ПИЩЕВОЙ ОБЩЕУКРЕПЛЯЮЩИЙ ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЙ ПРОДУКТ ИЗ ХРЯЩЕВОЙ ТКАНИ ГИДРОБИОНТОВ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 2005 года по МПК A23L1/30 A23L1/325 

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано как общеукрепляющая, питательная добавка, предназначенная для активизации иммунной системы и профилактики заболеваний костно-мышечной системы и соединительной ткани, а также для введения в пищевые продукты, применяемые при заболеваниях опорно-двигательного аппарата.

Известны продукты, полученные из хрящевой и костной тканей животного происхождения (патент RU 2082416), хрящевой ткани птиц (патент US 5529786), хрящевой ткани рыб (патент US 6149946, патент RU 2181292, патент RU 2161002).

Известен продукт (Патент US 6025327, МКИ 7 А 61 К 38/39), представляющий порошкообразный гидролизованный коллаген типа II, рекомендуемый для коррекции пищевого рациона человека при нарушениях структуры хрящевой ткани. Количество используемого продукта составляет 2000-3000 мг/день ежедневно. Препарат не содержит в составе аминосахаров, обладающих хондропротекторными свойствами.

Известен водный экстракт из сушеного акульего хряща (Заявка WO 9836760, МКИ 6 А 61 К 35/32), содержащий ингибиторы и активаторы ангиогенеза. Ингибитор ангиогенеза полезен для профилактики и предотвращения роста новообразований. Активатор ангиогенеза особенно полезен для стимуляции заживления ран.

Известен продукт (Заявка WO 98/44929, МКИ А 61 К 31/70, 38/01), содержащий белки энзиматически гидролизованного коллагена с молекулярной массой 1-300 кДа, которые комбинируют с солями глюкозамина или хондроитинсульфата. Соли глюкозамина и хондроитинсульфата являются синтетическими аналогами и вносятся дополнительно. Продукт рекомендуют для профилактики артроза.

Известны продукты, рекомендуемые при артритах, и способы их получения с использованием коллагена типа II, хондроитинсульфата и глюкозамина (Патент US 6162787, МКИ 7 А 61 К 38/00). Продукты содержат нерастворимый нативный коллаген типа II в гранулированной форме в комбинации с хондроитином, глюкозамином, аскорбатом, бором и магнием. Предложены способы получения нативного коллагена, типа II в гранулированной форме.

Известна питательная добавка (Заявка WO 9945798, МКИ 6 А 23 L 1/304, А 23 J 1/10, А 61 К 35/32), на основе биоорганического кальция. Состав получают из костей животных, предварительно удаляя липиды из костей паровой обработкой или кипячением. Затем кости измельчают для получения суспензии, в которую вводят нейтральную липазу для вторичного удаления липидов и добавляют протеазу для получения первичной ферментативно разложенной жидкости. В эту жидкость вводят папаин для получения вторичной ферментативно разложенной жидкости, которую подкисляют (активируют) с образованием конечного продукта, легко абсорбируемый в кишечнике человека.

Известен продукт, представляющий собой экстракт акульего хряща и способ его получения (Патент РФ 2181292, МКИ А 61 К 35/36), рекомендуемый как противоколлагенолитический, противовоспалительный, ангиогенный и противоопухолевый. Способ получения водного экстракта акульего хряща включает следующие стадии: гомогенизацию хрящевой ткани, экстракцию водой, центрифугирование смеси для отделения экстракта и последующее его фракционирование, с получением молекул с молекулярной массой, меньшей и равной 500 кДа.

Известен способ и продукт с использованием хорды осетровых рыб (Патент US 6149946, МКИ А 61 К 35/60). Продукт представляет экстракт из высушенной в жидком азоте хорды осетровых рыб, которую суспендировали в 0,01 М уксусной кислоте. Продукт предназначен для облегчения симптомов артрита. При артрите, в частности ревматоидном артрите у млекопитающих, в том числе человека, рекомендуют включать в рацион хорду, ее экстракты и их смеси в количестве 1,0 мкг - 1,05 г/день.

Известен способ получения комплексного продукта (Патент RU 2082416, МКИ 6 А 61 К 35/32), содержащего мукополисахариды и коллаген из животного сырья. Способ включает измельчение сырья, гидролиз 2,0-8,8%-ным водным раствором гидроокиси натрия в течение 8-70 ч в зависимости от исходной ткани, гомогенизацию, экстракцию кислотой, выделение и сушку целевого продукта. Экстракцию проводят хлорной кислотой при рН 1,5-2,5, а целевой продукт выделяют из экстракта диализом против дистиллированной воды через полупроницаемую мембрану. Недостатком метода является длительность процесса.

