Данное изобретение относится к новым 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолинам, обладающим физиологической активностью. Более конкретно, настоящее изобретение относится к специфической физиологической активности 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолинов, позволяющей использовать их в качестве “молекулярных инструментов” и лекарственных субстанций, селективно подавляющих программируемую клеточную смерть (апоптоз - Apoptosis: Pharmacological Implications and Therapeutic Opportunities. Kaufmann, S. H., Ed.; Academic Press: San Diego, 1997); а также к фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения в виде активных субстанций; а также к способу получения этих композиций и способу применения этих композиций для лечения и предупреждения развития различных заболеваний, связанных с повышенной активацией апоптоза. Этот широкий круг заболеваний включает, в частности, кардиоваскулярные (например, острые ишемические поражения - инсульт, инфаркт миокарда), нейродегенеративные, например болезни Паркинсона и Альцгеймера (Ryan С.; Salvesen G. Caspases and neuronal development. Biol. Chem, 2003, 384 (6), 855-861), вирусные заболевания (например, гепатит-С и СПИД), и т.д. (Cryns, V. L.; Yuan, J. The cutting edge: Caspases in apoptosis and disease. In When Cells Die; Lockshin, R. A., Zakeri, Z., Tilly, J. L., Eds.; Wiley-Liss: New York, 1998, 177-210).
В основе фармакологического эффекта 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолинов лежит высокоэффективное подавление апоптоза, реализуемое посредством ингибирования цистеиновой протеазы - каспазы-3, играющей ключевую роль в развитии апоптоза.
В настоящее время совершенно ясно, что жизнь многоклеточных организмов основана на балансе постоянно протекающих процессов - деление и рост клеток должны сопровождаться альтернативным процессом удаления старых, поврежденных, мутировавших и других нежелательных для организма клеток. Управляемую форму программированной смерти клетки с характерными морфологическими и биохимическими признаками определяют как апоптоз (греческое слово, соответствующее русскому "листопаду": аро - отделение, ptosis - падение) (Apoptosis: Pharmacological Implications and Therapeutic Opportunities. Kaufmann, S.H., Ed.; Academic Press: San Diego, 1997. When Cells Die; Lockshin, R.A.; Zakeri, Z.; Tilly, J.L.; Eds.; Wiley-Liss: New York, 1998). На сегодняшний день установлено, что нарушение контроля клеточной гибели ведет к сдвигам гомеостаза и развитию различных патологических состояний (Nicholson D.W. From bench to clinic with apoptosis-based therapeutic agents. Nature (London) 2000, 407, 810-816). В случае повышенной активации апоптоза возникают самые серьезные патологии, относящиеся к кардиоваскулярным, нейродегенеративным, инфекционным, метаболическим и т.п. заболеваниям (Cryns V. L.; Yuan J. The cutting edge: Caspases in apoptosis and disease. In When Cells Die; Lockshin, R. A.; Zakeri, Z.; Tilly, J. L.; Eds.; Wiley-Liss: New York, 1998, 177-210). Так, показано, что протекание СПИДа и ряда тяжелых заболеваний нервной системы (паркинсонизм, болезнь Альцгеймера) характеризуется повышенной активацией апоптоза (Hartmann A.; Hunot S.; Michel P.; Muriel M.-P.; Vyas S.; Faucheux В.; Mouatt-Prigent P.; Turmel H.; Srinivasan A.; Ruberg M.; Evan G.; Agid Y.; Hirsch E. Caspase-3: A vulnerability factor and final effector in apoptotic death of dopaminergic neurons in Parkinson's disease. PNAS 2000, 97 (6), 2875-2880). При ишемии мозга и инсульте значительная часть клеток пораженной области умирает именно по механизму апоптоза. Применительно к клеткам животных и человека апоптоз в большинстве случаев связан с протеолитической активацией каскада каспаз - семейства эволюционно консервативных цистеиновых протеаз, которые специфически расщепляют белки после остатков аспарагиновой кислоты. На основе структурной гомологии каспазы подразделяются на подсемейства а) каспазы-1 (каспазы 1, 4, 5), б) каспазы-2 (каспаза-2) и в) каспазы-3 (каспазы 3, 6-10). (Nicholson, D.W.; Thornberry, N.A. Caspases: killer proteases. Trends Biochem. Sci. 1997, 22, 299-306); (Nicholson D.W. Caspase structure, proteolytic substrates and function during apoptotic cell death [Review]. Cell. Death. Diff. 1999, 6, 1028-1042).
Особенно важную роль, фактически определяющую жизненные перспективы клеток, играет каспаза-3. (Porter, A. G.; Janicke, R. U. Emerging roles of caspase-3 in apoptosis. Cell Death Differ. 1999, 6, 99-104). Поэтому поиск высокоэффективных ингибиторов каспазы-3, способных блокировать развитие апоптоза, является весьма перспективным подходом к созданию принципиально новых новых кардиопротекторов (Chapman J.; Magee W.; Stukenbrok H.; Beckius G.; Milici A.; Tracey W.A novel nonpeptidic caspase-3/7 inhibitor, (S)-(+)-5-[1-(2-methoxymethylpyrrolidinyl)-sulfonyl]isatin reduces myocardial ischemic injury. Eur. J. Pharmacol. 2002, 456(1-3), 59-68), нейропротекторов (Scott С.; Sobotka-Briner С.; Wilkins D.; Jacobs R.; Folmer J.; Frazee W.; Bhat R.; Ghanekar S.; Aharony D. Novel Small Molecule Inhibitors of Caspase-3 Block Cellular and Biochemical Features of Apoptosis. Pharmacol. Exp. Therap. 2003, 304(1), 433-440), гепатопротекторов (Anseimo D.; Katori M.; Kaldas M.; Hoglen N.; Valentine K.; Busuttil R.; Kupiec-Weglinski W.; Farmer, D. Apoptosis targeted therapy with the caspase inhibitor IDN-6556, ameliorates ex-vivo liver ischemia reperfusion injury. Am. J. Transplant. 2002, 2(Suppl. J), 920) для лечения и защиты от широкого круга заболеваний, ключевым звеном которых является апоптоз.
Многочисленные исследования, проведенные в последнее время, привели к открытию высокоэффективных ингибиторов каспазы-3 в ряду пептидных (Garcia-Calvo M.; Peterson E.; Leiting В.; Ruel R.; Nicholson D.; Thornberry N. Inhibition of human caspases by peptide-based and macromolecular inhibitors. J. Biol. Chem. 1998, 273, 32608-32613) и пептидомиметических соединений (Karanewsky D.; Bai X.; Linton S.; Krebs J.; Wu J.; Pham В.; Tomaselli K. Conformationally constrained inhibitors of caspase-1 and of the human CED-3 homologue caspase-3. Bioorg. Med. Chem. Lett. 1998, 8, 2757-2762). Примером такого рода соединений могут служить, например, следующие пептидомиметические производные, разработанные фирмами Idun Pharmaceuticals, Inc. (Tomaselli K.J.; Gladstone P.L.; Ternansky R.J. Pat. PCT WO 0179162, 2001) и Vertex Pharmaceuticals Inc. (Golec, J.; Lang, P.; Diu-Hercend, A.; Knegtel, R.; Weber, P.; Miller, K.; Hercend, Т.; Mortimore, M.; Miller, A. Pat. PCT WO 0285899, 2002).
Однако такого рода соединения имеют весьма ограниченную возможность клинического применения, что связано с их неудовлетворительными фармакокинетическими и физико-химическими свойствами (Scott С.; Sobotka-Briner С.; Wilkins D.; Jacobs R.; Folmer J.; Frazee W.; Bhat R.; Ghanekar S.; Aharony D. Novel Small Molecule Inhibitors of Caspase-3 Block Cellular and Biochemical Features of Apoptosis. Pharmacol. Exp. Therap. 2003, 304(1), 433-440). В этой связи продолжаются поиски непептидных низкомолекулярных каспазных ингибиторов. Так, были найдены достаточно эффективные ингибиторы (IС50=5-40 nМ) каспазы-3 в ряду изатинов, например (Chapman J.; Magee W.; Stukenbrok H.; Beckius G.; Milici A.; Tracey W. A novel nonpeptidic caspase-3/7 inhibitor, (S)-(+)-5-[1-(2-methoxymethylpyrrolidinyl) sulfonyl]isatin reduces myocardial ischemic injury. Eur. J. Pharmacol. 2002, 456(1-3), 59-68) и (Lee, D.; Long, S.A.; Murray, J.H. et al. Potent and selective nonpeptide inhibitors of caspases 3 and 7. J. Med. Chem. 2001, 44(12), 2015-2026)
Однако невысокая селективность соединений этого класса стимулирует дальнейшие поиски ингибиторов каспазы-3. Так, недавно были обнаружены каспазные ингибиторы в ряду хиназолинов, вещества обладают умеренной активностью и селективностью (Scott С.; Sobotka-Briner С.; Wilkins D.; Jacobs R.; Folmer J.; Frazee W.; Bhat R.; Ghanekar S.; Aharony D. Novel Small Molecule Inhibitors of Caspase-3 Block Cellular and Biochemical Features of Apoptosis. Pharmacol. Exp. Therap. 2003, 304(1), 433-440).
Следует отметить, что некоторые 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолины описаны в научной и патентной литературе (Таблица 1) и лишь пара примеров относится к физиологической активности 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолинов, в частности сообщалось о их цитотоксической активности (Ganjian, I.; Khorshidi, M.; Lalezari, I. Synthesis and cytotoxic activity of 2-dialkylaminoalkyl-1,3-dihydropyrrolo[3,4-c]quinoline-1,3-diones and 6-(2-dimethylaminoethyl)-1H-dibenz[c,e]azepine-5,7-dione J.Heterocycl. Chem. 1991, 28 (5), 1173-1175) и антималярийной активности (Campaigne, E.; Hutchinson, J.H. Some N-Substituted 2-Amino-and 2-methylquinoline-3,4-dicarboximides. J. Heterocycl. Chem. 1970, 7, 655-659).
Сведения об протеазной активности 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолинов в научной и патентной литературе до настоящего времени отсутствовали. В результате проведенных исследований, направленных на поиск новых биологически активных соединений, в том числе селективно подавляющих программируемую клеточную смерть (апоптоз), изобретатели обнаружили новый хемотип непептидных ингибиторов каспаз, а именно 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолины.
Более конкретно данное изобретение относится к новым и известным 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолинам, обладающим физиологической активностью, в том числе специфической физиологической активностью, позволяющей использовать их в качестве “молекулярных инструментов” и активных лекарственных субстанций, селективно подавляющих программируемую клеточную смерть (апоптоз); а также к фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения в виде активных субстанций; а также к способу ее получения и способу ее применения для лечения и предупреждения развития различных заболеваний, связанных с повышенной активацией апоптоза, например острые ишемические поражения (например, инсульт, инфаркт миокарда), нейродегенеративные (например, болезни Паркинсона и Альцгеймера), вирусные заболевания (например, гепатит-С и СПИД), а также кардиальная или церебральная ишемия, диабет, синдромы иммунодефицита, церебральная травма или инсульт, травма спинного мозга, повреждение органов при трансплантации, алопеция, старение, сепсис, менингит, нейродегенеративные заболевания, синдром Дауна, атрофия мышц, множественный склероз, токсическое или инфекционное поражение печени и др.
Ниже приведены определения терминов, используемых в описании изобретения: “Комбинаторная библиотека” означает коллекция соединений, полученных параллельным синтезом и предназначенная для поиска лидера или оптимизации биологической активности лид-соединения, причем каждое соединение библиотеки соответствует общему скэффолду и библиотека является коллекцией родственных гомологов или аналогов.
“Фокусированная библиотека” означает комбинаторную библиотеку, или совокупность нескольких комбинаторных библиотек, или совокупность библиотек и веществ, специальным образом организованную с целью увеличения вероятности нахождения хитов и лидеров или с целью повышения эффективности их оптимизации. Дизайн фокусированных библиотек, как правило, связан с направленным поиском эффекторов (ингибиторов, активаторов, агонистов, антагонистов и т.п.) определенных биомишеней (ферментов, рецепторов, ионных каналов и т.п.).
“Лид-соединение” означает соединение с выдающейся активностью, относящейся к определенной болезни.
“Скэффолд” означает общую структурную формулу или молекулярный каркас или инвариантную область соединений, характерную для всех соединений, входящих в комбинаторную библиотеку.
“Хемотип” означает серию соединений, объединенную общей структурной формулой, и обладающую определенным общим свойством, например, каким-то видом физиологической активности. Можно сказать, например, "новый хемотип активаторов калиевых каналов", или "известный хемотип киназных ингибиторов", и т.д. Как правило, наличие общего структурного фрагмента у соединений в рамках одного хемотипа является необходимым и достаточным условием для наличия у них общего свойства.
