток и еще лучше - образование канальцев.

На основании полученных результатов испытаний авторы данного изобретения смогли заключить, что новые производные боррелидина данного изобретения воздействуют, главным образом, на клеточный механизм, который способен прерывать образование капилляров из эндотелиальных клеток, но оказывают влияние на пролиферацию таких клеток только при более высокой концентрации. Открытие авторов изобретения, состоящее в том, что в одной и той же культуре эндотелиальных клеток новые производные боррелидина данного изобретения ингибируют образование канальцев при более низкой концентрации, чем пролиферацию, является не только новым, но и неожиданным. Следовательно, селективность проявляется не в различной чувствительности для различных клеток, а она может наблюдаться между межклеточными контактами, управляющими образованием капилляров, и клеточной пролиферацией.

Исследования противоопухолевого действия в системах моделей метастазов

1. В опыте на модели легочной аденокарциномы Льюиса [Holmgren et al., Nature Medicine 1, 149 (1995)] боррелидин в очень небольшой степени ингибирует распространение метастазных узелков после удаления первичной опухоли в легком. С другой стороны, соединение примера 15 весьма значительно ингибирует рост микрометастазов не только при интраперитонеальном, но и при пероральном введении одной пятой токсической дозы.

2. В опыте на модельной тестовой системе, содержащей линию 38 клеток толстой кишки в системе “селезенка - печень” [Dong, Z. et al., J. Natl. Cancer Inst. 86, 913 (1994); Shaheen, R.M. et al., Cancer Research 89, 5412 (1999)] способность клеток аденокарциномы толстой кишки мыши, трансплантированных в селезенку, образовывать метастазы значительно снижается после субтоксического введения соединения примера 15.

Соединения данного изобретения могут использоваться для терапевтических целей сами по себе или, предпочтительно, в форме фармацевтических композиций. Такие композиции включены в объем данного изобретения.

Данные фармацевтические композиции содержат соединения общей формулы (I) в количестве, необходимом для получения нужного эффекта, в сочетании с носителями, наполнителями, разбавителями и/или другими вспомогательными фармацевтическими материалами, известными сами по себе в данной области и обычно используемыми в фармацевтической промышленности.

Например, в качестве носителей, разбавителей и наполнителей, указанных выше, могут использоваться вода, спирты, желатин, лактоза, сахароза, крахмал, пектин, стеарат магния, стеариновая кислота, тальк, различные животные или растительные масла, а также гликоли, такие как пропиленгликоль или полиэтиленгликоль. В качестве вспомогательных фармацевтических материалов могут, например, использоваться консерванты, антиоксиданты, различные природные или синтетические эмульгаторы, диспергирующие или смачивающие агенты, красители, вкусовые добавки, буферы, дезинтеграторы и другие материалы, улучшающие биологическое применение активного ингредиента.

Фармацевтические композиции данного изобретения могут находиться в обычных формах, таких как препараты для перорального введения, которые могут быть получены с использованием перечисленных выше вспомогательных фармацевтических материалов. Такие композиции для перорального введения могут представлять собой твердые фармацевтические формы, такие как таблетки, капсулы, порошки, пилюли, драже или гранулы, или жидкие фармацевтические формы, такие как сиропы, растворы, эмульсии или суспензии. Препараты для ректального введения могут представлять собой свечи. Препараты для парентерального введения, вводимые минуя желудочно-кишечный тракт, могут представлять собой, например, растворы для инъекции или вливания. Кроме того, фармацевтические композиции данного изобретения могут представлять собой препараты для наружного применения, такие как мази, кремы, растворы для компрессов, растворы для промывки глаз, глазные капли и т.д.

Хотя доза соединений данного изобретения, необходимая для получения необходимого фармацевтического действия, зависит, помимо прочего, от индивидуального состояния и возраста пациента и, в конечном счете, определяется врачом, для профилактики и/или лечения заболеваний, в которых необходимо ингибирование связанного с данным заболеванием ангиогенеза, может использоваться доза в интервале от примерно 0,5 мг до примерно 100 мг на 1 кг массы тела. Такая доза может вводиться ежедневно несколькими порциями, принимая во внимание состояния системы поглощения.

Фармацевтические композиции, включающие соединения общей формулы (I) данного изобретения, могут использоваться в дополнение к хирургическому вмешательству и лучевой терапии в качестве вспомогательных средств, прежде всего, для лечения и профилактики роста опухолей и для ограничения образования метастазов рака. Кроме того, они могут использоваться для лечения других заболеваний и состояний, при которых ингибирование, контроль и регрессия образования новых сосудов приводит к благоприятному эффекту; примерами таких заболеваний являются артрит, различные офтальмологические случаи (например, субретинальное образование сосудов), а также псориаз.

Исходя из изложенного выше, данное изобретение предоставляет также способ лечения ангиогенных заболеваний у млекопитающих, вызванных избыточным аномальным ангиогенезом, который включает введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, эффективной дозы соединения общей формулы (I).

Далее соединения данного изобретения и способ их получения иллюстрируются приведенными ниже примерами, которые, однако, не ограничивают объем данного изобретения.

Пример 1

Сложный 2-морфолиноэтиловый эфир боррелидина [(I), R=СОО(СН₂)₂-С₄Н₈NО]

120 мг (0,245 ммоль) боррелидина растворяют при перемешивании при 20° С в 5 мл абсолютного тетрагидрофурана, затем к полученному раствору добавляют 38 мг (0,245 ммоль) 1-гидроксибензтриазола, 30 мг (0,245 ммоль) диметиламинопиридина и 65 мг (0,31 ммоль) дициклогексилкарбодиимида. После перемешивания в течение 30 минут добавляют 0,3 мл (0,32 г, 2,45 ммоль) 4-(2-гидроксиэтил)морфолина. После перемешивания в течение 3 часов при 20° С исходное соединение (R_f=0,43) исчезает и образуется продукт (R_f=0,51), что подтверждается тонкослойной хроматографией (силикагелевая пластина, элюентная система: хлороформ/метанол 95:5). Реакционную смесь упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 50 мл хлороформа, промывают водой (2× 50 мл), сушат над сульфатом натрия и упаривают досуха. Сухой остаток хроматографируют на колонке с силикагелем со смесями хлороформа и этилацетата с возрастающим содержанием этилацетата. Фракции, содержащие продукт, элюированный смесью состава 65:35, объединяют и упаривают досуха. Структуру полученного таким образом маслянистого продукта (133 мг) подтверждают данными спектроскопии (Н-ЯМР, С-ЯМР, TS (масс-спектрометрия с термораспылением).

