СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ПЯТИЛЕТНЕЙ ВЫЖИВАЕМОСТИ БЕЗ ПРОГРЕССИИ БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ ПОСЛЕ РАДИКАЛЬНОГО ХИРУРГИЧЕСКОГО ЛЕЧЕНИЯ Российский патент 2005 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, и может быть использовано для прогнозирования пятилетней выживаемости без прогрессии больных раком мочевого пузыря после радикального хирургического лечения.

Известен способ прогнозирования выживаемости больных раком мочевого пузыря, включающий определение глубины инвазии (Sobin LH, Wittekind С. Urinary bladder. In: TNM classification of malignant tumours, 5th ed. New York: International Union Against Cancer, Wiley-Liss, 1997: 187-90) и степени дифференцировки рака (Mostofi FK, Sobin LN, Torioni H. Histological classification of tumours, 10th ed. Geneva: Worid Health Organization, 1973). Эти прогностические факторы являются ведущими и составляют основу современной классификации рака.

Известен способ прогнозирования выживаемости больных раком мочевого пузыря, включащий определение глубины инвазии и степени дифференцировки клеток рака в биоптате новообразования (Аль-Шукри С.Х. Опухоли мочеполовых органов: Руководство для врачей. СПб, Питер, 2000, с.130-134). Данный способ может быть выбран в качестве прототипа.

Недостатками способа являются отсутствие характеристик, непосредственно указывающих на пролиферативную активность раковых клеток, и субъективизм исследования, что снижает точность прогнозирования.

Задачей изобретения является повышение точности прогнозирования пятилетней выживаемости без прогрессии больных раком мочевого пузыря после радикального хирургического лечения за счет оценки пролиферативной активности раковых клеток.

Поставленная задача решается тем, что в известном способе прогнозирования пятилетней выживаемости без прогрессии больных раком мочевого пузыря после радикального хирургического лечения, включающем определение глубины инвазии и степень дифференцировки рака в биоптате новообразования, согласно изобретению биоптат окрашивают раствором нитрата серебра и в 100 ядрах прилежащих друг к другу опухолевых клеток определяют среднее количество ядрышек и стандартное отклонение распределения аргентофильных гранул в ядрышках, рассчитывают показатель пятилетней выживаемости без прогрессии рака при любой глубине инвазии по следующей формуле:

S=2,289*М_Я+0,219*SD_АГ+0,998*рТ-0,102*G, где

М_Я - среднее количество ядрышек в раковых клетках;

SD_АГ - стандартное отклонение распределения аргентофильных гранул в ядрышках раковых клеток;

рТ - глубина инвазии рака мочевого пузыря, при этом рТ_а=1, pT₁=2, pT₂=3, рТ₃=4, рТ₄=5;

G - степень дифференцировки клеток рака мочевого пузыря, при этом G₁=1, G₂=2, G₃=3,

и при значениях S≤6,95 прогнозируют пятилетнюю выживаемость без прогрессии рака, при этом для поверхностного рака дополнительно определяют коэффициент вариации распределения ядрышек и эксцесс распределения аргентофильных гранул в ядрышках и рассчитывают показатель пятилетней выживаемости без прогрессии по следующей формуле:

S_ПР=0,1727*CV_Я+0,3276*Е_АГ, где

CV_Я - коэффициент вариации распределения ядрышек в раковых клетках;

Е_АГ - эксцесс распределения аргентофильных гранул в ядрышках раковых клеток, и при значениях S_ПР>7,75 прогнозируют пятилетнюю выживаемость.

На основании результатов обследования 62 больных раком мочевого пузыря (из них 28 больных поверхностным раком) авторами были выявлены наиболее информативные прогностические характеристики, отражающие пролиферативную активность раковых клеток. Предлагаемый способ включает количественную оценку этих характеристик, что позволяет более точно по сравнению с прототипом прогнозировать пятилетнюю выживаемость больных раком мочевого пузыря без прогрессии. Чувствительность способа по прогнозу выживаемости для больных любой глубины инвазии составляет 74%, специфичность 71%, точность 72%. Специфичность способа по прогнозу выживаемости для больных поверхностным раком 100%, а точность предсказания 73%.

Способ осуществляют следующим образом.