“Заместитель” означает химический радикал или группу, которые присоединяются к другому радикалу, группе или к скэффолду, включая, но не ограничивая атом галогена, “инертный заместитель”, нитрогруппа, сульфогруппа, сульфамидная группа, гидроксильная группа, аминогруппа, карбоксиалкильная группа, алкоксикарбонильная группа, карбамоильная группа и др.
“Инертный заместитель” ("Non-interfering substituent") означает низко- или нереакционноспособный радикал, инертный к дальнейшим превращениям и к среде, включая, но не ограничивая C1-С7 алкил, С2-С7 алкенил, С2-С7 алкинил, C1-С7 алкокси, С7-C12 аралкил, замещенный аралкил, С7-C12 гетероциклилалкил, замещенный гетероциклилалкил, С7-С12 алкарил, С3-С10 циклоалкил, С3-С10 циклоалкенил, фенил, замещенный фенил, толуил, ксиленил, бифенил, С2-С12 алкоксиалкил, С2-С10 алкилсульфинил, С2-С10 алкилсульфонил, (СН2)m-O-(C1-С7 алкил), -(CH2)m-N(C1-С7 алкил)n, арил, замещенный арил, замещенный алкокси, фторалкил, арилоксиалкил, гетероциклил, замещенный гетероциклил и нитроалкил; где m имеет значение от 1 до 7, n=1, 2. Предпочтительными “инертными заместителями” являются C1-С7 алкил, С2-С7 алкенил, С2-С7 алкинил, C1-С7 алкокси, С7-C12 аралкил, С7-C12 алкарил, С3-С10 циклоалкил, С3-С10 циклоалкенил, фенил, замещенный фенил, (CH2)m-O-(C1-С7 алкил), -(CH2)m-N(C1-С7 алкил)n, арил, замещенный арил, гетероциклил и замещенный гетероциклил.
“Замещенная группа, замещенный радикал или скэфолд” означают, соответственно группу, радикал или скэффолд, у которых имеется заместитель, включая, но не ограничивая: инертный заместитель, атом галогена, нитрогруппа, цианогруппа, сульфогруппа, гидроксильная группа, аминогруппа, карбоксиалкильная группа, карбоксильная группа, карбамоильная группа. Например: замещенный алкил означает алкил, у которого один или несколько заместителей, например гидроксиалкил или метилоксикарбонилалкил, амино-метоксикарбонил-метил, диметиламиноалкил, 2-гидрокси-2-метоксикарбонил-этил и др.; замещенная аминогруппа означает аминогруппу, у которой имеется один или два заместителя, например ациламиногруппа, N,N-диалкиламиногруппа, N-ацил-N-арил-аминогруппа, ацетил-метоксикарбонилметиламино группа и др.; замещенный фенил означает фенил, у которого имеется один или несколько заместителей, например 2-метоксикарбонилфенил, 4-амино-3-метоксикарбонилфенил, 3,4-диаминофенил и др.
“Необязательно замещенная группа, необязательно замещенный радикал или скэффолд” означают, соответственно группу, радикал или скэффолд, включающие группы, радикалы или скэффолды с заместителями и без заместителей. Например, понятие необязательно замещенная аминогруппа включает: незамещенную аминогруппу и аминогруппы, содержащие любые, не противоречащие химии заместители, включая, но не ограничивая ациламино группы, N,N-диалкиламиногруппы, N-ацил-N-арил-аминогруппы, ацил-метоксикарбонилметил-аминогруппы и др.
“Арил” означает один или более ароматических циклов, каждой из которых включает 5 или 6 атомов углерода. “Арил” может быть конденсированным полициклом, например, как нафталин или неконденсированным, как бифенил. “Замещенный арил” имеет один или несколько “не мешающих” заместителей.
“Галоген” означает атом фтора, хлора, брома или иода.
“Гетероцикл” означает один или несколько насыщенных или ароматических циклов с 5, 6 или 7 атомами, по крайней мере, один из которых является гетероатомом. Преимущественными гетероатомами являются сера, кислород и азот. “Гетероцикл” может быть конденсированным полициклом, например, как бензимидазол, бензоксазол, бензтиазол, хинолин или неконденсированным, например, как бипиридил.
“Азогетероцикл” означает гетероцикл, включающий, по крайней мере, один атом азота, например, как бензимидазол, бензоксазол, бензтиазол, хинолин.
“Замещенный гетероцикл” означает гетероцикл, имеющий один или несколько “не мешающих” заместителей.
“Параллельный синтез” означает метод проведения химического синтеза комбинаторной библиотеки индивидуальных соединений.
Целью настоящего изобретения являются новые 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолины.
Поставленная цель достигается новыми замещенными 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолинами общей формулы 1
или их фармацевтически приемлемыми солями, N-оксидами или гидратами, в которых:
R1, R2 и R3 - независимо выбираются из: атома водорода, атома галогена, СF3, CN, NO2, инертного заместителя, выбранного из группы, включающей низко- или нереакционноспособный радикал C1-C7 алкил, С2-С7 алкенил, С2-С7 алкинил, С1-С7 алкокси, С7-C12 аралкил, замещенный аралкил, C7-C12 гетероциклилалкил, замещенный гетероциклилалкил, С7-С12 алкарил, С3-С10 циклоалкил, С3-С10 циклоалкенил, фенил, замещенный фенил, толуил, ксиленил, бифенил, C2-C12 алкоксиалкил, С3-С10 алкилсульфинил, С2-С10 алкилсульфонил, (CH2)m-O-(C1-C7 алкил), -(CH2)m-N(C1-C7 алкил)n, арил, замещенный арил, замещенный алкокси, фторалкил, арилоксиалкил, гетероциклил, замещенный гетероциклил и нитроалкил; где m имеет значение от 1 до 7; n=1, 2; необязательно замещенную гидроксильную группу, необязательно замещенную карбокси-С2-С6 алкильную группу, необязательно замещенную карбамоильную группу, при условии, что два из R1, R2 и R3 означают водород;
R4 представляет: атом водорода, атом галогена, инертный заместитель, замещенный C1-C7 алкил, замещенный С2-С7 алкенил, необязательно замещенную аминогруппу или необязательно замещенную гидроксильную группу;
R5 представляет: атом водорода, инертный заместитель, выбранный из группы, включающей низко- или нереакционноспособный радикал C1-C7 алкил, C2-C7 алкенил, С2-С7 алкинил, C1-C7 алкокси, C7-C12 аралкил, замещенный аралкил, C7-C12 гетероциклилалкил, замещенный гетероциклилалкил, C7-C12 алкарил, С3-С10 циклоалкил, С3-С10 циклоалкенил, фенил, замещенный фенил, толуил, ксиленил, бифенил, C2-C12 алкоксиалкил, С2-С10 алкилсульфинил, С2-С10 алкилсульфонил, -(CH2)m-O-(C1-C7 алкил), -(CH2)m-N(C1-C7алкил)n, арил, замещенный арил, замещенный алкокси, фторалкил, арилоксиалкил, гетероциклил, замещенный гетероциклил и нитроалкил; где m имеет значение от 1 до 7; n=1, 2; необязательно замещенный гидроксиС1-5алкил, необязательно замещенную аминогруппу, необязательно замещенную гидроксильную группу, замещенный C1-C7 алкил, замещенный С2-С7 алкенил, замещенный С2-С7 алкинил, замещенный в алкильном или арильном фрагменте С7-C12 аралкил, замещенный в алкильном или гетероциклическом фрагменте С7-C12 гетероциклилалкил, замещенный в алкильном или арильном фрагменте С7-С12 алкарил, замещенный С3-С10 циклоалкил, замещенный С3-С10 циклоалкенил, замещенный фенил, замещенный арил, замещенный гетероциклил;
R8 представляет: группу
либо
R8 означает атом водорода, атом галогена, СF3, CN, NO2, инертный заместитель, выбранный из группы, включающей низко- или нереакционноспособный радикал C1-C7 алкил, С2-С7 алкенил, С2-С7 алкинил, C1-C7 алкокси, C7-C12 аралкил, замещенный аралкил, С7-С12 гетероциклилалкил, замещенный гетероциклилалкил, С7-С12 алкарил, С3-С10 циклоалкил, С3-С10 циклоалкенил, фенил, замещенный фенил, толуил, ксиленил, бифенил, С2-С12 алкоксиалкил, С2-С10 алкилсульфинил, С2-С10 алкилсульфонил, (CH2)m-O-(C1-C7 алкил), -(CH2)m-N(C1-C7 алкил)n, арил, замещенный арил, замещенный алкокси, фторалкил, арилоксиалкил, гетероциклил, замещенный гетероциклил и нитроалкил; где m имеет значение от 1 до 7, n=1, 2; необязательно замещенную гидроксильную группу, необязательно замещенную карбоксиС1-6алкильную группу, необязательно замещенную карбамоильную группу;
R6 и R7 независимо друг от друга представляют: атом водорода, инертный заместитель, необязательно замещенный аминоС1-7алкил, необязательно замещенную аминогруппу, необязательно замещенную гидроксильную группу;
или
R6 и R7 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, представляют 3-10-членный цикл, необязательно дополнительно включающий гетероатом, выбранный из группы: кислород, азот или сера, необязательно конденсированный и необязательно замещенный;
исключая: N-оксид 2-метил(или 2-фенил)-3,4-хинолиндикарбоксимид; 2-(2-диметил (или диэтил)аминоэтил)- или 2-(3-диметиламинопропил)-4-метил-1Н-пирроло[3,4-с]хинолин-1,3(2Н)-дионы и 8-бром-2-(2-диметил (или диэтил)аминоэтил)- или 8-бром-2-(3-диметиламинопропил)-4-метил-1Н-пирроло[3,4-с]хинолин-1,3(2Н)-дионы и соединения 1, в которых одновременно R1=R2=R3=R8=R5=H, a R4=Н или СН3; соединения 1, в которых одновременно R1=R2=R3=R8=Н, а R4=СН3, 2-(3,4-дихлорфенил)-винил, NH2, NНС(O)СН3 и R5=2-(дибутиламино)этил, 2-пирролидин-1-ил-этил, 2-пиперидин-1-ил-этил; соединения 1, в которых одновременно один из R1-R3=Н, Сl, Вr, а два других - Н, R8=Cl, Br, NO2, R4=СН3, СНВr2, фенил, R5=Н, СН3; соединения 1, в которых одновременно два из R1-R3 означают водород, а один из R1 -R3 и R8 представляют собой одинаковые или различные атом водорода, атом галогена, СF3, CN, ОН, алкил, циклоалкил, алкокси, алкилтио, R4=Н, алкил, фенил; R5=Н, алкил, циклоалкил, алкокси, циклоалкилокси, бензил, фенил, 2-(1-метилпиррол-2-ил)этил, 2-морфолин-4-ил-этил, 2-(4-фторбензоиламино)-этил; соединения 1, в которых одновременно R1=Н, R8=замещенная сульфамоильная группа, R4=СН3, R5=инертный заместитель; R1-R3 - вoдopoд, R4 - стирил, R5 - п-толил, п-метоксифенил, фенил, R8 - водород, хлор, бром, метил, нитро; R1=R2=R3=R5=H, a R4 - аминокарбамоильная группа.
Целью настоящего изобретения является создание новой фармацевтитческой композиции, обладающей биологической активностью, предназначенной для лечения и предупреждения развития различных заболеваний животных и людей.
Поставленная цель достигается фармацевтической композицией в форме таблеток, капсул или инъекций, помещенных в фармацевтически приемлемую упаковку, обладающей протеазной (каспазной) активностью, предназначенной для лечения и предупреждения развития различных заболеваний животных и людей, содержащей в качестве активной субстанции фармацевтически эффективное количество 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолина общей формулы 1 или их фармацевтически приемлемые соли, N-оксиды или гидраты.
Целью настоящего изобретения является создание способа получения новой фармацевтической композиции, обладающей биологической активностью, в том числе обладающей протеазной (каспазной) активностью, предназначенной для лечения и предупреждения развития различных заболеваний животных и людей, связанных с повышенной активацией апоптоза.
Поставленная цель достигается способом получения фармацевтической композиции смешением инертного разбавителя и/или наполнителя с активной субстанцией, в качестве активной субстанции используется 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолина общей формулы 1 или его фармацевтически приемлемые соли, N-оксида или гидрата.
Целью настоящего изобретения является создание новой фармацевтической композиции, обладающей протеазной (каспазной) активностью, предназначенной для лечения и предупреждения развития различных заболеваний животных и людей, связанных с повышенной активацией апоптоза.