Известен продукт СТИМБОН-3 и способ его получения, описанный в заявке на изобретение РФ 97116345/14, 6 А 61 К 35/32. Продукт содержит костный коллаген, продукты гидролиза гликозаминогликанов костной ткани, костные неколлагеновые белки с молекулярной массой 5-10 кДа, обладающие гипогликемическими свойствами, и новокаин.

Способ получения продукта заключается в том, что из декальцинированного диссоциативно экстрагированного матрикса костной ткани получают коллаген и продукты кислотного гидролиза гликозаминогликанов, из диссоциативного экстракта кости выделяют фракцию белков с относительной молекулярной массой 5-10 кДа нейтральной и основной природы, смешивают в указанной пропорции, добавляют коллаген. Продукт Стимбон-3 рекомендуют при дегенеративно-дистрофических поражениях суставного хряща. Недостатком продукта является дополнительное внесение коллагена.

Известно средство профилактики дегенеративно-дистрофических изменений хрящевой ткани (Патент RU 2201757, МКИ А 61 К 35/32, 38/08, А 61 F 9/00, А 61 Р 19/02), представляющее собой композицию, включающую кальций, фосфор и смеси аминокислот, которая в своем составе имеет уроновые кислоты и гексозамины, при этом композиционный состав на 100 г продукта составляет:

уроновые кислоты 2,8-3,2 г

гексозамины 4,8-5,2 г

кальций 42,0-45,0 г

фосфор 27,0-30,0 г

магний 2,6-2,8 г

аминный азот в виде свободных аминокислот и

олигопептидов остальное

Способ получения включает следующие этапы: декальцинацию костного матрикса, кислотный гидролиз, смешивание компонентов и их высушивание. Гидролизат гликозаминогликанов суставного хряща получают из хрящевой ткани очищенных трахей крупного рогатого скота, для чего их подвергают кислотному гидролизу в соляной кислоте до полного растворения, затем декальцинацией раствором соляной кислоты и осаждением оксидом кальция из очищенных и измельченных костей крупного рогатого скота получают костный минерал, после чего осуществляют смешивание минеральной фазы с гидролизатом хряща и высушивание.

В целом к недостаткам известных способов следует отнести жесткие условия гидролиза, дополнительное введение синтетических компонентов.

Наиболее близким техническим решением по технической сущности и для продукта, и для способа являются продукт и способ его получения, описанные в патенте РФ №2161002, 7 А 23 L 1/325, А 61 К 35/60.

Данный продукт обладает иммуностимулирующей и антиокислительной активностями и представляет собой ферментативный гидролизат хрящевой ткани акул видов Lamna ditropis, Halaerurus buergeri, Galeocerdo cuvier, Squalus acanthias, Somniosus antarcticus, Somniosus paciflcus и содержит свободные аминокислоты в количестве не менее 20 мас.% от массы сухого препарата; в том числе ароматические аминокислоты - триптофан, тирозин и фенилаланин, сумма которых составляет не менее 22% от общего количества аминокислот, диаминокислоты - лизин и аргинин - не менее 19%, дикарбоновые аминокислоты - аспарагиновая и глутаминовая - не менее 17%, а также глицин не менее 6% и таурин не менее 1,5%. В состав продукта входят гиалуроновая кислота в количестве 2,1-5,5 мг/г, не более 15% белка и 0,4-1,5 мг/г свободных аминосахаров от массы сухого препарата.

Недостатком прототипа - данного продукта из хрящевой ткани акул является недостаточно широкий спектр биологической активности, высокое содержание хлорида натрия, низкое содержание гексозаминов.

Процесс получения этого продукта (прототипа) из хрящевой ткани акул видов Lamna ditropis, Halaerurus buergeri, Galeocerdo cuvier, Squalus acanthias, Somniosus antarcticus, Somniosus pacificus включает следующие стадии: сырье - свежие или сухие акульи хрящи - измельчают и экстрагируют 0,9-2,0% раствором хлористого натрия в течение 10-18 ч при 5-10°С, ферментативный гидролиз осуществляют с помощью протеолитических ферментных препаратов при 30-45°С в течение 15-24 ч, инактивацию ферментов осуществляют нагреванием до 70-80°С в течение 15-20 мин, последующее выделение целевого продукта проводят путем фильтрации, сушку проводят сублимационным или распылительным способом. Выход конечного продукта составляет 6-8%.