После радикального хирургического лечения из биоптата новообразования готовят срезы опухолевой ткани толщиной 5-7 мкм и после депарафинизации определяют глубину инвазии и степень дифференцировки рака в соответствии с классификацией TNM и присваивают им следующие значения: 1, 2, 3, 4, 5 для рТ_а, рТ1, рТ2, рТ3, рТ4 соответственно и 1, 2, 3 для G1, G2, G3 соответственно. В дополнение срезы опухолевой ткани окрашивают раствором азотнокислого серебра по методике Howell and Black (Howell WM, Black DA. Controlled silver staining of nucleolus organiser regions with a protective colloidal developer: a one step method. Experientia 1980; 36: 1014-15) в следующей модификации: на стекло с опухолевой тканью помещают смесь из четырех капель свежеприготовленного 50% раствора AgNO₃ и двух капель желатина. Затем предметные стекла закрывают покровными стеклами и на фильтровальной бумаге в чашке Петри помещают в термостат с температурой 36°С на 18-20 минут. Далее покровные стекла смывают дистиллированной водой, а препараты высушивают на воздухе при комнатной температуре (t=20-22°С). Затем в 100 ядрах прилежащих друг к другу клеток рака мочевого пузыря при помощи иммерсионного микроскопа с увеличением ×1000 и микрофокусировкой подсчитывают количество ядрышек и отдельно расположенных в них аргентофильных гранул и рассчитывают среднее количество ядрышек (М_Я) в раковых клетках и стандартное отклонение распределения аргентофильных гранул (SD_АГ) в ядрышках раковых клеток. При любой глубине инвазии показатель пятилетней выживаемости без профессии рака вычисляют по формуле S=2,289*М_Я+0,219*SD_АГ+0,998*рТ-0,102*G и при значениях S≤6,95 прогнозируют пятилетнюю выживаемость без прогрессии. Если значения рТ=1-2, то дополнительно определяют коэффициент вариации распределения ядрышек (CV_Я) и эксцесс распределения аргентофильных гранул (Е_АГ) и рассчитывают показатель выживаемости по следующей формуле S_ПР=0,1727*CV_Я+0,3276*Е_АГ, и при значениях S_ПР>7,75 прогнозируют пятилетнюю выживаемость без прогрессии.

Способ иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Больной К., 56 лет, поступил в клинику урологии в плановом порядке через три месяца после появления неоднократных эпизодов безболевой макрогематурии.

При поступлении состояние удовлетворительное, температура тела нормальная, живот мягкий, при пальпации безболезненный во всех отделах, почки не пальпируются, поколачивание по пояснице безболезненно с обеих сторон, наружные половые органы без патологических изменений, при пальцевом ректальном исследовании определяется увеличенная безболезненная предстательная железа. По данным клинического анализа крови выявлено снижение уровня гемоглобина до 96 г/л, эритроцитов - 3,5*10⁶, ускорение СОЭ - 74 мм/ч, биохимические показатели - в пределах нормальных значений, лейкоцитурия, бактериурия. На экскреторных урограммах форма, размер и положение почек обычные, определяется расширение полостной системы правой почки и правого мочеточника, замедление выведения контрастного препарата справа. На нисходящей цистограмме выявлен холмовидный дефект наполнения, свидетельствующий об увеличении предстательной железы (доброкачественная гиперплазия простаты). При цистоскопии определяются множественные папиллярные образования на широком основании, расположенные на передней, правой боковой и задней стенках мочевого пузыря, а также в области мочепузырного треугольника. По данным рентгенографии костей и легких метастазы не выявлены.

Диагноз: рак мочевого пузыря, Т1-Т2, NX, МО, хр. цистит, обострение. Сопутствующие заболевания: доброкачественная гиперплазия предстательной железы; ИБС, стенокардия I-II ф.кл., хр. бронхит. 29.09.1988 г. была произведена резекция мочевого пузыря, послеоперационный период протекал спокойно, больной выписан в удовлетворительном состоянии 04.11.1988 г. Гистологическое заключение: низкодифференцированный переходно-клеточный рак, прорастающий слизистую оболочку в поверхностный мышечный слой (рТ2, G3). В соответствии с прототипом больной с глубиной инвазии рТ2 и степенью дифференцировки G3 относится к категории прогностически неблагоприятных. В связи с высоким риском смерти от опухолевой прогрессии этому больному должна быть выполнена органоуносящая операция: радикальная цистэктомия. При исследовании опухолевой ткани, окрашенной нитратом серебра, в соответствии с описанной методикой значения SD_АГ; М_Я и S составили 3,985; 1,48 и 6,94 соответственно. Это позволило прогнозировать пятилетнюю выживаемость больного без прогрессии рака. При последующем диспансерном наблюдении в течение 5 лет признаки прогрессии выявлены не были.

Пример 2. Больной С., 58 лет, поступил в клинику урологии в плановом порядке с жалобами на периодическое появление примеси крови в моче в течение трех месяцев, дизурию.

При поступлении состояние удовлетворительное, температура тела нормальная, живот мягкий, при пальпации безболезненный во всех отделах, почки не пальпируются, поколачивание по пояснице безболезненно с обеих сторон, наружные половые органы без патологических изменений, при пальцевом ректальном исследовании определяется несколько увеличенная безболезненная предстательная железа. Клинические и биохимические показатели крови - в пределах нормальных значений, лейкоцитурия, бактериурия. На экскреторных урограммах форма, размер и положение почек обычные, функция не нарушена. На нисходящей цистограмме дефекты наполнения отчетливо не видны. При цистоскопии определяются множественные ворсинчатые образования на передней, боковой и задней стенках мочевого пузыря. По данным рентгенографии костей и легких метастазы не выявлены.