Поставленная цель достигается фармацевтической композицией в форме таблеток, капсул или инъекций, помещенных в фармацевтически приемлемую упаковку, обладающей протеазной (каспазной) активностью, предназначенной для лечения и предупреждения развития различных заболеваний животных и людей, связанных с повышенной активацией апоптоза, содержащей в качестве активной субстанции фармацевтически эффективное количество 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолина общей формулы 1
или его фармацевтически приемлемой соли, N-оксида или гидрата, в которых:
R1, R2 и R3 - независимо выбираются из: атома водорода, атома галогена, СF3, CN, NO2, инертного заместителя, выбранного из группы, включающей низко- или нереакционноспособный радикал C1-C7 алкил, С2-С7 алкенил, C2-C7 алкинил, C1-C7 алкокси, С7-С12аралкил, замещенный аралкил, С7-С12 гетероциклилалкил, замещенный гетероциклилалкил, С7-С12алкарил, С3-С10циклоалкил, С3-С10циклоалкенил, фенил, замещенный фенил, толуил, ксиленил, бифенил, С2-С12алкоксиалкил, С2-С10 алкилсульфинил, С2-С10 алкилсульфонил, (CH2)m-О-(C1-C7 алкил), -(CH2)m-N(C1-C7 алкил)n, арил, замещенный арил, замещенный алкокси, фторалкил, арилоксиалкил, гетероциклил, замещенный гетероциклил и нитроалкил; где m имеет значение от 1 до 7; n=1, 2; необязательно замещенную гидроксильную группу, необязательно замещенную карбокси-С2-С6 алкильную группу, необязательно замещенную карбамоильную группу, при условии, что два из R1, R2 и R3 означают водород;
R4 представляет: атом водорода, атом галогена, инертный заместитель, замещенный C1-C7 алкил, замещенный С2-С7 алкенил, необязательно замещенную аминогруппу или необязательно замещенную гидроксильную группу;
R5 представляет: атом водорода, инертный заместитель, выбранный из группы, включающей низко- или нереакционноспособный радикал C1-C7 алкил, С2-С7 алкенил, С2-С7 алкинил, C1-C7 алкокси, C7-C12 аралкил, замещенный аралкил, C7-C12 гетероциклилалкил, замещенный гетероциклилалкил, C7-C12 алкарил, С3-С10 циклоалкил, С3-С10 циклоалкенил, фенил, замещенный фенил, толуил, ксиленил, бифенил, С2-С12 алкоксиалкил, С2-С10 алкилсульфинил, С2-С10 алкилсульфонил, -(CH2)m-O-(C1-C7 алкил), -(CH2)m-N(C1-C7алкил)n, арил, замещенный арил, замещенный алкокси, фторалкил, арилоксиалкил, гетероциклил, замещенный гетероциклил и нитроалкил; где m имеет значение от 1 до 7; n=1, 2; необязательно замещенный гидроксиС1-5алкил, необязательно замещенную аминогруппу, необязательно замещенную гидроксильную группу, замещенный C1-C7 алкил, замещенный С2-С7 алкенил, замещенный С2-С7 алкинил, замещенный в алкильном или арильном фрагменте С7-C12 аралкил, замещенный в алкильном или гетероциклическом фрагменте С7-C12 гетероциклилалкил, замещенный в алкильном или арильном фрагменте С7-С12 алкарил, замещенный С3-С10 циклоалкил, замещенный С3-С10 циклоалкенил, замещенный фенил, замещенный арил, замещенный гетероциклил;
R8 представляет: группу
либо
R8 означает атом водорода, атом галогена, СF3, CN, NO2, инертный заместитель, выбранный из группы, включающей низко- или нереакционноспособный радикал C1-C7 алкил, С2-С7 алкенил, С2-С7 алкинил, C1-C7 алкокси, С7-С12аралкил, замещенный аралкил, С7-С12 гетероциклилалкил, замещенный гетероциклилалкил, C7-C12 алкарил, С3-С10 циклоалкил, С3-С10 циклоалкенил, фенил, замещенный фенил, толуил, ксиленил, бифенил, C2-C12 алкоксиалкил, C2-C10 алкилсульфинил, С2-С10 алкилсульфонил, (CH2)m-O-(C1-C7 алкил), -(CH2)m-N(C1-C7 алкил)n, арил, замещенный арил, замещенный алкокси, фторалкил, арилоксиалкил, гетероциклил, замещенный гетероциклил и нитроалкил; где m имеет значение от 1 до 7; n=1, 2; необязательно замещенную гидроксильную группу, необязательно замещенную карбоксиС1-6алкильную группу, необязательно замещенную карбамоильную группу;
R6 и R7 независимо друг от друга представляют: атом водорода, инертный заместитель, необязательно замещенный аминоС1-7алкил, необязательно замещенную аминогруппу, необязательно замещенную гидроксильную группу;
или
R6 и R7 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, представляют 3-10-членный цикл, необязательно дополнительно включающий гетероатом, выбранный из группы: кислород, азот или сера, необязательно конденсированный и необязательно замещенный.
Целью настоящего изобретения является создание способа получения новой фармацевтической композиции, обладающей биологической активностью, в том числе обладающей протеазной (каспазной) активностью, предназначенной для лечения и предупреждения развития различных заболеваний животных и людей, связанных с повышенной активацией апоптоза.
Поставленная цель достигается способом получения фармацевтической композици путем использования в качестве активной субстанции 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолина общей формулы 1 или его фармацевтически приемлемой соли, N-оксида или гидрата.
Целью настоящего изобретения является создание способа лечения или профилактики болезней или состояний у животных и человека, связанных с повышенной активацией апоптоза.
Поставленная цель достигается способом лечения или профилактики болезней или состояний у животных и человека, связанных с повышенной активацией апоптоза, который заключается в назначении пациентам, нуждающимся в лечении, эффективного количества фармацевтической композици, содержащей в качестве активной субстанции 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолин общей формулы 1 или его фармацевтически приемлемую соль, N-оксид или гидрат.
Целью настоящего изобретения является создание способа лечения или профилактики болезней или состояний у животных и человека, в патогенезе которых участвуют каспазы.
Поставленная цель достигается способом лечения или профилактики болезней или состояний у животных и человека, в патогенезе которых участвуют каспазы, который заключается в назначении пациентам, нуждающимся в лечении, эффективного количества фармацевтической композици, содержащей в качестве активной субстанции 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолин общей формулы 1 или его фармацевтически приемлемую соль, N-оксид или гидрат.
Согласно изобретению способ лечения или профилактики болезней или состояний у животных и человека, в патогенезе которых участвуют каспазы, предпочтительно используют для лечения или профилактики следующих заболеваний или состояний: кардиальная или церебральная ишемия; диабет; синдромы иммунодефицита, включая СПИД; церебральная травма или инсульт; травма спинного мозга; повреждение органов при трансплантации; алопеция; старение; сепсис; менингит; нейродегенеративные заболевания; синдром Дауна; атрофия мышц; множественный склероз; токсическое или инфекционное поражение печени; болезнь Альцгеймера; болезнь Паркинсона.
Целью настоящего изобретения является применение “фармакологических инструментов” ингибиторов каспаз, предназначенных для экспериментального (in vitro, in vivo) исследования процессов апоптоза.
Поставленная цель достигается применением в качестве “фармакологических инструментов” ингибиторов каспаз, предназначеных для экспериментального (in vitro, in vivo) исследования процессов апоптоза 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолина общей формулы 1:
или его фармацевтически приемлемой соли, N-оксида или гидрата, в которых:
R1, R2 и R3 - независимо выбираются из: атома водорода, атома галогена, СF3, CN, NO2, инертного заместителя, выбранного из группы, включающей низко- или нереакционноспособный радикал C1-C7 алкил, С2-С7 алкенил, С2-С7 алкинил, C1-C7 алкокси, C7-C12 аралкил, замещенный аралкил, С7-С12 гетероциклилалкил, замещенный гетероциклилалкил, С7-С12 алкарил, С3-С10 циклоалкил, С3-С10 циклоалкенил, фенил, замещенный фенил, толуил, ксиленил, бифенил, C2-C12 алкоксиалкил, С2-С10 алкилсульфинил, С2-С10 алкилсульфонил, (CH2)m-O-(C1-C7 алкил), -(CH2)m-N(C1-C7 алкил)n, арил, замещенный арил, замещенный алкокси, фторалкил, арилоксиалкил, гетероциклил, замещенный гетероциклил и нитроалкил; где m имеет значение от 1 до 7; n=1, 2; необязательно замещенную гидроксильную группу, необязательно замещенную карбокси-С2-С6 алкильную группу, необязательно замещенную карбамоильную группу, при условии, что два из R1, R2 и R3 означают водород;
R4 представляет: атом водорода, атом галогена, инертный заместитель, замещенный C1-C7 алкил, замещенный C2-C7 алкенил, необязательно замещенную аминогруппу или необязательно замещенную гидроксильную группу;
R5 представляет: атом водорода, инертный заместитель, выбранный из группы, включающей низко- или нереакционноспособный радикал C1-C7 алкил, С2-С7 алкенил, С2-С7 алкинил, C1-C7 алкокси, C7-C12 аралкил, замещенный аралкил, С7-С12 гетероциклилалкил, замещенный гетероциклилалкил, C7-C12 алкарил, С3-С10 циклоалкил, С3-С10 циклоалкенил, фенил, замещенный фенил, толуил, ксиленил, бифенил, C2-C12 алкоксиалкил, С2-С10 алкилсульфинил, С2-С10 алкилсульфонил, -(CH2)m-O-(C1-C7 алкил), -(CH2)m-N(C1-C7алкил)n, арил, замещенный арил, замещенный алкокси, фторалкил, арилоксиалкил, гетероциклил, замещенный гетероциклил и нитроалкил; где m имеет значение от 1 до 7; n=1, 2; необязательно замещенный гидроксиС1-5алкил, необязательно замещенную аминогруппу, необязательно замещенную гидроксильную группу, замещенный C1-C7 алкил, замещенный С2-С7 алкенил, замещенный С2-С7 алкинил, замещенный в алкильном или арильном фрагменте С7-C12 аралкил, замещенный в алкильном или гетероциклическом фрагменте С7-C12 гетероциклилалкил, замещенный в алкильном или арильном фрагменте С7-C12 алкарил, замещенный С3-С10 циклоалкил, замещенный С3-С10 циклоалкенил, замещенный фенил, замещенный арил, замещенный гетероциклил;
R8 представляет: группу
либо
R8 означает атом водорода, атом галогена, СF3, CN, NO2, инертный заместитель, выбранный из группы, включающей низко- или нереакционноспособный радикал C1-C7 алкил, С2-С7 алкенил, С2-С7 алкинил, C1-C7 алкокси, C7-C12 аралкил, замещенный аралкил, С7-С12 гетероциклилалкил, замещенный гетероциклилалкил, C7-C12 алкарил, С3-С10 циклоалкил, С3-С10 циклоалкенил, фенил, замещенный фенил, толуил, ксиленил, бифенил, C2-C12 алкоксиалкил, С2-С10 алкилсульфинил, С2-С10 алкилсульфонил, (CH2)m-O-(C1-C7 алкил), -(CH2)m-N(C1-C7 алкил)n, арил, замещенный арил, замещенный алкокси, фторалкил, арилоксиалкил, гетероциклил, замещенный гетероциклил и нитроалкил; где m имеет значение от 1 до 7, n=1, 2; необязательно замещенную гидроксильную группу, необязательно замещенную карбоксиС1-6алкильную группу, необязательно замещенную карбамоильную группу;
R6 и R7 независимо друг от друга представляют: атом водорода, инертный заместитель, необязательно замещенный аминоС1-7алкил, необязательно замещенную аминогруппу, необязательно замещенную гидроксильную группу;
или
R6 и R7 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, представляют 3-10-членный цикл, необязательно дополнительно включающий гетероатом, выбранный из группы: кислород, азот или сера, необязательно конденсированный и необязательно замещенный;
или R8 представляет: атом водорода, атом галогена, CF3, CN, NO2, инертный заместитель, необязательно замещенную гидроксильную группу, необязательно замещенную карбоксиС1-6алкильную группу, необязательно замещенную карбамоильную группу.
1,3-диоксо-2,3-Дигидро-1H-пирроло[3,4-с]хинолины общей формулы 1 получают по схемам 1 и 2:
Методики получения хинолин-3,4-дикарбоновых кислот 4, их ангидридов 5 и имидов 2,3-дигидро-1,3-диоксо-1H-пирроло[3,4-с]хинолинов 1 описаны в патентах (Shapiro, H.S. Pyrrolo[3,4-c]quinoline compounds and pharmaceutical compositions, metods for their use and preparation. Пат. США 4268513, 1981. Иващенко, А.В.; Кобак, В.В.; Хват, А.В.; Ильин, А.П.; Кравченко, В.В.; С.Е.Ткаченко. 6-Сульфамоилхинолин-4-карбоновые кислоты и их производные, способ их получения и комбинаторная библиотека. Заявка на патент России 2003106182, 2003) и статье (Ried, W.; Weidemann, P. Chem. Ber. 1971, 104, 3341-3349. Ganjian, I.; Khorshidi, M.; Lalezari, I.).