(Обозначения 1", 2", 3", 5" и 6" в спектральных данных относятся к морфолиновому кольцу)

Характеристические спектральные данные

 ¹H-ЯМР (CDCl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): Н-2: 4,93, д,т; Н-4: 6,20, ддд; Н-5: 6,36, дд; Н-6: 6,82, д; Н-8: 4,10; Н-16: 3,84, м; -O-СН₂-СН₂-: 4,12, м и 4,30, м; -СН₂-СН₂-1": ~2,50; Н₂-2" и Н₂-6": ~2,50; H₂-3" и Н₂-5": 3,68, т.

 ¹³С-ЯМР (СDСl₃; δ (м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): С-2: 76,4, д; С-4: 138,5, д; С-5: 126,9, д; С-6: 143,9, д; С-7: 116,0, с; 7-CN: 118,2, с; С-8: 73,1, д; С-16: 70,0, д; С-18: 172,4, с; 1'-СО-O: 176,0, с; O-CH₂-CH₂: 61,8, т; CH₂-CH₂-1": 57,0, т; С-2",6": 53,8, т; С-3",5": 66,9, д.

TS (EI, 70 eV; m/z): 602, [M]^+• ; 113, [CH₂=CH-морфолинил]^+• ; 100, [СН₂=морфолинил]^+• .

Пример 2

Сложный 2-(2-пиридил)этиловый эфир боррелидина [(I), R=COO(CH₂)₂-C₅H₄N]

К активному сложному 1-гидроксибензтриазоловому эфиру, полученному из 150 мг (0,306 ммоль) боррелидина в соответствии с методикой примера 1, добавляют 0,35 мл (0,38 г, 3,06 ммоль) 2-(2-гидроксиэтил)пиридина. После перемешивания в течение 3 часов при 20° С исходный боррелидин (R_f=0,43) исчезает и образуется продукт (R_f=0,58), что подтверждается тонкослойной хроматографией (силикагелевая пластина, элюентная система: хлороформ/метанол 95:5). Реакционную смесь упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 100 мл хлороформа, промывают водой (3× 30 мл), сушат над сульфатом натрия и упаривают досуха. Сухой остаток хроматографируют на колонке с силикагелем со смесями хлороформа и этилацетата с возрастающим содержанием этилацетата. Фракции, содержащие продукт, элюированный смесью состава 1:1, объединяют и упаривают досуха. Структуру полученного таким образом затвердевающего маслянистого продукта (171 мг) подтверждают данными спектроскопии (Н-ЯМР, С-ЯМР, TS).

(Обозначения 2", 3", 4", 5" и 6" в спектральных данных относятся к морфолиновому кольцу)

Характеристические спектральные данные

 ¹Н-ЯМР (СDСl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): Н-2: 4,90, д,т; Н-4: 6,15, ддд; Н-5: 6,36, дд; Н-6: 6,80, д; Н-8: 4,12; Н-16: 3,85, м; -О-СН₂-СН₂-: 4,35-4,60, м; -СН₂-СН₂-2": 3,10, т; Н-3": 7,17, д; Н-4": 7,62, м; Н-5": 7,15, м; Н-6": 6,52, д.

 ¹³С-ЯМР (CDCl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): С-2: 76,2, д; С-4: 138,6, д; С-5: 126,8, д; С-6: 144,0, д; С-7: 115,9, с; 7-CN: 118,2, с; С-8: 73,1, д; С-16: 70,1, д; С-18: 172,4, с; 1'-СО-O: 176,0, с; О-СН₂-СН₂: 63,8, т; СН₂-СН₂-2": 37,3, т; С-2": 157,9, с; С-3": 123,3, д; С-4": 136,4, д; С-5": 126,9, д; С-6": 149,4, д.

TS (EI, 70 eV; m/z): 594, [М]^+• .

Пример 3

Амид боррелидина [(I), R=CONH₂]

150 мг (0,306 ммоль) боррелидина при перемешивании растворяют в 10 мл абс. тетрагидрофурана, затем при -20° С добавляют 47 мкл (0,33 ммоль) триэтиламина и 44 мкл (0,33 ммоль) изобутилхлорформиата. После перемешивания в течение 30 минут при -20° С соль триэтиламин • НСl отфильтровывают и к раствору добавляют 100 мкл (1,5 ммоль) 25% водного раствора гидроксида аммония. После перемешивания реакционной смеси в течение 3 часов исходный боррелидин (R_f=0,43) исчезает и образуется продукт (R_f=0,33), что подтверждается тонкослойной хроматографией (силикагелевая пластина, элюентная система: хлороформ/метанол 95:5). Значение рН реакционной смеси доводят до 7, добавляя 1-2 капли уксусной кислоты, затем реакционную смесь упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 100 мл хлороформа, промывают водой (2× 30 мл), сушат над сульфатом натрия и раствор упаривают досуха. Сухой остаток хроматографируют на колонке с силикагелем со смесями хлороформа и этилацетата с возрастающим содержанием этилацетата. Фракции, содержащие продукт, элюированный смесью состава 55:45, объединяют и упаривают досуха. Структуру полученного таким образом отверждающегося маслянистого продукта (109 мг) подтверждают данными спектроскопии (Н-ЯМР, С-ЯМР, TS).

Характеристические спектральные данные

 ¹H-ЯМР (СDСl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): Н-2: 4,90, д,т; Н-4: 6,16, ддд; Н-5: 6,30, дд; Н-6: 6,75, д; Н-8: 4,04; 8-ОН: 2,95; Н-16: 3,75, м; MH₂: 5,55-5,72.