Ферментативный гидролиз проводят с использованием протеолитического ферментного препарата, выделенного из пилорических придатков дальневосточных лососей (пилорин) с активностью 100-200 Е/г в количестве 1-4% от массы измельченных хрящей, или протеолитического ферментного препарата, выделенного из гепатопанкреаса камчатского краба с активностью 150-250 Е/г в количестве 0,5-3% от массы измельченных хрящей, или с использованием мегатерина с активностью 200-400 Е/г в количестве 1-4% от массы измельченных хрящей.

Недостатками прототипа - способа получения продукта из хрящевой ткани акул является большая продолжительность ферментативного гидролиза, высокое содержание хлорида натрия и низкий выход целевого продукта.

Задача, решаемая изобретениями, - расширение ассортимента пищевых общеукрепляющих профилактических продуктов из хрящевой ткани гидробионтов, получение продукта с более широким спектром биологической активности за счет получения комплексного препарата, дополнительно обладающего противовоспалительной активностью, улучшение вкусовых качеств продукта, содержащего в растворимой форме действующие начала, легко абсорбируемые в кишечнике человека.

Сущность изобретения заключается в том, что пищевой общеукрепляющий профилактический продукт из хрящевой ткани гидробионтов, обладающий иммуностимулирующей, антиокислительной, противовоспалительной активностями, представляет собой ферментативно-кислотный гидролизат из хрящевой ткани гидробионтов и содержит:

свободные гексозамины - 0,8-6,5%,

хондроитинсульфаты - 5,8-7,0%,

растворимый коллаген - 3,8-13,8%,

микро- и макроэлементы, из которых

40-60% - кальция, 5,8-17% - магния - 10-11%,

свободные аминокислоты - 10-18%,

низкомолекулярные ингибиторы

металлопротеиназ с Мм 0,3-10 кДа - 0,1-1,5%,

белок - 42-55%.

Известно, что гексозамины и хондроитинсульфаты являются предшественниками макромолекул суставного хряща, и введение их в пищевой рацион вызывает стимулирующее действие и ускоряет регенерацию хрящевой ткани за счет использования готового строительного материала и способности накапливаться в очагах воспаления. Их активность зависит от наличия в их структуре хотя бы одной отрицательно заряженной карбоксильной или сульфатной группы, обеспечивающей гидрофильность и поверхностно-активные свойства. Низкомолекулярные ингибиторы металлопротеиназ предотвращают повышение активности ферментов, участвующих в воспалительном процессе. Свободные аминокислоты необходимы и полезны для восстановления соединительных тканей. Кальций способствует нормальному росту и развитию организма, служит строительным материалом для костей, необходим для функционирования нервной, мышечной и костной систем. Магний, взаимодействуя с кальцием, влияет на проницаемость мембран, способствуя повышению уровня кальция в организме.

Новым в объекте изобретении - продукте является то, что получен комплексный, обладающий иммуностимулирующей, антиоксидантной, противовоспалительной активностью, очищенный от липидов, в растворимой форме и с пониженным содержанием хлорида натрия пищевой общеукрепляющий профилактический продукт из хрящевой ткани гидробионтов.

Содержание гексозаминов и хондроитинсульфатов определяли спектрофотометрически, согласно методике фармакопейной статьи №42-1286-99. Количество коллагена определяли по методу Крыловой Н.Н. и Лясковской Ю.Н. "Физико-химические методы исследования продуктов животного происхождения". М.: Пищевая пром-ть, 1965, с.49-55. Исследование элементного состава препаратов из хрящевой ткани проводили атомно-абсорбционным методом на пламенно-эмиссионном спектрофотометре Nippon Jarrel Ash модель АА-855. Содержание белка определяли по количеству азотистых веществ (в пересчете на белок) микрометодом по Кьельдалю на приборе "Kjeltec auto 10 SO Analyser". Ингибиторная активность компонентов хрящевой ткани определена Пивненко Т.Н., Клычковой Г.Ю.// Известия ТИНРО, 2001, Т.129, с.74-81.

Антиоксидантную активность определяли по накоплению малонового диальдегида в сыворотке крови в присутствии экзогенной системы окисления. Определялось количество малонового диальдегида, накопленного за сутки инкубации в присутствии 0,25 М [Fe²⁺/Fe³⁺] (катализатор ускоренного окисления) в нормальной антирезусной сыворотке крови человека при концентрации препарата 2 мг/л сыворотки. В качестве контроля использовалась сыворотка с добавлением катализатора окисления. Содержание малонового диальдегида в присутствии продуктов из хрящевой ткани гидробионтов составило 0,014-0,0175 мг/мл сыворотки крови. В контрольном образце, в который был введен катализатор окисления, но отсутствовали препараты из хрящевой ткани, содержание малонового диальдегида составило 0,070-0,072 мг/мл.