Методики получения хинолин-3,4-дикарбоновых кислот 7, их ангидридов 8 и 1,3-диоксо -2,3-дигидро -1H-пирроло[3,4-с]хинолинов 1 описаны в статьях (Rooy et al. J. Chem. Soc. (C) 1969, 1886-1891. Brown, R.F.C.; Coulston, K.J.; Eastwood, F.W.; Moffat, M.R. Synthesis of indeno[1,2-b]indole by flash vacuum pyrolysis of 2-phenylquinoline-3,4-dicarboxylic anhydride. Tetrahedron Lett. 1991, 32(6), 801-802; Brown, R.F.C.; Coulston, K.J.; Eastwood, F.W.; Moffat, M.R. Pyrolysis of quinoline-3,4-dicarboxylic anhydrides bearing 2-phenyl, 2-benzyl, and 2-o-tolyl substituents: formation of products of carbine insertion and addition. Tetrahedron 1992, 48(36), 7763-7774) и патентах (Shaw, К.; Yuan, J. Preparation of pyrroloquinolinones as GABA brain receptor ligands. Пат. США 5243049,1993; Shaw, К.; Yuan, J. Certain pyrroloquinolinones; a new class of GABA brain receptor ligands. 5604235, 1997), а 2-амино-3,4-дикарбоновых кислот 9 и 2,3-дигидро-1,3-диоксо-1Н-пирроло[3,4-с]хинолинов 1 описаны в статьях (Compaigne, E.; Hutchinson, J.H. N-substituted 2-amino- and 2-methylquinoline-3,4-dicarboximides. J. Heterocycl. Chem. 1970, 7 (3), 655-659. Ganjian, I.; Khorshidi, M.; Lalezari, I. Synthesis and cytotoxic activity of 2-dialkylaminoalkyl-1,3-dihydropyrrolo[3,4-c]quinoline-1,3-diones and 6-(2-dimethylaminoethyl)-1H-dibenz[c,e]azepine-5,7-dione. J. Heterocycl. Chem. 1991, 28(5), 1173-1175).
Способы получения фармацевтических композиций общеизвестны и в зависимости от готовой формы (таблетки, капсулы или инъекции) включают смешение разнообразных разбавителей и/или наполнителей с активной субстанцией.
Антипротеазная активность соединений формулы 1 определялась на 9 сериновых протеазах (Каспазы 1-9), которые вовлечены в регуляцию программированной клеточной смерти (апоптозис) и воспалительных процессов. Активность Каспаз определялась по скорости расщепления соответствующего субстрата, представляющего собой пептид со специфичной для каждой используемой каспазы последовательностью аминокислот с присоединенной флуоресцентной группой (метилкумарин). Метод описан в [Stennicke H.R. and Salvesen G.S. Biochemical Characteristics of Caspase-3, -6, -7 and -8. The Journal of Biological Chemistry, 1997, 272(41) 25719-25723].
Антиапоптозная активность соединений формулы 1 определялась на клеточной линии 3Т3, полученной из АТСС (American Type Culture Collection) no методу, описанному в [Burchiel SW, Edwards BS, Kuckuck FW, Lauer FT, Prossnitz ER, Ransom JT, Sklar LA. Analysis of free intracellular calcium by flow cytometry: multiparameter and pharmacologic applications. Methods, 2000, 21(3), 221-230].
Профилактическое лечение апоптоза мозга и желточного мешка зебра-рыбы (zebrafish) проводилось по методике, описанной в [Kimmel, C.B. Patterning the brain of the zebrafish embryo. Annu Rev Neurosci. 1993, 16, 707-732].
Изобретение иллюстрируется, но не ограничивается следующими примерами.
Примеры 1-10 (Таблицы 2-6) описывают получение исходных реагентов;
примеры 11-19 (Таблица 7) описывают получение 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1H-пирроло[3,4-с]хинолинов общей формулы 1;
примеры 20-22 описывают способы получения фармацевтических композиций;
примеры 23 и 24 описывают биологическую активность 1,3-диоксо-2,3-дигидро -1H-пирроло[3,4-с]хинолинов общей формулы 1;
пример 25 описывает профилактическое лечение апоптоза мозга и желточного мешка зебра-рыбы (zebrafish) фармацевтической композицией, включающей 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1H-пирроло[3,4-с]хинолины формулы 1.
Структуры полученных соединений подтверждались данными химического, хроматографического и спектрального анализа. Жидкофазный параллельный ситез новых соединений и комбинаторной библиотеки осуществлялись с использованием специальных синтезаторов "CombiSyn-012-3000" [М. Бару, А. Иващенко, Патент России 2180609, 2002; РСТ WO 02/087740 Al, 2002] и оборудования [Technology Platform., In Custom Chemistry; Chemical Diversity Labs, Inc.; San Diego, CA, 2002; p. 5, http://www.chemdiv.com.].
Все растворители и реагенты были получены из коммерческих источников, таких как Акрос (Acros) (Бельгия), Сигма-Олдрич (Sigma-Aldrich) (США), Ланкастер (Lancaster) (Великобритания) и КемДив (ChemDiv) (США). Точки плавления (т.пл.) были получены на приборе фирмы Бюхи (Buchi) (Швейцария) модель В-520. 1Н и 13С ЯМР спектры были получены на спектрометре Gemini-300 (300 и 75 МГц соответственно) фирмы Вариан (Varian) (США) в CDCl3 или диметилсульфоксиде-d6. Химические сдвиги приведены в шкале δ (ppm). Внутренний стандарт тетраметилсилан.
Содержание основного вещества контролировали с помощью HPLC на приборе Шимадзу (Shimadzu) 10-AV (колонка Luna-C18, Phenomenex, 25 см × 4.6 мм, UV детектирование на 215 и 254 нм) и LC-MS (ВЖХ-МС) на приборе Applied Biosystems (Shimadzu 10-AV LC, автоматическая подача образца Gilson-215, масс-спектрометр API 150EX, UV (215 и 254 нм) и ELS детекторы, колонка Luna-C18, Phenomenex, 5 см × 2 мм).
Аналитическую ТСХ проводили на силикагеле на алюминевых пластинках Silufol UV254 (5 см × 15 см) (Kavalier, Czech Republic) или на стеклянных пластинках с 0.25-мм слоем силикагеля 60 F254 (Merck, Germany). Визуализация осуществлялась с помощью УФ света на длине волны 254 нм. Для хроматографической очистки использовали силикагель 5-40 мкм (Chemapol, Czech Republic) и 63 мкм (ЕМ Science, USA). В соответствии с данными LC/MS все синтезированные соединения имели содержание основного вещества выше 95% (если не указано иначе).
Пример 1. Общий способ получения 3,3-дихлор-2-оксо-2,3-дигидро-1H-индол-5-сульфонил хлоридов 11 (схема 3).
Постепенно прибавляли изатин 2: R2=Н (0,1 моль) к хлорсульфоновой кислоте (50 мл), поддерживая температуру 55-60°С. Реакционную массу выдерживали при 60° 2-3 часа, охлаждали до комнатной температуры и выливали при перемешивании на лед. Осадок отфильтровывали, промывали водой, сушили в вакууме и перекристаллизовывали из дихлорметана, а затем из смеси толуол-петролейный эфир (8: 2). Получали 3,3-дихлор-2-оксо-2,3-дигидро-1H-индол-5-сульфонил хлориды 11, с выходом 40-75%, содержащие по данным LC MS более 95% основного вещества (Таблица 2).
Пример 2. Общий способ получения амидов 3,3-дихлор-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфокислот 12: (схема 4).
в которых R1 имеет вышеуказанное значение, a R6R7N представляет собой необязательно замещенную аминогруппу.
К раствору 3,3-дихлор-2-оксо-2,3-дигидро-1H-индол-5-сульфонил хлорида 11 (10 ммоль) в 15 мл безводного тетрагидрофурана (ТГФ) прибавляли при перемешивании последовательно амин 10 (10,5 ммоль), а затем триэтиламин (1,0 мл, 10,5 ммоль). Реакционную массу перемешивали при комнатной температуре 8-12 ч, осадок отфильтровывали, а фильтрат упаривали в вакууме. Полученный продукт хроматографировали на силикагеле смесью дихлорметана с ТГФ. Получали амиды 3,3-дихлор-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфокислот 12 с выходом 54-87%, содержащие по данным LC MS более 95% основного вещества (Таблица 3).
Пример 3. Общий способ получения амидов 2,3-диоксо-2,3-дигидро-1H-индол-5-сульфокислот 2.1 (схема 5).
в которых R1 имеет вышеуказанное значение, a R6R7N представляет собой необязательно замещенную аминогруппу.
Перемешивали 8-12 ч при 50-70°С сульфамид 12 (5 ммоль) и Na2CO3 (1,26 г, 12 ммоль) в 20 мл воды. Реакционную массу упаривали в вакууме досуха. Сухой остаток растворяли в 30 мл АсОН, добавляли несколько капель концентрированной соляной кислоты и кипятили 1-3 часа, после чего упаривали в вакууме досуха. Из сухого остатка экстрагировали продукт этилацетатом, экстракт фильтровали и упаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле смесью дихлорметан-ТГФ. Получали амиды 2,3-диоксо-2,3-дигидро-1H-индол-5-сульфокислоты 2.1, с выходом 46-82%, содержащие по данным LC MS более 95% основного вещества (Таблица 4).
Пример 4. Общий способ получения 6-сульфамоилхинолин-3,4-дикарбоновых кислот формулы 4 (схема 6).
в которых R1, R3 и R6R7N имеют вышеуказанное значение.
Растворяют 3,3-дихлор-2-оксо-2,3-дигидро-1H-индол-5-сульфонил хлорид 12 (0.02 моль) в диоксане (60 мл). Полученный раствор охлаждают до 5°С и при перемешивании прибавляют амин 10 (0.02 моль), N-метилморфолин (2.2 мл). Реакционную смесь перемешивают 1 час, после чего к реакционной смеси добавляют небольшими порциями ледяную воду, стараясь, чтобы продукт выделялся в виде твердого вещества, а не давал эмульсию. Осадок затина 2.1 отфильтровывают, промывают на фильтре водой, растворяют в диоксане (60 мл) и добавляют при интенсивном перемешивании 5N раствор NaOH (120 мл). Реакционная смесь приобретает интенсивное красно-коричневое окрашивание, а через 10-15 мин перемешивания становится коричневато-желтой. К реакционной смеси добавляют метиленактивное соединение 3 (0.3 моль) и перемешивают 10-12 часов. Реакционную смесь при охлаждении и интенсивном перемешивании подкисляют 2N соляной кислотой до рН=2-3, перемешивают 2 часа, после чего выдерживают 10-12 часов при 5°С. Осадок отфильтровывают, промывают на фильтре многократно водой, после чего промывают изопропанолом (3 раза) и сушат в вакууме. Получают, с выходом 45-85%, 6-сульфамоил-хинолин-3,4-дикарбоновые кислоты формулы 4, содержащие по данным LC MS более 95% основного вещества (Таблица 5).
Пример 5. Общий способ получения 6-сульфо-хинолин-3,4-дикарбоновых кислот формулы 4 (схема 7).
в которых R1, R3 и R6R7N имеют вышеуказанное значение.
К раствору NaOH (12 г, 0.3 моль) в воде (80 мл) постепенно прибавляют при комнатной температуре и перемешивании 3,3-дихлор-2-оксо-2,3-дигидро-1H-индол-5-сульфонил хлорид 12 (0.03 моль), продолжают перемешивать 1,5-2 часа, после чего прибавляют метиленактивное соединение 3 (0.09 моль). Полученную реакционную массу перемешивают при комнатной температуре 8-12 часов, подкисляют, при охлаждении, концентрированной соляной кислотой до рН=5 и через 1,5-2 часа отфильтровывают осадок. Получают, с выходом 55-87%, 6-сульфо-хинолин-3,4-дикарбоновые кислоты формулы 4, содержащие по данным LC MS более 95% основного вещества (Таблица 5).
Пример 6. Общий способ получения хинолин-3,4-дикарбоновых кислот формулы 4 (схема 8).
в которых R1, R2 и R3 имеют вышеуказанное значение.