 ¹³С-ЯМР (СDСl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): С-2: 76,6, д; С-4: 138,8, д; С-5: 126,8, д; С-6: 144,0, д; С-7: 115,9, с; 7-CN: 118,3, с; С-8: 73,0, д; С-16: 69,8, д; С-18: 172,4, с; 1'-CONH₂: 178,1, с.

TS (EI, 70 eV; m/z): 488, [М]^+• ; 470, [М-Н₂О]^+• ; 452, [М-2Н₂O]^+• , 435, [М-Н₂O-NН₃]^+• ; 417, [М-2Н₂О-NН₃]^+• .

TS (CI, изобутан; m/z): 489, [М+Н]⁺, 471, [М+Н -H₂O]⁺.

Пример 4

2-Морфолиноэтиламид боррелидина [(I), R=CONH(CH₂)₂-C₄H₈NO]

К раствору смешанного ангидрида, полученного в соответствии с методикой примера 3 из 150 мг (0,306 ммоль) боррелидина, добавляют 0,25 мл (1,9 ммоль, 0,25 г) 4-(2-аминоэтил)морфолина. После перемешивания в течение 3 часов исходный боррелидин (R_f=0,43) исчезает и появляется продукт (R_f=0,22), что подтверждается тонкослойной хроматографией (силикагелевая пластина, элюентная система: хлороформ/метанол 95:5). Реакционную смесь упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 100 мл хлороформа, промывают водой (3× 30 мл), сушат над сульфатом натрия и упаривают досуха. Сухой остаток хроматографируют на колонке с силикагелем со смесями хлороформа и этилацетата с возрастающим содержанием этилацетата. Фракции, содержащие продукт, элюированный смесью состава 95:5, объединяют и упаривают досуха. Структуру полученного таким образом затвердевающего маслянистого продукта (172 мг) подтверждают спектроскопическими данными (Н-ЯМР, С-ЯМР, TS).

(Обозначения 2", 3", 5" и 6" в спектральных данных относятся к морфолиновому кольцу)

Характеристические спектральные данные

 ¹H-ЯМР (CDCl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): Н-2: 5,00, д,т; Н-4: 6,20, ддд; Н-5: 6,35, дд; Н-6: 6,80, д; Н-8: 4,10; Н-16: 3,82, м; NH: 6,15, т; NH-CH₂-CH₂-N: 3,20-3,45, м; NH-CH₂-CH₂-N: 2,32, м; Н-2"-6": 2,45, м; Н-3"-5": 3,70, м.

 ¹³С-ЯМР (СDСl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): С-2: 76,5, д; С-4: 139,1, д; С-5: 126,5, д; С-6: 144,1, д; С-7: 115,8, с; 7-CN: 118,3, с; С-8: 73,1, д; С-16: 69,2, д; С-18: 172,2, с; 1'-CO-N: 175,5, с; NH-CH₂-CH₂-N: 57,1, т-36,3, т; С-2",6": 53,3, т; С-3",5": 66,8 т.

TS (EI, 70 eV; m/z): 601, [М]^+• ; 585, [М-H₂O]^+• ; 113,

[СН₂=СН-морфолинил]^+• ; 100, [СН₂=морфолинил]⁺.

Пример 5

Боррелидиновый спирт [(I), R₁=CH₂OH]

Раствор смешанного ангидрида, полученного из 150 мг (0,306 ммоль) боррелидина в соответствии с методикой примера 3, по каплям добавляют к раствору 60 мг (1,5 ммоль) NaBH₄ в 2 мл воды и охлаждают до -20° С. После перемешивания в течение 5 часов исходный боррелидин (R_f=0,43) исчезает и появляется продукт (R_f=0,52), что подтверждается тонкослойной хроматографией (силикагелевая пластина, элюентная система: хлороформ/метанол 95:5). К реакционной смеси добавляют 1-2 капли уксусной кислоты для разложения избытка NaBH₄, затем реакционную смесь упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 100 мл хлороформа, промывают водой (2× 30 мл), сушат над сульфатом натрия и упаривают досуха. Сухой остаток (185 мг) хроматографируют на колонке с силикагелем со смесями хлороформа и этилацетата с возрастающим содержанием этилацетата. Фракции, содержащие продукт, элюированный смесью состава 3:1, объединяют и упаривают досуха. Структуру полученного таким образом затвердевающего маслянистого продукта (117 мг) подтверждают данными спектроскопии (Н-ЯМР, С-ЯМР, TS).

Характеристические спектральные данные

 ¹H-ЯМР (СDСl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): Н-2: 4,92, д,т; Н-4: 6,20, ддд; Н-5: 6,35, дд; Н-6: 6,80, д; Н-8: 4,10; Н-16: 3,87, м; 1'-СН₂-ОН: 3,45 м.

 ¹³С-ЯМР (СDСl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): С-2: 76,7, д; С-4: 139,1, д; С-5: 126,7, д; С-6: 144,1, д; С-7: 115,8, с; 7-CN: 118,3, с; С-8: 73,0, д; С-16: 70,5, д; С-18: 172,3, с; 1'-СН₂-ОН: 66,4, т.

TS (EI, 70 eV; m/z): 475, [М]^+• ; 457, [M-H₂O]^+• ; 439, [М-2Н₂О]^+•

TS (CI, изобутан; m/z): 476, [М+Н]⁺; 458, [М+Н-H₂O]^+• ; 440, [М+Н-2Н₂O]⁺.