Иммуностимулирующее действие продукта определяли и оценивали в следующих тестах:

определение влияния продукта на фагоцитарную активность полиморфно-ядерных лейкоцитов (ПМЯЛ) и макрофагов в эксперименте in vivo и in vitro;

определение действия продукта на число антителообразующих клеток в селезенках мышей, иммунизированных эритроцитами барана;

определение действия продукта на восстановление розеткообразующих клеток из селезенок морских свинок. Сущность метода заключается в выделении клеток, обработке их трипсином для нарушения поверхностной структуры. Далее оценивали способность клеток к восстановлению в присутствии и отсутствии испытуемого препарата из хрящевой ткани гидробионтов. Показатель восстановления розеткообразующих клеток, выраженный в процентном отношении, был взят в качестве основного иммунологического показателя, он составляет для полученных препаратов не менее 15% по сравнению с контролем.

Противовоспалительную активность продуктов из хрящевой ткани гидробионтов определяли на модели инфекционно-аллергического псевдотуберкулезного артрита у кроликов. Экспериментальный артрит вызывали путем антигенного раздражения тканей правого коленного сустава животных, предварительно (за 7 суток) сенсибилизированных культурой псевдотуберкулезного микроба штамм 512. Животных сенсибилизировали подкожным введением в правое бедро суспензии бактерий в дозе 2·10⁷ микробных клеток. Через 7 и 14 суток кроликам в полость коленного сустава в асептических условиях вводили корпускулярный псевдотуберкулезный антиген, доза которого составляла 10⁷-10⁸ м.к. Инфицированные животные были разделены на две группы: опытная группа (20 кроликов) в течение 14 дней получала ежедневно однократно испытуемый препарат, растворенный в дистиллированной воде, перорально в количестве 22,5 мг, контрольная группа (6 кроликов) не получала лечения.

При экспериментально-морфологическом исследовании противовоспалительного действия продукта из хрящевой ткани гидробионтов было замечено, что животные опытной группы активны, прибавляли в весе, имели гладкую, без выпадений шерсть. В контрольной группе наблюдали обильное выпадение шерсти и непостоянную хромоту, округлость конфигурации коленного сустава, мелкоточечные кровоизлияния в суставной сумке, наличие синовиальной жидкости в полости сустава.

При микроскопическом исследовании выявлены изменения в синовиальной оболочке коленного сустава. У животных опытной группы после употребления продукта наблюдалось слабое разволокнение соединительной ткани, незначительная гиперемия сосудов, единичные кровоизлияния, остаточные реактивно-воспалительные изменения. В контрольной группе отмечен отек синовии, набухание коллагеновых волокон, умеренное расширение и полнокровие сосудов, фибриноидное набухание стенок сосудов, диапедезные кровоизлияния. Периваскулярная и слабая диффузная инфильтрация синовиальной оболочки лимфоидно-макрофагальными клетками с примесью полиморфно-ядерных лейкоцитов, эозинофилов и плазматических клеток свидетельствует о развитии воспалительного процесса.

На уровне макроскопических изменений внутренних органов у контрольных животных выявлены синюшная окраска паренхимы легких, некротические очажки по краю и в паренхиме печени. У животных опытной группы наблюдались лишь единичные очажки в стадии репарации.

Микроскопические изменения внутренних органов (печень, селезенка, легкие, лимфатические узлы) свидетельствуют о слабовыраженных некротических изменениях, наличии мелких очажков бронхопневмонии и дистрофических изменений гепатоцитов в контроле. У животных опытной группы вышеуказанные изменения протекали на фоне гиперплазии бронх-ассоциированной лимфоидной ткани, умеренной лимфоидно-макрофагальной инфильтрации в портальных трактах печени, гиперплазии В- и Т-зависимых зон селезенки и лимфатических узлов.

Таким образом, исследование противовоспалительной активности свидетельствуют о том, что продукт из хрящевой ткани гидробионтов оказывает положительный эффект и уменьшает морфологические проявления экспериментального инфекционно-аллергического псевдотуберкулезного артрита у кроликов. Продукт обладает также стимулирующим действием, вызывая улучшение общего состояния животных и развитие тканевых иммуноморфологических реакций.