К суспензии изатина 2 (45 ммоль) в воде (100 мл) прибавляют в атмосфере азота КОН (30 г). Реакционную массу перемешивают при комнатной температуре до полного растворения изатина 2, после чего прибавляют метиленактивного соединения 3 (126 ммоль) и перемешивают еще 8-12 часов. К реакционной массе постепенно прибавляют при охлаждении концентрированную соляную кислоту (40 мл) до рН=5. Осадок отфильтровывают и сушат в вакууме при 70°С. Получают, с выходом 60-87%, кислоты 4, содержащие по данным LC MS, более 95% основного вещества (Таблица 5).
Пример 7. Общий способ получения 6-сульфо-хинолин-3,4-дикарбоновых кислот формулы 4 (схема 9).
в которых R1 и R3 имеют вышеуказанное значение.
К смеси натриевой соли 2,3-диоксо-2,3-дигидро-1H-индол-5-сульфокислоты 2 (45 ммоль) или ее натриевой в воде (110 мл) прибавляют LiOH × 1Н2O (22,0 г, 536 ммоль) при перемешивании в атмосфере азота. К полученному раствору прибавляют при комнатной температуре метиленактивное соединение 3 (126 ммоль). Реакционную массу выдерживают при перемешивании и комнатной температуре 12-24 часов, подкисляют при перемешивании концентрированной соляной кислотой до рН=5, осадок отфильтровывают, промывают водой и сушат в вакууме. Получают 6-сульфо-хинолин-3,4-дикарбоновые кислоты 4, с выходом 80-95%, содержащие по данным LC MS более 95% основного вещества (Таблица 5).
Пример 8. Общий способ получения 1,3-диоксо-1,3-дигидрофуро[3,4-с]хинолинов 5 (схема 10).
в которых R1, R2 и R3 имеют вышеуказанное значение.
Суспензию 3.66 г (10 ммоль) хинолин-3,4-дикарбоновой кислоты 4 в уксусном ангидриде (25 мл) нагревают при перемешивании на масляной бане при 120°С до полного растворения кислоты, после чего дополнительно нагревают при перемешивании 30 мин. Реакционную смесь охлаждают 12 часов при 4°С. Выпавший осадок 1,3-диоксо-1,3-дигидрофуро[3,4-с]хинолина 5 отфильтровывают, промывают небольшим количеством уксусного ангидрида и безводным эфиром. Дополнительное количество 1,3-диоксо-1,3-дигидрофуро[3,4-с]хинолина 5 получают из фильтрата, для чего фильтрат разбавляют в 3 раза эфиром, выдерживают при охлаждении 40-60 часов при 4°С, осадок 5 отфильтровывают и промывают эфиром. Получают 1,3-диоксо-1,3-дигидрофуро[3,4-с]хинолин 5, с суммарным выходом 78-90% (Таблица 6).
Пример 9. Общий способ получения 1,3-диоксо-1,3-дигидро-фуро[3,4-с]хинолин-6-сульфонатов пиридиния 5 (схема 11).
в которых R1 и R3 имеют вышеуказанное значение.
К суспензии 6-сульфохинолин-3,4-дикарбоновой кислоты формулы 4 (30 ммоль) в пиридине (30 мл), прибавляют уксусный ангидрид (50 мл) и перемешивают реакционную массу 3 часа при 50-60°С. Продукт отфильтровывают, промывают на фильтре ацетоном или эфиром и сушат в вакууме. Получают, с выходом 71-95%, пиридиния 1,3-диоксо-1,3-дигидрофуро[3,4-с]хинолин-6-сульфонаты 5 (Таблица 6).
Пример 10. Пиридиний 1,3-диоксо-4-фенил-1,3-дигидрофуро[3,4-с]хинолин-8-сульфонат 5(8) (схема 12).
К нагретому до 80°С раствору 6.23 г (0.025 моль) натриевой соли изатин-5-сульфокислоты 2 в 60 мл 5N раствора NaOH при перемешивании добавляют 9.6 г (0.05 моль) этил бензоилацетата 3. Смесь перемешивают при этой температуре 4 часа, охлаждают и при интенгсивном перемешивании подкисляют 2N НСl до рН=2-3 и оставляют в холодильнике на ночь. Осадок отфильтровывают, тщательно промывают охлажденным 2N НСl, холодной водой, изопропанолом, тщательно сушат, получают 8.26 г (88%) пиридиниевой соли 2-фенил-6-сульфо-3,4-хинолиндикарбоновой кислоты 4(12) (LC MS, m/z 374 (М+1)), которую без дополнительной очистки суспендируют в 100 мл уксусного ангидрида, к смеси добавляют 20 мл безводного пиридина. Полученную смесь нагревают при перемешивании при 80°С до полного растворения осадка, после чего, дополнительно, 3 часа. Реакционную смесь охлаждают, осадок отфильтровывают, промывают на фильтре уксусным ангидридом, безводным эфиром, получают 6.1 г (56%) пиридиний 1,3-диоксо-4-фенил-1,3-дигидрофуро[3,4-с]хинолин-8-сульфоната 5(8) (Таблица 6). LC-MS (раствор в метаноле), m/z: 388(M+1), что отвечает метиловому эфиру 2-фенил-6-сульфо-3,4-хинолиндикарбоновой кислоты.
Пример 11. Параллельный синтез амидов 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1H-пирроло[3,4-с]хинолинов 1 (схема 1).
А. Параллельный синтез хинолин-3,4-дикарбоновых кислот 4.
Параллельный синтез хинолин-3,4-дикарбоновых 4 проводили в синтезаторе "CombiSyn-012-3000". В каждый из 12 реакторов синтезатора загружают по 0,97 г (10.21 ммоль) КОН в смеси 15 мл воды и 10 мл этанола, последовательно прибавляют при перемешивании и комнатной температуре по 5.11 ммоль соответствующего изатина 2 и по 6.13 моль метиленактивного карбонильного соединения 3, предварительно растворенного в 5 мл этанола. Реакционные массы кипятят 5-18 часов до исчезновения исходного изатина 2. Контроль осуществляют с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ) на силикагеле, в качестве элюэнта используют смесь хлороформа с этанолом в объемном соотношении 19:1. Для ТСХ контроля 0,1 мл реакционной смеси растворяют в 1 мл воды. Полученные в каждом реакторе растворы нейтрализуют 5% соляной кислотой до рН=3 и экстрагируют 0,25 мл этилацетата. Органические слои отделяют и хроматографируют на пластинках “Silufol UV254” фирмы Kavalier (Чехия). После окончания процесса из реакционных смесей отгоняют в вакууме спирт, остатки фильтруют и упаривают досуха. Полученные остатки растворяют в минимальном количестве воды и прибавляют 10% соляную кислоту до рН=2-3. Выпавшие осадки отфильтровывают и сушат в вакууме над хлористым кальцием. Полученные кристаллические продукты экстрагируют этилацетатом, хлороформом или метиленхлоридом, экстракты сушат безводным сульфатом натрия, фильтруют и упаривают в вакууме. Остатки перекристаллизовывают из подходящего растворителя. Получают хинолин-3,4-дикарбоновые кислоты 4, представляющих собой кристаллические вещества, растворимые в этилацетате, хлороформе, метиленхлориде, умеренно растворимые в этаноле и ацетоне, плохо растворимые в эфире и нерастворимые в гексане (Таблица 5).
Б. Параллельный синтез 1,3-дигидрофуро[3,4-с]хинолин-1,3-дионов 5. Паралельный синтез 1,3-дигидрофуро[3,4-с]хинолин-1,3-дионов 5 проводят в синтезаторе "CombiSyn-012-3000". В каждый из 12 реакторов синтезатора загружают по 3.43 ммоль дикарбоновой кислоты 4 и по 15 мл уксусного ангидрида. Реакционные массы перемешивают до полного растворения при 100°С. Полученные растворы охлаждают до 0°С и выдерживают при этой температуре 3-4 часа. Выпавшие осадки отфильтровывают, промывают на фильтре эфиром, гексаном и сушат в вакууме при 50-60°С. Получают 5, с выходом 50-80%, которые без дополнительной очистки используют для получения амидов 2,3-дигидро-1,3-диоксо-1H-пирроло[3,4-с]хинолинов 1.
В. Параллельный синтез амидов 2,3-дигидро-1,3-диоксо-1H-пирроло[3,4-с]хинолинов 1. Параллельный синтез комбинаторной библиотеки проводили в синтезаторах "CombiSyn-012-3000". В каждый из 12 реакторов синтезатора загружают соответствующий 1,3-дигидрофуро[3,4-с]хинолин-1,3-дионов 5, один из аминов 6 и триэтиламин в мольном соотношении 1:1:0.1 На 1 г 5 используют 20 мл толуола. Реакционные массы перемешивают при кипении реакционной массы 20-48 часов до окончания реакции. Контроль протекания реакции осуществляют с помощью LC MS и/или ТСХ (силикагель, хлороформ : метанол=19:1). После окончания реакций толуол отгоняют в вакууме досуха, к остаткам в каждый реактор синтезатора прибавляют метилен хлорид, перемешивают и отфильтровывают осадки. Фильтраты трижды промывают 3% водным раствором гидроксида натрия, водой, 10% соляной кислотой и снова водой. Сушат безводным сульфатом натрия, фильтруют, отгоняют растворитель в вакууме, а остатки хроматографируют на силикагеле метилен хлоридом, а затем смесью метилен хлорид : метанол=99:1. Получают, с выходом 11-55%, 2,3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолин-1,3-дионы 1, представленные в Таблице 7.
Пример 12. Общий способ получения 1,3-диоксо-1,3-дигидро-2Н-пирроло[3,4-с]хинолины 3 (схема 12).
в которых R1, R2, R3 и R4 имеют вышеуказанное значение.
К раствору 3,4-хинолин-3,4-дикарбоновой кислоты 4 (2.0 ммоль) в NMP (1 мл) прибавляют карбодиимидазол (4.2 ммоль) и перемешивают до прекращения выделения СО2. К полученной смеси прибавляют амин 6 (2.0 ммоль) и, в случае необходимости, триэтиламина (4.0 ммоль). Реакционную массу выдерживают 20 мин при 80-100°С, охлаждают, разбавляют водой, экстрагируют продукт реакции дихлорметаном. Экстракт упаривают, а остаток хроматографируют на силикагеле смесью дихлорметан-ТГФ. Получают, с выходом 35-91%, 1,3-диоксо-1,3-дигидро-2H-пирроло[3,4-с]хинолины 1, представленные в Таблице 7.
Пример 13. Общая способ получения 1,3-диоксо-1,3-дигидро-2H-пирроло[3,4-с]хинолин-8-сульфонатов пиридиния 1 (схема 13).
в которых R1, R3 и R4 имеют вышеуказанное значение.
Кипятят с обратным холодильником 3-5 часа смесь соответствующего ангидрида 5 (60 ммоль) и первичного амина 6 (60 ммоль) в 50 мл уксусной кислоты. Реакционную массу упаривают в вакууме, остаток промывают изопропанолом и сушат. Получают, с выходом 75-97%, 1,3-диоксо-1,3-дигидро-2H-пирроло[3,4-с]хинолин-8-сульфонаты пиридиния 1, представленные в Таблице 7.
Пример 14. Общий способ получения 8-сульфамоил-1,3-диоксо-1,3-дигидро-2H-пирроло[3,4-с]хинолинов 1.1 (схема 14).
в которых R1, R3, R4 и R6, R7, N имеют вышеуказанное значение.
Перемешивают 3 часа смесь соответствующей 6-сульфамоил-хинолин-3,4-дикарбоновой кислоты 4 (0.2 ммоль) и CDI (0.44 ммоль) в 1 мл NMP. К полученной смеси прибавляют соответствующий амин 6 (0.2 ммоль), перемешивают 1 час при комнатной температуре, затем 2 часа при 80°С. Реакционную массу охлаждают при перемешивании до комнатной температуры, прибавляют 2 мл воды и 1 мл насыщенного раствора NaHCO3 и перемешивают 30 мин. Выпавший осадок отделяют, промывают насыщенным раствором NaHCO3, трижды водой, изопропанолом и кристаллизуют из минимального количества изопропанола. Получают соединения 1.1, с выходом 45-92%, представленные в Таблице 7.
Пример 15. Общий способ получения 1,3-диоксо-1,3-дигидро-2H-пирроло[3,4-с]хинолин 1 (схема 15).
К смеси ангидрида 5 (0.2 ммоль) и 1 М раствора амина 6 в N-метилпирролидоне (0.2 мл) добавляют 1.1 М раствора карбонилдиимидазола в N-метилпирролидоне (0.4 мл). Реакционную массу перемешивают 1 час при комнатной температуре, а 2 часа при 80°С, охлаждают и прибавляют при перемешивании 2,5 мл воды, затем 1 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия. Полученную смесь перемешивают 30 мин, выпавший осадок центрифугируют, промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия, трижды водой и изопропанолом. В случае необходимости продукт кристаллизуют из минимального количества. Получают, с выходом 25-85%, соединения 1, представленные в Таблице 7.