Пример 6

N,N'-Дициклогексилкарбамидоамид боррелидина [(I), R=СОN(С₆Н₁₁)СОNНС₆Н₁₁] 98 мг (0,2 ммоль) боррелидина при перемешивании растворяют при 20° С в 2 мл абс. тетрагидрофурана, затем к полученному раствору добавляют 124 мг (0,6 ммоль) дициклогексилкарбодиимида. Реакционную смесь перемешивают при этой же температуре, и ход реакции контролируют с помощью тонкослойной хроматографии. На пластине с нанесенным на нее силикагелем и системой элюирования: хлороформ/метанол 95:5 исходный боррелидин (R_f=0,43) исчезает спустя 5 часов и появляется продукт (R_f=0,74). После этого реакционную смесь упаривают досуха и неочищенный продукт (240 мг) хроматографируют на колонке с силикагелем со смесями хлороформа и этилацетата с возрастающим содержанием этилацетата. Фракции, содержащие продукт, элюированный смесью состава 8:2, объединяют и упаривают досуха. Структуру полученного таким образом затвердевающего маслянистого продукта (105 мг) подтверждают данными спектроскопии (Н-ЯМР, С-ЯМР, TS).

Характеристические спектральные данные

 ¹H-ЯМР (CDCl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): Н-2: 4,93, д,т; Н-4: 6,28, ддд; Н-5: 6,36, дд; Н-6: 6,84, д; Н-8: ~4,10; Н-16: 3,85, м; циклогексильные группы: 3,65 м, 1Н; 4,05, м, 1Н; 1,4-2,1, м, 20Н.

 ¹³С-ЯМР (CDCl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): С-2: 77,0, д; С-4: 139,0, д; С-5: 126,7, д; С-6: 144,1, д; С-7: 115,7, с; 7-CN: 118,2, с; С-8: 73,1, д; С-16: 69,1, д; С-18: 172,7, с; 1'-CO-N: уширенный сигнал, не возникающий из основной (фоновой) линии; N-CO-N: 153,6, с; циклогексильные группы: 50,1, д; 40,9, д (уширенный сигнал); 32,7, т (2С); 32,6, т (2С); 24,7, т; 25,9, т (2С); 26,0, т (2С).

TS (EI, 70 eV; m/z): 695, [М]^+• ; 570, [М-O=С=N-С₆Н₁₁]^+• ; 552, [570-Н₂O]^+• .

TS (CI, изобутан; m/z): 696, [M+H]^+• ; 571, [М+Н-O=C=N-С₆Н₁₁]⁺; 553, [571-Н₂О]⁺; 83, [С₆Н₁₁]⁺.

Пример 7

Бензиламид боррелидина [(I), R=CONHCH₂-C₆H₅]

К раствору смешанного ангидрида, полученного из 200 мг (0,41 ммоль) боррелидина в соответствии с методикой примера 3, добавляют 220 мкл (2 ммоль, 2,14 мг) бензиламина. После перемешивания в течение 3 часов исходный боррелидин (R_f=0,52) исчезает и появляется продукт (R_f=0,69), что подтверждается тонкослойной хроматографией (силикагелевая пластина, элюентная система: хлороформ/метанол 3:7). Реакционную смесь упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 100 мл хлороформа, промывают водой (3× 30 мл), сушат над сульфатом натрия и упаривают досуха. Сухой остаток хроматографируют на колонке с силикагелем со смесями хлороформа и этилацетата с возрастающим содержанием этилацетата. Фракции, содержащие продукт, элюированный смесью состава 8:2, объединяют и упаривают досуха. Структуру полученного таким образом затвердевающего маслянистого продукта (135 мг) подтверждают данными спектроскопии (Н-ЯМР, С-ЯМР, TS).

Характеристические спектральные данные

 ¹H-ЯМР (СDСl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): Н-2: 4,95, д,т; Н-4: 6,24, ддд; Н-5: 6,35, дд; Н-6: 6,79, д; Н-8: 4,10, м; Н-16: 3,80, м; 1'-CONH- 5,98, т; NH-CH₂-Ph: 4,26, дд, и 4,44, дд; Ph: 7,15-7,35, м, 5Н.

 ¹³С-ЯМР (СDСl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): С-2: 76,7, д; С-4: 138,8, д; С-5: 126,7, д; С-6: 144,0, д; С-7: 115,8, с; 7-CN: 118,3, с; С-8: 73,0, д; С-16: 69,8, д; С-18: 172,4, с; 1'-CO-NH-: 175,4, с; NH-CH₂-Ph: 43,8, т; Ph: 138,2, с; 128,7, д; 127,7, д; 127,6, д.

TS (EI, 70 eV; m/z): 578, [М]^+• ; 560, [M-H₂O]^+• ; 542, [M-2H₂O]^+• ; 435, [M-2Н₂О-C₆H₅CH₂NH₂]^+• ; 106, [C₇H₈N]⁺; 91, [С₇Н₇]⁺.

TS (CI, изобутан; m/z): 579, [М+Н]⁺; 561, [М+Н-Н₂O]⁺; 106, [C₇H₈N]⁺; 91, [С₇Н₇]⁺.

Пример 8

2-Пиколиламид боррелидина [(I), R=CONHCH₂-C₅H₄N]

К раствору смешанного ангидрида, полученного из 200 мг (0,41 ммоль) боррелидина в соответствии с методикой примера 3, добавляют 206 мкл (2 ммоль, 216 мг) 2-пиколиламина. После перемешивания в течение 3 часов исходный боррелидин (R_f=0,52) исчезает и появляется продукт (R_f=0,29), что подтверждается тонкослойной хроматографией (силикагелевая пластина, элюентная система: хлороформ/метанол 3:7). Реакционную смесь упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 100 мл хлороформа, промывают водой (3× 30 мл), сушат над сульфатом натрия и упаривают досуха. Сухой остаток хроматографируют на колонке с силикагелем со смесями хлороформа и этилацетата с возрастающим содержанием этилацетата. Фракции, содержащие продукт, элюированный смесью состава 1:1, объединяют и упаривают досуха. Структуру полученного таким образом затвердевающего маслянистого продукта (188 мг) подтверждают данными спектроскопии (Н-ЯМР, С-ЯМР, TS).

Характеристические спектральные данные

 ¹H-ЯМР (СDСl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): Н-2: 5,00, дт; Н-4: 6,20, ддд; Н-5: 6,40, дд; Н-6: 6,80, д; Н-8: 4,15, м; Н-16: 3,82, м; 1'-CONH-: 7,14, т; NН-СН₂-2-Рy: 4,55, д; Рy: 7,20-7,36, м, 2Н; 7,70, тд, 1Н и 8,50, д, 1Н.