Сущность изобретения-способа заключается в том, что заявленный пищевой общеукрепляющий профилактический продукт из хрящевой ткани получают следующим образом: сырье - свежую или сухую хрящевую ткань акул, или скатов, или осетровых и лососевых рыб, или головоногих моллюсков (кальмаров, осьминогов) - измельчают и экстрагируют 0,9-2,0% раствором хлористого натрия в течение 10-18 часов при 5-10°С, ферментативный гидролиз осуществляют с помощью протеолитического фермента микробиального или животного происхождения при 30-40°С в течение 7-8 ч, инактивацию фермента проводят нагреванием смеси до 70-80°С в течение 15-20 мин, последующее осаждение липидов осуществляют 0,2-0,3% раствором хитозана в 2-4% уксусной кислоте в течение 9-15 ч при 5-10°С, далее смесь центрифугируют, либо пропускают через фильтромиткалевый фильтр. Далее очищенный ферментативный гидролизат диализируют против дистиллированной воды, с получением раствора, содержащего растворимый коллаген, низкомолекулярные ингибиторы металлопротеиназ с молекулярной массой 0,3-10 кДа, свободные хондроитинсульфаты, смесь аминокислот. Осадок подвергают кислотному гидролизу в 2-4 М соляной кислоте, далее проводят осаждение гексозаминов хлоридом кальция. Осадок, содержащий гексозамины, и диализованный ферментативный гидролизат смешивают и высушивают с получением целевого продукта.

Новым в способе получения пищевого общеукрепляющего профилактического продукта из хрящевой ткани гидробионтов является введение стадий очистки ферментативного гидролизата путем осаждения липидов 0,2-0,3% раствором хитозана в 2-4% уксусной кислоте в течение 9-15 ч при 5-10°С и последующий диализ ферментативного гидролизата против дистиллированной воды, способствующих улучшению вкусовых качеств продукта. Используемые в предлагаемом способе протеолитические ферменты микробиального и животного происхождения, такие как протомекс, панкреатин, пилорин и протеолитический ферментный препарат из гепатопанкреаса камчатского краба, позволяют сохранить в конечном продукте жизненно важные аминокислоты, такие как триптофан, цистеин, а также низкомолекулярные ингибиторы металлопротеиназ, которые при кислотном гидролизе сырья разрушаются, а дополнительно введенный этап кислотного гидролиза осадка позволяет повысить содержание гексозаминов в продукте, и как результат - появление противовоспалительной активности и увеличение выхода конечного продукта.

В предлагаемом способе в отличие от прототипа получают комплексный препарат, содержащий продукты ферментативно-кислотного гидролиза хрящевой ткани осетровых, или лососевых рыб, или акул, или скатов, или головоногих моллюсков (кальмаров, осьминогов), а именно: растворимую форму гексозаминов, хондроитинсульфатов, низкомолекулярных ингибиторов металлопротеиназ с молекулярной массой 0,3-10 кДа, коллагена, Са и Mg, легко абсорбируемых в кишечнике человека.

Сущность изобретения поясняется следующими примерами.

Пример 1.

Пищевой общеукрепляющий профилактический продукт из хрящевой ткани акул представляет собой ферментативно-кислотный гидролизат и содержит:

свободные гексозамины в количестве - 3,45%,

хондроитинсульфаты - 6,8%,

растворимый коллаген - 4,0%,

микро- и макроэлементы, из которых

40% составляет кальций, 6,3% - магний - 11,0%,

свободные аминокислоты - 15,0%,

низкомолекулярные ингибиторы металло-

протеиназ с молекулярной массой 0,3-10 кДа - 0,3%,

белок - 51,45%,

влагу - 8%.

Данный продукт получают следующим образом: 1 кг измельченных хрящей акул экстрагировали в 4 л 1%-ного раствора хлористого натрия в течение 15 часов при 10°С, затем экстракт нагревали до 38°С, доводили рН раствора до 8,0 и добавляли ферментный препарат "Панкреатин" в количестве из расчета в единицах активности на массу исходного сырья, предварительно растворенного в 0,2 л того же раствора, тщательно перемешивали и выдерживали в течение 7 ч при 38°С, перемешивание проводили периодически. Инактивацию фермента проводили нагреванием до 80°С в течение 20 мин. Осаждение липидов осуществляли 0,3% раствором хитозана в 2% уксусной кислоте в течение 10 ч при 8°С. Раствор центрифугировали при 3000 об/мин в течение 30 мин. Далее очищенный ферментативный гидролизат диализировали против дистиллированной воды, с получением раствора, содержащего растворимый коллаген, низкомолекулярные ингибиторы металлопротеиназ с молекулярной массой 0,3-10 кДа, свободные хондроитинсульфаты, смесь аминокислот. Осадок подвергали кислотному гидролизу в 4 М соляной кислоте, далее проводили осаждение гексозаминов хлоридом кальция. Осадок, содержащий гексозамины, и диализированный ферментативный гидролизат смешивали и высушивали сублимационным способом. Выход препарата составил 10,1%.