Пример 16. Общий способ получения 8-сульфамоил-1,3-диоксо-1,3-дигидро-2H-пирроло[3,4-с]хинолин 1.1 (схема 16).
Нагревают 2 часа при 60-80°С смесь 1,3-диоксо-1,3-дигидро-2H-пирроло[3,4-с]хинолин-8-сульфонатов пиридиния 1 (50 ммоль), тетраметилсульфолана (100 мл) и РОСl3 (35 мл). Реакционную массу охлаждают до комнатной температуры и выливают на лед. Продукт 1.2 экстрагируют хлористым метиленом. Экстракт промывают водой, сушат безводным сульфатом натрия, фильтруют и упаривают в вакууме. Остаток растворяют в минимальном количестве диметилсульфоксида и выливают в воду. Осадок отфильтровывают, промывают на фильтре водой и сушат в леофильной сушке. Полученный продукт, в случае необходимости, кристаллизуют из подходящего растворителя. Получают, с выходом 55-85%, 1,3-диоксо-1,3-дигидро-2H-пирроло[3,4-с]хинолин-8-сульфонил хлориды 1.2. Растворяют сульфонил хлорид 1.2 (10 ммоль) в диоксане (2 мл), к полученному раствору прибавляют N-метилморфолин (20 ммоль) и амин 10 (11 ммоль). Реакционную массу нагревают при 60°С 3 часа, прибавляют воду (3-5 мл), осадок отделяют и, в случае необходимости, перекристаллизовывают или очищают флэшхроматографией на силикагеле. Получают, с выходом 35-95%, соединения 1.1, представленные в Таблице 7.
Пример 17. 4-Метил-1,3-диоксо-2-(1,3,5-триметил-1H-пиразол-4-ил)-2,3-дигидро-1H-пирроло[3,4-с]хинолин-8-карбонитрил 1(452) (схема 17).
Приготовленную в инертной атмосфере смесь 0.2 г (0.5 ммоль) 8-бром-4-метил-2-(1,3,5-триметил-1H-пиразол-4-ил)-1H-пирроло[3,4-с]хинолин-1,3(2H)-диона 1(451), 0,039 г (0.6 ммоль) цианида калия, 0,044 г (0.5 ммоль) N,N'-диметилэтилендиамина, 9.5 мг (0.05 ммоль) CuI и 16 мг (0.1 ммоль) KI в 3 мл диметоксиэтана нагревают в герметичной пробирке в микроволновой печи (300 W) при 190°С в течение 20 мин. Реакционную смесь выливают в 5% раствор НСl, экстрагируют дважды хлороформом, водный слой промывают 5% раствором НСl, водой, высушивают над Na2SO4 и упаривают. Целевой продукт 1(452), получают разделением остатка препаративной ТСХ (элюент - этилацетат, Rf=0.65) с последующей кристаллизацией из изопропанола. Получают 0,045 г (26%) нитрила 1(452) (Таблица 7).
Пример 18. Пиридиний 1,3-диоксо-4-фенил-2-(1,3,5-триметил-1Н-пиразол-4-ил)-2,3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолин-8-сульфонат 1(453) (схема 18).
Смесь 2.78 г (6.4 ммоль) пиридиний 1,3-диоксо-4-фенил-1,3-дигидрофуро[3,4-с]хинолин-8-сульфоната 5(8) и 0.96 г 1,3,5-1Н-пиразол-4-амина 13 в 20 мл безводного пиридина нагревают при перемешивании при 60°С 20 мин, добавляют 10 мл уксусного ангидрида и продолжают перемешивание при 70°С в течение 1.5 часа. Смесь, до 1/3 исходного объема, упаривают при пониженном давлении, обрабатывают этилацетатом и оставляют на ночь в холодильнике. Твердое вещество отфильтровывают, промывают этилацетатом, сушат и получают 3.2 г (92%) 1(453) (Таблица 7).
Пример 19. 8-[(3-Морфолино-3-оксопропил)сульфонил]-4-фенил-2-(1,3,5-триметил-1H-пиразол-4-ил)-1H-пирроло[3,4-с]хинолин-1,3(2H)-дион 3(458) (схема 19).
А. 3-[1,3-Диоксо-4-фенил-2-(1,3,5-триметил-1 Н-пиразол-4-ил)-2,3-дигидро-1 Н-пирроло[3,4-с]хинолин-8-сульфинонилхлорид 1(454). К смеси 2.71 г (5 ммоль) соли 1(453) и 15 мл тетраметиленсульфона добавляли 0.91 мл (1.53 г, 10 ммоль) РОСl3, смесь нагревают при перемешивании 3.5 часа, выливают на лед, отфильтровывают твердое вещество, промывают на фильтре ледяной водой, лиофилизируют сутки, получают 2.5 г целевого сульфохлорида 1(454). LC-MS (раствор в смеси морфолин-ДМСО 5:95), m/z: 532 [М+1] (что отвечает соответствующему сульфоморфолиду).
Б. 1,3-Диоксо-4-фенил-2-(1,3,5-триметил-1Н-пиразол-4-ил)-2,3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолин-8-сульфиновая кислота 14. К раствору 0.126 г (1 ммоль) Na2SO3 в 2 мл воды добавляют при перемешивании 0.096 г (0.2 ммоль) сульфохлорида 1(454), после чего сразу присыпают 0.084 г (1 ммоль) NaHCO3. Смесь перемешивают 1 час, подкисляют уксусной кислотой, получают раствор сульфиновой кислоты 12, который используют далее в последующем синтезе.
В. Метил 3-[1,3-диоксо-4-фенил-2-(1,3,5-триметил-1 Н-пиразол-4-ил)-2,3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолин-8-ил]сульфонилпропионат 1(455). К раствору сульфиновой кислоты 14, полученной по предыдущей методике, добавляют 0.1 мл метилакрилата, смесь интенсивно перемешивают при комнатной температуре сутки, подкисляют 2N НСl до рН 1-2 и оставляют на ночь в холодильнике. Выпавший осадок отделяют центрифугированием, промывают трижды 5% раствором бикарбоната натрия, еще трижды - водой, всякий раз отделяя осадок от промывных вод центрифугированием. Получают 0.065 г (61%) целевого вещества 1(455) (Таблица 7).
Г. 8-[(3-(Морфолин-4-ил)-3-оксопропил)сульфонил]-4-фенил-2-(1,3,5-триметил-1H-пиразол-4-ил)-1H-пирроло[3,4-с]хинолин-1,3(2H)-дион 1(458). К раствору сульфиновой кислоты 14 добавляют 0.1 мл акриловой кислоты, реакционную смесь перемешивают сутки, выпавший осадок кислоты 1(457) отделяют центрифугированием, промывают тщательно водой, всякий раз отделяя осадок от промывных вод центрифугированием, сутки лиофилизируют, к полученному веществу добавляют 1 мл SOCl2 и 1 каплю ДМФА, смесь перемешивают 3 часа, обрабатывают толуолом. Твердое вещество отделяют центрифугированием, затем трижды промывают толуолом, отделяя осадок центрифугированием. Полученное таким образом вещество обрабатывают 10% раствором морфолина в диоксане, полученную смесь перемешивают 2 часа, после чего обрабатывают водой. Выпавший осадок отделяют центрифугированием, промывают многократно водой, сушат в вакууме. Получают 0.036 мг (31%) 1(458) (Таблица 7).
Пример 20. Способ получения фармацевтической композиции в форме таблеток. Смешивают 800 мг крахмала, 800 мг измельченной лактозы 200 мг талька и 500 мг метил 2-[4-метил-8-(4-метилпиперидиносульфонил)-1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолин-2-ил] ацетата 1(101) и спрессовывают в брусок. Полученный брусок измельчают в гранулы и просеивают через сита, собирая гранулы размером 14-16 меш. Полученные гранулы таблетируют в подходящую форму таблетки весом 280 мг каждая. Аналогичным образом получают фармацевтические композиции в виде таблеток, содержащие в качестве активного ингредиента другие 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолины общей формулы 1.
Пример 21. Способ получения фармацевтической композиции в форме капсул. Тщательно смешивают соединения 1(101) с порошком лактозы в соотношении 2:1. Полученную порошкоообразную смесь упаковывают по 300 мг в желатиновые капсулы подходящего размера.
Пример 22. Способ получения фармацевтической композиции в форме инъекций для внутримышечных, внутрибрюшинных или подкожных инъекций. Смешивают 500 мг гидрохлорида соединения 1(101), с 300 мг хлорбутанола, 2 мл пропиленгликоля и 100 мл инъекционной воды. Полученный раствор фильтруют и помещают по 1 мл в ампулы, которые запаивают и стерилизуют в автоклаве.
Пример 23. Составляют фокусированную библиотеку, включающую известные антипротеазные лиганды и 505 2,3-дигидро-1,3-диоксо-1H-пирроло[3,4-с]хинолинов формулы 1, представленных в Таблице 7. Антипротеазную активность фокусированной библиотеки определяют на 9 сериновых протеазах (Каспазы 1-9), которые вовлечены в регуляцию программированной клеточной смерти (апоптозис) и воспалительных процессов. Рекомбинантные Каспазы были приобретены у фирмы Sigma (USA). Активность Каспаз определялась по скорости расщепления соответствующего субстрата, представляющего собой пептид со специфичной для каждой используемой каспзы последовательностью аминокислот с присоединенной флуоресцентной группой (метилкумарин). Метод описан в [Stennicke H.R. and Salvesen G.S. Biochemical Characteristics of Caspase-3, -6, -7 and -8. The Journal of Biological Chemistry, 1997, 272(41) 25719-25723]. Отщепление метилкумарина от пептидной молекулы в результате протеолитической реакции фермента сопровождается усилением интенсивности флуоресценции, измерения которой производят с помощью флуоресцентного параллельного считывателя VICTOR2V (PerkinElmer, USA) при длине волны возбуждения 355 нм и длине волны эмиссии 460 нм. Для проведения реакций используют оптические 96-луночные микроплаты. Каспазы 1, 4, 5, 6 и 9 были приобретены у Calbiochem (USA); каспазы 2, 7 и 8 - у R&D Systems (USA) и каспаза 3 была получена от UPSTATE (USA). Флуоресцентные субстраты для каждой из перечисленных каспаз также были приобретены у соответствующих фирм. Состав среды использованной для проведения энзиматических реакций был универсальным для всех каспаз и включал в себя следующие компоненты: 25 мM HEPES рН=7.5, 50 мМ КСl, 0.1% CHAPS, 5 мM DTT. Исходные растворы тестируемых соединений готовят их растворением в ДМСО (диметилсульфоксид) до концентрации 10 мМ. Исходные растворы соединений дальше разбавляют в дистиллированной воде до концентрации 300 μМ (рабочий раствор соединений). Из рабочего раствора соединений готовят серии 3-кратных разбавлений в 3.3% ДМСО/Н2О2, 10μл каждого соединения соответствующей концентрации помещают в соответствующие ячейки 96-ячеечной оптической платы в дупликатах и к ним добавляют 90 μл растворов соответствующих киназ в конечной концентрации 1 U по определению производителей киназ. После инкубации соединений с энзимами в течение 10 минут в каждую ячейку добавляют 50 μл раствора субстрата и измерения флуоресценции производят в кинетическом режиме. Скорость изменения флуоресценции во времени вычисляют с помощью программного пакета Prism 4.0 (Graphpad, USA). Ингибирование скорости реакции при каждой концентрации соединения вычисляют по формуле
где (F100) - скорость реакции данной каспазы в отсутствие соединений;
Fi - скорость киназной реакции в присутствии данного (i) соединения в данной концентрации.
Из зависимостей скорости киназной реакции при разных концентрациях данного соединения вычисляют концентрацию соединения, вызывающую полумаксимальное ингибирование (IC50) для каждой киназы. Большинство испытанных 2,3-дигидро-1,3-диоксо-1H-пирроло[3,4-с]хинолинов формулы 1 показали способность ингибирования, при этом в зависимости от их структуры значения IC50 колебались от единиц nМ до десятков μМ.