 ¹³С-ЯМР (СDСl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): С-2: 76,7, д; С-4: 139,2, д; С-5: 126,5, д; С-6: 144,2, д; С-7: 115,7, с; 7-CN: 118,2, с; С-8: 73,1, д; С-16: 69,3, д; С-18: 172,3, с; 1'-CO-NH-: 175,6, с; NH-CH₂-2Py: 44,3, т; Ру: 156,3, с; 122,8, д; 137,2, д; 122,5, д; 148,8, д.

TS (EI, 70 eV; m/z): 579, [M]^+• ; 561, [М-Н₂О]^+• ; 336, [C₂₀H₂₂N₃O₂]⁺; 109, [С₅Н₄NСН₂NН₃]⁺; 107, [С₆H₇N₂]⁺; 92, [C₆H₆N]⁺.

TS (CI, изобутан; m/z): 580, [М+Н]⁺.

Пример 9

4-Пиколиламид боррелидина [(I), R=CONHCH₂-C₅H₄N]

К раствору смешанного ангидрида, полученного из 200 мг (0,41 ммоль) боррелидина в соответствии с методикой примера 3, добавляют 206 мкл (2 ммоль, 216 мг) 4-пиколиламина. После перемешивания в течение 3 часов исходный боррелидин (R_f=0,43) исчезает и появляется продукт (R_f=0,24), что подтверждается тонкослойной хроматографией (силикагелевая пластина, элюентная система: хлороформ/метанол 95:5). Реакционную смесь упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 100 мл хлороформа, промывают водой (3× 30 мл), сушат над сульфатом натрия и упаривают досуха. Сухой остаток хроматографируют на колонке с силикагелем со смесями дихлорметана и этилацетата с возрастающим содержанием этилацетата. Фракции, содержащие продукт, элюированный смесью состава 15:85, объединяют и упаривают досуха. Структуру полученного таким образом затвердевающего маслянистого продукта (201 мг) подтверждают данными спектроскопии (Н-ЯМР, С-ЯМР, TS).

Характеристические спектральные данные

 ¹H-ЯМР (СDСl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): Н-2: 4,98, дт; Н-4: 6,22, м; Н-5: 6,36, дд; Н-6: 6,78, д; Н-8: 4,10, м; Н-16: 3,78, м; 1'-CONH-: 6,55, т; NH-CH₂-4Py: 4,18, дд и 4,62, дд; Ру: 7,15, д, 2Н и 8,48, д, 2Н.

 ¹³С-ЯМР (СDСl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): С-2: 76,6, д; С-4: 138,7, д; С-5: 126,7, д; С-6: 143,9, д; С-7: 116,0, с; 7-CN: 118,4, с; С-8: 72,9, д; С-16: 69,5, д; С-18: 172,2, с; 1'-CO-NH-: 176,0, с; NH-CH₂-4Py: 42,3, т; Рy: 149,7, д; 122,2, д и 147,7, с.

TS (EI, 70 eV; m/z): 579, [М]^+• ; 561, [М-Н₂О]^+• ; 336, [C₂₀H₂₂N₃O₂]⁺; 107 [C₆H₇N₂]⁺; 93, [С₆H₇N]^+• ; 92, [С₆Н₆N]⁺.

TS (CI, изобутан; m/z): 580, [M+H]⁺; 562, [М+Н-Н₂O]⁺.

Пример 10

2-Фурфуриламид боррелидина [(I), R=СОNНСН₂-С₄Н₃О]

К раствору смешанного ангидрида, полученного из 200 мг (0,41 ммоль) боррелидина в соответствии с методикой примера 3, добавляют 177 мкл (2 ммоль, 194 мг) 2-фурфуриламина. После перемешивания в течение 3 часов исходный боррелидин (R_f=0,52) исчезает и появляется продукт (R_f=0,70), что подтверждается тонкослойной хроматографией (силикагелевая пластина, элюентная система: хлороформ/этилацетат 3:7). Реакционную смесь упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 100 мл хлороформа, промывают водой (3х30 мл), сушат над сульфатом натрия и упаривают досуха. Сухой остаток хроматографируют на колонке с силикагелем со смесями дихлорметана и этилацетата с возрастающим содержанием этилацетата. Фракции, содержащие продукт, элюированный смесью состава 65:35, объединяют и упаривают досуха. Структуру полученного таким образом затвердевающего маслянистого продукта (105 мг) подтверждают данными спектроскопии (Н-ЯМР, С-ЯМР, TS).

Характеристические спектральные данные

ИК: 3357; 2958; 2213: 1723: 1651 см^-1

 ¹Н-ЯМР (СDСl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): Н-2: 4,88, дт; Н-4: - 6,15, м; Н-5: 6,30, дд; Н-6: 6,75, д; Н-8: 4,03, м; Н-16: 3,76, м; 1'-CONH-: 5,86, т; NH-CH₂-2Fu: 4,28, дд и 4,48, дд; Fu: 6/13, дд; 6,25, д и 7,27, д.

 ¹³С-ЯМР (СDСl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): С-2: 76,7, д; С-4: 138,8, д; С-5: 126,7, д; С-6: 144,1, д; С-7: 115,7, с; 7-CN: 118/2, с; С-8: 73,1, д; С-16: 69,6, д; С-18: 172,5, с; 1'-CO-NH-: 175,2, с; NH-CH₂-2Fu: 36,8, т; Fu: 151,0, с; 110,5, д; 107,5, д; 142,2, д.

TS (EI, 70 eV; m/z): 568, [M]^+• ; 550, [М-Н₂О]^+• ; 96, [C₅H₆NO]⁺; 81, [С₅Н₅O]⁺.

TS (CI, изобутан; m/z): 569, [М+Н]⁺; 551, [М+Н-H₂O]⁺; 96, [C₂H₆NO]⁺; 81, [C₅H₅O]⁺.