Антиоксидантная активность составила 20,7%, что соответствует содержанию МДА 0,0145 мг/мл сыворотки.

Индекс восстановления РОК составил 15,6%.

Пример 2.

Пищевой общеукрепляющий профилактический продукт из хрящевой ткани осетровых рыб представляет собой ферментативно-кислотный гидролизат и содержит:

свободные гексозамины в количестве - 3,36%,

хондроитинсульфаты - 6,0%,

растворимый коллаген - 13,5%,

микро- и макроэлементы, из которых

58% составляет кальций, 9,8% - магний - 10,0%,

свободные аминокислоты - 14,0%,

низкомолекулярные ингибиторы металло-

протеиназ с молекулярной массой 0,3-10 кДа - 1,3%,

белок - 43,84%,

влагу - 8%.

Данный продукт получают следующим образом: 1кг измельченных хрящей осетровых рыб экстрагировали в 4 л 2%-ного раствора хлористого натрия в течение 12 часов при 6°С, затем экстракт нагревали до 37°С, доводили рН раствора до 8,0 и добавляли ферментный препарат "Пилорин", из пилорических придатков лососевых рыб, в количестве из расчета в единицах активности на массу исходного сырья, предварительно растворенного в 0,2 л того же раствора, тщательно перемешивали и выдерживали в течение 7 ч при 37°С, перемешивание проводили периодически. Инактивацию фермента проводили нагреванием до 70°С в течение 20 мин. Осаждение липидов осуществляли 0,3% раствором хитозана в 2% уксусной кислоте в течение 15 ч при 5°С. Раствор центрифугировали при 3000 об/мин в течение 30 мин. Далее очищенный ферментативный гидролизат диализировали против дистиллированной воды, с получением раствора, содержащего растворимый коллаген, низкомолекулярные ингибиторы металлопротеиназ с молекулярной массой 0,3-10 кДа, свободные хондроитинсульфаты, смесь аминокислот. Осадок подвергли кислотному гидролизу в 3 М соляной кислоте, далее проводили осаждение гексозаминов хлоридом кальция. Осадок, содержащий гексозамины, и ферментативный гидролизат смешивали и высушивали в сушке барабанного типа. Выход препарата составил 20%.

Антиоксидантная активность составила 25%, что соответствует содержанию МДА 0,0175 мг/мл сыворотки.

Индекс восстановления РОК составил 17,9%.

Пример 3.

Пищевой общеукрепляющий профилактический продукт из хрящевой ткани лососевых рыб представляет собой ферментативно-кислотный гидролизат и содержит:

свободные гексозамины в количестве - 1,1%,

хондроитинсульфаты - 6,0%,

растворимый коллаген - 5,9%,

микро- и макроэлементы, из которых

42% составляет кальций, 6,2% - магний - 10,0%,

свободные аминокислоты - 16,0%,

низкомолекулярные ингибиторы металло-

протеиназ с молекулярной массой 0,3-10 кДа - 0,98%,

белок - 53,02%,

влагу - 7%.

Данный продукт получают следующим образом: 1 кг измельченной хрящевой ткани лососевых рыб экстрагировали в 4 л 0,9%-ного раствора хлористого натрия в течение 18 часов при 5°С, затем экстракт нагревали до 35°С, доводили рН раствора до 8,0 и добавляли ферментный препарат, выделенный из гепатопанкреаса камчатского краба в количестве из расчета в единицах активности на массу исходного сырья, предварительно растворенного в 0,2 л того же раствора, тщательно перемешивали и выдерживали в течение 7,5 ч при 35°С, перемешивание проводили периодически. Инактивацию фермента проводили нагреванием до 80°С в течение 20 мин. Осаждение липидов осуществляли 0,2% раствором хитозана в 3% уксусной кислоте в течение 13 ч при 6°С. Раствор пропускали через фильтромиткалевую ткань. Далее очищенный ферментативный гидролизат анализировали против дистиллированной воды, с получением раствора, содержащего растворимый коллаген, низкомолекулярные ингибиторы металлопротеиназ с молекулярной массой 0,3-10 кДа, свободные хондроитинсульфаты, смесь аминокислот. Осадок подвергли кислотному гидролизу в 2 М соляной кислоте, далее проводили осаждение гексозаминов хлоридом кальция. Осадок, содержащий гексозамины, и диализированный ферментативный гидролизат смешивали и высушивали сублимационным способом. Выход препарата составил 12%.

Антиоксидантная активность составила 20%, что соответствует содержанию МДА 0,014 мг/мл сыворотки.