Пример 24. Составляют фокусированную библиотеку, включающую известные антипротеазные лиганды и 505 2,3-дигидро-1,3-диоксо-1H-пирроло[3,4-с]хинолинов формулы 1, представленных в Таблице 7. Антиапоптозную активность фокусированной библиотеки определяют на клеточной линии 3Т3, полученной из АТСС (American Type Culture Collection) по методу, описанному в [Burchiel SW, Edwards BS, Kuckuck FW, Lauer FT, Prossnitz ER, Ransom JT, Sklar LA. Analysis of free intracellular calcium by flow cytometry: multiparameter and pharmacologic applications. Methods, 2000, 21(3), 221-230]. Клетки выращивают на микроскопных стеклах в полной DMEM среде, и клеточную морфологию оценивают под микроскопом Nikon Eclips TS100. Клетки обрабатывают 20 нМ стауроспорином в течении 24 часов без и в присутсвии разных концентраций соединений, проявивших ингибирующую активность на Каспазе-3. Обработка клеток стауроспорином приводит к инициации клеточного апоптоза, который проявляется в округлении клеток. Эффект соединений, проявляющийся в предотвращении апоптоза, оценивался по доле клеток, сохранивших фибробластоподобную морфологию в присутствии этого соединения и стауроспорина. Цитотоксичный эффект соединений формулы 1 определялся с использованием стандартной методики, описанной в [Thomas P. Misko, Maureen К. Highkin, Amy W. Veenhuizen, Pamela T. Manning, Michael K. Stem, Mark G. Currie, and Daniela Salvemini. Characterization of the Cytoprotective Action of Peroxynitrite Decomposition Catalysts. J. Biol. Chem., 1998, Vol. 273, Issue 25, 15646-15653]. ТЭТ клетки высевают в 96-луночные платы при концентрации клеток примерно 2×105 клеток/ячейку и растят в среде Earle's MEM (без фенолового красного), содержащей 10% сыворотку теленка и 2 мМ L-глутамин. Перед добавлением испытуемых соединений платы промывают в физиологическом растворе Дулбекко с фосфатным буфером. Соединения затем добавляют в каждую ячейку, содержащую 200 μл физиологического раствора Дулбекко с фосфатным буфером и платы оставляют на качалке на 15 минут при комнатной температуре. После 15 мин инкубации клетки однократно промывают физиологическим раствором и в ячейки добавляют по 200 μл 10% Alamar Blue в полной Earle's MEM среде и инкубируют в течение 1-2 часов при 37°С в атмосфере 5% СО2. 100 μл аликвоты переносят в оптические платы, и интенсивность флуоресценции продукта, образовавшегося в результате восстановления резозурина (Alamar Blue) измеряют на флуоресцентном считывателе плат Victo2V при длине волны возбуждения 545 нм и длине волны эмиссии 575 нм. Состояние клеток оценивают по способности митохондрий в живых клетках восстанавливать резазурин. Степень токсичности выражают как процент Alamar Blue сигнала, продуцированного клетками, обработанными веществом, по отношению к сигналу необработанных контрольных клеток.
2,3-дигидро-1,3-диоксо-1H-пирроло[3,4-с]хинолинов формулы 1 проявляют антиапоптозную активность в диапазоне концентраций от десятков мкМ до сотен мкМ в то же время, цитотоксичный эффект активных некоторых соединений формулы 1 проявляется при концентрации 100 μM и выше.
Пример 25. Профилактическое лечение апоптоза мозга и желточного мешка зебра-рыбы (zebrafish). Использование фармацевтической композиции, включающей 2,3-дигидро-1,3-диоксо-1H-пирроло[3,4-с]хинолин формулы 1 для профилактического лечения апоптоза нервных клеток головного мозга, вызванного патологическим влиянием неблагоприятных факторов внешней среды проверялось на целом организме (зебра-рыбка) в соответствии с методикой, описанной в [Пат. США 6299858 и 6656449]. 24-часовые мальки зебрафиш помещались в лунки (по 10 мальков в каждой лунке) 96-луночной платы и в каждую лунку добавляли либо исследуемое вещество и индуктор апоптоза, либо только индуктор апоптоза, либо ничего (контроль). После 24 часов инкубации в лунки добавляли краситель, окрашивающий умершие клетки. После 8 часов инкубации с красителем рыбки подвергались микроскопическому обследованию.
Контрольный опыт - выдерживание зебра-рыбок в 1% водном растворе DMS не приводит к каким либо изменениям в области мозга и желточного мешка. Выдерживание в течение 24 часов, зебра-рыбок в 1% водном растворе DMS, содержащем 2,3-дигидро-1,3-диоксо-1H-пирроло[3,4-с]хинолин и индуктор апоптоза, не приводит к заметным изменениям в области мозга и желточного мешка.
Воздействие проапоптозного вещества (индуктора апоптоза) на зебра-рыбок вызывает массовую гибель нервных клеток мозга. Последнее свидетельствует об эффективном профилактическом лечении индуцированной гибели нейронных клеток и деформации яичного мешка с помощью фармацевтической композиции, включающей 2,3-дигидро-1,3-диоксо-1H-пирроло[3,4-с]хинолин.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| 1-СУЛЬФОНИЛ-1,3-ДИГИДРОИНДОЛ-2-ОНЫ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ (ВАРИАНТЫ), СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ | 2003 |
|
RU2259999C2 |
| ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ | 2003 |
|
RU2248978C1 |
| ГЕТЕРОЦИКЛИЛСУЛЬФИНОВЫЕ КИСЛОТЫ И ИХ ПРОИЗВОДНЫЕ, ФОКУСИРОВАННАЯ БИБЛИОТЕКА И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ | 2004 |
|
RU2263666C1 |
| АНЕЛИРОВАННЫЕ КАРБАМОИЛАЗАГЕТЕРОЦИКЛЫ, СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ (ВАРИАНТЫ), ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, ФОКУСИРОВАННАЯ БИБЛИОТЕКА | 2004 |
|
RU2266906C1 |
| ЗАМЕЩЕННЫЕ 7-СУЛЬФОНИЛ БЕНЗО[B][1,4]ДИАЗЕПИНЫ (ВАРИАНТЫ), СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ (ВАРИАНТЫ), ФОКУСИРОВАННАЯ БИБЛИОТЕКА И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ | 2004 |
|
RU2261246C1 |
| ЗАМЕЩЕННЫЕ 2Н-ПИРАНО[2,3-С]ПИРИДИНЫ, КОМБИНАТОРНАЯ И ФОКУСИРОВАННАЯ БИБЛИОТЕКИ | 2003 |
|
RU2261251C2 |
| ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СПОСОБЫ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ | 2006 |
|
RU2303597C1 |
| ЗАМЕЩЕННЫЕ 1,2-ДИГИДРО[2,7]-НАФТИРИДИНЫ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЕ | 2003 |
|
RU2243218C1 |
| ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКИЕ СОЕДИНЕНИЯ, ВКЛЮЧАЮЩИЕ 2-АМИНОПИРИДИН-3-СУЛЬФОНОВЫЙ ФРАГМЕНТ, СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ (ВАРИАНТЫ), ФОКУСИРОВАННАЯ БИБЛИОТЕКА И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ | 2004 |
|
RU2263667C1 |
| ЗАМЕЩЕННЫЕ 3,7-ДИАЗОБИЦИКЛО[3.3.1]НОНАНЫ, ФОКУСИРОВАННАЯ БИБЛИОТЕКА И КОМБИНАТОРНАЯ БИБЛИОТЕКА | 2003 |
|
RU2228934C1 |
Изобретение относится к новым замещенным 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолинам общей формулы 1, являющимся высокоэффективными ингибиторами каспазы-3, которые могут быть использованы для получения лекарственных средств и для экспериментального (in vitro, in vivo) исследования процессов апоптоза в качестве “фармакологических инструментов”. Предложены также фармацевтические композиции, способ их получения и применения.
В общей формуле 1 R1, R2, R3 и R8 независимо друг от друга представляют: атом водорода, атом галогена, CF3, CN, инертный заместитель, необязательно замещенную гидроксильную группу, необязательно замещенную карбокси C1-6алкильную группу, необязательно замещенную карбамоильную группу; R4 представляет: атом водорода, атом галогена, инертный заместитель, необязательно замещенную аминогруппу, замещенную гидроксильную группу; R5 представляет: атом водорода, инертный заместитель, необязательно замещенный гидроксиС1-5алкил, необязательно замещенный аминоС1-7алкил, необязательно замещенную аминогруппу, необязательно замещенную гидроксильную группу; R6 и R7 независимо друг от друга представляют: атом водорода, инертный заместитель, необязательно замещенный аминоС1-7алкил, необязательно замещенную аминогруппу, необязательно замещенную гидроксильную группу; или R6 и R7 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, представляют необязательно замещенный и необязательно дополнительно включающий гетероатом, выбранный из группы: кислород, азот или сера, 3-10-членный цикл; или R6 и R7 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, представляют конденсированный гетероцикл, необязательно замещенный и необязательно дополнительно включающий гетероатом, выбранный из группы: кислород, азот или сера. 8 н.п. ф-лы, 7 табл.
или их фармацевтически приемлемые соли, N-оксиды или гидраты, в которых
R1 , R2 и R3 независимо выбираются из атома водорода, атома галогена, CF3, CN, NO2, инертного заместителя, выбранного из группы, включающей низко- или нереакционноспособный радикал С1-С7 алкил, С2-С7 алкенил, С2-С7 алкинил, С1-С7 алкокси, С7-С12 аралкил, замещенный аралкил, С7-С12 гетероциклилалкил, замещенный гетероциклилалкил, С7-С12алкарил, С3-С10циклоалкил, С3-С10 циклоалкенил, фенил, замещенный фенил, толуил, ксиленил, бифенил, С2-С12 алкоксиалкил, С2-С10 алкилсульфинил, С2-С10 алкилсульфонил, (CH2)m-O-(С1-С7 алкил), -(CH2)m-N(С1-С7 алкил)n, арил, замещенный арил, замещенный алкокси, фторалкил, арилокcиалкил, гетероциклил, замещенный гетероциклил и нитроалкил; где m имеет значение от 1 до 7, n имеет значение от 1 до 2; необязательно замещенную гидроксильную группу, необязательно замещенную карбокси-С2-С6 алкильную группу, необязательно замещенную карбамоильную группу, при условии, что два из R1 , R2 и R3 означают водород;
R4 представляет атом водорода, атом галогена, инертный заместитель, замещенный С1-С7 алкил, замещенный С2-С7 алкенил, необязательно замещенную аминогруппу или необязательно замещенную гидроксильную группу;
R5 представляет атом водорода, инертный заместитель, выбранный из группы, включающей низко- или нереакционноспособный радикал С1-С7 алкил, С2-С7 алкенил, С2-С7 алкинил, С1-С7 алкокси, С7-С12 аралкил, замещенный аралкил, С7-С12 гетероциклилалкил, замещенный гетероциклилалкил, С7-С12 алкарил, С3-С10циклоалкил, С3-С10циклоалкенил, фенил, замещенный фенил, толуил, ксиленил, бифенил, С2-С12 алкоксиалкил, С2-С10 алкилсульфинил, С2-С10 алкилсульфонил, (CH2)m-O-(С1-С7 алкил), -(CH2)m-N(С1-С7 алкил)n, арил, замещенный арил, замещенный алкокси, фторалкил, арилоксиалкил, гетероциклил, замещенный гетероциклил и нитроалкил; где m имеет значение от 1 до 7, n имеет значение от 1 до 2; необязательно замещенный гидроксиС1-5алкил, необязательно замещенную аминогруппу, необязательно замещенную гидроксильную группу, замещенный С1-С7 алкил, замещенный С2-С7 алкенил, замещенный С2-С7 алкинил, замещенный в алкильном или арильном фрагменте С7-С12 аралкил, замещенный в алкильном или гетероциклическом фрагменте С7-С12 гетероциклилалкил, замещенный в алкильном или арильном фрагменте С7-С12 алкарил, замещенный С3-С10 циклоалкил, замещенный С3-С10 циклоалкенил, замещенный фенил, замещенный арил, замещенный гетероциклил; R8представляет группу
либо
R8означает атом водорода, атом галогена, CF3, CN, NO2, инертный заместитель, выбранный из группы, включающей низко- или нереакционноспособный радикал С1-С7алкил, С2-С7алкенил, С2-С7алкинил, С1-С7 алкокси, C7-C12аралкил, замещенный аралкил, C7-C12 гетероциклилалкил, замещенный гетероциклилалкил, C7-C12алкарил, С3-С10циклоалкил, С3-С10циклоалкенил, фенил, замещенный фенил, толуил, ксиленил, бифенил, С2-С12 алкоксиалкил, С2-С10алкилсульфинил, С2-С10алкилсульфонил, (CH2)m-O-(С1-С7 алкил), -(CH2)m-N(С1-С7 алкил)n, арил, замещенный арил, замещенный алкокси, фторалкил, арилоксиалкил, гетероциклил, замещенный гетероциклил и нитроалкил; где m имеет значение от 1 до 7, n имеет значение от 1 до 2; необязательно замещенную гидроксильную группу, необязательно замещенную карбокси С1-С6алкильную группу, необязательно замещенную карбамоильную группу;
R6 и R7 независимо друг от друга представляют атом водорода, инертный заместитель, необязательно замещенный амино С1-С7алкил, необязательно замещенную аминогруппу, необязательно замещенную гидроксильную группу
или
R6 и R7 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, представляют 3-10-членный цикл, необязательно дополнительно включающий гетероатом, выбранный из группы кислород, азот или сера, необязательно конденсированный и необязательно замещенный;
исключая N-оксид 2-метил(или 2-фенил)-3,4-хинолиндикарбоксимид; 2-(2-диметил (или диэтил)аминоэтил)- или 2-(3-диметиламинопропил)-4-метил-1Н-пирроло[3,4-с]хинолин-1,3(2Н)-дионы и 8-бром-2-(2-диметил (или диэтил)аминоэтил)- или 8-бром-2-(3-диметиламинопропил)-4-метил-1Н-пирроло[3,4-с]хинолин-1,3(2Н)-дионы и соединения 1, в которых одновременно R1 = R2 = R3 = R8 = R5 = H, a R4 = Н или СН3; соединения 1, в которых одновременно R1 = R2 = R3 = R8 = Н, a R4 = СН3, 2-(3,4-дихлорфенил)-винил, NH2, NHC(O)CH3 и R5 = 2-(дибутиламино)этил, 2-пирролидин-1-ил-этил, 2-пиперидин-1-ил-этил; соединения 1, в которых одновременно один из R1 - R3 -Н, Сl, Вr, а два других -Н, R8 = Cl, Br, NO2, R4 = СН3, СНВг2, фенил, R5 = Н, СН3; соединения 1, в которых одновременно два из R1 - R3 означают водород, а один из R1 – R3 и R8 представляют собой одинаковые или различные атом водорода, атом галогена, CF3, CN, ОН, алкил, циклоалкил, алкокси, алкилтио, R4= Н, алкил, фенил; R5 = Н, алкил, циклоалкил, алкокси, циклоалкилокси, бензил, фенил, 2-(1-метилпиррол-2-ил)этил, 2-морфолин-4-ил-этил, 2-(4-фторбензоиламино)-этил; соединения 1, в которых одновременно R1 = H, R8 = замещенная сульфамоильная группа, R4 = СН3, R5 = инертный заместитель; R1 - R3 - вoдopoд, R4 - стирил, R5 - п-тoлил, п-метоксифенил, фенил, R8- водород, хлор, бром, метил, нитро; R1 = R2 = R3 = R5 = H, a R4- аминокарбамоильная группа.