Пример 11

3-Пиридиламид боррелидина [(I), R=CONH-C₅H₄N]

К раствору смешанного ангидрида, полученного из 200 мг (0,41 ммоль) боррелидина в соответствии с методикой примера 3, добавляют 188 мг (2 ммоль) 3-аминопиридина. После перемешивания в течение 3 часов исходный боррелидин (R_f=0,43) исчезает и появляется продукт (R_f=0,25), что подтверждается тонкослойной хроматографией (силикагелевая пластина, элюентная система: хлороформ/метанол 95:5). Реакционную смесь упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 100 мл хлороформа, промывают водой (3× 30 мл), сушат над сульфатом натрия и упаривают досуха. Сухой остаток хроматографируют на колонке с силикагелем со смесями дихлорметана и этилацетата с возрастающим содержанием этилацетата. Фракции, содержащие продукт, элюированный смесью состава 1:9, объединяют и упаривают досуха. Структуру полученного таким образом затвердевающего маслянистого продукта (144 мг) подтверждают данными спектроскопии (Н-ЯМР, С-ЯМР, TS).

Характеристические спектральные данные

ИК: 3318; 2958; 2212; 1730; 1542 см^-1

 ¹H-ЯМР (СDСl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): Н-2: 4,92, дт; Н-4: 6,20, м; Н-5: 6,35, дд; Н-6: 6,76, д; Н-8: 4,08, д; Н-16: 3,76, м; -CO-NH-3Рy: 7,70, с; Рy: 8,53, д; 8,22-8,36, м, 2Н и 7,25 т.

 ¹³С-ЯМР (СDСl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): С-2: 76,5, д; С-4: 138,5, д; С-5: 126,9, д; С-6: 143,9, д; С-7: 115,9, с; 7-CN: 118,2, с; С-8: 73,1, д; С-16: 70,6, д; С-18: 172,4, с; 1’-СО-МН-: 174,6, с; Ру: 145,1, д; 126,9, с; 140,6, д; 123,7, д; 135,1, д.

TS (EI, 70 eV; m/z): 565, [М]^+• ; 547, [М-Н₂О]^+• ; 322, [C₂₀H₂₂N₃O₂]⁺; 121, [C₆H₅N₂O]⁺; 95, [C₅H₇N₂]⁺.

TS (CI, изобутан; m/z): 566, [М+Н]⁺; 548, [М+Н-Н₂O]⁺; 95, [С₅Н₇N₂]⁺.

Пример 12

Сложный трет-бутиловый эфир боррелидинилглицина [(I), R=CONHCH₂-COOC₄H₉]

К раствору смешанного ангидрида, полученного из 200 мг (0,41 ммоль) боррелидина в соответствии с методикой примера 3, добавляют 280 мг (1,67 ммоль) гидрохлорида сложного трет-бутилового эфира глицина и 235 мкл (1,69 ммоль, 170 мг) триэтиламина. После перемешивания в течение 3 часов исходный боррелидин (R_f=0,52) исчезает и появляется продукт (R_f=0,73), что подтверждается тонкослойной хроматографией (силикагелевая пластина, элюентная система: хлороформ/этилацетат 3:7). Реакционную смесь упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 100 мл хлороформа, промывают водой (3× 30 мл), сушат над сульфатом натрия и упаривают досуха. Сухой остаток хроматографируют на колонке с силикагелем со смесями хлороформа и метанола с возрастающим содержанием метанола. Фракции, содержащие продукт, элюированный смесью состава 96:4, объединяют и упаривают досуха. Структуру полученного таким образом затвердевающего маслянистого продукта (129 мг) подтверждают данными спектроскопии (Н-ЯМР, С-ЯМР, TS).

Характеристические спектральные данные

 ¹Н-ЯМР (СDСl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): Н-2: 4,92, дт; Н-4: 6,22, м; Н-5: 6,38, дд; Н-6: 6,82, д; Н-8: 4,10, дд; Н-16: 3,85, м; -CO-NH-СН₂: 6,15, т; NH-CH₂-CO-: 3,88, дд и 3,99, дд; tBu: 1,48, с, 3Н.

 ¹³С-ЯМР (СDСl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): С-2: 76,7, д; С-4: 139,0, д; С-5: 126,7, д; С-6: 144,2, д; С-7: 115,7, с; 7-CN: 118,2, с; С-8: 73,1, д; С-16: 69,5, д; С-18: 172,5, с; 1'-CO-NH-: 175,5, с; NH-CH₂-CO: 42,2, т; СН₂-СО-О: 169,5, с; O-С-(СН₃)₃: 82,5, с; O-С-(СН₃)₃: 28,0, кв.

TS (EI, 70 eV; m/z): 602, [М]^+• ; 528, [М-С₄H₉ОН]^+• ; 435, [М-2Н₂O-C₅H₁₃NO₂]^+• .

TS (CI, изобутан; m/z): 603, [М+Н]⁺; 547, [М+Н-C₄H₈]⁺; 529, [М+Н-С₄Н₉OН]⁺.

Пример 13

Циклогексиламид боррелидина [(I), R=CONH-С₆Н₁₁]

К раствору смешанного ангидрида, полученного из 200 мг (0,41 ммоль) боррелидина в соответствии с методикой примера 3, добавляют 234 мкл (2 ммоль, 203 мг) циклогексиламина. После перемешивания в течение 3 часов исходный боррелидин (R_f=0,52) исчезает и появляется продукт (R_f=0,68), что подтверждается тонкослойной хроматографией (силикагелевая пластина, элюентная система: хлороформ/этилацетат 3:7). Реакционную смесь упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 100 мл хлороформа, промывают водой (3× 30 мл), сушат над сульфатом натрия и упаривают досуха. Сухой остаток хроматографируют на колонке с силикагелем со смесями хлороформа и метанола с возрастающим содержанием метанола. Фракции, содержащие продукт, элюированный смесью состава 96:4, объединяют и упаривают досуха. Структуру полученного таким образом затвердевающего маслянистого продукта (205 мг) подтверждают данными спектроскопии (Н-ЯМР, С-ЯМР, TS).