Индекс восстановления РОК составил 19,5%.

Пример 4.

Пищевой общеукрепляющий профилактический продукт из хрящевой ткани кальмара представляет собой ферментативно-кислотный гидролизат и содержит:

свободные гексозамины в количестве - 0,99%,

хондроитинсульфаты - 6,0%,

растворимый коллаген - 8,4%,

микро- и макроэлементы, из которых

55% составляет кальций, 16% - магний - 10,0%,

свободные аминокислоты - 18,0%,

низкомолекулярные ингибиторы металло-

протеиназ с молекулярной массой 0,3-10 кДа - 1,2%,

белок - 47,41%,

влагу - 8%.

Данный продукт получают следующим образом: 1 кг измельченной хрящевой ткани кальмара экстрагировали в 4 л 1,2%-ного раствора хлористого натрия в течение 10 часов при 7°С, затем экстракт нагревали до 30°С, доводили рН раствора до 8,0 и добавляли ферментный препарат "Протомекс" в количестве из расчета в единицах активности на массу исходного сырья, предварительно растворенного в 0,2 л того же раствора, тщательно перемешивали и выдерживали в течение 8 ч при 30°С, перемешивание проводили периодически. Инактивацию фермента проводили нагреванием до 80°С в течение 20 мин. Осаждение липидов осуществляли 0,2% раствором хитозана в 4% уксусной кислоте в течение 12 ч при 9°С. Раствор пропускали через фильтромиткалевый фильтр. Далее очищенный ферментативный гидролизат диализировали против дистиллированной воды, с получением раствора, содержащего растворимый коллаген, низкомолекулярные ингибиторы металлопротеиназ с молекулярной массой 0,3-10 кДа, свободные хондроитинсульфаты, смесь аминокислот. Осадок подвергли кислотному гидролизу в 2 М соляной кислоте, далее проводили осаждение гексозаминов хлоридом кальция. Осадок, содержащий гексозамины, и диализированный ферментативный гидролизат смешивали и высушивали на сушке барабанного типа. Выход препарата составил 9,75%.

Антиоксидантная активность составила 22,1%, что соответствует содержанию МДА 0,0155 мг/мл сыворотки.

Индекс восстановления РОК составил 22,4%.

Пример 5.

Пищевой общеукрепляющий профилактический продукт из хрящевой ткани осьминога представляет собой ферментативно-кислотный гидролизат и содержит:

свободные гексозамины в количестве - 1,0%,

хондроитинсульфаты - 6,1%,

растворимый коллаген - 9,1%,

микро- и макроэлементы, из которых

51% составляет кальций, 15% - магний - 11,0%,

свободные аминокислоты - 17,0%,

низкомолекулярные ингибиторы металло-

протеиназ с молекулярной массой 0,3-10 кДа - 1,0%,

белок - 47,8%,

влагу - 7%.

Данный продукт получают следующим образом: 1 кг измельченной хрящевой ткани осьминога экстрагировали в 4 л 1,1%-ного раствора хлористого натрия в течение 11 часов при 9°С, затем экстракт нагревали до 33°С, доводили рН раствора до 8,0 и добавляли ферментный препарат, выделенный из гепатопанкреаса камчатского краба, в количестве из расчета в единицах активности на массу исходного сырья, предварительно растворенного в 0,2 л того же раствора, тщательно перемешивали и выдерживали в течение 7,5 ч при 33°С, перемешивание проводили периодически. Инактивацию фермента проводили нагреванием до 80°С в течение 20 мин. Осаждение липидов осуществляли 0,2% раствором хитозана в 3% уксусной кислоте в течение 11 ч при 7°С. Раствор центрифугировали при 3000 об/мин в течение 30 мин. Далее очищенный ферментативный гидролизат диализировали против дистиллированной воды, с получением раствора, содержащего растворимый коллаген, низкомолекулярные ингибиторы металлопротеиназ с молекулярной массой 0,3-10 кДа, свободные хондроитинсульфаты, смесь аминокислот. Осадок подвергли кислотному гидролизу в 2 М соляной кислоте, далее проводили осаждение гексозаминов хлоридом кальция. Осадок, содержащий гексозамины, и диализированный ферментативный гидролизат смешивали и высушивали сублимационным способом. Выход препарата составил 10,5%.

Антиоксидантная активность составила 22,1%, что соответствует содержанию МДА 0,0155 мг/мл сыворотки.

Индекс восстановления РОК составил 19,8%.

Пример 6.