или их фармацевтически приемлемой соли, N-оксида или гидрата, в которых
R1, R2 и R3 независимо выбираются из атома водорода, атома галогена, CF3, CN, NO2, инертного заместителя, выбранного из группы, включающей низко- или нереакционоспособный радикал С1-С7алкил, С2-С7 алкенил, С2-С7 алкинил, С1-С7 алкокси, С7-С12 аралкил, замещенный аралкил, С7-С12 гетероциклилалкил, замещенный гетероциклилалкил, С7-С12алкарил, С3-С10циклоалкил, С3-С10 циклоалкенил, фенил, замещенный фенил, толуил, ксиленил, бифенил, С2-С12 алкоксиалкил, С2-С10 алкилсульфинил, С2-С10 алкилсульфонил, (CH2)m-O-(С1-С7 алкил), -(CH2)m-N(С1-С7 алкил)n, арил, замещенный арил, замещенный алкокси, фторалкил, арилокcиалкил, гетероциклил, замещенный гетероциклил и нитроалкил; где m имеет значение от 1 до 7, n имеет значение от 1 до 2; необязательно замещенную гидроксильную группу, необязательно замещенную карбокси-С2-С6 алкильную группу, необязательно замещенную карбамоильную группу, при условии, что два из R1, R2 и R3 означают водород;
R4 представляет атом водорода, атом галогена, инертный заместитель, замещенный С1-С7 алкил, замещенный С2-С7 алкенил, необязательно замещенную аминогруппу или необязательно замещенную гидроксильную группу;
R5 представляет атом водорода, инертный заместитель, выбранный из группы, включающей низко- или нереакционноспособный радикал С1-С7 алкил, С2-С7 алкенил, С2-С7 алкинил, С1-С7 алкокси, С7-С12 аралкил, замещенный аралкил, С7-С12 гетероциклилалкил, замещенный гетероциклилалкил, С7-С12 алкарил, С3-С10циклоалкил, С3-С10циклоалкенил, фенил, замещенный фенил, толуил, ксиленил, бифенил, С2-С12 алкоксиалкил, С2-С10 алкилсульфинил, С2-С10 алкилсульфонил, (CH2)m-O-(С1-С7 алкил), -(CH2)m-N(С1-С7 алкил)n, арил, замещенный арил, замещенный алкокси, фторалкил, арилоксиалкил, гетероциклил, замещенный гетероциклил и нитроалкил; где m имеет значение от 1 до 7, n имеет значение от 1 до 2; необязательно замещенный гидроксиС1-5алкил, необязательно замещенную аминогруппу, необязательно замещенную гидроксильную группу, замещенный С1-С7 алкил, замещенный С2-С7 алкенил, замещенный С2-С7 алкинил, замещенный в алкильном или арильном фрагменте С7-С12 аралкил, замещенный в алкильном или гетероциклическом фрагменте С7-С12 гетероциклилалкил, замещенный в алкильном или арильном фрагменте С7-С12 алкарил, замещенный С3-С10 циклоалкил, замещенный С3-С10 циклоалкенил, замещенный фенил, замещенный арил, замещенный гетероциклил;
R8представляет группу
либо
R8означает атом водорода, атом галогена, CF3, CN, NO2, инертный заместитель, выбранный из группы, включающей низко- или нереакционноспособный радикал С1-С7алкил, С2-С7алкенил, С2-С7алкинил, С1-С7 алкокси, C7-C12аралкил, замещенный аралкил, C7-C12 гетероциклилалкил, замещенный гетероциклилалкил, C7-C12алкарил, С3-С10циклоалкил, С3-С10циклоалкенил, фенил, замещенный фенил, толуил, ксиленил, бифенил, С2-С12 алкоксиалкил, С2-С10алкилсульфинил, С2-С10алкилсульфонил, (CH2)m-O-(С1-С7 алкил), -(CH2)m-N(С1-С7 алкил)n, арил, замещенный арил, замещенный алкокси, фторалкил, арилоксиалкил, гетероциклил, замещенный гетероциклил и нитроалкил; где m имеет значение от 1 до 7, n имеет значение от 1 до 2; необязательно замещенную гидроксильную группу, необязательно замещенную карбокси С1-С6алкильную группу, необязательно замещенную карбамоильную группу;
R6 и R7 независимо друг от друга представляют атом водорода, инертный заместитель, необязательно замещенный амино С1-С7алкил, необязательно замещенную аминогруппу, необязательно замещенную гидроксильную группу
или
R6 и R7 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, представляют 3-10-членный цикл, необязательно дополнительно включающий гетероатом, выбранный из группы кислород, азот или сера, необязательно конденсированный и необязательно замещенный.
или его фармацевтически приемлемой соли, N-оксида или гидрата в качестве ингибитров каспаз, которые могут быть использованы для получения лекарственных средств и для экспериментального (in vivo, in vitro) исследования процессов апоптоза в качестве “фармакологических инструментов” в которых
R1, R2 и R3 независимо выбираются из атома водорода, атома галогена, CF3, CN, NO2, инертного заместителя, выбранного из группы, включающей низко- или нереакционноспособный радикал С1-С7алкил, С2-С7 алкенил, С2-С7 алкинил, С1-С7 алкокси, С7-С12 аралкил, замещенный аралкил, С7-С12 гетероциклилалкил, замещенный гетероциклилалкил, С7-С12алкарил, С3-С10циклоалкил, С3-С10 циклоалкенил, фенил, замещенный фенил, толуил, ксиленил, бифенил, С2-С12 алкоксиалкил, С2-С10 алкилсульфинил, С2-С10 алкилсульфонил, (CH2)m-O-(С1-С7 алкил), -(CH2)m-N(С1-С7 алкил)n, арил, замещенный арил, замещенный алкокси, фторалкил, арилокcиалкил, гетероциклил, замещенный гетероциклил и нитроалкил; где m имеет значение от 1 до 7, n имеет значение от 1 до 2; необязательно замещенную гидроксильную группу, необязательно замещенную карбокси-С2-С6 алкильную группу, необязательно замещенную карбамоильную группу, при условии, что два из R1, R2 и R3 означают водород;
R4 представляет атом водорода, атом галогена, инертный заместитель, замещенный С1-С7 алкил, замещенный С2-С7 алкенил, необязательно замещенную аминогруппу или необязательно замещенную гидроксильную группу;
R5 представляет атом водорода, инертный заместитель, выбранный из группы, включающей низко- или нереакционноспособный радикал С1-С7 алкил, С2-С7 алкенил, С2-С7 алкинил, С1-С7 алкокси, С7-С12 аралкил, замещенный аралкил, С7-С12 гетероциклилалкил, замещенный гетероциклилалкил, С7-С12 алкарил, С3-С10циклоалкил, С3-С10циклоалкенил, фенил, замещенный фенил, толуил, ксиленил, бифенил, С2-С12 алкоксиалкил, С2-С10 алкилсульфинил, С2-С10 алкилсульфонил, (CH2)m-O-(С1-С7 алкил), -(CH2)m-N(С1-С7 алкил)n, арил, замещенный арил, замещенный алкокси, фторалкил, арилоксиалкил, гетероциклил, замещенный гетероциклил и нитроалкил; где m имеет значение от 1 до 7, n имеет значение от 1 до 2; необязательно замещенный гидроксиС1-5алкил, необязательно замещенную аминогруппу, необязательно замещенную гидроксильную группу, замещенный С1-С7 алкил, замещенный С2-С7 алкенил, замещенный С2-С7 алкинил, замещенный в алкильном или арильном фрагменте С7-С12 аралкил, замещенный в алкильном или гетероциклическом фрагменте С7-С12 гетероциклилалкил, замещенный в алкильном или арильном фрагменте С7-С12 алкарил, замещенный С3-С10 циклоалкил, замещенный С3-С10 циклоалкенил, замещенный фенил, замещенный арил, замещенный гетероциклил;
R8представляет группу
либо
R8означает атом водорода, атом галогена, CF3, CN, NO2, инертный заместитель, выбранный из группы, включающей низко- или нереакционноспособный радикал С1-С7алкил, С2-С7алкенил, С2-С7алкинил, С1-С7 алкокси, C7-C12аралкил, замещенный аралкил, C7-C12 гетероциклилалкил, замещенный гетероциклилалкил, C7-C12алкарил, С3-С10циклоалкил, С3-С10циклоалкенил, фенил, замещенный фенил, толуил, ксиленил, бифенил, С2-С12 алкоксиалкил, С2-С10алкилсульфинил, С2-С10алкилсульфонил, (CH2)m-O-(С1-С7 алкил), -(CH2)m-N(С1-С7 алкил)n, арил, замещенный арил, замещенный алкокси, фторалкил, арилоксиалкил, гетероциклил, замещенный гетероциклил и нитроалкил; где m имеет значение от 1 до 7, n имеет значение от 1 до 2; необязательно замещенную гидроксильную группу, необязательно замещенную карбоксиС1-С6алкильную группу, необязательно замещенную карбамоильную группу;
R6 и R7 независимо друг от друга представляют атом водорода, инертный заместитель, необязательно замещенный аминоС1-С7алкил, необязательно замещенную аминогруппу, необязательно замещенную гидроксильную группу
или
R6 и R7 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, представляют 3-10-членный цикл, необязательно дополнительно включающий гетероатом, выбранный из группы кислород, азот или сера, необязательно конденсированный и необязательно замещенный;
или R8означает атом водорода, атом галогена, CF3, CN, NO2, инертный заместитель, необязательно замещенную гидроксильную группу, необязательно замещенную карбоксиС1-С6алкильную группу, необязательно замещенную карбамоильную группу.
| US 4268513A,19.05.1981 | |||
| Прибор для очистки паром от сажи дымогарных трубок в паровозных котлах | 1913 |
|
SU95A1 |
| B.С.УХОВ И ДР | |||
| Переносная печь для варки пищи и отопления в окопах, походных помещениях и т.п. | 1921 |
|
SU3A1 |
| IVACHTCHENCO ALEXANDRE V | |||
| et al | |||
| Приспособление для точного наложения листов бумаги при снятии оттисков | 1922 |
|
SU6A1 |
| "Journal of Combinatorial | |||