Характеристические спектральные данные

ИК: 3344; 2931; 2213; 1717; 1647; 1541 см^-1

 ¹Н-ЯМР (СDСl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): Н-2: 4,94, дт; Н-4: 6,25, м; Н-5: 6,35, дд; Н-6: 6,83, д; Н-8: 4,10, дд; Н-16; 3,88, м; -CO-NH-: 5,35, д; циклогексил-СН: 3,75, м, 1Н.

 ¹³С-ЯМР (CDCl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): С-2: 76,8, д; С-4: 139,0, д; С-5: 126,7, д; С-6: 144,1, д; С-7: 115,7, с; 7-CN: 118,2, с; С-8: 73,2, д; С-16: 69,7, д; С-18: 172,5, с; 1'-CO-NH-: 174,3, с; циклогексил: 50,47, д; 33,3, т; 33,4, т; 25,3, т; 24,7, т; 24,8, т.

TS (EI, 70 eV; m/z): 570, [М]^+• ; 552, [М-Н₂О]^+• ; 534, [М-2Н₂O]^+• ; 327, [C₂₀H₂₇N₂O₂]⁺; 224, [C₁₃H₂₂NO₂]⁺.

TS (CI, изобутан; m/z): 571, [М+Н]⁺; 553, [М+Н-Н₂О]⁺.

Пример 14

1-Этаноламид боррелидина [(I), R=CONH-CH₂CH₂OH]

К раствору смешанного ангидрида, полученного из 200 мг (0,41 ммоль) боррелидина в соответствии с методикой примера 3, добавляют 124 мкл (2 ммоль, 125 мг) этаноламина. После перемешивания в течение 3 часов исходный боррелидин (R_f=0,43) исчезает и появляется продукт (R_f=0,26), что подтверждается тонкослойной хроматографией (силикагелевая пластина, элюентная система: хлороформ/метанол 95:5). Реакционную смесь упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 100 мл хлороформа, промывают водой (3× 30 мл), сушат над сульфатом натрия и упаривают досуха. Сухой остаток хроматографируют на колонке с силикагелем со смесями хлороформа и этилацетата с возрастающим содержанием этилацетата. Фракции, содержащие продукт, элюированный смесью состава 3:7, объединяют и упаривают досуха. Структуру полученного таким образом затвердевающего маслянистого продукта (198 мг) подтверждают данными спектроскопии (Н-ЯМР, С-ЯМР, TS).

Характеристические спектральные данные

ИК: 3350; 2958; 2212; 1719; 1646 см^-1

 ¹H-ЯМР (CDCl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): Н-2: 4,98, дт; Н-4: 6,28, м; Н-5: 6,38, дд; Н-6: 6,83, д; Н-8: 4,10, д; Н-16: 3,82, м; -CO-NH-CH₂: 6,32, т; NH-CH₂-CH₂-: 3,38, м; -CH₂-CH₂-OH: 3,70, м.

 ¹³С-ЯМР (СDСl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): С-2: 76,7, д; С-4: 139,0, д; С-5: 126,6, д; С-6: 144,1, д; С-7: 115,8, с; 7-CN: 118,4, с; С-8: 73,1, д; С-16: 69,4, д; С-18: 172,3, с; 1'-СО-NН-: 176,7, с; NH-CH₂-CH₂: 42,3, т; -СН₂-СH₂-ОН: 61,7, т.

TS (EI, 70 eV; m/z): 532, [М]^+• ; 514, [М-H₂O]^+• ; 496, [М-H₂O]^+• ; 478 [М-3Н₂О]^+• ; 289 [С₁₆Н₂₁N₂O₃]⁺; 271 [C₁₆H₁₉N₂O₂]⁺; 186 [С₂H₁₆NО₂]⁺.

TS (CI, изобутан; m/z): 533, [М+Н]⁺; 515, [М+Н-H₂O]⁺.

Пример 15

3-Пиколиламид боррелидина [(I), R=CONHCH₂-C₅H₄N]

К раствору смешанного ангидрида, полученного из 4,0 г (8,2 ммоль) боррелидина в соответствии с методикой примера 3, добавляют 4,2 мл (41,2 ммоль, 4,46 г) 3-пиколиламина. После перемешивания в течение 3 часов исходный боррелидин (R_f=0,43) исчезает и появляется продукт (R_f=0,24), что подтверждается тонкослойной хроматографией (силикагелевая пластина, элюентная система: хлороформ/метанол 95:5). Реакционную смесь упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 500 мл хлороформа, промывают водой (3× 1500 мл), сушат над сульфатом натрия и упаривают досуха. Сухой остаток хроматографируют на колонке с силикагелем со смесями хлороформа и этилацетата с возрастающим содержанием этилацетата. Фракции, содержащие продукт, элюированный смесью состава 2:8, объединяют и упаривают досуха. К полученному таким образом затвердевающему маслянистому веществу (3,62 г) добавляют 4 мл этилацетата и 20 мл н-гексана, твердое вещество растирают и затем отфильтровывают. Таким образом получают 3,04 г продукта. Т.пл.: 99-105° С.

Элементный анализ для С₃₄Н₄₉N₃O₅ (М: 579,785):

вычислено: С=70,43%, Н=8,52%, N=7,25%;

найдено: С=70,45%, Н=8,88%, N=6,91%.

УФ: λ _max (EtOH)=256 нм (ε =29166).

Структуру продукта подтверждают данными спектроскопии (Н-ЯМР, С-ЯМР, TS).

Характеристические спектральные данные

ИК: 3325; 2958; 2212; 1732; 1651; 1251 см^-1

 ¹Н-ЯМР (СDСl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): Н-2: 4,98, дт; Н-4: 6,22, м; Н-5; 6,39, дд; Н-6: 6,81, д; Н-8: 4,10, д; Н-16: 3,80, м; 1'-CO-NH-: 6,50, т; NH-CH₂-3Py: 4,25, дд и 4,60, дд; Ру: 7,25, дд; 7,63, д и 8,43-8,53, м, 2Н.