Пищевой общеукрепляющий профилактический продукт из хрящевой ткани ската представляет собой ферментативно-кислотный гидролизат и содержит:

свободные гексозамины в количестве - 6,1%,

хондроитинсульфаты - 6,5%,

растворимый коллаген - 4,9%,

микро- и макроэлементы, из которых

43% составляет кальций, 6,4% - магний - 11,0%,

свободные аминокислоты - 13%,

низкомолекулярные ингибиторы металло-

протеиназ с молекулярной массой 0,3-10 кДа - 0,4%,

белок - 50,1%,

влагу - 8%.

Данный продукт получают следующим образом: 1 кг измельченных хрящей ската экстрагировали в 4 л 1,5%-ного раствора хлористого натрия в течение 16 часов при 8°С, затем экстракт нагревали до 39°С, доводили рН раствора до 8,0 и добавляли ферментный препарат "Пилорин", выделенный из пилорических придатков лососевых рыб, в количестве из расчета в единицах активности на массу исходного сырья, предварительно растворенного в 0,2 л того же раствора, тщательно перемешивали и выдерживали в течение 8 ч при 39°С, перемешивание проводили периодически. Инактивацию фермента проводили нагреванием до 70°С в течение 20 мин. Осаждение липидов осуществляли 0,2% раствором хитозана в 4% уксусной кислоте в течение 9 ч при 10°С. Раствор центрифугировали при 3000 об/мин в течение 30 мин. Далее очищенный ферментативный гидролизат диализировали против дистиллированной воды, с получением раствора, содержащего растворимый коллаген, низкомолекулярные ингибиторы металлопротеиназ с молекулярной массой 0,3-10 кДа, свободные хондроитинсульфаты, смесь аминокислот. Осадок подвергли кислотному гидролизу в 4 М соляной кислоте, далее проводили осаждение гексозаминов хлоридом кальция. Осадок, содержащий гексозамины, и диализированный ферментативный гидролизат смешивали и высушивали сублимационным способом. Выход препарата составил 14%.

Антиоксидантная активность составила 21,4%, что соответствует содержанию МДА 0,015 мг/мл сыворотки.

Индекс восстановления РОК составил 15,9%.

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано как общеукрепляющая, питательная добавка для профилактики заболеваний костно-мышечной системы и соединительной ткани. Предложен общеукрепляющий профилактический продукт и способ его получения. Продукт представляет собой ферментативно-кислотный гидролизат из хрящевой ткани акул, или скатов, или осетровых, или лососевых рыб, или головоногих моллюсков. При этом продукт содержит свободные гексозамины, хондроитинсульфаты, растворимый коллаген, микро- и макроэлементы, свободные аминокислоты и низкомолекулярные ингибиторы металлопротеиназ и белок при определенном количественном соотношении. Способ предусматривает гомогенизацию хрящевой ткани гидробионтов, экстракцию 0,9-2,0% хлористым натрием, ферментативный гидролиз, инактивацию ферментов и отделение конечного продукта. При этом ферментативный гидролиз ведут протеолитическими ферментами микробиального или животного происхождения в течение 7-8 часов. После инактивации ферментов проводят осаждение липидов 0,2-0,3% раствором хитозана в 2-4% уксусной кислоте в течение 9-15 часов. Затем осадок отделяют, обезжиренный ферментативный гидролизат диализируют против дистиллированной воды, осадок подвергают кислотному гидролизу 2-4 М раствором соляной кислоты. Из кислотного гидролизата выделяют гексозамины путем обработки хлоридом кальция. После чего осадок, содержащий гексозамины, и диализованный ферментативный гидролизат смешивают и сушат с получением пищевого общеукрепляющего профилактического продукта. Изобретение позволяет получить продукт с более широким спектром биологической активности, дополнительно обладающий противовоспалительной активностью, а также улучшить вкусовые качества продукта. 2 с. и 1 з.п. ф-лы.

1. Пищевой общеукрепляющий профилактический продукт из хрящевой ткани гидробионтов, отличающийся тем, что он представляет собой ферментативно-кислотный гидролизат из хрящевой ткани акул, или скатов, или осетровых, или лососевых рыб, или головоногих моллюсков (кальмаров, осьминогов) и содержит:

свободные гексозамины в количестве - 0,8-6,5%,

хондроитинсульфаты - 5,8-7,0%,

растворимый коллаген - 3,8-13,8%,

микро- и макроэлементы, из которых

40-60% составляет кальций, 5,8-17% - магний - 10-11,0%,

свободные аминокислоты - 10-18%,

низкомолекулярные ингибиторы металло-

протеиназ с молекулярной массой 0,3-10 кДа - 0,1-1,5%,

белок - 42-55%.