Диагноз: рак мочевого пузыря, Т_а - T1, NX, МО, хр. цистит, обострение.

Сопутствующие заболевания - ИБС, стенокардия I-II ф.кл., хр. бронхит. 29.08.1988 г. произведена резекция мочевого пузыря, в послеоперационном периоде отмечена атака пиелонефрита, получал консервативное лечение, выписан в удовлетворительном состоянии. Гистологическое заключение: низкодифференцированный переходно-клеточный рак, инвазия в мышечный слой не обнаружена (рТ_а-рТ1, G3). В соответствии с прототипом больной с глубиной инвазии рТ_а ^-рТ1 и степенью дифференцировки G3 относится к категории прогностически неблагоприятных. В связи с высоким риском смерти от опухолевой прогрессии этому больному должна быть выполнена либо органоуносящая операция - радикальная цистэктомия, - либо агрессивная внутрипузырная химиотерапия или иммунотерапия. При исследовании опухолевой ткани, окрашенной нитратом серебра по описанной методике, в соответствии с формулой, предназначенной для определения пятилетней выживаемости без опухолевой прогрессии при любой глубине инвазии, значения SD_АГ; М_Я и S составили 4,136; 1,91 и 6,96 соответственно. Эти значения являются пограничными (немного превышают 6,95) и поэтому для уточнения вероятности пятилетней выживаемости без прогрессии применяют формулу для поверхностного рака мочевого пузыря. При этом получают значения Е_АГ, CV_Я и S_ПР, составившие 1,524; 42,15 и 7,778 соответственно, что относит больного к прогностически благоприятной группе и предсказывает пятилетнюю выживаемость без прогрессии. При последующем диспансерном наблюдении в течение 5 лет признаков прогрессии выявлено не было.

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии и онкологии. Сущность способа: определяют глубину инвазии, степень дифференцировки клеток рака в биоптате новообразования, окрашивают биоптат раствором нитрата серебра и в 100 ядрах прилежащих друг к другу опухолевых клеток определяют среднее количество ядрышек (М_я) и стандартное отклонение распределения аргентофильных гранул в ядрышках (SD_аг). Рассчитывают показатель пятилетней выживаемости без прогрессии рака при любой глубине инвазии: S=2,289*М_я+0,219*SD_АГ+0,998*рТ-0,102*G, где рТ - глубина инвазии рака мочевого пузыря (рТ_а=1, рТ₁=2, рТ₂=3, рТ₃=4, рТ₄=5); G - степень дифференцировки клеток рака мочевого пузыря (G₁=1, G₂=2, G₃=3). При значениях S≤6,95 прогнозируют пятилетнюю выживаемость без прогрессии рака, при этом для поверхностного рака дополнительно определяют коэффициент вариации распределения ядрышек (CV_я) и эксцесс распределения аргентофильных гранул в ядрышках (Е_АГ) раковых клеток, рассчитывают показатель пятилетней выживаемости без прогрессии: S_пр=0,1727*CV_я+0,3276*E_АГ. При значениях S_пр>7,75 прогнозируют пятилетнюю выживаемость. Способ позволяет повысить точность прогнозирования.

Способ прогнозирования выживаемости без прогрессии больных раком мочевого пузыря после радикального хирургического лечения, включающий определение глубины инвазии и степень дифференцировки клеток рака в биоптате новообразования, отличающийся тем, что биоптат окрашивают раствором нитрата серебра и в 100 ядрах прилежащих друг к другу опухолевых клеток определяют среднее количество ядрышек и стандартное отклонение распределения аргентофильных гранул в ядрышках, рассчитывают показатель пятилетней выживаемости без прогрессии рака при любой глубине инвазии по следующей формуле:

S=2,289·М_я+0,219·SD_АГ+0,998·рТ-0,102·G,

где М_я - среднее количество ядрышек в раковых клетках;

SD_АГ - стандартное отклонение распределения аргентофильных гранул в ядрышках раковых клеток;

рТ - глубина инвазии рака мочевого пузыря, при этом рТ_а=1, рТ₁=2, рТ₂=3, рТ₃=4, рТ₄=5;

G - степень дифференцировки клеток рака мочевого пузыря, при этом G₁=1, G₂=2, G₃=3

и при значениях S≤6,95 прогнозируют пятилетнюю выживаемость без прогрессии рака, при этом для поверхностного рака дополнительно определяют коэффициент вариации распределения ядрышек и эксцесс распределения аргентофильных гранул в ядрышках и рассчитывают также показатель пятилетней выживаемости без прогрессии по следующей формуле:

S_пр=0,1727·CV_я+0,3276·Е_АГ,

где CV_я - коэффициент вариации распределения ядрышек в раковых клетках;

E_АГ - эксцесс распределения аргентофильных гранул в ядрышках раковых клеток и при значениях S_пр>7,75 прогнозируют пятилетнюю выживаемость.