 ¹³С-ЯМР (CDCl₃; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): С-2: 76,5, д; С-4: 138,7, д; С-5: 126,7, д; С-6: 144,0, д; С-7: 116,0, с; 7-CN: 118,5, с; С-8: 73,0, д; С-16: 69,7, д; С-18: 172,2, с; 1'-CO-NH-: 175,8, с; NH-CH₂-3Py: 41,1, т; Рy: 148,8, д; 134,2, с; 135,7, д; 123,6, д; 148,6, д.

TS (EI, 70 eV; m/z): 579, [М]^+• ; 561, [М-Н₂О]^+• ; 336, [С₂₀Н₂₂Н₃О₂]; 107, [C₆H₇N₂]⁺; 93, [C₆H₇N]^+• ; 92, [С₆Н₆N]⁺.

TS (CI, изобутан; m/z): 580, [М+Н]⁺.

Получение хлористоводородной соли

350 мг (0,6 ммоль) указанного выше продукта растворяют в 5 мл тетрагидрофурана, затем с перемешиванием при температуре 0°С добавляют 70 мкл 37% водного раствора хлористоводородной кислоты. Растворитель выпаривают под вакуумом и воду удаляют азеотропной отгонкой с бензолом. Сухой остаток растирают с абсолютным эфиром. Твердое вещество отфильтровывают и промывают эфиром. Таким образом получают 330 мг продукта.

Т.пл.: 114-119° С.

Элементный анализ для С₃₄Н₄₉N₃O₅·_{HCl· 2H2О (М=652,246):}

вычислено: С=62,61%, Н=8,35%, N=6,44%, Cl=5,44%,Н₂О=5,52%;

найдено: С=64,16%, Н=8,22%, N=6,44%, Cl=5,67%, H₂O=5,57%.

УФ: λ _max (EtOH)=256 нм (ε =30170).

Характеристические спектральные данные

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): Н-2: 4,85, дт; Н-4: 6,30, м; Н-5: 6,48, дд; Н-6: 6,95, д; Н-8: 4,08, д; Н-16: 3,70, м; 1'-CO-NH-: 8,60, т; NH-СН₂-3Рy: 4,26, дд и 4,54, дд; Рy: 7,92, дд; 8,30, д и 8,68-8,82, м, 2Н.

 ¹³С-ЯМР (ДМСО-d₆; δ [м.д.], δ _тмс=0; мультиплетность): С-2: 75,6, д; С-4: 139,1, д; С-5: 127,5, д; С-6: 143,4, д; С-7: 116,6, с; 7-CN: 119,4, с; С-8: 70,8, д; С-16: 70,0, д; С-18: 171,1, с; 1'-CO-NH-: 175,9, с; NH-CH₂-3Py: 38,2, т; Ру: 143,4, д; 141,5, д; 141,3, д; 139,3, с; 126,6, д.

Данное изобретение относится к новым производным боррелидина общей формулы (I), где R представляет группу общей формулы -COOR¹, -CONR²R³, -CONR⁴CONR²R⁵ или -CH₂OR⁶, где R¹ представляет С_2-6-алкильную группу; C_1-6-алкильную группу, замещенную гидроксильной группой или 5-8-членной насыщенной азотсодержащей гетероциклической группой (которая, помимо атома азота, может включать атом кислорода) или 5- или 6-членной азотсодержащей ароматической гетероциклической группой; или С_3-6-циклоалкильную группу; R² и R³ являются одинаковыми или различными и независимо представляют атом водорода или C_1-6-алкильную группу, которая необязательно может быть замещенной гидроксильной, С_2-5-алкоксикарбонильной или 5-8-членной насыщенной азотсодержащей гетероциклической группой (которая, помимо атома азота, может включать атом кислорода) или 5- или 6-членной ароматической гомоциклической группой или ароматической гетероциклической группой, содержащей атом кислорода и/или азота; 5- или 6-членную циклоалкильную или гетероарильную группу; R⁴ и R⁵ являются одинаковыми или различными и независимо представляют атом водорода или С_3-6-циклоалкильную группу; R⁶ представляет атом водорода, и таутомерам, сольватам данных соединений, их смесям и кислотно-аддитивным солям. Изобретение относится также к фармацевтическим композициям, включающим соединения общей формулы (I) в качестве активного ингредиента. Ингибиторы ангиогенеза данного изобретения ингибируют образование новых сосудов в тканях живых организмов и могут использоваться для профилактики и ингибирования ангиогенеза, возникающего при росте опухоли, и для профилактики образования метастазов опухоли. Технический результат - получение новых производных боррелидина, обладающих ценным физиологическим действием. 2 с. и 6 з.п. ф-лы.

1. Производные боррелидина общей формулы (I)

где R представляет группу общей формулы -COOR¹, -CONR²R³, -CONR⁴CONR⁴R⁵ или -CH₂OR⁶, где R¹ представляет С_2-6-алкильную группу; C_1-6-алкильную группу, замещенную гидроксильной группой или 5-8-членной насыщенной азотсодержащей гетероциклической группой (которая, помимо атома азота, может включать атом кислорода) или 5- или 6-членной азотсодержащей ароматической гетероциклической группой; или С_3-6-циклоалкильную группу;

R² и R³ являются одинаковыми или различными и независимо представляют атом водорода или C_1-6-алкильную группу, которая необязательно может быть замещенной гидроксильной, С_2-5-алкоксикарбонильной, или 5-8-членной насыщенной азотсодержащей гетероциклической группой (которая, помимо атома азота, может включать атом кислорода), или 5- или 6-членной ароматической гомоциклической группой, или ароматической гетероциклической группой, содержащей атом кислорода и/или азота; 5- или 6-членную циклоалкильную или гетероарильную группу;

R⁴ и R⁵ являются одинаковыми или различными и независимо представляют атом водорода или С_3-6-циклоалкильную группу;

R⁶ представляет атом водорода,

и его таутомеры, сольваты, их смеси и кислотно-аддитивные соли всех указанных соединений.